REPARACIN REPARACIN- -RECOMBINACIN RECOMBINACIN

Importancia del Importancia del

tema. tema.
Fidelidad de la Fidelidad de la
replicacin. Daos replicacin. Daos
en el ADN y en el ADN y
sistemas de sistemas de
reparacin del reparacin del
ADN. ADN.
Recombinacin: Recombinacin:
concepto, concepto,
clasificacin, clasificacin,
modelos, modelos,
enzimologa. enzimologa.
Consecuencias Consecuencias
genticas de la genticas de la
Recombinacin. Recombinacin.
Dao del ADN Dao del ADN
Como toda molcula el ADN participa de diversas reacciones Como toda molcula el ADN participa de diversas reacciones
qumicas, y como tal puede eventualmente sufrir modificaciones. qumicas, y como tal puede eventualmente sufrir modificaciones.
Dichas modificaciones pueden ser Dichas modificaciones pueden ser
espontneas espontneas
inducidas por diversos agentes inducidas por diversos agentes
fsicos fsicos
qumicos qumicos
biolgicos. biolgicos.
Tipos de dao que ocurren en el ADN
5000 5000 depurinaciones depurinaciones/da/ clula /da/ clula
100 100 desaminaciones desaminaciones/da / clula /da / clula
ESPONTNEOS: ESPONTNEOS:
depurinaciones depurinaciones
desaminaciones desaminaciones
Son formas alternativas isomricas de las bases Son formas alternativas isomricas de las bases
nitrogenadas nitrogenadasque cambian el patrn de que cambian el patrn de
apareamiento normal. apareamiento normal.
..Las variantes son de Las variantes son de ceto ceto a a enol enol para para timina y timina y
guanina guanina y de y de amino amino aa imino imino para para citosina y citosina y
adenina adenina
Cambios Cambios tautomricos tautomricos de base de base
Cambios Cambios tautomricos tautomricos durante la replicacin durante la replicacin
Tipos de dao que ocurren en el ADN
Figura a: sitios proclives a modificaciones
- oxidacin
- hidrlisis
- metilacin
INDUCIDOS: INDUCIDOS:
Qumicos Qumicos
los agentes alquilantes los agentes alquilantes
adic ionan grupos metilo o etilo adic ionan grupos metilo o etilo
en diversas bases del ADN en diversas bases del ADN
Fsicos Fsicos
Exposicin a UV: Dmeros de Exposicin a UV: Dmeros de
pirimidina pirimidina
Sistemas de reparacin Sistemas de reparacin
1) 1) Fidelidad de la Fidelidad de la polimerasa polimerasa
2) 2) Sistemas de reparacin directa Sistemas de reparacin directa
3) 3) Reparacin por escisin. Reparacin por escisin.
4) 4) Sistemas de reparacin post Sistemas de reparacin post- -replicacin. replicacin.
Sistemas de reparacin Sistemas de reparacin
Esta dada por la actividad Esta dada por la actividad exonucleasa exonucleasa 3 3--5 5
Requerimiento de Requerimiento de primers primers
Imposibilidad de la Imposibilidad de la polimerasa polimerasa de agregar nucletidos si de agregar nucletidos si
no hay apareamiento exacto en los nucletidos previos no hay apareamiento exacto en los nucletidos previos
Implica la imposibilidad de replicacin en direccin 3 Implica la imposibilidad de replicacin en direccin 3--5. 5.
Fidelidad intrnseca de la maquinaria de Fidelidad intrnseca de la maquinaria de
replicacin (10 replicacin (10
--99
pb) pb)
Sistemas de reparacin Sistemas de reparacin
1) 1) Sistemas de reparacin directa. Sistemas de reparacin directa.
a. a. Fotorreactivacin Fotorreactivacin: : eliminacin eliminacin
de dmeros de pirimidina. de dmeros de pirimidina.
(procariotas y plantas) (procariotas y plantas)
b. b. Remocin del metilo en O Remocin del metilo en O
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de de
guanina guanina (la (la metilacin metilacin se produce por se produce por
agentes alquilantes) agentes alquilantes)
Sistemas de reparacin Sistemas de reparacin
2) 2) Reparacin por escisin. Reparacin por escisin.
2a: 2a: Reparacin por Reparacin por
escisin de base escisin de base
2b: 2b: Reparacin por Reparacin por
escisin de nucletido escisin de nucletido
Sistemas de reparacin Sistemas de reparacin
2c: Sistema de 2c: Sistema de
reparacin por reparacin por
apareamiento errneo. apareamiento errneo.
Cmo se diferencia la hebra Cmo se diferencia la hebra
parental parental de la nueva? de la nueva?
_E. _E. Coli Coli: la hebra : la hebra parental parental est est
metilada metilada..
_Eucariotas: la hebra nueva _Eucariotas: la hebra nueva
presenta roturas de simple hebra. presenta roturas de simple hebra.
2d: Sistema de reparacin 2d: Sistema de reparacin
acoplada a la transcripcin. acoplada a la transcripcin.
_Se reparan preferentemente las _Se reparan preferentemente las
hebras transcriptas. (factores de la hebras transcriptas. (factores de la
trasncripcin trasncripcin que actan en la que actan en la
maquinaria de reparacin, maquinaria de reparacin, ej. ej. TFIIH) TFIIH)
3) 3) Sistemas de Sistemas de
reparacin post reparacin post- -
replicacin. replicacin.
Sistemas de reparacin Sistemas de reparacin
3a: Reparacin 3a: Reparacin recombinatoria recombinatoria. . La La
hebra hebra parental parental no daada rellena el espacio no daada rellena el espacio
opuesto al sitio daado en la otra molcula opuesto al sitio daado en la otra molcula
hija, mediante recombinacin entre secuencias hija, mediante recombinacin entre secuencias
homlogas. homlogas.
Sistemas de reparacin Sistemas de reparacin
Mantenimiento de la Mantenimiento de la informacion informacionhereditaria hereditaria
La replicacin del material gentico es esencial a
la vida
Errores en la replicacin son el origen de las
enfermedades hereditarias
Errores en la replicacin son causa primaria
de canceres
Existen patologas por incapacidad de
reparar errores cometidos en la replicacin
La recombinacin aumenta la variabilidad y
genera diversidad
mitosis
mitosis
meiosis
DNA
RECOMBINATION
Recombinacin Recombinacin
Importancia de la variabilidad gnica Importancia de la variabilidad gnica: :
- -La estabilidad gnica es crucial para la supervivencia La estabilidad gnica es crucial para la supervivencia
a corto plazo. a corto plazo.
- -A largo plazo, la supervivencia de los organismos A largo plazo, la supervivencia de los organismos
puede depender de la puede depender de la variacin gnica variacin gnica, ,
mediante la cual clulas y organismos pueden mediante la cual clulas y organismos pueden
adaptarse a las variaciones del ambiente. adaptarse a las variaciones del ambiente.
- -La propiedad del ADN de experimentar La propiedad del ADN de experimentar
reordenaciones determina que se formen nuevas reordenaciones determina que se formen nuevas
combinaciones gnicas, sustrato molecular de la combinaciones gnicas, sustrato molecular de la
variabilidad gnica. variabilidad gnica.
Donde y cuando sucede la Donde y cuando sucede la
recombinacin homloga....? recombinacin homloga....?
- -Durante la formacin de gametos: MEIOSIS Durante la formacin de gametos: MEIOSIS
Donde y cuando sucede la Donde y cuando sucede la
recombinacin homloga....? recombinacin homloga....?
Aumento de la variabilidad gentica: Aumento de la variabilidad gentica:
- -Varios niveles: Varios niveles:
1) Dado por la combinacin aleatoria de los 1) Dado por la combinacin aleatoria de los
cromosomas paternos y maternos. cromosomas paternos y maternos.
Consecuencias genticas de la Consecuencias genticas de la
recombinacin recombinacin
2 2
23 23
gametos diferentes gametos diferentes
1) La recombinacin aumenta el 1) La recombinacin aumenta el
nmero de combinaciones entre nmero de combinaciones entre
alelos paternos y maternos. alelos paternos y maternos.
2) Permite ir eliminando 2) Permite ir eliminando
alelos deletreos tras alelos deletreos tras
diversas generaciones. diversas generaciones.
3) Ofrece mecanismos 3) Ofrece mecanismos
de reparacin del ADN. de reparacin del ADN.
Por estos motivos y Por estos motivos y
muchos ms, es que muchos ms, es que
la reproduccin la reproduccin
sexual ha sido tan sexual ha sido tan
efectiva a lo largo de efectiva a lo largo de
la evolucin. la evolucin.
Consecuencias genticas Consecuencias genticas
de la recombinacin de la recombinacin
Recombinacin Recombinacin
Concepto: Concepto: Implica la ruptura fsica y posterior unin de Implica la ruptura fsica y posterior unin de
hebras de ADN de forma tal que intercambian el hebras de ADN de forma tal que intercambian el
contenido de ADN resultando en dos nuevas hebras. contenido de ADN resultando en dos nuevas hebras.
Clasificacin: Clasificacin:
1) 1) HOMLOGA HOMLOGA: requiere grandes regiones de : requiere grandes regiones de
homologa. homologa. ((ej. ej. recombinacin meitica) recombinacin meitica)
2) 2) SITIO ESPECFICA SITIO ESPECFICA: se da entre regiones especficas : se da entre regiones especficas
de molculas de ADN. Requiere regiones pequeas de molculas de ADN. Requiere regiones pequeas
de homologa. de homologa.((ej. ej. reorganizaciones del ADN reorganizaciones del ADN genes de Igs, genes de Igs,
insercin viral) insercin viral)
3) 3) TRANSPOSICIN: TRANSPOSICIN: implica el movimiento de implica el movimiento de
secuencias a travs del genoma y no requiere secuencias a travs del genoma y no requiere
secuencias homlogas. secuencias homlogas. ((transposones transposones, , retrotransposones retrotransposones, , etc etc))
Recombinacin homloga Recombinacin homloga
Primeros indicios: Primeros indicios:
Morgan Morgan (1910) (1910)
Anlisis de Anlisis de
ligamiento. ligamiento.
Recombinacin homloga Recombinacin homloga
Primeros indicios: Primeros indicios:
- -Habra un Habra un
intercambio fsico intercambio fsico
de informacin de informacin
hereditaria. hereditaria.
- -Relacin directa Relacin directa
entre la entre la
frecuencia de frecuencia de
recombinacin y recombinacin y
distancia de distancia de
mapa. mapa.
- -Sienta las bases Sienta las bases
del mapeo del mapeo
gentico. gentico.
Recombinacin homloga Recombinacin homloga
Modelo de Modelo de Robin RobinHolliday Holliday (1964): (1964):
Recombinacin homloga Recombinacin homloga
Intermediario Intermediario Holliday Holliday
Forma Chi Forma Chi
Recombinacin homloga Recombinacin homloga
Resolucin del Resolucin del
intermediario intermediario Holliday Holliday: :
Se forman molculas Se forman molculas
recombinantes recombinantes, con un sector , con un sector
heterodplex heterodplex..
No se forman molculas No se forman molculas
recombinantes recombinantes. Persiste un . Persiste un
sector sector heterodplex heterodplex..
Recombinacin homloga Recombinacin homloga
Inicio
Intermediario
de Holliday
Resolucin
Recombinacin homloga Recombinacin homloga
Otros modelos del inicio del evento Otros modelos del inicio del evento recombinacional recombinacional: :
1975: 1975: Modelo de Modelo de
rotura de simple rotura de simple
hebra en una sola hebra en una sola
molcula de ADN. molcula de ADN.
Modelo de Modelo de
rotura de rotura de
doble doble
hebra en hebra en
una sola una sola
molcula molcula
de ADN de ADN..
(la ms (la ms
aceptada aceptada
actualmente) actualmente)
A pesar de los mltiples modelos del comienzo de la recombinaci A pesar de los mltiples modelos del comienzo de la recombinacin, la n, la
unin unin Holliday Hollidayde hebra cruzada contina siendo el intermediario central de hebra cruzada contina siendo el intermediario central
del proceso. del proceso.
Recombinacin homloga Recombinacin homloga
Enzimologa de la recombinacin homloga Enzimologa de la recombinacin homloga
Fenmeno estudiado Fenmeno estudiado
fundamentalmente en bacterias, pero fundamentalmente en bacterias, pero
con homlogos en eucariotas: con homlogos en eucariotas:
- -Rec Rec BCD: BCD: Con su actividad Con su actividad
helicasa helicasa desenrrollna desenrrollna el ADN, y el ADN, y
cuando encuentra la cuando encuentra la
secuencia chi (GCTGGTGG) secuencia chi (GCTGGTGG)
corta una hebra, dejando un corta una hebra, dejando un
sustrato de reconocimiento sustrato de reconocimiento
para Rec A. para Rec A.
Enzimologa de la recombinacin homloga Enzimologa de la recombinacin homloga
- -Rec Rec BCD: BCD: Con su actividad Con su actividad
helicasa helicasa desenrrollna desenrrollna el ADN, y el ADN, y
cuando encuentra la cuando encuentra la
secuencia chi (GCTGGTGG) secuencia chi (GCTGGTGG)
corta una hebra, dejando un corta una hebra, dejando un
sustrato de reconocimiento sustrato de reconocimiento
para Rec A. para Rec A.
- -Rec Rec A: Se une al ADN A: Se une al ADN
simple hebra. simple hebra.
Promueve la invasin Promueve la invasin
de una hebra a la de una hebra a la
otra molcula de otra molcula de
ADN, reconociendo ADN, reconociendo
secuencias de alta secuencias de alta
homologa. homologa.
Enzimologa de la recombinacin homloga Enzimologa de la recombinacin homloga Enzimologa de la recombinacin homloga Enzimologa de la recombinacin homloga
- -Rec Rec A: A: RAD 51 RAD 51
(homlogo en levaduras) (homlogo en levaduras)
Enzimologa de la recombinacin homloga Enzimologa de la recombinacin homloga
- -Ruv Ruv AB: AB: Complejo enzimtico ( Complejo enzimtico (helicasa helicasa) que ) que
promueve la migracin de ramas promueve la migracin de ramas
Enzimologa de la Enzimologa de la
recombinacin homloga recombinacin homloga
- -Ruv Ruv C: C: ( (resolvasa)Complejo resolvasa)Complejo
enzimtico con funcin enzimtico con funcin
endonucleasa endonucleasa que promueve la que promueve la
rotura y unin de las molculas de rotura y unin de las molculas de
ADN del intermediario ADN del intermediario Holliday Holliday. .
Determina segn las hebras que Determina segn las hebras que
corte si se van a producir corte si se van a producir
molculas molculas recombinantes recombinantes o no. o no.
1) La recombinacin aumenta el nmero de combinaciones 1) La recombinacin aumenta el nmero de combinaciones
entre alelos paternos y maternos. entre alelos paternos y maternos.
2) Permite ir eliminando alelos deletreos tras diversas 2) Permite ir eliminando alelos deletreos tras diversas
generaciones. generaciones.
3) Ofrece mecanismos de reparacin del ADN. 3) Ofrece mecanismos de reparacin del ADN.
Consecuencias genticas de la recombinacin Consecuencias genticas de la recombinacin
Recombinacin Recombinacin
Clasificacin: Clasificacin:
1) 1) HOMLOGA HOMLOGA: requiere grandes regiones de : requiere grandes regiones de
homologa. homologa. ((ej. ej. recombinacin meitica) recombinacin meitica)
2) 2) SITIO ESPECFICA SITIO ESPECFICA: se da entre regiones especficas : se da entre regiones especficas
de molculas de ADN. Requiere regiones pequeas de molculas de ADN. Requiere regiones pequeas
de homologa. de homologa.((ej. ej. reorganizaciones del ADN reorganizaciones del ADN genes de Igs, genes de Igs,
insercin viral) insercin viral)
3) 3) TRANSPOSICIN: TRANSPOSICIN: implica el movimiento de implica el movimiento de
secuencias a travs del genoma y no requiere secuencias a travs del genoma y no requiere
secuencias homlogas. secuencias homlogas. ((tranposones tranposones, , retrotransposones retrotransposones, , etc etc))
- -El reordenamiento entre El reordenamiento entre
molculas de ADN se produce molculas de ADN se produce
en sitios especficos. en sitios especficos.
Recombinacin sitio especfica Recombinacin sitio especfica
- -Integracin de bacterifagos: Integracin de bacterifagos:
- -Integracin de bacterifagos: Integracin de bacterifagos:
--El reordenamiento entre molculas de El reordenamiento entre molculas de
ADN se produce en sitios especficos. ADN se produce en sitios especficos.
Recombinacin sitio especfica Recombinacin sitio especfica
- -Genes de Inmunoglobulina y Genes de Inmunoglobulina y
receptores T receptores T
Recombinacin sitio especfica Recombinacin sitio especfica
Recombinasas Recombinasas: :
RAG 1 & 2 RAG 1 & 2
- -Genes de Inmunoglobulina Genes de Inmunoglobulina
y receptores T y receptores T
Recombinacin Recombinacin
sitio especfica sitio especfica
Recombinasas Recombinasas: :
RAG 1 & 2 RAG 1 & 2
Transposicin Transposicin
Clasificacin: Clasificacin:
--Va Va intermediario de ADN. intermediario de ADN.
--Va Va intermediario de ARN intermediario de ARN
Concepto: Concepto:
--La transposicin implica el La transposicin implica el
movimiento de secuencias movimiento de secuencias
a travs del genoma. a travs del genoma.
_Descubiertos a travs de _Descubiertos a travs de
evidencias genticas por evidencias genticas por
McClintock McClintock (50) (50)
Aplicaciones Aplicaciones
ADN recombinante ADN recombinante
Inactivacion Inactivacion gnica por recombinacin gnica por recombinacin
(animales (animales transgnicos transgnicos) )