REGIONAL DISTRITO CAPITAL SISTEMA DE GESTIN DE LA CALIDAD

Informe de Laboratorio No 1 AISLAMIENTO Y SELECCIN DE MICROORGANISMOS

CENTRO DE GESTIN INDUSTRIAL BOGOT D.C. 12 04 2013

REGIONAL DISTRITO CAPITAL SISTEMA DE GESTIN DE LA CALIDAD

Informe de Laboratorio No 1 AISLAMIENTO Y SELECCIN DE MICROORGANISMOS

FABIN MNDEZ JHON ANDERSON SANABRIA HCTOR RODRGUEZ

Instructor Sonia Marcela Buitrago

CENTRO DE GESTIN INDUSTRIAL BOGOT D.C. 12 04 2013

MARCO TEORICO El bioetanol es uno de los ms importantes combustibles renovables que contribuyen a la reduccin de impacto ambiental negativo, aunque la obtencin de etanol se lleva a cabo por un proceso complejo, la transformacin de recursos biolgicos como los cultivos energticos (caa de azcar, maz y otros) o el material lingocelulsico requiere el acondicionamiento de la materia prima para su conversin a etanol con el uso de microorganismos fermentativos como las levaduras las cuales consumen los azucares presentes en el medio convirtindolos en etanol. En la fermentacin alcohlica, adems de los microorganismos (levaduras), las enzimas juegan un papel importante ya que sin estas no sera posible tan compleja operacin. Adems de los microorganismos y enzimas se requiere que el medio sobre el cual actan tenga unas condiciones especiales como pH, temperatura y concentracin de nutrientes en el sustrato. Levadura es el nombre genrico dado a un grupo de hongos Ascomicetes pertenecientes al orden Endomicetales. Son micro hongos que se encuentran generalmente en forma de clulas nicas y que se reproducen mediante gemacin. Siendo un anaerobio facultativo: transformando azcar, la levadura aerbica produce dixido de carbono, agua y una produccin relativamente alta de nueva levadura, mientras que la levadura crecida anaerbicamente tiene una velocidad relativamente lenta de crecimiento, que ahora se acopla a una alta conversin de azcar en alcohol y dixido de carbono. El aislamiento de micro organismos es esencial para un proceso como estos ya que permite determinar el aumento del nmero de microorganismos a lo largo del tiempo, el estudio que se hace puede servir tambin para entender el crecimiento de levaduras y de otros hongos. La fermentacin alcohlica comienza con el catabolismo de la glucosa y conducen a la creacin de gliceraldehido3-fosfato y en una segunda parte se produce energa en forma de ATP y son liberados los productos de fermentacin, etanol y CO2 en este proceso la intervencin de las levaduras se encargan de convertir el azcar en el principal metabolito para la fermentacin alcohlica el etanol. La levadura ms utilizada para este proceso es la levadura Saccharomyces cerevisiae que ha disfrutado de una larga y distinguida historia en la industria de la fermentacin. Debido a su eficiencia en producir etanol, Con el surgimiento de la gentica molecular moderna, S. cerevisiae est a la vanguardia de muchos de los desarrollos en biotecnologa moderna. Consecuentemente, la importancia industrial de S. cerevisiae ha ido ms all de la fermentacin tradicional. Hoy en da, los productos de la biotecnologa de levaduras afectan muchos sectores comerciales importantes, incluyendo la industria de alimentos, bebidas, biocombustibles, qumicos, enzimas industriales, productos farmacuticos, agricultura y medio ambiente.

OBJETIVOS

1. Conocer como se hace un aislamiento de microorganismos en el laboratorio de acuerdo a los conocimientos adquiridos 2. Conocer las tcnicas de recuento para determinar microorganismos viables a distintas concentraciones de etanol y glucosa 3. Evaluar la tolerancia de los microorganismos aislados a diferentes concentraciones de etanol y glucosa MATERIALES Cajas de petri Pipetas graduadas y aforadas de 10 y 1mL Frasco Hit 2 tubos de ensayo Elenmeyer Vidrio de reloj Esptulas Pipeteador EQUIPOS Incubadora Balanza Autoclave REACTIVOS Agua peptonada Agar OGY

PROCEDIMIENTO

DIAGRAMA DE FLUJO

Preparacin de solucin salina estril 99% al 0.1%

En un frasco de hit se agrega 90mL de esta agua

En dos tubos de ensayo se adiciona 9 mL en c/u de solucin salina

Llevar al autoclave para esterilizar

Preparacin del material

Realizar los clculos para la preparacin de los agares a diferentes concentraciones

Lavar cajas de petri y pipetas envolverlas en papel kraft y llevarlas al autoclave

Despus de esterilizadas marcarlas sin abrirlas

Se toman 10mL de la muestra(guarapo) y se adicionan al vaso de hit que contiene 10mL de solucin salina 10-1

ETANOL

GLUCOSA

A partir de esta dilucin se toma 1mL y se adiciona en uno de los tubos con 9mL solucin salina- 10-2

Tomar 1mL de la solucin 10-1 y adicionar en la caja de petri

Tomar 1mL de dilucion10-1 y adicionar en las cajas de petri

A partir de esta disolucin se toma 1mL y se adiciona al otro tubo que contiene 9mL de solucin salina dis- 10-3

Adicionar agar OGY fundido a diferentes concentraciones de Etanol(4%,8%,12% y 18%)

Adicionar agar OGY fundido a diferentes concentraciones de Glucosa(4%,8%,12% y 18%)

De las diluciones anteriores tomar 1mL y realizar una siembra en profundidad en las cajas de petri

Homogenizar y levar a incubar a 30C por 5 das

Adicionar 20mL del agar OGY fundido estril y homogenizar muy bien

Dejar gelificar, marcar las cajas y llevar a incubar a 30C por 5 das

DISCUSIN Y RESULTADOS

En la materia prima estudiada, se obtuvo un recuento de bacterias que se analizaran de acuerdo al conteo de estas, resultado coherente con la practica llevada a cabo, que se obtiene del proceso de fermentacin de cascaras de pia (guarapo), de la cual se obtienen levaduras para la obtencin de etanol, de donde pueden aislarse para su respectivo conteo y anlisis de la cual se pueden analizar que tan importante es su resistencia a las diferentes concentraciones de etanol y glucosa para poderlas adoptar para nuestro proyecto. En este ejercicio se puede determinar que a mayor disolucin menor es la cantidad de colonias formadas, en diferentes concentraciones la cantidad de colonias formadas varia y en algunas son incontables.

ANLISIS Y DE LA PRCTICA El aislamiento de microorganismos son muy favorables para la caracterizacin de las levaduras obtenidas, ya que en la industria sern muy favorables para reducir los contaminantes de gases de invernadero y lograr tener una obtencin de etanol ms puro para un mejoramiento del alcohol carburante y mejo eficiencia.

CONCLUSIONES

El anlisis que se realizo nos deja como conclusin un conocimiento en el conteo de colonias y las diferentes tcnicas que se utilizan en estas

Se puede observar que a mayor disolucin menor es la cantidad de colonias que se forman en el cultivo.

Las diferentes concentraciones de etanol y glucosa en que se realizaron las disoluciones nos deja ver como varia el crecimiento de colonias y su tolerancia a estas

BIBLIOGRAFIA

Disponible en internet:http://www.revistavirtualpro.com/revista/index.php?ed=200612-01&pag=8

Disponible en internet: http://www.scielo.cl/scielo.php?pid=S071807642011000600011&script=sci_arttext

Disponible en internet: http://www.scielo.org.co/scielo.php?pid=S012342262009000200017&script=sci_arttext REVISTA U.D.C.A ACTUALIZACIN Y DIVULGACIN CIENTIFICA rev.udcaactual.divulg.cient. vol.12 no.2 Bogot July/Dec. 2009

Disponible en internet: http://www.unavarra.es/genmic/microgral/Tema%2002.%20Cultivo%20de%20microorganismos.pdf

BUITRAGO M Sonia. Gua de laboratorio, Aislamiento de microorganismos