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CMO ES QUE ENVEJECEN LOS VULOS?

Adaptacin y traduccin: MVZ. Fernando Cavazos G. Veterinario de Servicio Tcnico ABS MXICO S.A. DE C.V. Tratndose de Inseminacin Artificial, siempre que se habla del tema relativo al tiempo ptimo para depositar el semen en la vaca en celo, se hace mencin que es importante que los espermatozoides se encuentren en el tracto reproductivo de la vaca por lo menos unas 6 u 8 horas antes de la hora estimada en que ovular dicha vaca y se hace nfasis en que, aunque el lapso de vida de los espermatozoides dentro del tracto reproductivo de la vaca es de aproximadamente 22 a 24 horas, la vida del vulo (oocito), por el contrario, solo es de unas 10 horas aproximadamente y que lo ideal es que el vulo (oocito) sea fecundado en las primeras horas siguientes al momento en que ha sido liberado del folculo por medio del proceso de la ovulacin. (Debido a que, conforme va envejeciendo, va perdiendo la capacidad de generar embriones con suficiente habilidad para sobrevivir, an cuando la fecundacin sigue siendo posible en embriones ya avejentados. El esquema siguiente tiene la intencin de refrescar en nuestra mente los detalles de tiempo relacionados con este tema: 28 horas aprox. OVULACIN

Pico de LH

10 horas Vida del vulo 6 a 16 horas *** Inicio del Celo 8 horas I.A. 14 horas I.A. *** Muy variable, sobre todo en vacas lecheras de alta produccin. En el esquema podemos apreciar que si realizamos la inseminacin dentro del lapso de 8 a 14 horas despus del inicio del celo, logramos con facilidad los dos objetivos que buscamos: 1. Que los espermatozoides estn ya en el tracto reproductivo de la vaca por lo menos 8 horas antes de la liberacin del vulo (tiempo requerido no solo para el transporte de los mismos hasta el istmo del oviducto - y posteriormente hasta el mpula del mismo - sino tambin para su capacitacin dentro del tracto reproductivo.) 2. Que exista ya un reservorio de espermas viables en el istmo del oviducto en el momento de la ovulacin para que de ah sean liberados los espermatozoides y sigan su curso ascendente por el oviducto para llegar al sitio de fecundacin y lograr que el oocito (vulo) sea fecundado en las primeras horas de su vida libre, fuera ya del folculo.
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Fin del Celo Vida de los espermatozoides del semen

Vida de los espermatozoides del semen

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Sitio de la Fertilizacin Trayecto a recorrer, luego de la ovulacin

mpula

OVARIO

Cuerno uterino

Los espermas ascienden desde el cuerpo uterino

Istmo del Oviducto: Lugar donde se acumulan los espermatozoides formando un Reservorio Funcional hasta el momento de la ovulacin

Quiz valga le pena enfatizar que hoy en da se tienen dos opciones importantes para inseminar: 1. En base a la deteccin del celo: En este caso, como ya se indic ms arriba, la inseminacin se basar en la hora estimada de inicio del celo. Por ello es tan importante la precisin en la deteccin de los celos, la cul nos permitir inseminar vacas que, por un lado, realmente estn en celo y por otro, que en ellas se ha podido hacer una estimacin ms o menos exacta de la hora en que pudieron haber iniciado su celo. (Esto ltimo depende de la frecuencia con que se hacen las observaciones del ganado para la deteccin de los celos, o de los mtodos auxiliares de deteccin con que se cuente, como es el caso de los podmetros) 2. En base a la sincronizacin de la ovulacin: En protocolos de sincronizacin como el Ovsynch, la ltima inyeccin en el protocolo (o sea la 2. inyeccin de GnRH) va a desencadenar el llamado Pico de LH (Elevacin sbita de la Hormona Luteinizante) y por lo tanto la vaca estar ovulando unas 28 o 30 horas despus de dicha inyeccin, por lo que el tiempo ideal para inseminar en ese caso es 14 a 16 horas despus de la inyeccin, lo cul no siempre se hace en lecheras muy grandes porque no se acomoda bien al manejo del ganado y se insemina a otra hora ms cmoda (sacrificando un poco las concepciones). En el caso de la sincronizacin de la ovulacin, la deteccin del celo no es necesaria ya que vamos a inducir una ovulacin a una hora determinada; pero s es muy importante seguir fielmente el tratamiento (y en la fase correcta del ciclo) para que de resultado y la ovulacin realmente se efecte. Pues bien, todo lo anterior est relacionado con la vida efmera del vulo u oocito, que es de alrededor de 10 horas, en las cules va envejeciendo de tal forma que, conforme transcurre el tiempo, van deteriorndose algunas de sus caractersticas y eso da como resultado que, aunque el oocito an conserve la capacidad de ser fertilizado y de iniciar la divisin celular para ir formando una mrula, los embriones as generados a partir de oocitos envejecidos, no tienen la habilidad de sobrevivir o bien de emitir seales bioqumicas adecuadas y de suficiente intensidad para que el tero de su madre los reconozca. Por ende, mueren en los primeros das de vida o bien no son reconocidos por el tero de la madre alrededor del da 17 despus del celo y esa hembra experimenta regresin del Cuerpo Lteo, desarrolla rpidamente un nuevo folculo dominante y presenta nuevamente celo (repite) como si no hubiese habido ninguna fecundacin en la ovulacin previa. En otras ocasiones, el oocito est suficientemente envejecido como para no ser capaz de controlar cuntos espermatozoides entran a su citoplasma, dndose el fenmeno llamado Polispermia durante la fertilizacin, que consiste en que ms de un espermatozoide penetra al oocito ocasionando que haya material gentico de ms, lo cul es incompatible con la vida del nuevo ser. Pero, Cmo es que envejece el vulo? Qu es lo que le va sucediendo realmente y le impide poder generar embriones viables? El Dr. Ron H.F.Hunter en su fascinante libro publicado en el ao 2003 por Cambridge Univeristy Press sobre la Fisiologa del Folculo de Graaf y la Ovulacin y cuyo ttulo es Physiology of the Graafian Follicle and Ovulation; ha incluido un prrafo muy interesante sobre el
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envejecimiento del oocito despus de la ovulacin, dentro del Captulo IX, que trata del destino post-ovulatorio tanto del folculo como del oocito. Como considero que dicho prrafo aporta informacin valiosa al tema que estamos tratando y resume de manera muy adecuada lo que sucede en el envejecimiento de los oocitos, me he permitido traducirlo literalmente para que el lector disponga de la informacin en forma directa: Envejecimiento Post-Ovulatorio de los Oocitos Dr. R.H.F. Hunter A la luz de los prrafos que precedieron, es apropiado hacer algunos breves comentarios acerca del envejecimiento de los oocitos de los mamferos. Asumiendo la posibilidad del hecho de que la introduccin de una suspensin de espermatozoides a la hembra en el coito, no se lleve a cabo dentro del tiempo adecuado antes de la ovulacin para una secuencia normal de eventos en la fertilizacin; surge entonces la importante pregunta acerca del tiempo de vida de los oocitos de los mamferos. Por tiempo de vida se entiende en este caso, el perodo de tiempo dentro de la Trompa de Falopio durante el cul el oocito permanece con la capacidad, no solamente de poder ser penetrado y activado por un espermatozoide fertilizante sino tambin de convertirse en un embrin viable. Es ampliamente aceptado que el oocito ya ovulado permanece fertilizable por mucho ms tiempo del que l conserva la capacidad de dar origen a un embrin normal. En algunas especies, oocitos envejecidos e incluso con visibles degeneraciones todava pueden ser penetrables por los espermatozoides. Desafortunadamente, una distincin clara entre lo que es un perodo de vida funcional y un perodo de vida penetrable en un oocito ya ovulado, no ha existido en los trabajos publicados. Cada vez se acumulan ms evidencias de que el perodo de vida funcional o viabilidad del oocito en el tracto reproductivo de la hembra, no es una figura constante para una determinada especie, sino que vara de acuerdo al grado de madurez del oocito en el momento en que es ovulado y de acuerdo a la composicin de los fluidos dentro de la Trompa de Falopio. Estos ltimos son influenciados especialmente por las hormonas esteroides de las gnadas. De hecho, la calidad de los oocitos liberados en una serie de ciclos ovricos espontneos en la misma hembra, puede ser demostrablemente diferente. An as, una estimacin de un perodo de vida funcional de un poco ms de 6 a 8 horas sera una estimacin prudente para la mayora de los mamferos hasta ahora examinados. Se han publicado estimaciones de 10 a 12 horas, e incluso de 12 a 18 horas para el perodo de vida de un oocito ovulado, en algunas especies como la vaca y la oveja, pero no se ha ofrecido en dichos casos, una rigurosa distincin entre lo que es el perodo de vida funcional y el simple perodo de vida penetrable. Aparte del grado de madurez del oocito en el momento de la ovulacin, los otros factores que tendran influencia sobre la vida funcional del oocito seran de tipo ambiental (estacin del ao, temperaturas ambientales, consideraciones nutricionales, diversos factores de estrs), la raza o linaje del animal dentro de una especie, y modificaciones al ambiente hormonal que da culminacin a la ovulacin, como es la sincronizacin del ciclo estral (o la regulacin del ciclo menstrual en la mujer). Por lo que se refiere a la degeneracin post-ovulatoria de un oocito, se tiene que dar consideracin a la superficie del oocito, a los organelos citoplasmticos y finalmente a las estructuras del ncleo. La superficie de la Zona Pelcida del oocito contiene receptores o sitios de unin para los espermatozoides, considerados como parte del sistema de glicoprotenas llamado ZP3 / ZP2, tal como fueron clasificadas en el modelo en ratones de Wassarman (1988, 1991) y por Wassarman, Liu &Litscher (1997). Estos receptores se van perdiendo gradualmente con el tiempo, aunque depende de la especie si esa prdida es principalmente por un deslavado o bien por un recubrimiento con otras molculas. Como se sugiri anteriormente, ciertas secreciones se van adhiriendo a la superficie de la Zona Pelcida durante el pasaje del oocito por la Trompa de Falopio al ir siendo desnudado ste de las clulas que lo rodean (Cumulus ooforus) y de las clulas de la Corona Radiada. Esas secreciones del mpula del oviducto irn enmascarando gradualmente los receptores del oocito y eso conduce eventualmente a la prdida total de la capacidad para ser fertilizado. Por lo que atae a los organelos del citoplasma, el enfoque principal usualmente es hacia los llamados grnulos corticales que son en realidad vesculas muy pequeas, de una micra de dimetro y que contienen material enzimtico en forma de grnulos. Poco antes de la ovulacin, estos grnulos emigran hasta colocarse justo por debajo de la membrana citoplasmtica, habindose formado en el aparato de Golgi que est ms profundamente colocado en el citoplasma. El tener una gran proximidad con la membrana citoplasmtica es esencial ya que stos grnulos debern fusionarse con dicha membrana justo encima de ellos para as liberar su contenido enzimtico hacia el espacio perivitelino ocupado por fluidos. Esa fusin es provocada por la activacin causada por el espermatozoide fecundante y la resultante oscilacin de iones de Calcio ++ en el
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citoplasma. Esa liberacin de enzimas al espacio perivitelino conduce a un cambio en la naturaleza de la Zona Pelcida y/o al establecimiento de un bloqueo a la polispermia. Un punto esencial en el envejecimiento del oocito es que los grnulos corticales comienzan a hincharse y a perder su colocacin perifrica - y por lo tanto pierden su habilidad para fusionarse con la membrana citoplasmtica. Ellos se encontrarn de manera desorganizada en la corteza del oocito y de esa forma comprometen o impiden la formacin de un bloqueo efectivo contra la polispermia. Aunque aparentemente al azar, ese movimiento centrpeto (hacia el interior) de los grnulos, es seguramente una expresin de modificaciones que est sufriendo el esqueleto celular. Esto deja al oocito abierto al riesgo de penetracin por mltiples espermatozoides. Cambiando ahora hacia el ncleo, un rasgo caracterstico del envejecimiento post-ovulatorio es la progresiva desorganizacin de los microtbulos que constituyen el husillo de la meiosis. Pares de esos microtbulos se separan lateralmente en forma gradual del husillo, ya que pierden su adhesin polar a unos organelos llamados cinetacores (ver figura). La integridad estructural y gentica de la placa de la metafase se rompe de esa manera, ya que la prdida de elementos del husillo involucra la prdida de los cromosomas asociados, del aparato divisorio celular. An cuando la activacin por medio de un espermatozoide fertilizante fuese todava posible y se reiniciara la segunda divisin meitica, el complemento global cromosmico estara incompleto y cualquier cigoto resultante sera aneuploide (le faltaran cromosomas). La muerte embrionaria temprana es la secuela ms comn a ese problema. Podran ser descritos otros rasgos estructurales de degeneracin tanto en el ncleo como en el citoplasma. En su conjunto, estos impediran una fertilizacin normal y el establecimiento de un embrin viable.

Figura 1 Representacin diagramtica para mostrar los estadios tempranos de degeneracin del husillo de la segunda meiosis, con la prdida lateral de microtbulos y sus cromosomas asociados de todo el aparato del husillo. Todava est por resolverse, hasta qu punto el envejecimiento post-ovulatorio del oocito representa un proceso degenerativo distinto al proceso de muerte celular programada o apoptosis. Los mecanismos de la apoptosis muy seguramente entran en juego cuando el proceso de envejecimiento est avanzado. Sin embargo, los cambios superficiales en la Zona Pelcida parecen no ser desencadenados de esa manera, ni debera esperarse que as sucediera, ya que la Zona Pelcida es una estructura accesoria que envuelve al oocito en s. Podra haber reservas tambin acerca de si la aparente dispersin al azar de los grnulos corticales hacia regiones interiores del citoplasma al envejecer el oocito luego de la ovulacin, es principalmente desencadenada por una cascada de apoptosis y este mismo comentario podra ser aplicado tambin a otras modificaciones estructurales.

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A pesar de que en los prrafos anteriores se ha dado un aparente nfasis a las influencias perjudiciales del envejecimiento post-ovulatorio del oocito, es sin embargo apropiado recordar que debe haber una corta pero muy importante fase de maduracin post-ovulatoria del oocito durante el trnsito del mismo hacia el sitio de fertilizacin en el rea donde el mpula se contina con el istmo de la Trompa de Falopio.

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