OBTENCIN DE CROMOSOMAS HUMANOS

INTRODUCCIN

Con excepcin de muy pocos tejidos, las muestras usadas para estudios cromosmicos no presentan un nmero significativo de divisiones celulares que permitan el anlisis sin un cultivo previo. Es as como las tcnicas de cultivo se han constituido en parte integral del anlisis citogentico. La sangre perifrica es el tejido usado ms frecuentemente en el estudio cromosmico postnatal por su facilidad de obtencin y cultivo. De entre las clulas del tejido sanguneo nicamente los leucocitos son de utilidad en el estudio citogentico, puesto que tanto plaquetas como eritrocitos carecen de ncleo.

Los linfocitos son las clulas blancas ms pequeas, con una proporcin ncleocitoplasma alta. Existen dos tipos principales de linfocitos, las clulas T (timo dependientes) involucradas en el proceso de inmunidad celular y las clulas B (mdula sea dependientes) involucradas en la inmunidad humoral. Los linfocitos T pueden ser inducidos a dividirse por accin de una glicoprotena obtenida del frijol Phaseolus vulgaris llamada Fitohemaglutinina (PHA) para la proliferacin en los cultivos con PHA.

Para el cultivo de linfocitos se utilizan medios suplementados tales como: Medio 199, MEM, F-10, y especialmente RPMI 1640, con 10 ml de suero fetal bovino o de ternera, 0,5 ml de L-Glutamina (aminocido), 1,5 ml de antibitico - antimictico (concentracin con efecto bacteriosttico), 1,5 ml de Hepes buffer (pH 7,2) y 20 ml de PHA (estimulador de la divisin), por cada 100 ml de medio de cultivo.

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Materiales Material biolgico: clulas del epitelio de descamacin de la mucosa oral. Sangre perifrica Microscopio ptico aceto-orceina Aceite de inmersin Abate lenguas Portaobjetos Cubreobjetos Papel absorbente OBJETIVOS

1.- Observar cromosomas humanos en placas ya preparadas. 2.- Identificar los grupos de cromosomas por su tamao y posicin centromrica solo con fines didcticos. 3.-Identificar ncleos transformados y no transformados. 4.-Calcular el ndice mittico.

METODO Preparacin de clulas de la mucosa oral 1.-Raspar cuidadosamente la parte interna de la mejilla. 2.-Hacer un frotis del raspado sobre un portaobjetos 3.- Agregar acetoorceina 4.-Observar al microscopio ptico con el objetivo de 10x hasta encontrar un campo en donde se localicen clulas. Observar despus de 40x y finalmente a 100x usando aceite de inmersin para identificar el corpsculo de Barr el cual se aprecia como una mancha obscura adherida a la membrana nuclear que se tie ms intensamente. 5.-Las clulas daadas o sobrepuestas no se consideran en el anlisis. 6.-Anotar las observaciones.

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RESULTADOS

DISCUCION (ANALISIS DE RESULTADOS)

Los Corpsculos o cuerpos de Barr, tambin llamados cromatina sexual X, son masas condensadas de cromatina sexual, se encuentran en el ncleo de las clulas somticas de las hembras debido a un cromosoma X inactivo. Son una masa heterocromtica, plana y convexa, la cual es bien apreciable en celulas epiteliales. Los corpsculos de Barr, son visibles en la Interface . La Aceto-orcena tie sustancias cidas por su basicidad, tie la cromatina por ser cido Desoxirribonucleico . La Acetocarmin es un colorante afn a protenas
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El mecanismo de inactivacin de un cromosoma X se realiza gracias a la expresin de un locus multifuncional llamado XIC que posee el gen XIST (X inactive-specific transcripts, o transcritos especficos del X inactivo). La mrula detecta la baja expresin de XIST en los cromosomas X aportados tanto por el varn como por la mujer, esto es captado por el gen Xce; que es el responsable del contaje que XIST deje de expresarse en un cromosoma X y aumente en el otro. Este aumento de expresin de XIST en un cromosoma es la base de la propiedad denominada competencia. Y luego se selecciona el cromosoma con ms expresin de XIST para inactivarlo, proceso conocido como eleccin. El cromosoma X contiene 1.100 genes, casi el cinco por ciento del genoma humano, adems de informacin que puede ayudar a mejorar el diagnstico de enfermedades, como la hemofilia, la ceguera, el autismo, la obesidad y la leucemia. La investigacin, realizada por un consorcio internacional de cientficos, muestra que las mujeres son mucho ms variables de lo que se pensaba y, con respecto a los genes, son ms complejas con los hombres. 'El cromosoma X es definitivamente el ms extraordinario en el genoma humano en trminos de patrones hereditarios y de su biologa nica (...) y en trminos de vnculo con enfermedades humanas', dijo Mark Ross, del Instituto Wellcome Trust Sanger en Reino Unido, que es el que dirige el consorcio cientfico. Las diferencias Los cromosomas, que se hallan en el ncleo de cada clula, contienen genes que determinan las caractersticas de cada individuo. Las mujeres tienen dos cromosomas X, mientras que los hombres portan un cromosoma X y uno Y, lo cual les da las caractersticas masculinas. La investigacin, que ha sido publicada en la revista cientfica Nature, muestra que el cromosoma Y es una versin erosionada del cromosoma X con slo unos pocos genes. El cromosoma X es tambin mucho mayor que el Y. Como las mujeres tienen dos copias del X, uno de ellos est en gran parte desactivado.

Sin embargo, no todos los genes en el cromosoma desactivado dejan de expresarse. Esto podra explicar algunas de las diferencias entre las mujeres y los hombres, segn Laura Carrel, de la Escuela Estatal de Medicina de Pensilvania. La desactivacin del cromosoma X tambin vara ampliamente entre las mujeres.

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'Los efectos de estos genes del cromosoma X inactivo podran explicar algunas diferencias entre hombres y mujeres que no son atribuibles a las hormonas sexuales', expres Carrel en un comunicado. Las mutaciones y trastornos genticos, como la acromatopsia (incapacidad para detectar colores), el autismo y la hemofilia, que estn vinculados al cromosoma X, tienden a afectar a los hombres porque no poseen otro X para compensar los fallos. El cromosoma X tambin alberga muchos genes vinculados al retraso mental y a un gen mayor, llamado DMD, en el genoma humano. Las mutaciones en el DMD causan la distrofia muscular de Duchenne, una enfermedad mortal y causante de la discapacidad en los hombres. 'Hay un nmero desproporcionado de enfermedades conocidas asociadas con el cromosoma X', dijo David Bentley, mdico del Instituto Wellcome Trust Sanger. 'Al comprobar los errores, podemos comenzar a comprender muchos mejor los procesos biolgicos en el cuerpo normal'. Alta expresin de XIST que sintetiza ARN que permanece exclusivamente en el ncleo y es capaz "de cubrir" el cromosoma a partir del cual fue producido Presenta un tamao de 1 m de dimetro cuando aparece en forma redondeada de 0,7 1,2 m en forma planoconvexa o rectangular Aparece normalmente pegado a la cara interna de la membrana nuclear y est compuesto por ADN

La tcnica de tincin utilizada no nos permiti mejores observaciones debido a que no se fijo con el calor y no se tomo en cuenta los enjuagues bucales.

CONCLUSION PODEMOS CONCLUIR QUE El corpsculo de Barr es una masa condensada de cromatina sexual en el ncleo de las clulas somticas de las hembras debido a un cromosoma X inactivo. El significado citolgico de la cromatina sexual o corpsculo de barr es, simplemente, el resultado de la heterocromatizacin positiva (inactivacin) de uno de los cromosomas X presentes en las clulas de los mamferos.

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Esta inactivacin se realiza en estados tempranos del desarrollo, en cada una de las clulas de los embriones femeninos y afecta a cualquiera de los dos cromosomas X; es al azar. Todas las clulas descendientes de aquella en que la inactivacin tuvo lugar, tendrn el mismo cromosoma X inactivo. En el hombre como normalmente debe ser no se observaron estos corpsculos debido a que no posee el cromosoma x inactivo o en su defecto no posee un cromosoma X adicional por lo que se podra decir que es un sujeto XY normal ya que si poseyera un cromosoma X adicional (si se hubiesen observado en el sujeto corpsculos de Barr), presentara el sndrome de Klinefelter (47 XXY) lo cual indica a individuos con fenotipo masculino y con cromatina "X.

Pensamos que u enjuague bucal antes de realizar los frotis pudo mejora la visualizacin en el laboratorio para eliminar bacterias en las muestras

Bibliografa Rodrguez, A. R., et al. Manual de prcticas de gentica y cuaderno de trabajo.UNAM. 2005 67

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