Microscopio electrnico El microscopio electrnico es un tipo de microscopio que utiliza electrones para crear una imagen del objetivo.

Tiene mucho ms alta magnificacin o poder de resolucin de un microscopio ptico normal. Aunque los microscopios electrnicos modernos pueden magnificar objetos hasta dos millones de veces, todava se basan en el prototipo de Ruska y su correlacin entre la longitud de onda y resolucin. El microscopio electrnico es una parte integral de muchos laboratorios. Los investigadores usan para examinar los materiales biolgicos (tales como microorganismos y clulas), una variedad de molculas grandes, biopsia de muestras mdicas, metales y estructuras cristalinas, y las caractersticas de diferentes superficies.

Qu es el Microscopio Electrnico? El microscopio electrnico es un tipo de microscopio que utiliza un haz de electrones para crear una imagen de la muestra. Es capaz de realizar aumentos mucho ms altos y tiene un mayor poder de resolucin de un microscopio de luz, lo que le permite ver objetos mucho ms pequeos con detalles ms finos. Son equipos de piezas grandes, por lo cual son costosos. Generalmente son instalados en una pequea habitacin especialmente diseada y que requiere personal capacitado para operarlos.

La historia de la Microscopia electrnica A mediados del siglo 19, microscopistas haban aceptado que simplemente no fue posible resolver las estructuras de menos de la mitad de un micrmetro con un microscopio de luz debido a la frmula de Abbe, pero el desarrollo del tubo de rayos catdicos estaba literalmente a punto de cambiar el aspecto que tenan las cosas, mediante el uso de electrones en lugar de luz! Hertz (1857-1894) sugiri que los rayos catdicos eran una forma de onda de movimiento y Weichert, en 1899, encontraron que estos rayos pueden ser concentradas en un pequeo punto por el uso de un campo magntico axial producido por un solenoide largo. Pero no fue hasta 1926 que Busch demostr tericamente que un corto solenoide converge un haz de electrones de la misma manera que el vidrio puede converger la luz del sol, que se realiz una comparacin directa entre los haces de luz y electrnica. Busch probablemente debera por lo tanto ser conocido como el padre de la ptica electrnica. En 1931, los ingenieros alemanes Ernst Ruska y Knoll Maximillion lograron aumento y la imagen electrnica. Este fue, en retrospectiva, el momento de la invencin del microscopio electrnico, pero el primer prototipo fue construido realmente por Ruska en 1933 y fue capaz de resolver a 50 nm. A pesar de que era primitivo y no muy adecuado para su uso prctico, Ruska fue reconocido unos 50 aos ms tarde por la concesin de un Premio Nobel. El primer microscopio electrnico disponible en el mercado fue construido en Inglaterra por Vickers Metropolitana de Imperial College de Londres, y fue llamado el EM1, aunque nunca super la resolucin de un buen microscopio ptico. Los microscopios electrnicos primeros no excitan los microscopistas pticos debido a que el haz de electrones, que tena una muy

alta densidad de corriente, se concentr en un rea muy pequea y estaba muy caliente y por lo tanto cualquier carbonizado especmenes no metlicos que se examinaron. Cuando se encontr que se podra examinar con xito los especmenes biolgicos en el microscopio electrnico despus de tratarlos con osmio y cortar rebanadas muy finas de la muestra, el microscopio electrnico comenz a aparecer como una propuesta viable. En la Universidad de Toronto, en 1938, Eli Franklin Burton y estudiantes Cecil Hall James Hillier y Albert Prebus construyen el primer microscopio electrnico en el Nuevo Mundo. Este fue un instrumento eficaz y de alta resolucin, el diseo de lo que finalmente condujo a lo que iba a ser conocido como el (Radio Corporation of America) gama de microscopios de gran xito RCA. Por desgracia, el estallido de la Segunda Guerra Mundial, en 1939 contuvo su desarrollo un poco, pero dentro de 20 aos a partir del final de la rutina de la guerra microscopios electrnicos comerciales no son capaces de una resolucin de 1 nm. Tipos de microscopios electrnicos Todos los microscopios electrnicos utilizan electromagntica y / o lentes electrostticas para controlar la trayectoria de los electrones. Las lentes de vidrio, que se utilizan en los microscopios de luz, no tienen efecto sobre el haz de electrones. El diseo bsico de una lente electromagntico es un solenoide (una bobina de alambre alrededor de la parte exterior de un tubo) a travs del cual se puede pasar una corriente, induciendo de ese modo un campo electromagntico. El haz de electrones pasa a travs del centro de dichos solenoides en su camino hacia abajo de la columna del microscopio de electrones hacia la muestra. Los electrones son muy sensibles a los campos magnticos y por lo tanto pueden ser controlados mediante el cambio de la corriente a travs de las lentes. El ms rpido los electrones viajan, la ms corta su longitud de onda. El poder de resolucin de un microscopio est directamente relacionado con la longitud de onda de la radiacin utilizada para formar una imagen. La reduccin de longitud de onda aumenta la resolucin. Por lo tanto, la resolucin del microscopio se aumenta si se incrementa el voltaje de aceleracin del haz de electrones. El voltaje de aceleracin del haz es citado en kilovoltios (kV). Ahora es posible comprar un kV microscopio electrnico de 1000, aunque esto no se encuentra comnmente. Aunque los microscopios electrnicos modernos pueden magnificar objetos hasta cerca de dos millones de veces, todava se basan en el prototipo de Ruska y la correlacin entre la longitud de onda y resolucin. El microscopio electrnico es una parte integral de muchos laboratorios, tales como el John Innes Centre. Los investigadores pueden utilizar para examinar los materiales biolgicos (tales como microorganismos y clulas), una variedad de molculas grandes, biopsia de muestras mdicas, metales y estructuras cristalinas, y las caractersticas de diferentes superficies. Hoy en da, los microscopios electrnicos tienen muchos otros usos fuera de la investigacin. Pueden ser utilizados como parte de una lnea de produccin, tales como en la fabricacin de chips de silicio, o dentro de los laboratorios forenses para la observacin de muestras, tales como residuos de disparos. En el campo de la diagnosis de avera y control de calidad, que se pueden utilizar para buscar lneas de tensin en las piezas del motor o, simplemente, para comprobar la relacin de aire a los slidos en el helado!

Microscopa electrnica de transmisin (TEM) La forma original de la microscopa electrnica, microscopa electrnica de transmisin (TEM) consiste en un haz de electrones de alta tensin emitida por un ctodo y formado por lentes magnticas. El haz de electrones que ha sido parcialmente transmitida a travs de la muestra muy delgada (y as semitransparente para los electrones) lleva informacin acerca de la estructura de la muestra. La variacin espacial de esta informacin (la "imagen") se amplifica luego por una serie de lentes magnticas hasta que se graba al golpear una pantalla fluorescente, placa fotogrfica, o un sensor sensible a la luz, tales como (dispositivo de carga acoplada) de la cmara CCD. La imagen detectada por el CCD puede mostrarse en tiempo real en un monitor u ordenador. Transmisin microscopios electrnicos producen imgenes de dos dimensiones, en blanco y negro. Resolucin de la TEM tambin se limita por la aberracin esfrica y cromtica, pero una nueva generacin de correctores de la aberracin ha sido capaz de superar o limitar estas aberraciones. Correccin de la aberracin esfrica Software ha permitido la produccin de imgenes con una resolucin suficiente para mostrar tomos de carbono en el diamante separados por slo 0.089 nm y tomos de silicio a 0.078 nm con aumentos de 50 millones de veces. La capacidad para determinar las posiciones de los tomos dentro de los materiales ha hecho que el TEM en una herramienta indispensable para la investigacin nanotecnologas y el desarrollo en muchos campos, incluyendo la catlisis heterognea y el desarrollo de dispositivos semiconductores para la electrnica y la fotnica. En las ciencias de la vida, sigue siendo principalmente la preparacin de la muestra, que limita la resolucin de lo que podemos ver en el microscopio electrnico, en lugar del propio microscopio. En JIC tenemos un alto voltaje (200kV) TEM, que fue instalado en 2008. Tenemos dos cmaras digitales en l, uno es una resolucin ms alta que la otra, de modo que la necesidad de desarrollar e impresin de pelcula ha sido negada. Nuestro TEM est diseado para su uso con muestras biolgicas y es capaz de resolver al mejor que 1 nm. Tambin es capaz de 3-D tomografa que consiste en tomar una sucesin de imgenes de inclinacin, mientras que las muestras mediante el aumento de los ngulos, que luego se pueden combinar para formar una imagen tridimensional de la muestra. Microscopio Electrnico de Barrido (SEM) A diferencia de la TEM, donde los electrones en el haz principal se transmiten a travs de la muestra, el microscopio electrnico de barrido (SEM) produce imgenes mediante la deteccin de electrones secundarios que son emitidos desde la superficie debido a la excitacin por el haz de electrones primaria. En la SEM, el haz de electrones se explora a travs de la superficie de la muestra en un patrn de trama, con detectores de la construccin de una imagen mediante la asignacin de las seales detectadas con la posicin del haz.

Resolucin TEM es aproximadam ente un orden de magnitud mejor que la resolucin SEM. Nuestro TEM puede resolver De "Micrografa", de Robert Hooke, fcilmente los Imagen SEM de una pata de 1665: Placa que muestra el dibujo detalles de mosca tomada en JIC en 2006 0,2 de pata de una mosca nm. Nuestros dos SEM en JIC son las adquisiciones relativamente recientes y son instrumentos de alta resolucin capaz de alrededor de 2 nm de resolucin en muestras biolgicas.Debido a que la imagen de SEM se basa en las interacciones de electrones en la superficie en lugar de la transmisin es capaz de muestras a granel de imagen y tiene una profundidad mucho mayor de vista, por lo que puede producir imgenes que son una buena representacin de la estructura 3D de la muestra. Por lo tanto, las imgenes de SEM se consideran para proporcionarnos 3D, informacin topogrfica de la superficie de la muestra, pero seguirn siendo siempre slo en blanco y negro. En la SEM, utilizamos tensiones acelerando mucho ms bajas para evitar la penetracin del haz dentro de la muestra ya que lo que se requiere es la generacin de los electrones secundarios de la estructura de la superficie verdadera de una muestra. Por lo tanto, es comn el uso de bajo KV, en el rango de 1-5kV para muestras biolgicas, a pesar de que nuestros SEM son capaces de hasta 30 kV. En JIC Actualmente tenemos dos SEM, ambos con capacidades de alta resolucin, las instalaciones de formacin de imgenes digitales y crio-sistemas que les permiten ser utilizados para observar especmenes congelados hidratados. Preparacin de la muestra Materiales para ser visto en un microscopio de electrones generalmente requieren el procesamiento para producir una muestra adecuada. Esto es principalmente debido a que la totalidad de la parte interior de un microscopio electrnico es bajo alto vaco con el fin de permitir que el haz de electrones para viajar en lneas rectas. La tcnica requerida vara dependiendo de la muestra, el anlisis requerido y el tipo de microscopio: Criofijacin - congelacin de una muestra con rapidez, por lo general a temperaturas de nitrgeno lquido o por debajo, que el agua forma el hielo. Esto conserva la muestra en una instantnea de su estado de solucin con el mnimo de artefactos. Un campo entero llamado

crio-microscopa electrnica se ha diversificado de esta tcnica. Con el desarrollo de criomicroscopa electrnica, ahora es posible observar prcticamente cualquier espcimen biolgico cerca de su estado nativo. Fijacin - un trmino general utilizado para describir el proceso de conservacin de una muestra en un momento en el tiempo y para evitar un mayor deterioro para que parezca lo ms posible a lo que sera como en el estado de vida, a pesar de que ahora est muerto. En la fijacin qumica para microscopa electrnica, glutaraldehdo se utiliza a menudo para reticular molculas de protena y tetrxido de osmio para preservar los lpidos. La deshidratacin - eliminacin de agua de las muestras. El agua se sustituye generalmente con disolventes orgnicos tales como etanol o acetona como un escaln hacia secado totales para los especmenes SEM o de infiltracin con resina y la posterior incorporacin de muestras de TEM. Incrustacin - la infiltracin del tejido con cera (para microscopa de luz) o una resina (por microscopa electrnica), tales como Araldite o LR White, que luego se pueden polimerizar en un bloque endurecido para su posterior seccionamiento. Seccionamiento - la produccin de rodajas delgadas de la muestra. Para microscopa ptica, las secciones pueden ser unos pocos micrmetros de espesor, pero para microscopa electrnica deben ser muy finas, as que son semi-transparente a los electrones, por lo general alrededor de 90 nm. Estos cortes ultrafinos para microscopa electrnica se cortan en un ultramicrotomo con una copa o un cuchillo de diamante. Cuchillos de vidrio se pueden hacer fcilmente en el laboratorio y son mucho ms baratos que el diamante, pero despuntan muy rpidamente y por lo tanto necesitan ser reemplazados con frecuencia. Tincin - utiliza metales pesados tales como el plomo y el uranio a los electrones de formacin de imgenes de dispersin y por lo tanto dar contraste entre diferentes estructuras, ya que muchos materiales (especialmente biolgica) son casi "transparente" para el haz de electrones. Por la tincin de las muestras con metales pesados, aadimos densidad de electrones a lo que se traduce en que haya ms interacciones entre los electrones en el haz primario y las de la muestra, que a su vez nos proporciona contraste en la imagen resultante. En biologa, las muestras se pueden teir "en bloque", antes de la incrustacin y / o posterior, directamente despus de la seccin, mediante una breve exposicin de las secciones a las soluciones de las manchas de metales pesados. Congelacin de la fractura y la congelacin de grabado - un mtodo de preparacin particularmente tiles para examinar las membranas lipdicas y sus protenas incorporadas "cara en" vista. El tejido fresco o suspensin de clulas se congelaron rpidamente (cryofixed), a continuacin, fracturadas por simple separacin o mediante el uso de un microtomo, mientras que se mantiene a la temperatura del nitrgeno lquido. La superficie fra, fracturada es generalmente "grabado" mediante el aumento de la temperatura a aproximadamente -95 C durante unos pocos minutos para permitir que un poco de hielo sublime superficie para revelar detalles microscpicos. Para el SEM, la muestra est ahora listo para la imagen. Para el TEM, puede ser entonces rotativo sombreado con platino se evapor a bajo ngulo (normalmente alrededor de 6 ) en un evaporador de alto vaco. Una

segunda capa de carbono, se evapor perpendicular al plano de la superficie media se realiza generalmente para mejorar la estabilidad de la capa de rplica. La muestra se devuelve a la temperatura y presin ambiente, y a continuacin, la rplica de metal extremadamente frgil "sombra" de la superficie de fractura se libera a partir del material biolgico subyacente por la digestin qumica cuidado con cidos, solucin de hipoclorito o detergente SDS. La rplica flotante se lava a fondo de las sustancias qumicas residuales, cuidadosamente recogido en una rejilla EM, se seca y luego ver en el TEM. Recubrimiento por pulverizacin catdica - un recubrimiento ultra-delgada de material elctricamente conductor, depositados por revestimiento de bajo vaco de la muestra. Esto se hace para evitar que la carga de la muestra que se producira debido a la acumulacin de los campos elctricos estticos debido a la irradiacin de electrones requerido durante la exploracin. Tambin aumenta la cantidad de electrones secundarios que pueden ser detectados a partir de la superficie de la muestra en el SEM y por lo tanto aumenta la relacin seal a ruido. Tales revestimientos incluyen el oro, el oro / paladio, platino, cromo, etc Desventajas de Microscopa Electrnica Los microscopios electrnicos son muy caros de comprar y mantener. Son ms dinmico que esttico en su operacin: requiere suministros muy estables de alto voltaje, corrientes extremadamente estables a cada uno los sistemas de alta / ultra-alto vaco bobina / lente, continuamente bombeado electromagntica y una circulacin de agua de refrigeracin a travs de las lentes y las bombas. Ya que son muy sensibles a las vibraciones y campos magnticos externos, microscopios destinados a lograr altas resoluciones deben ser alojados en edificios con servicios especiales. Se requiere una cantidad significativa de la formacin con el fin de operar un microscopio electrnico con xito y microscopa electrnica se considera una habilidad especializada. Las muestras tienen que ser vistos en el vaco, como las molculas que componen el aire se dispersan los electrones. Esto significa que las muestras necesitan ser especialmente preparado por tcnicas a veces largos y difciles de soportar el ambiente dentro de un microscopio electrnico. Los avances recientes han permitido que algunas muestras hidratadas para obtener imgenes con un microscopio electrnico de barrido ambiental, pero las aplicaciones de este tipo de imgenes son todava limitados. Artefactos Hay que subrayar desde el principio que cada micrografa electrnica es, en cierto sentido, un artefacto. Los cambios en la ultraestructura son inevitables durante todas las etapas de procesamiento de muestras que deben someterse a: se extrae el material, dimensiones se cambian y el cambio molecular se produce. Lo mejor que podemos hacer es mantener estos cambios a un mnimo mediante la comprensin de los procesos involucrados para que podamos tomar decisiones informadas de los mejores procedimientos de preparacin para utilizar para cada muestra. Los artefactos se presentan en muchas formas: podra haber prdida de continuidad en las membranas, distorsin o desorganizacin de los orgnulos, los

espacios vacos en el citoplasma de clulas cerradas o dobleces o curvas en estructuras filamentosas que son por lo general recta, tales como microtbulos y as sucesivamente.Con la experiencia, microscopistas aprender a reconocer la diferencia entre un artefacto de la preparacin y la estructura verdadera, principalmente por mirando a las mismas o similares muestras preparadas de la misma o de una manera diferente. Microscopios electrnicos de barrido de imagen por lo general materiales conductores o semi-conductores mejor. Los materiales no conductores se pueden obtener imgenes, ya sea por un microscopio electrnico de barrido ambiental o ms generalmente por recubrimiento de la muestra con una capa de metal conductor. Una tcnica de preparacin comn es recubrir la muestra con una capa de material conductor, unos pocos nanmetros de espesor, tales como 10 nm de oro, de una mquina de pulverizacin catdica. Este proceso, sin embargo, tienen el potencial de alterar las muestras delicadas y cubrir algunos detalles. Cuando se utiliza la fijacin qumica y la deshidratacin como parte de la preparacin de la muestra, a menudo hay mucha contraccin y colapso de estructuras delicadas y por eso, especialmente para nuestros intereses en el JIC de especmenes botnicos que son altamente hidratado, tendemos a utilizar la tcnica de crio-fijacin que es mucho menos propensa a artefactos. Para el TEM, las muestras se preparan generalmente por la exposicin a muchos productos qumicos desagradables, con el fin de dar un buen detalle ultra estructural que puede resultar en artefactos puramente como un resultado de la preparacin. Esto da el problema de los artefactos distintivas de las estructuras originales dentro de la muestra, especialmente en muestras biolgicas. Los cientficos sostienen que los resultados de las diversas tcnicas de preparacin se han comparado, y como no hay ninguna razn por la que todos deben producir artefactos similares, por lo tanto, es razonable pensar que las caractersticas de microscopa electrnica se correlacionan con las clulas vivas. Adems, el trabajo de mayor resolucin ha sido directamente en comparacin con los resultados de la cristalografa de rayos X, que proporciona una confirmacin independiente de la validez de esta tcnica. Un trabajo reciente realizado en muestras no fijadas, vitrificados (congelado rpidamente, sin el uso de ningn producto qumico, para formar hielo sin ninguna cristalizacin) Se ha realizado tambin, adems de confirmar la validez de esta tcnica. Sin embargo, incluso las tcnicas de crio-fijacin no estn exentos de sus propios artefactos de preparacin y daos de cristales de hielo, debido al hecho de que a medida que el agua se congela se expande, es un problema comn cuando se trata de la imagen de un espcimen grande (mayor que 200 micras), que no puede ser congelados con la suficiente rapidez para vitrificar el agua

Microscopio electrnico Destacado

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Fecha: 1925 Utilidad: Dispositivo electrnico capaz de formar imagenes de objetos diminutos Inventor: Ernst Ruska, Max Knoll y Jhener

El microscopio electrnico es un dispositivo que utiliza un haz de electrones dirigidos hacia una muestra a analizar y produciendo una imagen en una pantalla sensible a los electrones. ste tipo de microscopio permite realizar aumentos de hasta 2.000.000x, frente a los microscopios pticos que producen aumentos de 2.000x, gracias a que la longitud de onda de los electrones (0,5 Angstroms) es mucho menor que la de la luz visible (4.000 Angstroms). La evolucin de ste tipo de microscopio signific un importante avance tanto para la medicina (visionado de partes de una clula, protenas, virus....) como para los procesos de calidad en farmacologa, desarrollo de semiconductores, circuitos integrados y dems aplicaciones industriales. Existen varios tipos de microscopios electrnicos, pero los ms usados son dos: De transmisin: se trata del tipo original de microscopio electrnico. Un haz de electrones es dirigido hacia una muestra a travs de un campo elctrico creado por electroimanes. Algunos de esos electrones se difractan y son capaces de generar una imagen en la pantalla adecuada. De barrido: ste tipo de microscopio se basa en realizar sondeos en cada punto de una muestra baada con oro u otros metales conductores, de modo que cuando el haz encuentre el obstculo se disipar energa (en forma de calor, luz, interacciones en el propio haz, etc...) y esos cambios sern recogidos por un sensor. Es capaz de crear imgenes en 3D. El microscopio electrnico fue desarrollado por los cientficos alemanes Ernst Ruska y Max Knoll, que crearon un prototipo en 1931, basndose en las teoras sobre la dualidad ondacorpsculo del fsico francs Louis-Victor de Broglie. Ese mismo ao la empresa alemana Siemens compra la patente , pero hasta 1939 no se comercializa el primer ejemplar. A pesar de la evolucin de la ciencia y de la sofisticacin de ste tipo de aparatos hoy en da, todos siguen basndose en el original de Ruska.

Bibliografia referencias electrnicas

http://ingeniatic.euitt.upm.es/index.php/tecnologias/item/520-microscopio-electr%C3%B3nico http://www.jic.ac.uk/microscopy/intro_EM.html

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