DETERMINACION DE PROTEIINAS METODO DE KJELDAHL Materiales: - Harina de frejol - Extracto resultante de la extraccin acuosa

Reactivos: - H2SO4 Concentrado - Mezcla catalizadora (cuSO4 y K2 SO4) - H2SO4 0.02N padronizado - NaOH 50% - H3BO3 - Indicador (rojo de metilo + verde de bromocresol)

Primera parte: Digestin 1.- Ligar el restato del bloque digestor, verificando el voltaje correcto 2.- Muestras 2.1.- Pesar cerca de 0,308 sobre papel vegetal previamente pesado, colocar juntamente con el papel de pesado en el tubo de digestin. Colocar 1.132gr. de CuSO4, 1.0gr. de K2SO4 y 5ml de H2SO4 concentrado. Agitar cuidadosamente el tubo para mezclar la muestra (en caso de muestras con alto contenido de protenas, el pesado deber ser menor, cerca de 0,1gr.). Hacer un blanco. 2.2.- Iniciar el calentamiento solamente cuando la muestra estuviera lista y colocada en el bloque digestor. La temperatura debe ser en torno de 105C. Aumentar gradualmente hasta 400C.

2b. Muestras Liquidas 2b1.- Medir 2.0ml con pipeta volumtrica. Adicionar los catalizadores en la misma cantidad en 5.0ml de H2SO4. Agitar cuidadosamente el tubo para mezclar la muestra.

2b2.- Iniciar el calentamiento solamente cuando la muestra estuviera lista y colocada en el bloque digestor. La temperatura debe ser en torno de 50C. Aumentar lentamente hasta 400C (No debe aumentar bruscamente, pues ocurrir prdida de muestra)

3.- El termino de la digestin es verificada cuando la muestra estuviera limpia y verdosa en caliente, y limpia azulada en frio. 4.- Terminada la digestin se vuelve el dial del restato para acero y se desliga la red elctrica. 5.- Retirar los tubos del bloque. Colocndolos en el soporte de tubos para su enfriamiento y posterior destilacin.

Segunda Parte: Destilacin. 1.- El nivel del agua en el baln de generacin de vapor debe estar encima del sensor. Completar siempre, colocando agua destilada a travs del embudo apropiado y cerrar la llave de funil. Cerrar la llave del funil dosador de soda. 2.- Ligar el aparato verificndose el voltaje de la red elctrica. 3.- Abrir la llave de agua para circulacin en el condensador. 4.- Girar el dial de la resistencia hasta 7/8 para calentamiento del agua del generador de vapor y esperar que hierva. 5.- Diluir la muestra que est en el tubo de digestin con 15ml de agua destilada (muestra fra) 6.- Girar el dial para cero y abrir la llave del embudo del baln generador de vapor. 7.- Colocar el erlenmeyer de 125ml conteniendo 10ml de H3BO4 (2%) con indicador (verde bromocresol y rojo de metilo) en el soporte abajo del condensador. 8.- Conectar el tubo de protena digerida en el local de encaje 9.- Adicionar NaOH 50% en el embudo dosador de soda (la llave deber estar cerrada) 10.- Abriendo la llave del dosador de soda lentamente (gota a gota), adicionar NaOH 50% hasta neutralizar. (La muestra neutra quedar de color oscuro o marrn) 11.- Terminada la neutralizacin, cerrar la llave del embudo de soda y del baln generador de vapor, inmediatamente girar el dial para 10 para iniciar el calentamiento y formacin de vapor. 12.- Retirar el erlenmeyer, girar el dial para 3/4 , abrir la llave del baln generador de vapor y retirar el tubo digestor

13.- Para limpiar el sistema, conectar un tubo digestor limpio, conectado 2ml de agua destilada, cerrar la llave generador de vapor, girar el dial hasta 10 y destilar por 5 minutos. 14.- Retirar el tubo de lavado procediendo como en el tem 13. El aparato estar listo para nueva destilacin (proceder como en los tems 7 al 13) 15.- Terminadas todas las destilaciones, proceder a la ultima destilacin de limpieza con agua destilada, teniendo el cuidado de agotar la soda de su reservatorio, lavndolo tambin con agua destilada.

Tercera parte: Titulacin 1.- Preparar una bureta de 50ml con H2SO4 0,02N factorada. 2.- Titular directamente en el erlenmeyer en el que fue colectado el destilado. 3.- El punto final de la titulacin ser indicado por la mudanza de color de la solucin.

CALCULOS: - Realizar los clculos como ida el profesor. 1.- Digestor en H2SO4 Compuesto Orgnico + H2SO4 (NH4)2SO4 2.- Destilacion con NaoH (NH4)2SO4 + NaOH NH3 + Na2SO4 + H2O