Condensador Diafragma Portafiltro Apertura numrica: Es un valor que indica el ngulo de apertura del cono luminoso.

. Distancia focal: Distancia entre el punto focal y la lente frontal del objetivo, expresada en milmetros. A. N. | Apertura Numrica (A. N.) PALABRAS CLAVE: resolucin, profundidad de campo, distancia de trabajo, brillantez DEFINICIN: La apertura numrica brinda una indicacin de la capacidad de coleccin de luz y poder de resolucin (a una distancia fija) de un objetivo. TECNOLOGA: La A. N. de un objetivo esta impresa en el objetivo junto con otras especificaciones del objetivo. Esta puede variar desde 0.04 para objetivos de bajo aumento hasta 1.3 o 1.4 para objetivos apocromticos de altos aumentos para uso con aceite de inmersin. La A. N. de un objetivo se define por: A. N. = I.R. sen Donde I.R., es el ndice de refraccin del medio, por ejemplo, aire, agua, o aceite, y es la mitad del ngulo del mximo cono de luz que sale o entra al objetivo. Incrementar el ndice de refraccin del medio entre el lente frontal del objetivo y la muestra da como resultado una mayor A. N. efectiva de trabajo. Los objetivos estn disponibles para agua (IR = 1.33), glicerina (IR = 1.47) y aceite de inmersin (IR = 1.51) aun cuando algunos de estos objetivos, especialmente los antiguos, generalmente no son intercambiables sin incurrir en artefactos de imagen. Un objetivo con gran A. N. colecta ms luz, brinda una imagen ms brillantes y es capaz de definir detalles ms finos (por ejemplo, tienen un mayor poder de resolucin) comparado con un objetivo con menor A. N. La relacin entre imagen e intensidad esta dada por: A. N. 4/AT2 Donde AT son los Aumentos Totales APLICACIONES: Los objetivos con mayores A. N. son generalmente preferidos por la mayora de las aplicaciones de imagen ya que ellos brindan mayor resolucin e imgenes ms brillantez. Los objetivos de alta A. N. tienden a tener distancia de trabajo ms cortas, sin embargo, esto puede restringir el espesor el espcimen y/o el uso de equipo de micromanipulacin. En microscopa, la apertura numrica es importante porque indica el poder de resolucin de una lente. El tamao del detalle ms pequeo que puede ser visualizado es proporcional a /AN, donde es la longitud de onda de la luz empleada. Una lente con una apertura numrica grande ser capaz de visualizar ms detalles que una lente con una apertura numrica ms baja no podr. Adems, las lentes con aperturas numricas grandes aceptan ms luz y dan una imagen ms brillante.

La apertura numrica es una medida del dimetro de la apertura comparada con la distancia focal. La resolucin del microscopio vs la apertura numrica? Hola R= tengo entendido Long.onda que la resolucin / de un microscopio (R) es:

Apertura

numrica

Logicamente no es una ingualdad, es una proporcionalidad ya que de por medio supongo que habrn constantes. Pero bueno en definitiva es as no?

Pues mi duda es la siguiente: se busque por donde se busque, en todos sitios se dice que a mayor apertura mayor resolucin y que a mayor long. de onda menor resolucin, y segn la formula que yo he puesto, que creo q est bien, es totalmente al revs!!! no lo entiendo, yo pienso que a mayor apertura numrica, como esta en el denominador, menro resolucion y pero calidad de imagen.

Espero que me ayuden. Gracias Si piensas en la resolucion como la distancia minima en la que dos puntos muy juntos aparecen como separados,la formula tiene sentido. Cuando la apertura numrica aumenta,esa distancia es menor, y por tanto la resolucin mayor. Cuando la longitud de onda aumenta,tambien aumenta esa distancia,es decir,la distancia mnima a la que dos puntos aparecen como separados es mayor,y la resolucin por tanto menor. Vamos, que en realidad la frmula debera decir quiz Dmin ~ Lambda/An y la resolucion sera la inversa R ~ 1/Dmin. Por tanto,llevas razn,es al revs.Pero hay confusin entre la formula que pones,que tiene que ver con la difraccin,y la resolucin,que es lo inverso a la difraccin.

3.4.1.-Aumento El poder de aumento de una lente est determinado por el grado de curvatura de su superficie y la distancia focal. En las lentes convexas mientras mayor sea la curvatura, menor ser la distancia focal y mayor ser el aumento. Se ha enunciado anteriormente que el microscopio compuesto aumenta en dos etapas y puesto que una sola lente no es suficiente se deben colocar varias lentes una detrs de la otra, potenciando de esta manera el poder de aumento. El primer juego de lentes, cercano al objeto en estudio, se denomina objetivo y el segundo juego, cercano al ojo del observador se denomina ocular (11). Cada sistema de lentes es capaz de producir una imagen aumentada cuyo valor se enuncia con la letra x, as que 10x significa que la imagen est aumentada 10 veces. 3.4.2.-Resolucin

Es la capacidad que tiene un sistema ptico de aislar dos puntos que se encuentran muy prximos entre s, de manera que se puedan ver individualizados uno del otro (14). La riqueza de detalles que puede ser observada al microscopio depende de la habilidad de este para hacer que los puntos del objeto que estn muy cercanos aparezcan en la imagen como puntos separados. Mientras ms corta sea la distancia entre esos puntos del objeto, ms finos sern los detalles. La distancia entre esos dos puntos se conoce como Lmite de Resolucin, el cual es tambin referido como el Poder de Resolucin y puede ser utilizada como un indicador del rendimiento del microscopio. Esto se puede comparar vagamente con algunos aspectos de la informtica, el tamao del pixel por ejemplo; mientras ms pequeo sea el tamao, mayor ser la cantidad de detalles de la imagen digital.

Lmites de Resolucin aproximados de Ojo humano: Microscopio Fotnico: Microscopio electrnico: 0,2 nm.

algunos

sistemas 0,2 0,2

pticos: mm. m.

El sistema iluminacin: La fuente luminosa consiste en un espejo o una fuente de luz elctrica que dirige un haz de luz hacia el condensador. CONDENSADOR.- Es una lente de gran abertura que permite dirigir o condensar la mayor parte de los rayos luminosos en la preparacin. En nuestro microscopio est integrado en la platina y tiene un diafragma unido en la parte inferior. DIAFRAGMA: Existe un diafragma en el condensador, que elimina el exceso de luminosidad para tener una buena iluminacin del objeto a observar FUENTE DE LUZ.- Para observar la muestra microscpica es necesario que sta se ilumine con algn tipo de luz y nuestros microscopios cuentan con un foco que da energa elctrica que dirige sus rayos luminosos hacia el sistema condensador.

4.5.-Sistema de iluminacin El sistema de iluminacin est constituido por las partes del microscopio que producen o captan, reflejan y regulan la intensidad de la luz que se utiliza para la observacin microscpica. Uno de los aspectos crticos a considerar en la microscopa ptica es la fuente de luz que se emplea para iluminar el espcimen. Si la muestra es iluminada de manera inadecuada, la calidad de la imagen que se obtiene se ver afectada, aun cuando se disponga de un excelente sistema ptico. La iluminacin ptima debe ser brillante, sin resplandores y en lo posible debe dispersarse de manera uniforme en el campo de observacin. Si se emplea luz visible (fotones) es usual que al microscopio se le denomine fotnico. En sus inicios, la microscopa se practicaba con iluminacin por reflexin; se utilizaba un espejo que se orientaba para recoger la luz solar o en su defecto, luz artificial (la luz de

una vela, mechero a gas, lmparas de aceite o petrleo) y la desviaba hacia la preparacin. Este mtodo se mantuvo durante mucho tiempo, en parte debido al lento perfeccionamiento de las bombillas incandescentes, que consisten en un globo de cristal en el que se ha hecho el vaco y dentro del cual va colocado un hilo de metal (platino, carbn, tungsteno, entre otros) que al paso de una corriente elctrica se pone incandescente y sirve para alumbrar (50). Con el uso de la bombilla elctrica se suprime este espejo y los microscopios pueden utilizarse en cualquier lugar. Sin embargo, algunos modelos de microscopios actuales, desde los ms sencillos y econmicos hasta los ms sofisticados, an poseen un espejo que sirve para desviar la luz producida por la bombilla, en el caso que sta no se encuentre alineada con la platina. El sistema de iluminacin est constituido por la fuente de luz, el condensador y un diafragma o iris. Como regla general, el sistema de iluminacin est colocado debajo de la platina y la finalidad es de iluminar mediante luz transmitida. En la mayora de los casos el estudio de las preparaciones histolgicas se hace por transiluminacin. En otros casos muy especficos se emplea el mtodo de luz reflejada, en el cual se ilumina la superficie del espcimen mediante epi-iluminacin (ver captulo 3). La fuente de luz emite una radiacin que es recogida por un dispositivo denominado condensador, que a su vez forma un cono luminoso necesario para la visualizacin con objetivos de mayor aumento.

4.5.1.-Fuentes de luz Aparte de la luz solar, empleada en microscopios sencillos con espejo, existen numerosas fuentes de iluminacin artificial, tanto para la observacin rutinaria como para la microfotografa. La luz artificial presenta numerosas ventajas tales como la constancia, la uniformidad y la intensidad; adems es muy favorable para los mayores aumentos. Existen varios tipos de fuentes de luz artificial: Bombillas de tungsteno y halgenas: La mayora de microscopios de luz estn dotados de lmparas de este tipo cuyo poder oscila entre 10W y 100W. Se emplean como fuentes principales o accesorias. Estas lmparas son radiadores trmicos que emiten una luz continua en un espectro comprendido entre 300 1200 nm. Estn constituidas por un bulbo de cristal relleno de un gas inerte y un filamento de tungsteno que es activado por una corriente elctrica produciendo una importante cantidad de luz y calor. Varan mucho en tamao, diseo y forma (68). Producen una luz blanca pero incrementan la intensidad del azul al rojo. La luz puede ser muy brillante para la observacin y se reduce con filtros que disminuyen la intensidad, denominados filtros de densidad neutra, disminuyendo la intensidad sin alterar los colores. Tambin se emplean filtros de colores que compensen el color rojo, de manera que se pueda observar la imagen del espcimen sobre un fondo iluminado neutro, blanco y claro. El vidrio azul corrige el tinte amarillo que tiene la luz incandescente y se obtiene una luz suave y agradable que aumenta la definicin. Lmparas de arco elctrico: Son lmparas que pueden contener gases (vapor de mercurio, xenn o circonio) y son empleadas para proveer una luz monocromtica con filtros apropiados, ideal para microfotografa en blanco y negro o a colores. Tambin se utilizan en microscopios especiales (fluorescencia).

 Lser: En los ltimos aos se ha incrementado el uso de lser (Light Amplification by Stimulated Emission of Radiation, Amplificacin de Luz por Emisin Estimulada de Radiacin) (42), que consiste en un dispositivo que genera un haz de luz con caractersticas de tamao, coherencia, forma y pureza controladas. El lser de argn es uno de los ms utilizados, cuya emisin est en el orden de 488-514 nm. Su costo es muy elevado y se emplea principalmente en microscopa confocal. LED: De las siglas en ingls Light-Emitting Diode (diodo emisor de luz) es un dispositivo emisor de luz con caractersticas muy prximas a la luz monocromtica (espectro reducido). La luz se produce cuando una corriente elctrica pasa a travs del material semiconductor (arseniuro de galio-aluminio) del que estn hechos (69). Se utilizan en una amplia gama de artefactos y lmparas. En comparacin con las bombillas incandescentes, son ms interesantes porque permiten ahorro de energa con un mayor rendimiento lumnico. Para microscopa se emplean LED de larga duracin que proveen una luz muy brillante y fra; esto ltimo es una gran ventaja, puesto que no genera calor y la observacin es ms cmoda para el usuario. En la actualidad se producen combinaciones de diodos que emiten una luz blanca.

4.5.2.-Condensador Es un dispositivo que tiene por finalidad formar conos luminosos grandes, con aperturas mayores, necesarios para ver con los objetivos de mayor aumento. El trmino condensador puede considerarse inadecuado, ya que no produce una condensacin de los rayos luminosos, por el contrario, produce un aumento de la seccin del cono luminoso (11) que a su vez forma una imagen ms clara. El condensador est conformado por una o varias lentes situadas debajo de la platina del microscopio, colocadas entre la fuente de luz y el espcimen. El primer condensador que se fabric en 1838 (por Dujardin) posea tres lentes acromticas. Al igual que en los objetivos, las lentes del condensador poseen poder de aumento y tambin producen aberraciones, sin embargo, stas tambin pueden corregirse.

Tipos de condensadores de acuerdo al grado de correccin de aberraciones pticas (15): Condensador de Abbe: Es el ms simple, sin correccin de aberraciones y el ms econmico. Compuesto de dos o ms lentes. Puede llegar a tener una apertura numrica de 1.4 en modelos de tres lentes. Se emplea para observacin de rutina y con objetivos de modesta apertura numrica y amplificacin. Una de las ventajas es el amplio cono de iluminacin que puede producir. Aplantico: Corrige aberraciones de esfericidad. Acromtico: Corrige aberraciones cromticas. Contiene tres o cuatro lentes corregidas para el azul y el rojo. Este condensador es til para observaciones de rutina con objetivos secos y para microfotografa (blanco y negro o color).

Aplantico-Acromtico: Poseen el ms alto nivel de correccin y es el condensador de eleccin para microfotografa a color con luz blanca. Puede contener ocho lentes y su uso es ptimo con inmersin y objetivos de mayor aumento.

El cono de luz que produce el condensador debe ajustarse de manera apropiada para optimizar la intensidad y el ngulo de apertura. Cada vez que se cambia un objetivo se debe realizar un ajuste para obtener el cono de luz conveniente a la apertura numrica del nuevo objetivo. A menudo no es prctico utilizar el mismo condensador para un amplio rango de objetivos (2x hasta 100x). Para objetivos de bajo poder de aumento (menor a 10x) algunos condensadores poseen una lente frontal adicional que es abatible. La altura del condensador es regulada mediante un mecanismo activado con un tornillo que lo baja o lo sube, acercndolo o no a la platina donde est colocado el espcimen (fig. 4-10). Adems de los condensadores empleados en los microscopios de campo claro, existe una variedad de modelos de condensadores especializados que se utilizan en diferentes aplicaciones, cuya finalidad principal es el incremento del contraste entre los detalles de la estructura del espcimen. Se han desarrollado condensadores especiales para microscopa de campo oscuro, contraste de fase, luz polarizada, contraste de interferencia diferencial.

Figura 4-10.-Condensador tipo Abbe y objetivo adaptado. Se observa un condensador con dos lentes y el trazado del haz de luz en un microscopio fotnico. El medio de inmersin, en este caso aceite, se puede colocar tanto entre la lente frontal del condensador y el preparado histolgico como entre el preparado y la lente frontal del objetivo. Modificado de Davison M, Abramowitz M. Optical Microscopy. Olympus Microscopy Resource Center (15).

4.5.3.-Diafragma o iris Es un dispositivo que se coloca inmediatamente debajo de la platina. Debe permitir cambios en la apertura y con dimetros variables cuya finalidad es la de obtener conos luminosos cada vez ms estrechos y eliminar los rayos de luz sobrantes. Los primeros diafragmas consistan en un disco de metal con agujeros de diferente dimetro, el cual se rotaba segn la necesidad. Estos discos fueron substituidos por el iris, otro dispositivo ms elaborado y con un diseo que le permite cambiar de dimetro. La apertura del diafragma se regula en relacin con el tipo de objetivo que se est utilizando. El diafragma o iris est pintado de negro con la finalidad de eliminar los rayos de luz reflejada que pueden interferir con la iluminacin del objeto. (11, 70, 71). (fig. 4-11).

Figura 4-11.-Iris con mecanismo para variar la apertura. Tomado de Cross M, Cole M. Modern Microscope (70).

4.5.4.-Iluminacin Khler La iluminacin es una variable crtica que hay que considerar al poner en funcionamiento el microscopio. Con frecuencia el uso incorrecto de la iluminacin, an en equipos sofisticados, conduce a la obtencin de imgenes defectuosas. El espcimen debe ser iluminado mediante una fuente de luz artificial, la cual puede producir artificios en la imagen que se observa. En el ao 1893, el profesor August Khler propuso un mtodo de iluminacin para optimizar la observacin microscpica y la microfotografa (15), que permite aprovechar al mximo las capacidades de las lentes (objetivos) iluminando la muestra en estudio con un campo de luz uniforme cuyo dimetro sea igual al del rea de captura del objetivo. Los microscopios modernos estn diseados para aplicar la iluminacin Khler y los requerimientos son (figs. 4-12 y 4-13): Condensador que sube y baja para enfocar el cono de luz. Bombilla con lente colectora.

 Dos diafragmas, un diafragma de campo situado a nivel de la lmpara y un diafragma de apertura, colocado debajo del condensador.

Figura 4-12.-Iluminacin Khler. Se debe iluminar el espcimen siguiendo el esquema. La lmpara posee un filamento (S) incandescente cuya luz es captada por la lente colectora L1 y regulada por el diafragma de campo D1. La imagen S del filamento de la lmpara es proyectada al plano del segundo diafragma D2. Este primer paso se realiza con D1 completamente abierto. La altura del condensador L2 se regula de manera que su punto focal est en el plano D2. La imagen del diafragma de campo D1 es proyectada en el plano de la preparacin por el condensador. Tomado de Estudio de diafragmas de campo y apertura. Microscopio (72).

El condensador se desplaza verticalmente hasta obtener una imagen ntida del diafragma de campo. La iluminacin ideal se consigue cundo el condensador se encuentra lo ms cerca de la preparacin. El diafragma de campo regula el dimetro de la apertura de la iluminacin y al cerrarlo se incrementan los contrastes (15). Una vez ajustada la iluminacin Khler no se debe regular la intensidad de la luz o el brillo bajando el condensador o cerrando la apertura de diafragma-iris, por el contrario, se regula la intensidad de la lmpara mediante un ajuste de voltaje.

Figura 4-13.-Trayectoria de la luz en la iluminacin Khler. Modificado de Davison M, Abramowitz M. Optical Microscopy. Olympus Microscopy Resource Center (15).

www.medic.ula.ve/histologia/anexos/microscopweb/.../capitulo

.htm

El microscopio compuesto u ptico utiliza lentes para ampliar las imgenes de los objetos observados. El aumento obtenido con estos microscopios es reducido, debido a la longitud de onda de la luz visible que impone limitaciones. El microscopio ptico puede ser monocular, y consta de un solo tubo. La observacin en estos casos se hace con un solo ojo. Es binocular cuando posee dos tubos. La observacin se hace con los dos ojos. Esto presenta ventajas tales como mejor percepcin de la imagen, ms cmoda la observacin y se perciben con mayor nitidez los detalles. Microscopio estereoscpico: el microscopio estereoscpico hace posible la visin tridimensional de los objetos. Consta de dos tubos oculares y dos objetivos pares para cada aumento. Este microscopio ofrece ventajas para observaciones que requieren pequeos aumentos. El ptimo de visin estereoscpica se encuentra entre 2 y 40X o aumento total del microscopio. Microscopio de campo oscuro. Este microscopio est provisto de un condensador paraboloide, que hace que los rayos luminosos no penetren directamente en el objetivo, sino que iluminan oblicuamente la preparacin. Los objetos aparecen como puntos luminosos sobre un fondo oscuro. Microscopio de fluorescencia. La fluorescencia es la propiedad que tienen algunas sustancias de emitir luz propia cuando inciden sobre ellas radiaciones energticas. El tratamiento del material biolgico con flurocromos facilita la observacin al microscopio. Microscopio de contraste de fases. Se basa en las modificaciones de la trayectoria de los rayos de luz, los cuales producen contrastes notables en la preparacin. Microscopio vertical: Es el microscopio convencional, perfeccionado a partir de los modelos antiguos, que posee la fuente de luz ubicada en la base, por debajo de la platina. Es el microscopio de uso ms comn. Microscopio invertido: La estructura del microscopio es invertida en comparacin al microscopio convencional. La fuente de luz est ubicada por encima de la platina y el principio de funcionamiento y formacin de la imagen es el mismo que el del microscopio tradicional. Utilizado principalmente para cultivos celulares (clulas vivas) sin una preparacin previa y para monitorear actividades (crecimiento, comportamiento) (fig. 418). Microscopio estereoscpico: Este tipo de microscopio proporciona una imagen estereoscpica, en tres dimensiones (3D) del espcimen. Se fundamenta en la visin binocular convencional, en la que los dos ojos observan el espcimen con ngulos levemente distintos. El microscopio estereoscpico debe ser binocular. Se utiliza para observar especmenes de gran tamao, sin corte o preparacin previa puesto que emplea luz incidente y no funciona por trans-iluminacin. Es ideal para realizar microdiseccion (fig. 4-19).

 Microscopio quirrgico: Es un microscopio que se emplea en microciruga. Proporciona un campo muy bien iluminado y un aumento de las estructuras anatmicas, facilitndole al cirujano una mayor visibilidad de los tejidos sanos y patolgicos que sern manipulados ms cuidadosamente y con menores posibilidades de lesin. Algunos modelos ms sofisticados tienen piezas automatizadas robticas. Se utiliza principalmente en intervenciones quirrgicas en las que se amerite una minuciosa diseccin, como por ejemplo del crneo y cerebro o del globo ocular (fig. 4-20) (80, 81). Microscopios fotnicos especiales: Ciertos especmenes, principalmente las clulas vivas o muestras no coloreadas, al ser observados en el microscopio comn de campo claro, muestran un muy pobre contraste de sus estructuras y no aportan datos relevantes, a pesar del poder de resolucin de los objetivos empleados. Para ello se han creado microscopios con ciertas particularidades que permiten la observacin de ese tipo de especmenes con un incremento muy satisfactorio del contraste. Entre ellos se citan: Microscopio de campo oscuro. Microscopio de luz ultravioleta. Microscopio de fluorescencia. Microscopio de polarizacin. Microscopio de contraste de fases. Microscopios interferenciales. El microscopio de campo oscuro: Se le llama tambin ultramicroscopio y es un microscopio ptico ordinario cuyo sistema condensador ha sido modificado para dirigir la luz a la preparacin desde los lados, de tal modo que slo la luz difractada por la preparacin pasa al ocular y se hace visible. A causa de esta disposicin, la muestra aparece iluminada sobre un fondo oscuro. La microscopa de campo oscuro hace posible la observacin en estado vivo de partculas y clulas que de otra manera estaran por debajo de los lmites de resolucin del microscopio ptico, aunque resulten visibles pocos detalles estructurales. La microscopia de campo oscuro ha sido ampliamente usada en el estudio de pequeas clulas mviles tales como Treponema pallidum, la espiroqueta causante de la sfilis, que es invisible con la microscopa ptica ordinaria. Microscopio de campo oscuro. Este microscopio est provisto de un condensador paraboloide, que hace que los rayos luminosos no penetren directamente en el objetivo, sino que iluminan oblicuamente la preparacin. Los objetos aparecen como puntos luminosos sobre un fondo oscuro.

Microscopio electrnico de barrido El microscopio electrnico de barrido est situado a la izquierda del operador, y las imgenes computarizadas de la muestra se ven en la pantalla de la derecha. Aunque un microscopio electrnico de transmisin puede resolver objetos ms pequeos que uno de barrido, este ltimo genera imgenes ms tiles para conocer la estructura tridimensional de objetos minsculos. El microscopio electrnico de barrido se utiliza para el estudio de la morfologa y la topografa de los elementos. Estos instrumentos utilizan voltajes cercanos a los 20.000 voltios. Las lentes magnticas utilizan un haz muy fino de electrones para penetrar repetidamente la muestra, y se produce una imagen ampliada de la superficie observada en la pantalla de un monitor. El microscopio Electrnico. Utiliza una fuente de electrones para observar la muestra y se clasifican en dos: 1.-De Transmisin lineal porque los electrones atraviesan la muestra y la reflejan en una pantalla fluorescente, aumentando la imagen a unas 200,000 veces ms que el ojo humano. 2.-De Barrido Superficial porque los electrones no atraviesan la muestra, solamente recorren la superficie como si la barrieran, proyectndola en una pantalla de televisin, aumentando la imagen hasta 1,000,000 de veces.

ANTICOAGULANTES

Descripcin de los anticoagulantes usados en Hematologa

Los anticoagulantes se utilizan para obtener plasma o muestras de sangre total para estudiar las caractersticas morfolgicas y realizar los recuentos celulares. Deben intentar que las clulas sanguneas a estudiar se encuentren en el estado ms parecido al fisiolgico, como cuando se encuentran circulando por el torrente sanguneo. Para ello los anticoagulantes no deben alterar la morfologa de los leucocitos, el tamao eritrocitario, no producir hemlisis e impedir la agregacin plaquetaria, posibilitando al mismo tiempo el mximo perodo de conservacin de la muestra (generalmente no ms de 24 horas incluso refrigerada a 4 C). Los anticoagulantes ms utilizados son: EDTA (C10H16N2O8) o sal disdica, dipotsica o tripotsica del cido etilendiaminotetraactico, actuando mediante un efecto quelante sobre el calcio (Ca++), impidiendo el proceso de la coagulacin al fijarlo. Este anticoagulante se utiliza fundamentalmente para la realizacin de recuentos celulares, sobretodo en los autoanalizadores y permite adems la realizacin del hematocrito y del frotis sanguneo hasta dos horas despus de la extraccin de la muestra al mismo tiempo que impide la aglutinacin de las plaquetas. Las sales de potasio tienen la ventaja con respecto a la de sodio, por ser ms fcilmente solubles en sangre cuando las usamos a partir del producto slido, sin embargo , las tres sales afectan el tamao del eritrocito, especialmente despus del almacenamiento de la sangre anticoagulada por espacio

de algunas horas. El International Council for Standardization in Hematology (ICSH) recomienda la sal dipotsica como anticoagulante para recolectar muestras sanguneas destinadas al recuento y caracterizacin del tamao celular y especialmente cuando los valores del hematocrito se requieren para la calibracin de los contadores automticos. El K2EDTA .2H2O posee un peso molecular relativo de 404,1g; 1g quela 100 mg de calcio inico y el pH para una solucin al 1% es de 4.8+/-1,0. La cantidad de EDTA dihidratado agregada a la sangre debe ser de 1.5-2.2 mg/ml. de sangre total. Esta cantidad es un compromiso entre la cantidad requerida para evitar la coagulacin y la cantidad a la cual se producen las alteraciones celulares. HEPARINA SDICA. HEPARINA DE LITIO, es un anticoagulante fisiolgico que acta impidiendo que la protrombina se transforme en trombina. Estructuralmente es un mucopolisacrido cido. Los frotis realizados con muestras sanguneas anticoaguladas con heparina producen en las tinciones panpticas un color azulado y una pseudovacuolizacin celular por lo tanto no se lo recomienda para tal fin. La proporcin adecuada es de 15-20 UI (0.1-0.2 mg) de heparina por ml de sangre. CITRATO TRISDICO, C6H5O7Na3, acta impidiendo que el calcio se ionice, evitando as la coagulacin. Se utiliza para realizar las pruebas de Hemostasia en una proporcin sangre: anticoagulante 9:1; as como para la velocidad de eritrosedimentacin en una proporcin sangre: anticoagulante 4:1. El citrato sdico se utiliza a una concentracin de 0.106 mol/l (31,3 g/L de C6H5O7Na3.2H2O). ACD se emplea fundamentalmente en Bancos de Sangre para conservar las unidades de sangre y estudios metablicos eritrocitarios por permitir una buena conservacin de los hemates. Se utiliza en una proporcin de un volumen de ACD por cada cuatro volmenes de sangre. La proporcin de la mezcla del anticoagulante es de: Acido Ctrico 0.9 g, Citrato disdico 2 g, Dextrosa 2 g, H2O destilada 120 ml.

Una vez extrada la sangre, sta puede conservarse coagulada o mantenidaincoagulable mediante la adicin de un anticoagulante. 4.1 CARACTERSTICAS BSICAS DE LOS ANTICOAGULANTES MS USADOSEN HEMATOLOGA No alterar el tamao de los hemates. No producir hemlisis. Evitar al mximo la agregacin plaquetaria. No alterar la morfologa de los leucocitos.La sangre tratada con anticoagulante debe procesarse lo antes posible, inclu-so mantenida bajo refrigeracin (4 C) si no pasan de las 2 horas. El tiempomximo entre la extraccin de la sangre y su procesamiento depende delcoagulante de eleccin y no debe ser ms de 4 horas, a excepcin delanticoagulante EDTA (etilendiaminotetractico) que puede ser hasta 24 horas(en refrigeracin a 4 C).Los anticoagulantes pueden emplearse en forma slida o lquida. Los prime-ros estn indicados para la determinacin de los parmetros hematolgicos,ya que no producen, como los anticoagulantes lquidos, dilucin de la sangre. 4.2 ANTICOAGULANTES SLIDOS

4.2.1 EDTA Es la sal disdica o tripotsica del cido etilendiaminotetractico. La saldisdica (Na 2EDTA) es menos soluble que la sal tripotsica (K3EDTA). Estoscompuestos realizan su accin a travs de un efecto quelante sobre el calcio,al fijarlo impiden su activacin y, por ende, la coagulacin sangunea. 4.2.1.1 Ventajas Respeta la morfologa eritrocitaria (especialmente la sal tripotsica) yleucocitaria, de manera que permite una demora de dos horas en la reali-zacin del frotis sanguneo despus de la extraccin sangunea. Asegura la conservacin de los elementos formes sanguneos durante 24horas si la sangre se mantiene a 4 C. Al inhibir la aglutinacin de las plaquetas, facilita su recuento o su expre-sin semicuantitativa a partir del frotis. La concentracin recomendada de EDTA es de 1,5 mg/mL. de sangre. Unamayor cantidad de anticoagulante puede producir retraccin celular, condisminucin del hematocrito, y un aumento de la concentracin media de lahemoglobina. Un exceso de sangre con relacin al anticoagulante produceformacin de microagregados que pueden alterar los resultados. El em-pleo de tubos al vaco con una gota (50 mL) de EDTA tripotsica comercialpara 5 mL de sangre es de inters prctico dado que es cien veces mssoluble facilitando la mezcla de sangre con anticoagulante. 4.2.1.2 Desventajas Usado en exceso afecta a los eritrocitos y a los leucocitos, a los cuales lesproduce encogimiento y cambios en su forma, por ello debe cuidarse de agregar la cantidad correcta de sangre al anticoagulante. 4.2.2 Anticoagulante de Wintrobe Es una mezcla de oxalato de amonio y potasio. Acta por precipitacin delcalcio, es fcil de preparar. Se emplea en forma de polvo en proporcin de 2 deoxalato de amonio por 1 de oxalato de potasio. La cantidad recomendada esde 2 mg x mL de sangre. Este anticoagulante no afecta el volumen globularmedio y puede usarse para determinaciones de hemoglobina, hematocrito yrecuento globular, pero para los extendidos queda limitada a los primerosminutos, tampoco es til para el recuento plaquetario porque produce forma-cin de agregados plaquetarios. 4.2.3 Heparina El nombre de heparina proviene del griego hepar, que significa hgado, ya quefue aislado por primera vez de las clulas de este tejido. Es un mucopolisacridocido. Presenta el inconveniente de que si no se agita rpidamente con lasangre despus de extrada pueden formarse microcogulos, aunque no alte-ra el volumen eritrocitario ni la morfologa de los leucocitos. No es recomenda-ble para el frotis sanguneo porque produce un fondo azul en la lmina. La heparina de sodio o litio puede usarse en forma slida o lquida, en propor-cin de 0,1 0,2 mg de heparina por 1 mL de sangre.

4.3 ANTICOAGULANTES LQUIDOS 4.3.1 Citrato trisdico

Es de eleccin para las pruebas de hemostasia y la velocidad de sedimenta-cin. Acta a travs de la precipitacin del calcio. La concentracin depende dela prueba por realizar. Para pruebas de hemostasia se emplea en proporcin de 1: 9 (0,5 mL deanticoagulante para 4,5 mL de sangre total). Para la determinacin de la VSG (Velocidad de Sedimentacin Globular) es1:4 (0,5 mL de anticoagulante para 2 mL de sangre). 4.3.2 Oxalato sdico Recomendado tambin para las pruebas de hemostasia. Se emplea en pro-porcin de un volumen de anticoagulante para 4 vol. de sangre.

Sangrado dentro de la piel

Enviar esta pgina a un amigoShare on facebookShare on twitterFavorito/CompartirVersin para imprimir El sangrado por debajo de la piel puede ocurrir a partir de vasos sanguneos rotos que forman diminutos puntos rojos, llamados petequias. La sangre tambin se puede acumular bajo el tejido en reas planas ms grandes, llamadas prpura o en un rea con hematomas grandes, llamada equimosis.

Hematoma: Introduccin
Un hematoma es una acumulacin localizada de sangre, usualmente sangre coagulada. Algunos tipos comunes de hematoma incluyen moretones, hematoma subdural (cerebro), hematoma subungueal (ua), o hematoma epidural (meninges). Equimosis es un trmino mdico que define una lesin subcutnea caracterizada por depsitos de sangre extravasada debajo de la piel intacta. Es clasificada como contusin simple y es un signo inequvoco de vitalidad. Su tamao puede variar. Cuando la equimosis ocasiona una elevacin palpable de la piel sobre la misma se le llama hematoma o, comnmente, moretn.1 Si su tamao es muy pequeo se le llama petequias. Se puede localizar en la piel o en la membrana mucosa. Las petequias son lesiones pequeas de color rojo, formadas por extravasacin de un nmero pequeo de eritrocitos cuando se daa un capilar. Las anormalidades de las plaquetas o de los capilares se suelen asociar con petequias. Son pequeos derrames vasculares cutneos del tamao de una cabeza de alfiler. Inicialmente son de color rojo, violceo o negruzco y cambian despus hacia el verde, el amarillo y el marrn a consecuencia de los sucesivos cambios qumicos de la sangre.

SEPSIA Es la entrada de grmenes patgenos en el organismo, capaces o no de producir enfermedad, dependiendo de su virulencia, la puerta de entrada, la cantidad y el estado defensivo del organismo. ASEPSIA Medida encaminada a impedir la infeccin Ejemp.: El uso de material estril para realizar una cura.
ACTIVO Alcoholes Clorhexidina Tintura de yodo Povidona yodada Triclosn IRRITACIN Desecacin de la piel Baja Alta Regular Baja SEGURIDAD Inflamable Baja Inflamable Alta Alta

el

contagio.

INACTIVACIN S Mnima S S Mnima

4.5.2 Extraccin de sangre por vaco La extraccin de sangre por vaco es la tcnica de extraccin de sangre venosa recomendada por el CLSI en la actualidad. Se utiliza en todo el mundo y en la mayora de los laboratorios brasileos, puesto que proporciona al usuario innumerables ventajas: La facilidad en la manipulacin es una de sus ventajas, dado que el tubo para la extraccin de la sangre por vaco tiene en su interior vaco calibrado y en capacidad proporcional al volumen de sangre informado en su etiqueta externa, lo que significa que cuando la sangre deja de fluir dentro del tubo, la persona que extrae la sangre tendr la certeza de que se extrajo el volumen de sangre correcto. La cantidad de anticoagulante/ activador del cogulo es proporcional al volumen de sangre que tiene que ser extrada, generando, al final de la extraccin, una muestra de calidad para ser procesada o analizada. La comodidad del paciente es esencial, dado que con una nica puncin venosa se pueden llenar rpidamente todos los tubos que son necesarios para las pruebas solicitadas por el mdico. Los pacientes con accesos venosos difciles, como nios, pacientes en tratamiento mdico, sometidos a quimioterapia, etc., tambin se benefician, puesto que hay productos que facilitan estas extracciones (palomillas para 28extraccin mltiple de sangre al vaco de distintos calibres de aguja y tubos para la extraccin de la sangre al vaco con menores volmenes de aspiracin). Otro aspecto relevante a tener en cuenta es el avance de la tecnologa en los equipos para el diagnstico y equipos con mayor especificidad y sensibilidad, que hoy requieren un menor volumen de muestra del paciente. Garanta de la calidad en los resultados de las pruebas, factor relevante y primordial en un laboratorio. Seguridad del profesional de la salud y del paciente, puesto que la extraccin por vaco es un sistema cerrado de extraccin de sangre. Al punzar la vena del paciente, la sangre fluye directamente de su vena al tubo de extraccin por vaco. Esto proporciona seguridad biolgica a la persona que extrae la sangre, puesto que no hay necesidad de manipulacin de la muestra de sangre. Por estos y otros motivos, como es la diferencia de acceso venoso de un paciente a otro, recomendamos que se tengan en cuenta algunos aspectos relevantes para la correcta extraccin.

4.9.1 Secuencia de extraccin para tubos plsticos de extraccin de sangre 1. Frascos para hemocultivos. 2. Tubos con citrato (tapa azul claro). 3. Tubos para suero con activador de cogulo, con o sin gel separador (tapa roja o amarilla). 4. Tubos con heparina con o sin gel separador de plasma (tapa verde). 5. Tubos con EDTA (tapa malva). 6. Tubos con fluoruro (tapa gris). 4.9.2 Secuencia de extraccin para tubos de vidrio de extraccin de sangre 1. Frascos para hemocultivos. 2. Tubos para suero de vidrio siliconizado (tapa roja). 3. Tubos con citrato (tapa azul claro). 4. Tubos para suero con activador de cogulo, con o sin gel separador (tapa amarilla). 5. Tubos con heparina con o sin gel separador de plasma (tapa verde). 6. Tubos con EDTA (tapa malva). 7. Tubos con fluoruro (tapa gris).