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Las cuestiones de salud de seguridad asociados con el uso de heparina porcina estimulaban el trabajo de produccin de heparina a travs de ingeniera metablica. Las clulas CHO son capaces de biosntesis HS pero heparina no, sin embargo, CHO mutantes defectuosos en la biosntesis HS demuestran la similitud de clulas CHO biosntesis HS y la biosntesis de heparina en las clulas del tejido conectivo Mstil. La expresin selectiva de las isoformas de NDST aparentemente determina si HS o heparina se sintetiza. En efecto, ms del 80% de los residuos GlcN en heparina de los mastocitos son GlcNS, mientras que ms del 50% de los residuos GlcN en clulas CHO HS son GlcNAc. De tipo salvaje CHO clulas expresan dos de los cuatro NDSTs, uno de los tres 6-OSTs, y ninguno de los siete 3-OSTs encontrados en humanos, lo que explica la simplicidad estructural de HS producidos por estas clulas. La biosntesis de la heparina como HS en clulas CHO requerira: 1. La sobre-expresin de una protena de ncleo apropiado para llevar a la heparina CHO fuera de la clula y su liberacin en el sobrenadante del cultivo; 2. La expresin controlada de las isoformas de NDST; 3. Co-localizacin de cantidades suficientes de C5 epimerasa y 2 OST-; 4. El mantenimiento de niveles suficientes y la correcta localizacin de Golgi de los correspondientes 6OST isoformas, y 5. La expresin y la correcta localizacin Golgi de 3-OST isoformas.
Sistemas de microfludicos faltan del carcter inmediato de alto rendimiento de microarrays; sin embargo, pueden proporcionar entornos que imitan la sntesis biolgica con mayor precisin y se pueden manipular conduciendo a nuevos diseos de proyeccin biosintticas y biolgicos. En la actualidad, se han desarrollado dos tipos de sistemas microfludicos: 1. canal microfludica, consistente en flujo de fluidos en canales de modelado; y 2. Microfludica digital, que consiste en
abre el movimiento de la gota en una plataforma de cuadrcula bidimensional, lo que elimina muchas de las limitaciones asociadas con los canales fijos. Desde microfludica digital manipula las muestras y los reactivos en forma de gotitas discretas y debido a la geometra de la matriz, es reconfigurada ms fcilmente que un dispositivo de canal, lo que permite un mayor nmero de rutas a travs del sistema y gota el tamao a la medida de nanoliter volmenes de microlitro. Esto permite una variedad de funciones sin necesidad de redisear el dispositivo ampliando la gama de aplicaciones de ensayos a la preparacin de la muestra.
El aparato de Golgi es el orgnulo responsable de la glicosilacin de protenas postraduccional, un proceso de varios pasos no dependiente de plantilla resultante en la sntesis de glicoprotenas y PGs. El microheterogeneity estructural de HS se origina en la compleja organizacin del aparato de Golgi que acta como una red de canales y utiliza membranas que contiene un nmero de enzimas. GAG logra su sntesis mediante el aparato de Golgi que es el resultado de un control preciso del flujo de fluidos y transformaciones biocatalizadores. Como el primer paso hacia la construccin del aparato de Golgi artificial, HS ha sido modificado con xito por 3-OST en una plataforma de microfludica digital. Biotinilado HS, inmovilizada en nanopartculas magnticas recubierto de estreptavidina, ha sido llevado en contacto con 3-OST-1 en un dispositivo de microfluidos digital. Anlisis del HS 3-OST-modificado mostr 70-fold mayor cantidad de 3 -Osulfatacin en comparacin con el control sin modificar.
Bueno lo que yo entend es que gracias a la gran importancia biolgica y teraputica de la heparina y del heparan sulfato hay un gran inters continuo en el avance de las nuevas tecnologas para su sntesis y entender la relacin entre su estructura y su actividad. Y que el futuro debe llevar una mejor comprensin de la biosntesis de la heparina y del heparan sulato basado en el aparato de Golgi, para as mejorar darle un buen uso a la heparina y mejorar la calidad de vida y lograr nuevos avances a partir de esto.