COMPOSICIN DE LOS REACTIVOS Reactivos lquidos listos para utilizar

COMPONENTES Reactivo 1: Tris, pH 7.8 L-Aspartato MDH LDH Reactivo 2: 2-Oxoglutarato NADH CONCENTRACIN FINAL 80 mmol/L 240 mmol/L 600 U/L 600 U/L 12 mmol/L 0.18 mmol/L

La presencia de la hemoglobina en suero indica la destruccin de eritrocitos con la liberacin de la GOT, produciendo as gran interferencia.

TGO (AST)
(Transaminase Glutamato Oxalacetato)
IFCC Modificado
2 reactivos Reactivo de diagnstico in vitro para la determinacin de GOT (AST) en suero o plasma humano, en sistemas fotomtricos.

MTODO PARA FOTOMETROS SEMIAUTOMATIZADOS

Programar el equipo bajo mtodo cintico, contra blanco de agua, filtro 340, sin filtro referencial, 37C, incubacin por 60 segundos y tiempo total de lectura de 60 segundos a intervalos de 10 segundos o menor. Inicio con Substrato
Pipetear en los tubos de 25 C, 30 C 37 C prueba Reactivo 1 400 l 400 l Muestra 100 l 50 l Mezclar Reactivo 2 100 l 100 l Mezclar.Incubar por 60 segundos. Leer la absorbancia por 60 segundos, 6 lecturas cada 10 segundos.

PREPARACIN DE LOS REACTIVOS

Inicio con Substrato: Los reactivos estn listos para usar. Inicio con Muestra: Mezclar 4 partes del reactivo 1 con 1 parte del reactivo 2. (= Reactivo De Trabajo)

ESTABILIDAD REACTIVOS
D94610 D98616 5 x 100 ml 5 x 50 ml 4 x 100 ml 1 x 100 ml 4 x 50 ml 1 x 50 ml
Calibrador Control Normal Control anormal

ALMACENAJE

DE

LOS

Reactivo 1 Reactivo 2 Reactivo 1 Reactivo 2

Diacal Auto Diacon N Diacon P

Condiciones:

proteger contra la luz cerrar inmediatamente despus de uso Inicio con Substrato: Almacenaje: 2 8 C Estabilidad: hasta la fecha de vencimiento Inicio con Muestra (Reactivo De Trabajo): Estabilidad: a28C 4 semanas a 15 25 C 5 das La absorbancia permisible mnima del reactivo de trabajo medida a 340 nm contra agua como referencia es 1.6.

Inicio con Muestra

Pipetear en los tubos de 25 C, 30 C 37 C prueba Reactivo de trabajo 500 l 500 l para Inicio con muestra Muestra 100 l 50 l Mezclar.Incubar por 60 segundos. Leer la absorbancia por 60 segundos, 6 lecturas cada 10 segundos.

D98485 D98481 D98482

5 x 3 ml 12 x 5 ml 12 x 5 ml

PARMETROS DE PRUEBA
Mtodo: Longitud de onda: Temperatura: Muestra: Linealidad: Sensibilidad: Reaccin UV, Cintica, disminucin, IFCC modificado de

CLCULO (paso de luz 1 centmetro)

GOT (IU/L) = A/min x Factor Factores: Inicio con Substrato: Factor en 340 nm Factor en 334 nm Factor en 365 nm Inicio con Muestra: Factor en 340 nm Factor en 334 nm Factor en 365 nm 25 o 30 C 1151 1173 2132 25 o 30 C 952 971 1765 37 C 2143 2184 3971 37 C 1745 1780 3235

ESTABILIDAD Y ALMACENAJE DE LA MUESTRA

Prdida de actividad: < 8 % en el plazo de 3 das a 15 25 C < 10 % en el plazo de 3 das Estabilidad: a -20 C por lo menos 3 meses Desechar los especimenes contaminados. a2-8C

334 nm de Hg, 365 nm de Hg, 340 nm 25C, 30C, 37C Suero, plasma con EDTA, plasma con heparina hasta 349 U/L El lmite ms bajo de la deteccin es 2 U/L

SUSTANCIAS DE INTERFERENCIA
Ninguna interferencia hasta: cido ascrbico 30 mg/dl Bilirrubina 40 mg/dl Triglicridos 2000 mg/dl

CONVERSIN DE UNIDADES
U/L x 0.01667 = katal/L

PRECISIN (en 37 C) Sin P-5-F Intra- prueba n = 20 Muestra 1 Muestra 2 Muestra 3 Inter- prueba n = 20 Muestra 1 Muestra 2 Muestra 3 Con P-5-F Intra- prueba n = 20 Muestra 1 Muestra 2 Muestra 3 Inter- prueba n = 20 Muestra 1 Muestra 2 Muestra 3 Media [mg/dl] 44.1 75.6 172 Media [mg/dl] 43.1 76.5 191 EST. [mg/dl] 1.11 1.80 3.22 EST. [mg/dl] 1.55 3.05 3.35 CV [%] 2.52 2.38 1.87 CV [%] 3.60 3.99 1.75 Media [mg/dl] 26.1 52.1 121 Media [mg/dl] 26.2 49.3 119 EST. [mg/dl] 0.83 1.59 0.91 EST. [mg/dl] 1.15 0.66 0.81 CV [%] 3.18 3.05 0.75 CV [%] 4.39 1.34 0.68
D98481 D98482 12 x 5 ml 12 x 5 ml DIACON N DIACON P Control probado Suero Normal Control probado Suero Anormal

VALORES DE REFERENCIA * (U/L)

Sin la adicin de fosfato de piridoxal: 25 C 30 C Varones: < 18 < 25 Mujeres: < 15 < 21 Con la adicin de fosfato de piridoxal: 30 C Varones: 7 34 Mujeres: 7 24 37 C < 37 < 31 37 C 10 50 10 35

CALIBRACIN
El uso de un calibrador para GOT es opcional. Recomendamos:
D98485 5 x 3 ml DIACAL AUTO Multi probado Suero de cal.

* Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de valores referenciales normales.

AUTOMATIZACIN
Las adaptaciones especiales para los analizadores automatizados se pueden hacer a peticin.

PRINCIPIO DE LA PRUEBA
Esta es una formulacin modificada para el anlisis de GOT, como es recomendado por el IFCC (Federacin Internacional de Qumica Clnica). El mtodo de referencia de la IFCC incluye el fosfato de piridoxal (PP), ver el Catlogo de Dialab N: D96361 en un nivel de 0.1 mmol/L. El PP funciona como coenzima en transferencia de AA, por lo tanto la adicin del PP da lugar a un incremento de la actividad de la enzima.
L-Aspartato+2-Oxoglutarato< Oxaloacetato + NADH + H+
GOT

ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES
1. 2. Los reactivos contienen azida de sodio (0.95 g/l) como preservante. No tragar! Evitar el contacto con la piel y membranas mucosas. Tomar las precauciones necesarias para el uso de reactivos de laboratorio.

>Oxaloacetato + L-Glutamato

ADMINISTRACIN DE DESECHOS
Remitirse por favor a los requisitos legales locales.

<MHD> L-Malato + NAD+

El NADH se oxida a NAD+, la disminucin resultante de la absorbancia a 340 nm es directamente proporcional a la actividad de la GOT en la muestra.

COMPARACIN DEL MTODO

Sin P-5-f Una comparacin entre el GOT (AST) de DIALAB sin P5-f (y) y una prueba comercialmente disponible (x) usando 84 muestras dio el siguiente resultado: y = 0.98 x 0.51 U/l; r = 0.998. Con P-5-f Una comparacin entre el GOT (AST) de DIALAB con P5-p (y) y una prueba comercialmente disponible (x) usando 85 muestras dio el siguiente resultado: y = 0.97 x 0.79; r = 0.996.

REFERENCIAS
1. 2. 3. Clin. Chem. Acta 105 (1980) S. 147 - 172. Synopsis der Leberkrankheiten: H. Wallhfer, E. Schmidt u. F. W. Schmidt, G. Thieme Verlag, Stuttgart 1974. Thefeld W. et al, Dt. Med. Wschr. 99 (1974), 343.

ABREVIATURAS
AA GOT MDH NAD+ NSADH LDH = Aminocido = Transaminasa Oxaloacetato Glutamato = Malato Deshidrogenasa = Di Nucletido Adenina Nicotinamida = NAD reducido = Lactato Deshidrogenasa

CARACTERSTICAS DE FUNCIONAMIENTO
LINEALIDAD El anlisis es lineal hasta A/min = 0.16 a 340nm y 334nm 0.08 a 365nm. Sobre esta concentracin, diluir la muestra con agua bi destilada NaCl (9 g/l del cloruro de sodio en agua) y realizar nuevamente la prueba, el resultado multiplicarlo por el factor de dilucin.

CONTROL DE CALIDAD
Pueden ser utilizados todos los sueros control con valores de HOT determinados por ste mtodo. Recomendamos:

IV D
D I A L A B P r o d u k t io n u n d V e r t r ie b v o n c h e m is c h - t e c h n is c h e n P r o d u k t e n u n d L a b o r in i n s t r u m e n t e n G e s e lls c h a f t m . b . H . A - 2 3 5 1 W ie n e r N e u d o r f A u s tr ia IZ - N O S u d H o n d a s tra s s e , O b je k t M 5 5 P h o n e + + 4 3 ( 0 )2 2 3 6 6 6 0 9 7 0 -0 F a x + + 4 3 (0 )2 2 3 6 6 6 0 9 1 0 -3 0 e - m a i l : o f f i c e @ d ia l a b . a t