Deteccin de Quinolonas en Carnes de Pollo a Nivel de Centros de Expendio de la Provincia de Santiago, Repblica Dominicana.

Silfrany1, R, O.; R. E. Caba1; F. Sols de los Santos1, I. Hanning2 1 Department of Animal Science, Universidad ISA, Santiago de los Caballeros, Dominican Republic, Postal Service 166
2

Department of Food Science and Technology, University of Tennessee 2605 River Dr. Knoxville, TN. 37996

Primary Audience: Researchers, Production managers,

E-mail: ihanning@utk.edu (479) 575-2391

RESUMEN En la Repblica Dominicana, la industria avcola representa una de las principales fuentes de protena animal con que cuenta la poblacin lo cual se ve reflejado en un consumo per cpita superior a los 34 kg de carne de pollo por ao, este desarrollo acelerado en la avicultura nacional ha sido impulsado por el uso masivo de antibiticos en especial del grupo de las Quinolonas, las cuales muchas veces se sobredosifican provocando residualidad en las carnes de pollo que trae como consecuencia la aparicin de alergias y de la creacin de resistencia hacia los antibiticos por parte de algunas bacterias por tal motivo la presente investigacin se realiz en diferentes (135) centros de expendio crnicos ubicados en la Provincia Santiago, Repblica Dominicana, con el propsito de evaluar la incidencia de residuos de Quinolonas superior a los Lmites Mximos de Residuos (LMRS) (300 g/kg) establecidos por las autoridades alimentarias como la Food and Drugs Administration (FDA) y la Autoridad Europea de Seguridad Alimentaria (EFSA). El muestreo se realiz desde el 5 de abril hasta el 19 de mayo del 2010. Se tomaron 135 muestras de pechugas de pollos de diferentes centros de expendio distribuidos en los 9 Municipios de la Provincia Santiago (Santiago, Tamboril, Sabana Iglesia, Villa Bison, Pual, Villa Gonzlez, Licey, Jnico, San Jos De Las Matas) y posteriormente fueron trasladadas al Laboratorio Agrobiotek Dominicana (Santo Domingo, Repblica Dominicana) donde fue utilizado el Test Equinox de la compaa Zeu Inmunotec. El test Equinox es un test cualitativo para la deteccin de Quinolonas en carne. Los resultados observados fueron los siguientes: El 50% de las muestras de pechuga de pollo de Sabana Iglesia, 20% de Licey, 20% de San Jos De La Matas y 6.25% de Santiago contenan residuos de Quinolonas superiores a los Lmites Mximos de Residuos permitidos,

mientras que las muestras evaluadas de Jnico, Pual, Tamboril, Villa Bison, Villa Gonzlez no presentaron residuos de Quinolonas. Como resumen general de esta investigacin, el 6.6% de las carnes de pollos expendidas en la Provincia Santiago se encuentran contaminados con residuos de Quinolonas. Los resultados de la presente investigacin sugieren que las carnes de pollos vendidas para consumo tienen residuos de antibiticos (Quinolonas) superiores a los establecidos como lmites mximos permitidos y que la poblacin est consumiendo estos residuos.

INTRODUCCIN

La industria avcola ocupa un importante sitial dentro del sector agroindustrial, debido a los avances tecnolgicos logrados en sus diferentes reas (Moran, 2000). En la Repblica Dominicana, esta industria representa una de las principales fuentes de protena animal con que cuenta la poblacin, ya que se producen entre 14 y 15 millones de unidades de pollos (28, 000,000 30, 000,000 kg/mes) de engorde por mes (Industria Avcola Empresas Lderes, 2007). La alta produccin avcola podra estar explicada por el gran consumo de carne de pollo en el pas, la cual se estima en ms de 34 kilogramos de carne de pollo por persona por ao (Instituto Interamericano de Cooperacin para la Agricultura, 2007) , esto nos convierte en uno de los pases de mayor consumo per cpita de carne de pollo en el mundo (Industria Avcola Empresas Lderes, 2007), y en el mayor productor de toda Centro Amrica y El Caribe (Industria Avcola Empresas Lderes, 2008). Para satisfacer la alta demanda de consumo de carne de pollo, los nutricionistas han utilizado tradicionalmente los promotores de crecimiento en las dietas para mejorar la eficiencia alimenticia de pollos de engorde. El principal grupo de promotores de crecimiento son los antibiticos usados a dosis subteraputicas y los cuales parecen haber mostrado ser efectivos en la promocin del crecimiento de aves ya que se ha documentado ganancias de peso hasta de un 5% en parvadas de pollos de engorde que consuman los antibiticos de forma subterapeutica en el alimento en comparacin a aquellos pollos de engorde que no lo hacan (Torres y Zaragoza, 2002). Sin embargo, la administracin de los antibiticos, en ocasiones de forma inadecuada y a sobredosis, as como la violacin del perodo de retiro, puede

provocar residualidad de estas sustancias en carne de pollo (Cancho, 2000). El consumo de carne de pollo con residuos de antibiticos podra ocasionar un conjunto de complicaciones en los humanos, incluyendo sepsis graves u otras enfermedades o alergias (Cirz, 2005). Adicionalmente, la continua exposicin a residuos de antibiticos causa el desarrollo de resistencia de las principales bacterias a estas sustancias. Esto se ha documentado en diferentes reportes a nivel mundial, el primero de los cuales surge en la dcada de los 70, donde se afirm que el uso constante de antibiticos en la produccin animal podra afectar la salud pblica. Ms tarde, en el ao 1990, en diversos pases europeos, se report la diseminacin de cepas de Enterococcus con resistencia de alto nivel a la Vancomicina, antibitico utilizado ampliamente en dichos pases. Esta problemtica llev a que Dinamarca en el ao 1999 prohibiera el uso de algunos antibiticos en animales de produccin (Torres y Zaragoza, 2002), pero no fue hasta el ao 2005 donde la Food and Drugs Administration (FDA) comprobara que el uso frecuente e inadecuado de las Quinolonas en la produccin avcola provocaba la aparicin de especies de Campylobacter resistentes en las aves que posteriormente eran transmitidas a los humanos lo cual es una seria amenaza para la humanidad (FDA, 2005).

Toda esta problemtica, sumada a la necesidad de preservar la salud pblica, y con el objetivo de establecer niveles de tolerancia mnimos para la seguridad alimentaria conllev a las autoridades sanitarias, tales como la FDA y la Autoridad Europea de Seguridad Alimentaria (EFSA) a establecer Lmites Mximos de Residuos (LMRS) sugeridos en los diferentes tejidos de especies de animales comestibles, tales como 300 g/kg para residuos de Quinolonas en msculo de pollos y pavos (FDA, 2005; Garca, 2006). Las Quinolonas son

antibiticos de uso frecuente en la industria avcola (Sumano y Gutirrez, 2000), y los fabricantes recomiendan no destinar las aves para consumo humano antes de siete das despus del ltimo tratamiento. Sin embargo, en la industria avcola, presionada por mantener niveles de productividad y para garantizar la produccin, tales tiempos con frecuencia no son respetados (Moran, 2000).

A pesar de haberse demostrado que este antibitico causa resistencia de las principales bacterias patgenas que atacan la industria avcola (Sumano y Gutirrez, 2000) y que siendo la Repblica Dominicana el ms grande productor avcola en Centro Amrica y El Caribe (Industria Avcola Empresas Lderes, 2008), no se haba estudiado si las carnes de pollos consumidas se encontraban contaminadas con niveles de Quinolonas por encima de los lmites establecidos.

La presente investigacin determin si las carnes de pollos consumidas en los centros de expendio de la provincia de Santiago, Repblica Dominicana, se encontraban contaminadas con residuos de Quinolonas superiores a los lmites establecidos por las autoridades regulatorias.

MATERIALES Y MTODOS 3.1 Ubicacin de la Investigacin. Esta investigacin se realiz en diferentes (135) centros de expendio de carnes de pollo de la provincia de Santiago, la cual se encuentra en el Norte de la Repblica Dominicana, a 155 km al Noroeste de Santo Domingo, capital de la Repblica, y a 70 km al Sur de Puerto Plata, con las siguientes caractersticas geoclimticas: Altitud 19 28 48 Norte, Longitud 70 41 24 Oeste, una altitud media de 175 msnm, una temperatura media anual de 25.6 C, precipitacin anual de 970 mm. Tiene una poblacin total estimada de 1,052,072 habitantes, un 71.4% de los cuales se concentran en Santiago, su municipio cabecera. La provincia est conformada por 9 municipios y 16 distritos municipales. Los municipios son Santiago, Licey, Tamboril, Pual, Villa Gonzlez, Villa Bison, Sabana Iglesia, San Jos de las Matas, y Jnico (Oficina de la Gobernacin de Santiago, 2007). 3.2 Diseo de la investigacin Segn datos de la oficina de la gobernacin, la provincia de Santiago cuenta con un total de 208 centros de expendio de carmes de pollo (Oficina de la Gobernacin de Santiago, 2009), por lo que a travs de la siguiente frmula estadstica, la cual considera una poblacin finita (Amador, 2008), se tom la siguiente muestra: Poblacin Finita n= pqNs2 2 E (n-1) + s2pq N = nmero de elementos del universo = (208)

n = nmero de elementos de la muestra = ? s = nivel de confianza elegido (2 sigmas) =1.96% p = tanto por ciento estimado = 0.5 q =100 p = 0.5 E = error de estimacin permitido = 0.05%

n=

(0.5) (0.5) 208 (1.96^2) 0.05^2(208-1) + (1.96^2)(0.5)(0.5)

n= 200 (0.0025)(207) + (3.8416) (0.25)

n=

200 = 0.5175 + 0.9604 200 1.4779 = 135.32

200 1.4779

n = 135

Una vez se obtuvo el tamao de la muestra, sta se multiplic por el por ciento de cada estrato para obtener la cantidad de centros de expendio a muestrear en cada uno (n*% de cada estrato). Por el resultado obtenido de la frmula se decidi muestrear 135 centros de expendio, que fueron distribuidos entre Santiago y sus distritos municipales (cuadro 3.1). Cuadro 3.1 Cantidad de Muestras que Fueron Tomadas por cada Municipio. Municipio Santiago Tamboril San Jos De Las Matas Villa Bison Pual Villa Gonzlez Licey Jnico Sabana Iglesia Poblacin 2007 753,629 hab. 57,551 hab. 41,348 hab. 48,204 hab. 49,500 hab. 38,164 hab. 34,679 hab. 17,774 hab. 11,222 hab. Total:1,052,072 hab= habitantes. (Oficina de la Gobernacin de Santiago, 2007) % de la Provincia 71.4% 5.5% 3.9% 4.6% 4.7% 3.6% 3.3% 1.7% 1.1% 100% Cantidad a Muestrear 135*71.4% = 96 135*5.5%:= 8 135*3.9%= 5 135*4.6%= 6 135*4.7%:=6 135*3.6%= 5 135*3.3%= 5 135*1.7%= 2 135*1.1%:=2 135 muestras

3.3 Procedimiento de Muestreo Utilizando un bistur, se tom la parte craneal de la pechuga y se pes para confirmar que tena el peso de 5 gramos, necesario para el anlisis, luego fue introducido en una bolsa plstica estril, correctamente identificada para ser almacenada bajo condiciones de refrigeracin por un perodo de 17 das y finalmente trasladada al laboratorio de la compaa AgroBiotek Dominicana, ubicada en la Calle Santiago No. 608, Altos Gazcue Santo Domingo, Repblica Dominicana donde fueron analizadas (Anexo 1).

3.4 Anlisis de la muestra Una vez obtenida la muestra, se procedi a utilizar el Test Equinox de la compaa Zeu Inmunotec, el cual es un test cualitativo para la deteccin de quinolonas en carne. Es un mtodo que permite comprobar si las carnes contienen Quinolonas en una concentracin por encima de los lmites mximos de residuos (300 g/kg) permitidos por las entidades regulatorios internacionales (basado en la inhibicin del crecimiento de la bacteria Escherichia coli) (Anexo 2).

3.4.1 Preparacin de la muestra

1. Pesar 5 0.5 gramos de carne magra, sin tejido adiposo ni conjuntivo, y trocear la

muestra. 2. Colocar la muestra en un tubo de cristal o plstico resistente al calor y perfectamente cerrado, de aproximadamente 1.5 cm de dimetro.

3. Calentar durante 3 0.5 minutos aproximadamente a 100 grados Celsius. 4. Enfriar tras el tratamiento sumergiendo el tubo cerrado en agua fra (16 18 C) durante 3-5 minutos. 5. Presionar el trozo de carne con unas pinzas para obtener la mxima cantidad de fluido que debe ser al menos 100 L.
6. Transvasar el fluido de carne a un epperdorf y centrifugar durante 3 minutos a 2000

fuerza g (3,813.2 RPM) (Anexo 3).

3.4.2 Preparacin del medio Aadir el contenido del vial Q Medium (medio de cultivo) en el vial de E. coli liofilizado. Homogenizar agitando manual y suavemente durante 10-15 minutos para obtener el medio de deteccin (Anexo 4).

3.4.3 Procedimiento del ensayo 1. Aplicar 50 L de muestra o control (extracto de jugo de carne) en los pocillos. 2. Aplicar 200 L del medio de deteccin. 3. Mezclar suavemente, sellar los pocillos con la lmina adhesiva e incubar a 37 C durante 18 2 h hasta que el control negativo haya virado a color marrn anaranjado.

4. Resultados: lectura visual: Sin invertir la placa, observar la base de los pocillos. Los pocillos de color azul-violeta se identificarn como positivos y los pocillos de color marrn anaranjado como negativos (Anexo 5). Nota: Las pruebas se aplicaron por duplicado y se utilizo un control negativo por cada kit. 3.5 Variables Evaluadas 3.5.1 Cumplimiento con LMRS de Quinolonas establecidos por las autoridades alimentarias. Nmero de muestras positivas segn LMRS.

3.5.2

Tasa (%) de residuos de Quinolonas superiores a los LMRS en los Municipios.

RESULTADOS Y DISCUSIN

4.1 Cumplimiento de los Lmites Mximo de Residuos (LMRS) Establecidos para Quinolonas.

Muestras de las carnes de pollos obtenidas en los diferentes centros de expendio de la Provincia de Santiago donde luego fueron analizadas con el Kit Equinox . En donde se observo la presencia de residuos de antibiticos (Quinolonas) en algunas muestras. Los municipios de Santiago 6.25% (6/96), Licey 20% (1/5), Sabana Iglesia 50% (1/2), San Jos De Las Matas 20% (1/5) (cuadro 4.1) (anexo 6). Por lo tanto los resultados de la presente investigacin sugieren que existe un incumplimiento de los LMRs en los municipios citados y que las personas consumiendo esas carnes, estn ingiriendo residuos de antibiticos (Quinolonas) superior a los Lmites Mximos de Residuos (LMRS) de 300 g/kg establecidos por la Food and Drugs Administration (FDA) y por la Autoridad Europea de Seguridad Alimentaria (EFSA) para las Quinolonas.

Los cambios colorimtricos fueron notorios (Anexo 4) por lo que no se presentaron resultados que pudieran considerase dudosos y todas las muestras fueron realizadas por duplicado. El kit Equinox ha sido utilizado en investigaciones previas y el grado de confiabilidad ha sido demostrado en las mismas (Chapela y Reboreda, 2008).

Como se puede observar en los resultados obtenidos, la presencia de residuos de Quinolonas por encima de los lmites mximos establecidos fueron detectados en varios municipios de la Provincia de Santiago y al igual que esta investigacin en la provincia de Zulia (Venezuela)

en el ao 2006 se realiz una investigacin en la cual se muestrearon por 5 das consecutivos (tomando cada da una muestra de pechuga), 4 plantas procesadoras de carne de pollo para un total de 20 muestras de las cuales el 50% (provenientes de dos plantas) resultaron con residuos de Quinolonas que violaban los lmites mximos de residuos sugeridos (Molero y Prez, 2006). De igual manera en el ao 2005 en la localidad de Cocham, Regin X de Chile se observ un 23% (3/13) de carnes de peces con residuos de antibiticos por encima de los lmites mximos establecidos (Fortt y Cabello, 2005).

Cada vez el tema de los residuos de antibiticos es ms controversial y la preocupacin por su uso a nivel individual y colectivo se incrementa causando que universidades e institutos de investigacin se preocupen por el tema. En Irn donde existe gran uso de antibiticos a nivel veterinario, especialmente en avicultura donde se estima que el 20% del total de antibiticos utilizados corresponde a la familia de las Quinolonas (Salehzadeh y Salehzadeh, 2007); la Organizacin Veterinaria Iran realiz una ambiciosa investigacin en la provincia de Tehern, la cual se prolong por ms de un ao donde se analizaron 270 muestras de carne de pollo, de las cuales 24 muestras (8.8%) resultaron con residuos de Quinolonas superiores a los LMRS establecidos.

Es importante resaltar que en ninguno de los pases mencionados existe normativa oficial para regulacin de estos residuos, y es interesante comparar la incidencia de residuos de antibiticos con pases como Blgica donde existe una normativa estricta con relacin al uso de antibiticos en la avicultura. Por ejemplo, en una investigacin en Blgica donde se analizaron 1,388 muestras de pollo, solo se encontr residuos en 2 de ellas (0.14%)

(Okerman y Vanhood, 1998); un porcentaje mucho menor que los hallazgos en Venezuela, Chile, Irn y en la presente investigacin. Este hallazgo sugiere la necesidad de la aplicacin de normativas gubernamentales especficas para reducir los niveles de residuos de antibiticos. Cuadro 4.1 Resultados de las muestras de carnes de pollo utilizadas para determinar la presencia de quinolonas en la Provincia Santiago, Repblica Dominicana. Municipios Santiago Licey Sabana Iglesia San Jos De Las Matas Jnico Pual Tamboril Villa Bison Villa Gonzlez Total # Total de muestras 96 5 2 5 2 6 8 6 6 135 Nmero de muestras positivas 6 1 1 1 0 0 0 0 0 9 % de muestras positivas. 6.25 % 20 % 50 % 20 % 0% 0% 0% 0% 0% 6.6%

4.2 Determinacin de la tasa (%) de residuos de Quinolonas superiores a los LMRS en los Municipios.

En la presente investigacin se encontraron 9 de 135 centros de expendios muestreados para un total de 6.6% que no cumplan con los LMRS establecidos para Quinolonas (cuadro 4.1), tales centros de expendio estaban ubicados en 4 (Santiago, Licey, San Jos De Las Matas,

Sabana Iglesia) de los 9 municipios muestreados para un total de 44% de municipios positivos (figura 4.1).

Figura 4.1 Tasa (%) de los municipios de la Provincia de Santiago detectados con residuos de Quinolonas.

La presencia de estos residuos involucra un potencial riesgo a los consumidores ya que las carnes fueron muestreadas en puntos de expendio y por lo tanto listas para ser consumidas, lo que demuestra falta de control en el uso de los antibiticos en la parte inicial (produccin) de la cadena comercial de las estas carnes.

En la Repblica Dominicana no se ha realizado mucha investigacin para evaluar la incidencia de residuos de antibiticos en alimentos, especialmente en crnicos, sin embargo,

ya en el ao 1981 en Quito (Ecuador) se realizo una evaluacin de 10 mataderos municipales donde se tomaron y analizaron mediante una prueba inespecfica la presencia o ausencia de residuos de antibiticos y se detect la presencia de residuos de antibiticos en carne de pollo en todos los establecimientos muestreados (100%) (Villacis y Cueva, 1981).

En otra investigacin realizada en Arabia Saudita durante un periodo de dos aos (19961998) utilizando un mtodo especifico para la deteccin de Quinolonas en carnes de pollos, se tomaron muestras de 32 centros de expendio y se determin que 22 de ellas (68%) tenan concentraciones por encima de los LMRs (Zaki y Mastour, 2000). Una de las posibles razones de dichos resultados fue la utilizacin de pre mezclas alimenticias que contenan Quinolonas.

Para contrarrestar esta posible causa, la comunidad cientfica ha planteado una serie de alternativas nutricionales como Prebiticos, Probiticos y cidos orgnicos que se pueden utilizar como promotores del crecimiento (Quiles, 2008).

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