I. INTRODUCCIN La vida depende de la existencia de unos catalizadores muy potentes y altamente especficos denominados enzimas.

De hecho, todos los pasos de todos los procesos metablicos estn catalizados por enzimas y la capacidad cataltica se considera, junto con la capacidad de autorreplicacin, una de las caractersticas fundamentales de la vida. Con la excepcin de un pequeo grupo de molculas de RNA cataltico (los ribozimas), todas las enzimas conocidas son protenas. Al igual que las disciplinas experimentales que han surgido como rama comn que es la biologa, tiene una historia propia construida a travs de observaciones, experiencias, pruebas y teoras. Se inici con el estudio de los procesos de fermentacin y de putrefaccin y Antoine-Laurent Lavoiser (17431794) fue el primero en plantear sobre bases cuantitativas el proceso de la fermentacin alcohlica al observar una relacin entre cantidad de azcar presente y productos formados durante el proceso. Sostuvo que la fermentacin poda ser considerada como una reaccin qumica cualquiera. No obstante Pasteur demostr pronto que los procesos de putrefaccin y fermentacin eran provocados por la presencia de bacterias y levadura. El nombre de enzima ("en la levadura") no se emple hasta 1877, pero mucho antes ya se sospechaba que ciertos catalizadores biolgicos intervenan en muchos procesos. As en 1850, Louis Pasteur concluy que la fermentacin de azcar en alcohol por levaduras estaba catalizada por lo que llam fermentos, que l consideraba inseparable de las clulas de levadura vivas. En 1897, Bchner, consigui extraer las enzimas que catalizaban la fermentacin alcohlica de las clulas de levadura, terminando as con la teora vitalista. No obstante hubo que esperar hasta 1926, cuando Sumner consigui purificar y cristalizar por primera vez una enzima, la ureasa, para demostrar su naturaleza proteica. En la actualidad se conocen ms de 2000 enzimas diferentes, muchas de las cuales se han aislado en forma pura. Se utilizan potentes tcnicas de purificacin y secuenciacin, tcnicas de difraccin de rayos X, RMN, etc., para conocer sus enveles estructurales, y tcnicas de mutagnesis dirigida para conocer ms sobre su funcionalidad y sus mecanismos de actuacin.

II. MARCO TEORICO

ENZIMAS Son catalizadores de naturaleza proteica, una enzima es una protena que cataliza las reacciones bioqumicas del metabolismo. Actan sobre las molculas conocidas como sustratos y permiten el desarrollo de los diversos procesos celulares. Es importante destacar que las enzimas no modifican el balance energtico ni el equilibrio de aquellas reacciones en las que intervienen: su funcin se limita a ayudar a acelerar el proceso. Esto quiere decir que la reaccin bajo el control de una enzima alcanza su equilibrio de manera mucho ms rpida que una reaccin no catalizada. Las enzimas estn formadas de carbono (C), Hidrgeno (H), oxigeno (O), Nitrgeno (Ni), y Azufre (S) combinados, pero siempre con peso molecular bastante elevado.

Principales caractersticas 1. Las Enzimas son protenas 2. Las Enzimas tienen centro(s) activo(s) 3. Las Enzimas son especficas 4. Las enzimas modifican la velocidad de reaccin (Incrementndola) pero no el equilibrio qumico

La Enzima Como Unidad Fundamental De Vida Cada clula y cada tejido tienen su actividad propia, lo que comporta continuos cambios en su estado bioqumico, en la base de la cual estn las enzimas, que tienen el poder de catalizar, facilitar, y agilizar determinados procesos sintticos y analticos. Las enzimas pueden considerarse como las unidades fundamentales de la vida. Este concepto poco difundido casi hasta el siglo XX, se ha desarrollado y concretado cada vez ms, y constituye un componente esencial de diversas disciplinas: la microbiologa, la fisiologa, la bioqumica, la inmunologa y la taxonoma, formando adems parte del campo aplicado, en gran variedad de industrias. El rasgo particular de las enzimas es que pueden catalizar procesos qumicos a baja temperatura, compatible con la propia vida, sin el empleo de

sustancias lesivas para los tejidos. La vida es, en sntesis, una cadena de procesos enzimticos, desde aquellos que tienen por sustratos los materiales ms simples, como el agua (H2O) y el anhdrido carbnico (CO2), presentes en los vegetales para la formacin de hidratos de carbono, hasta los ms complicados que utilizan sustratos muy complejos. La formacin de los prtidos, los glcidos y los lpidos es un ejemplo tpico: Son a la vez degradados y reconstruidos por otras reacciones enzimticas, produciendo energa a una velocidad adecuada para el organismo, sin el gasto energtico que exigen los mtodos qumicos de laboratorio.

ESTRUCTURA Y MECANISMOS Las enzimas son generalmente protenas globulares que pueden presentar tamaos muy variables, desde 62 aminocidos como en el caso del monmero de la 4-oxalocrotonato tautomerasa, 15 hasta los 2.500 presentes en la cintas de cidos grasos. Las actividades de las enzimas vienen determinadas por su estructura tridimensional, la cual viene a su vez determinada por la secuencia de aminocidos. Sin embargo, aunque la estructura determina la funcin, predecir una nueva actividad enzimtica basndose nicamente en la estructura de una protena es muy difcil, y un problema an no resuelto. Casi todas las enzimas son mucho ms grandes que los sustratos sobre los que actan, y solo una pequea parte de la enzima (alrededor de 3 a 4 aminocidos) est directamente involucrada en la catlisis. La regin que contiene estos residuos encargados de catalizar la reaccin es denominada centro activo. Las enzimas tambin pueden contener sitios con la capacidad de unir cofactores, necesarios a veces en el proceso de catlisis, o de unir pequeas molculas, como los sustratos o productos (directos o indirectos) de la reaccin catalizada. Estas uniones de la enzima con sus propios sustratos o productos pueden incrementar o disminuir la actividad enzimtica, dando lugar as a una regulacin por retro alimentacin positiva o negativa, segn el caso. La mayora de las enzimas, al igual que el resto de las protenas, pueden ser desnaturalizadas si se ven sometidas a agentes desnaturalizantes como el calor, los pHs extremos o ciertos compuestos como el SDS. Estos agentes destruyen la estructura terciaria de las protenas de forma reversible o irreversible, dependiendo de la enzima y de la condicin.

ESPECIFICIDAD Las enzimas suelen ser muy especficas tanto del tipo de reaccin que catalizan como del sustrato involucrado en la reaccin. La forma, la carga y las caractersticas hidroflicas / hidrofbicas de las enzimas y los sustratos son los responsables de dicha especificidad. Las enzimas tambin pueden mostrar un elevado grado deestereoespecificidad, regioselectividad y quimioselectividad. Algunas de estas enzimas que muestran una elevada especificidad y precisin en su actividad son aquellas involucrados en la replicacin y expresin del genoma. Estas enzimas tienen eficientes sistemas de comprobacin y correccin de errores, como en el caso de la ADN polimerasa, que cataliza una reaccin de replicacin en un primer paso, para comprobar posteriormente si el producto obtenido es el correcto. Este proceso, que tiene lugar en dos pasos, da como resultado una media de tasa de error increblemente baja, en torno a error cada 100 millones de reacciones en determinadas polimerasas de mamferos. Este tipo de mecanismos de comprobacin tambin han sido observados en la ARN polimerasa, en la ARNt aminoacil sintetasa y en la actividad de seleccin de los aminoacil-tRNAs. Aquellas enzimas que producen metablicos secundarios son denominadas promiscuas, ya que pueden actuar sobre una gran variedad de sustratos. Por ello, se ha sugerido que esta amplia especificidad de sustrato podra ser clave en la evolucin y diseo de nuevas rutas biosintticas.

NOMENCLATURA DE LAS ENZIMAS Muchas enzimas han sido designadas aadiendo el sufijo asa al nombre del sustrato, es decir, la molcula sobre la cul ejerce su actividad cataltica. Por ejemplo la ureasa cataliza la hidrlisis de la urea, y la arginasa cataliza la hidrlisis de la arginina. Otras enzimas han recibido su nombre en funcin del tipo de reaccin que catalizan; as la Gliceraldehdo-3-fosfato- deshidrogenasa cataliza la deshidrogenacin (oxidacin) del Gliceraldehdo-3-fosfato a 3-fosfoglicerato. Incluso algunas se conocen de hace mucho tiempo y mantienen su nombre, sin dar informacin alguna del sustrato o la reaccin que catalizan (tripsina). A cada enzima se le asigna un nmero con cuatro dgitos: 1. Indica el grupo (va de 1 a 6) 2. Indica el subgrupo 3. Indica el sub-subgrupo 4. Indica la cantidad sustratos sobre los cuales la enzima ha sido efectiva

FUNCIN DE LAS ENZIMAS Las enzimas son protenas que catalizan todas las reacciones bioqumicas. Adems de su importancia como catalizadores biolgicos, tienen muchos usos mdicos y comerciales. Un catalizador es una sustancia que disminuye la energa de activacin de una reaccin qumica. Al disminuir la energa de activacin, se incrementa la velocidad de la reaccin. La mayora de las reacciones de los sistemas vivos son reversibles, es decir, que en ellas se establece el equilibrio qumico. Por lo tanto, las enzimas aceleran la formacin de equilibrio qumico, pero no afectan las concentraciones finales del equilibrio.

CLASIFICACIN DE LAS ENZIMAS Clasificacin de las enzimas de acuerdo a su complejidad Se clasifican como: Enzimas Simples Conjugadas Formada por una o ms cadenas poli Contienen por lo menos un grupo no pptidas proteico enlazada a la cadena poli pptida En las protenas conjugadas podemos distinguir dos partes:

Apoenzima : Es la parte polipeptdica de la enzima. Cofactor : Es la parte no proteica de la enzima.

La combinacin de la apoenzima y el cofactor forman la holoenzima. Los cofactores pueden ser: *Iones metlicos: Favorecen la actividad cataltica general de la enzima, si no estn presentes, la enzima no acta. Estos iones metlicos se denominan activadores. Ejemplos: Fe2+, Mg2+, Cu2+, K+, Na+ y Zn2+ *La mayora de los otros cofactores son coenzimas las cuales generalmente son compuestos orgnicos de bajo peso molecular, por ejemplo, las vitaminas del complejo B son coenzimas que se requieren para una respiracin celular adecuada.

Clasificacin de las enzimas segn su actividad Tipo de enzimas Hidrolasas Isomerasas Ligasas Liasas Actividad Catalizan reacciones de hidrlisis. Rompen las biomolculas con molculas de agua. A este tipo pertenecen las enzimas digestivas. Catalizan las reacciones en las cuales un ismero se transforma en otro, es decir, reacciones de isomerizacin. Catalizan la unin de molculas. Catalizan las reacciones de adicin de enlaces o eliminacin, para producir dobles enlaces. Catalizan reacciones de xido-reduccin. Facilitan la transferencia de electrones de una molcula a otra. Ejemplo; la glucosa, oxidasa cataliza la oxidacin de glucosa a cido glucnico. Catalizan la transferencia de un grupo de una sustancia a otra. Ejemplo: la transmetilasa es una enzima que cataliza la transferencia de un grupo metilo de una molcula a otra.

Oxidorreductasas

Tansferasas

ACTIVIDAD ENZIMTICA La sustancia sobre la cual acta una enzima se llama sustrato. Los sustratos son especficos para cada enzima: La sacarosa es el sustrato de la sacarasa que acta rompindola en sus componentes. Las enzimas actan de acuerdo con la siguiente secuencia: La enzima (E) y el sustrato (S) se combinan para formar un complejo intermedio enzima sustrato (ES), el cual se descompone formando un producto y regenerando la enzima.

El grado de especificidad de las enzimas es muy alto, pueden distinguir incluso entre diferentes tipos de ismeros. Se cree que la especificidad de la enzima es

debido a la forma particular de una pequea parte conocida como sitio activo, la cual se fija a la contraparte complementaria en el sustrato. FACTORES QUE INFLUYEN EN LA ACTIVIDAD ENZIMTICA Concentracin del sustrato.- A mayor concentracin del sustrato, a una concentracin fija de la enzima se obtiene la velocidad mxima. Despus de que se alcanza esta velocidad, un aumento en la concentracin del sustrato no tiene efecto en la velocidad de la reaccin. Concentracin de la enzima.- Siempre y cuando haya sustrato disponible, un aumento en la concentracin de la enzima aumenta la velocidad enzimtica hacia cierto lmite. Temperatura.- Un incremento de 10C duplica la velocidad de reaccin, hasta ciertos lmites. El calor es un factor que desnaturaliza las protenas por lo tanto si la temperatura se eleva demasiada, la enzima pierde su actividad. pH.- El pH ptimo de la actividad enzimtica es 7, excepto las enzimas del estmago cuyo pH ptimo es cido. Presencia de cofactores.- Muchas enzimas dependen de los cofactores, sean activadores o coenzimas para funcionar adecuadamente. Para las enzimas que tienen cofactores, la concentracin del cofactor debe ser igual o mayor que la concentracin de la enzima para obtener una actividad cataltica mxima.

MODELOS DE ACTUACIN DE LAS ENZIMAS Para explicar la actividad cataltica de las enzimas, se ha propuesto un mecanismo general, en dos etapas:

En la primera etapa, la enzima (E) se une a la molcula de sustrato (S), para formar el complejo enzima-sustrato (ES). En una segunda etapa, el complejo se fragmenta dando lugar al producto (P) y a la enzima (E), que vuelve a estar disponible para reaccionar con otra molcula de sustrato. Por lo general, la molcula de enzima es mucho mayor que la del sustrato por lo que slo una pequea parte de la enzima est implicada en la formacin del complejo; esta regin que interacciona con el sustrato y en la que tiene lugar la reaccin, se denomina sitio activo de la enzima. El sitio activo es un dominio tridimensional de la enzima con una distribucin de los grupos nica para posibilitar la unin a su sustrato especfico.

Dichos grupos del enzima no tienen por qu ser necesariamente consecutivos en la secuencia de la protena y reciben el nombre de centros catalticos. El modelo ms conocido sobre el mecanismo de reaccin de las enzimas es el de Fischer, quien propuso que la molcula de sustrato se adapta al centro activo de la enzima del mismo modo que lo hara una llave al encajar en una cerradura, es decir, que tienen una relacin estructural complementaria (Figura 2). No obstante, esta hiptesis tiene ciertas limitaciones, as si el centro activo posee una estructura prediseada para el sustrato, en caso de que sea un proceso reversible, dicho sitio activo tambin debera estar perfectamente diseado para que encaje el producto de la reaccin. De la misma forma, la teora de la llave-cerradura tampoco explica bien algunos fenmenos de inhibicin enzimtica.

Otra hiptesis ms aceptada actualmente es la del enzima flexible o de ajuste inducido (modelo de Koshland), que sugiere que el sitio activo no necesita ser una cavidad geomtricamente rgida y preexistente, sino que dicho sitio activo debe tener una disposicin espacial, precisa y especfica, de ciertos grupos de la enzima que al interaccionar con el sustrato se adaptan y ajustan a su estructura (Figura 3).

Modelo de la "llave-cerradura" Las enzimas son muy especficas, como sugiri Emil Fischer en 1894. Con base a sus resultados dedujo que ambas molculas, enzima y sustrato, poseen complementariedad geomtrica, es decir, sus estructuras encajan exactamente una en la otra, por lo que ha sido denominado como modelo de la "llavecerradura", refirindose a la enzima como a una especie de cerradura y al sustrato como a una llave que encaja de forma perfecta en dicha cerradura. Sin embargo, si bien este modelo explica la especificidad de las enzimas, falla al intentar explicar la estabilizacin del estado de transicin que logran adquirir las enzimas. Modelo del encaje inducido

En 1958 Daniel Koshland sugiere una modificacin al modelo de la llavecerradura: las enzimas son estructuras bastante flexibles y as el sitio activo podra cambiar su conformacin estructural por la interaccin con el sustrato. Como resultado de ello, la cadena aminoacdica que compone el sitio activo es moldeada en posiciones precisas, lo que permite a la enzima llevar a cabo su funcin cataltica. En algunos casos, como en las glicosidasas, el sustrato cambia ligeramente de forma para entrar en el sitio activo. El sitio activo continua dicho cambio hasta que el sustrato est completamente unido, momento en el cual queda determinada la forma y la carga final.

COFACTORES Algunas enzimas no precisan ningn componente adicional para mostrar una total actividad. Sin embargo, otras enzimas requieren la unin de molculas no proteicas denominadas cofactores para poder ejercer su actividad. Los cofactores pueden ser compuestos inorgnicos, como los iones metlicos y los complejos ferrosulfurosos, o compuestos orgnicos, como la flavina o el grupo hemo. Los cofactores orgnicos pueden ser a su vez grupos prostticos, que se unen fuertemente a la enzima, o coenzimas, que son liberados del sitio activo de la enzima durante la reaccin. Las coenzimas incluyen compuestos como el NADH, el NADPH y el adenosn trifosfato. Estas molculas transfieren grupos funcionales entre enzimas. Un ejemplo de una enzima que contiene un cofactor es la anhidrasa carbnica, en la cual el zinc (cofactor) se mantiene unido al sitio activo, tal y como se muestra en la figura anterior (situada al inicio de la seccin "Estructuras y mecanismos"). Estas molculas suelen encontrarse unidas al sitio activo y estn implicadas en la catlisis. Por ejemplo, la flavina y el grupo hemo suelen estar implicados en reacciones redox. Las enzimas que requieren un cofactor pero no lo tienen unido son denominadas apoenzimas o apoprotenas. Una apoenzima junto con cofactor (es) es denominada holoenzima (que es la forma activa). La mayora de los cofactores no se unen covalentemente a sus enzimas, pero s lo hacen fuertemente. Sin embargo, los grupos prostticos pueden estar covalentemente unidos, como en el caso de la tiamina pirofosfato en la enzima piruvato deshidrogenasa. El trmino "holoenzima" tambin puede ser aplicado a aquellas enzimas que contienen mltiples subunidades, como en el caso de la ADN polimerasa, donde la holoenzima es el complejo con todas las subunidades necesarias para llevar a cabo la actividad enzimtica.

COENZIMAS

Las coenzimas son pequeas molculas orgnicas que transportan grupos qumicos de una enzima a otra. Algunos de estos compuestos, como la riboflavina, la tiamina y el cido flico son vitaminas (las cuales no pueden ser sintetizados en cantidad suficiente por el cuerpo humano y deben ser incorporados en la dieta). Los grupos qumicos intercambiados incluyen el ion hidruro (H-) transportado por NAD o NADP+, el grupo fosfatotransportado por el ATP, el grupo acetilo transportado por la coenzima A, los grupos formil, metenil o metil transportados por el cido flico y el grupo metil transportado por la S-Adenosil metionina. Debido a que las coenzimas sufren una modificacin qumica como consecuencia de la actividad enzimtica, es til considerar a las coenzimas como una clase especial de sustratos, o como segundos sustratos, que son comunes a muchas enzimas diferentes. Por ejemplo, se conocen alrededor de 700 enzimas que utilizan la coenzima NADH. Las coenzimas suelen estar continuamente regenerndose y sus concentraciones suelen mantenerse a unos niveles fijos en el interior de la clula: por ejemplo, el NADPH es regenerado a travs de la ruta de las pentosas fosfato y la S-Adenosil metionina por medio de la metionina adenosiltransferasa. Esta regeneracin continua significa que incluso pequeas cantidades de coenzimas son utilizadas intensivamente. Por ejemplo, el cuerpo humano gasta su propio peso en ATP cada da.

CONTROL DE LA ACTIVIDAD La actividad enzimtica puede ser controlada en la clula principalmente de estas cinco formas:

Produccin de la enzima: (a nivel de la transcripcin o la traduccin): la sntesis de una enzima puede ser favorecida o desfavorecida en respuesta a determinados estmulos recibidos por la clula. Esta forma de regulacin gnica se denomina induccin e inhibicin enzimtica. Por ejemplo, las bacterias podran adquirir resistencia a antibiticos como la penicilina gracias a la induccin de unas enzimas llamadas beta-lactamasas, que hidrolizan el anillo beta-lactmico de la molcula de penicilina. Otro ejemplo, son las enzimas presentes en el hgado denominadas citocromo P450 oxidasas, las cuales son de vital importancia en el metabolismo de drogas y frmacos. Compartimentalizacin de la enzima: las enzimas pueden localizarse en diferentes compartimentos celulares, de modo que puedan tener lugar diferentes rutas metablicas de forma independiente. Por ejemplo, los cidos grasos son sintetizados por un conjunto de enzimas localizadas en el citosol, en el retculo endoplasmtico y en el aparato de Golgi, y posteriormente, dichos cidos grasos son utilizados por otro conjunto de enzimas diferentes como fuente energtica en la mitocondria, a travs de la -oxidacin. Inhibidores y activadores enzimticos: las enzimas pueden ser activadas o inhibidas por ciertas molculas. Por ejemplo, el producto final de una ruta metablica suele actuar como inhibidor de alguna de las enzimas implicadas en las primeras reacciones de la ruta, estableciendo as una realimentacin negativa que regula la cantidad de producto final obtenido por esa ruta. Este mecanismo de realimentacin negativa permite ajustar efectivamente la velocidad de sntesis de los metabolitos intermedios con la demanda de la clula, y permite distribuir econmicamente materiales y energa para evitar exceso o escasez de los productos finales. Este control enzimtico permite mantener un ambiente relativamente estable en el interior de los organismos vivos. Modificacin postraduccional de enzimas: las enzimas pueden sufrir diversas modificaciones postraduccionales como la fosforilacin, la miristoilacin y la glicosilacin. Por ejemplo, en la respuesta a insulina, se produce la fosforilacin de multitud de enzimas, como la de la glucgeno sintasa, que ayuda en el control de la sntesis o degradacin del glucgeno y permite a la clula responder a las variaciones de los niveles de azcar en sangre. Otro ejemplo de modificacin postraduccional es la degradacin de la cadena polipeptdica. La quimiotripsina, una proteasa digestiva, es sintetizada en una forma inactiva, quimiotripsingeno, en el pncreas y transportada en este estado hasta elestmago, donde ser activada. De este modo se evita que la enzima

digiera el pncreas y los dems tejidos por los que pasa antes de llegar al estmago.

Activacin dependiente del ambiente: algunas enzimas pueden ser activadas cuando pasan de un ambiente con unas condiciones a otro con condiciones diferentes, como puede ser el paso del ambiente reductor del citoplasma al ambiente oxidativo del periplasma, el paso de un ambiente con elevado pH a otro con bajo pH, etc. Por ejemplo, lahemaglutinina del virus de la gripe es activada mediante un cambio conformacional que se produce cuando el pH del medio es suficientemente cido, lo cual ocurre cuando el virus entra en el interior de la clula a travs de un lisosoma.

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