INTRODUCCION

La micropropagacin consiste en la propagacin de un genotipo a gran escala a travs del empleo de tcnicas de Cultivo de Tejidos. Es una herramienta muy til en los programas de mejoramiento, ya que tiene el potencial de producir plantas de calidad uniforme a escala comercial, a partir de un genotipo selecto y con una tasa de multiplicacin ilimitada. Esto es posible gracias a la propiedad de totipotencia que tienen las clulas vegetales; esto es la capacidad de regenerar una planta completa cuando estn sujetas a los estmulos adecuados. As, las clulas somticas de cualquier tejido podran formar tallos, races o embriones somticos de acuerdo con la competencia que posean y al estmulo que reciban. El desarrollo de una metodologa de micropropagacin a partir de meristemos apicales es importante para conocer el comportamiento in vitro de esta variedad y apoyar la multiplicacin de plantas lite de sexo femenino seleccionadas en campo por sus caractersticas fenotpicas especiales; adems se puede realizar una cuidadosa seleccin del material gentico, manejar grandes volmenes de plntulas en espacios reducidos y mantener un stock de plantas libres de enfermedades
(1)

. Una forma de obtener plantas

libres de patgenos es a travs del cultivo in vitro de meristemos que se fundamenta en el hecho de que la distribucin de los microorganismos (virus, bacterias y micoplasmas) en los tejidos de la planta no es uniforme y su concentracin tiende a disminuir progresivamente hacia el pice del tallo (2). Uno de los mtodos principales de regeneracin de plantas in vitro es la formacin de yemas axilares en hojas jvenes o primordios de hojas en meristemos o yemas de tallo que han sido aislados y cultivados in vitro. Todas las plantas formadas por este mtodo son genticamente uniformes y se originan directamente de meristemos preexistentes o recientemente formados sin intervencin del estado de callo
(3)

. La tcnica del cultivo de

meristemos consiste en la diseccin e incubacin del meristemo apical de una planta en condiciones de asepsia. Se considera como meristemo en sentido estricto al domo meristemtico del pice o bien el domo meristemtico con uno o dos primordios foliares. La dificultad del cultivo del meristemo aislado aconseja diseccionarlo y cultivarlo con al menos uno de los primordios foliares, con lo que tambin se obtienen buenos resultados.

OBJETIVOS Conocer las diferentes maneras en que podemos propagar las plantas a nivel de laboratorio. Identificar y clasificar los diferentes partes de la planta que se usan para la micropropagacin y las fases que conllevan el proceso.

MATERIALES Y METODOS Materiales:

Esquejes con hojas de camote. 2 mecheros con alcohol comercial. 1 frasco de alcohol al 70. 1 frasco de leja clorox al 2%. Agua destilada estril. 1 frasco de alcohol comercial. Pinza y bistur estril. 2 placas Petri estril. 1 encendedor o caja de fosforo. Algodn. 1 vaso de precipitacin.

Mtodo: El trabajo se inicia con la mxima asepsia posible para evitar cualquier tipo de contaminacin del explanto. En primer lugar se coloca el bistur y la pinza en un vaso de precipitacin con algodn y alcohol comercial para evitar as cierta contaminacin. De los esquejes del camote se obtienen los nudos que contengan las yemas ms pequeas posibles y se colocan en una placa Petri con agua de cao; se obtiene aproximadamente 10 yemas. Posteriormente se hace uso de los mecheros; la distancia entre estos debe ser aproximadamente 20 cm, esto para evitar cualquier tipo de contaminacin en los explantes Estando todo preparado, se procede a la desinfeccin de las yemas, para esto se les coloca en otra placa Petri con alcohol al 70% por 30 segundos. Terminado el tiempo se les enjuaga 5 veces con agua destilada estril. Seguido a esto se le agrega leja al 2% por 3 minutos y posteriormente se enjuaga 5 veces nuevamente con agua destilada estril. Concluido todo el proceso, se procede al sembrado de los explantes ya libres de contaminacin en frasquitos de penicilina el cual contiene el medio de cultivo apropiado, para esto se hace uso del bistur y se procura que los explantes queden paraditos en el medio de cultivo. Finalmente se sella los frasquitos con papel aluminio. Se coloca los frasquitos en un lugar desinfectado y que tenga luz atenuada.

RESULTADOS

Fig.1: Frasquitos de penicilina con el explante

Fig.2: explante con raz

Frasquitos de penicilina N1

Observacin No se vio crecimiento de raz en el explante. Libre de contaminacin.

N2

Se vio crecimiento de raz en el explante. Libre de contaminacin.

N3

Se vio crecimiento de raz en el explante. Libre de contaminacin.

N4

No se vio crecimiento de raz en el explante. Libre de contaminacin.

N5

No se vio crecimiento de raz en el explante. Libre de contaminacin.

DISCUSION En diversas investigaciones se ha observado que al reducir el tamao del explante se disminuye la contaminacin y el problema de desinfeccin superficial
(4&5)

En diversas especies leosas propagadas a travs de segmentos nodales, el establecimiento in vitro de los cultivos se ve dificultado por la contaminacin con hongos, bacterias o ambos (6). La presencia de contaminantes tanto externos como internos afectan el desempeo de los explantes una vez establecidos en condiciones in vitro haciendo indispensable el uso tcnicas que permitan la deteccin de patgenos sistmicos y su desinfeccin superficial (Leifert y Cassels, 2001; Surez et al., 2003). En esta investigacin no se observ contaminacin en la introduccin in vitro de meristemos apicales de camote. El uso de alcohol (70%) durante 30 segundos y NaCl (2%) durante 3 minutos result ser muy efectivo en la desinfeccin de explantes, pero es muy importante considerar que la introduccin de meristemos se hizo a partir de plntulas provenientes de un cultivo. Jimnez (1998) indica que los pices y meristemos que son empleados como material inicial para el cultivo in vitro, son reas de sntesis de auxinas por lo que la concentracin endgena es alta y que normalmente cuando se emplean pices no se adicionan auxinas al medio de cultivo aunque estos pueden estimular el crecimiento, pero cuando se emplean meristemos es frecuente que no exista suficiente auxina endgena siendo necesaria la adicin exgena. En los ltimos tiempos aos, el cultivo de tejidos vegetales ha cobrado mayor inters debido a las expectativas que se tiene en cuanto a la biotecnologa; es de considerar, por ejemplo la creciente importancia que el cultivo de tejidos esta adquiriendo en la agricultura se tiene predicciones de que las tcnicas in vitro sern una importante herramienta de la agricultura del siglo XXI.

CONCLUSION La desinfeccin superficial con hipoclorito de sodio no permiti el establecimiento asptico de pices y segmentos nodales del camote. Los segmentos nodales tratados con hipoclorito de sodio mostraron un menor porcentaje de explantes con hongos y contaminados totales. El cultivo in vitro es un mtodo de propagacin de plantas de aplicacin profesional, puesto que se realiza en laboratorio, en unas condiciones estriles y con unas instalaciones especiales.

REFERENCIA BIBLIOGRAFICA 1. Ibar L. Aguacate, Chirimoyo, Mango y Papaya. Editorial Aedos. Barcelona, Espaa. 173 pp. 1979. 2. Jimnez E. Cultivo de pices y meristemos. En J. Prez (Ed.), Propagacin y mejora gentica de plantas por biotecnologa (pp. 45-56). Cuba. Ediciones GEO. 1998. 3. Binding, H. Reproducibly high plating efficiencies of isolated mesophyll protoplasts from shoot cultures of Tobacco. Physiology Plantarum 35:225-227. 1975. 4. 4- Sandoval, J. A. y L. E. Muller. Influencia del tamao del explante en la propagacin in vitro de cuatro cultivares de Musa. Turrialba 42: 243- 248. 1992. 5. 5- Somarribas, Y., G. Nir, L. Fanberstein y S. Lavee. The effect of cyanamide on the realease from dormancy of grapevine buds. Scientia Hort. 19: 97-104. 1983. 6. 6- Rey, H. Y., O. J. Burtnik, P. A. Sansberro y L. A. Mroginski. Medios de cultivo para el establecimiento in vitro de explantos de yerba mate (Ilex paraguariensis). Turrialba 41: 306- 310. 1991.

ANEXOS Preparacin del medio de cultivo

Sembrado del explante