Unidad41 Teroria Enzimas Ok

maov/mlvm/julio de 2009
Termodinmica, Cintica y Enzimas

Mara de la Luz Velzquez Monroy y Miguel ngel Ordorica Vargas
Introduccin
Las enzimas son las molculas encargadas de acelerar las reacciones qumicas que constituyen el
metabolismo de los seres vivos. La Bioqumica moderna, se inici con el estudio de las caracte-
rsticas de las enzimas. El impulso inicial tuvo lugar en 1897 cuando Eduard Buchner demostr
que la fermentacin alcohlica se poda efectuar en extractos de levadura, libres de clulas.
A partir de este momento, se hizo posible estudiar las enzimas indi-
viduales en forma sistemtica, y definir su importancia para las re-
acciones qumicas de los seres vivos.
Reacciones Qumicas
Las reacciones qumicas del metabolismo, lo mismo que cualquier
otra reaccin qumica, son procesos en los cuales una o ms subs-
tancias llamadas reactivos, se transforman en otras llamadas pro-
ductos, con estructura y propiedades diferentes. En general las re-
acciones qumicas se representan como:
Productos Reactivos
Los cambios de estructura durante las reacciones qumicas slo son
posibles si se rompen y/o forman enlaces qumicos. El rompimiento
y formacin de enlaces qumicos implica que los tomos comparten
sus electrones en forma diferente en los reactivos y en los productos. Podemos entonces concluir
que una reaccin qumica es un:
Proceso durante el cual se producen reacomodos de los electrones de enlace de los tomos.
Para que se lleven a cabo dichos reacomodos, es necesario que tenga lugar un intercambio de
energa. Los intercambios de energa durante las reacciones qumicas los estudia la Termodin-
mica Qumica.
Por otro lado, los reacomodos electrnicos se efectan a velocidades, y a travs de caminos espe-
cficos que son estudiados por la Cintica Qumica.
Nuestra capacidad para modificar las reacciones qumicas depende del conocimiento de la cinti-
ca y termodinmica de estas.
Termodinmica Qumica
La Termodinmica se encarga del estudio de los intercambios de energa que acompaan a todos
los procesos. A partir de un modelo bsico del mundo real y un conjunto de leyes que rigen su
comportamiento, la Termodinmica deduce relaciones que describen los cambios de energa y la
direccin de los procesos fsicos y qumicos a escala macroscpica. Como no hace ninguna con-
sideracin respecto de las propiedades microscpicas de la materia, no puede decir nada sobre el
Figura 1. Eduard Buch-
ner
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universo atmico. Es bsicamente esttica pues se ocupa slo del inicio y el final de los cambios
y jams de su velocidad, aunque si puede predecir su direccin y punto de equilibrio.
Energa. La energa es el objeto de estudio de la Termodinmica. La energa se define como la
capacidad de producir trabajo, modificando o desplazando objetos. La energa puede ser Poten-
cial (determinada por la posicin en el espacio) o Cintica (determinada por el movimiento). La
Termodinmica estudia los intercambios y transformaciones de Energa, empleando un Modelo,
y aplicando las Leyes de la Termodinmica.
Modelo Termodinmico. El modelo del mundo real que se usa en Termodinmica para estudiar
los cambios de energa est formado por:
1. Sistema. Parte del universo que es objeto de estudio del observador.
2. Alrededores. Todo lo que rodea al sistema, pero que no interesa al observador.
3. Universo. Sistema + Alrededores
4. Lmite. Frontera real o imaginaria, que separa al sistema de sus alrededores.
Tipos de Sistemas. Segn el tipo de intercambios que permite su lmite, los sistemas pueden ser:
1. Abiertos. Cuando el lmite permite el intercambio de Materia y Energa (Calor y Trabajo)
2. Cerrados. S el lmite permite el paso de Energa (Calor y Trabajo), pero NO de Materia.
3. Adiabticos. El lmite es impermeable a Materia y Calor, pero permite el paso de otras formas
de Energa (Trabajo)
4. Aislados. Cuando el lmite es impermeable tanto a la Materia como a la Energa (Calor y Tra-
bajo)
Estado Termodinmico. Es el conjunto de valores de las propiedades de un sistema, que lo ca-
racterizan en un momento dado. Para cualquier sistema, existe un nmero infinito de estados. Al-
gunos estados termodinmicos importantes que pueden alcanzar los sistemas son:
1. Definido. Se llama as el estado, cuando conocemos los valores de todas sus propiedades, o to-
das las relaciones que nos permitan calcularlos.
2. Equilibrio. Estado de un sistema cuyas propiedades tienen valores constantes, que no realiza
intercambio de materia o energa y del cual el sistema no puede salir por s solo.
3. Estacionario. Estado en que el sistema mantiene valores constantes de sus propiedades, me-
diante intercambio continuo de materia y energa con los alrededores. Los valores de las pro-
piedades son diferentes a los del estado de equilibrio y cambia cuando cambia la velocidad del
intercambio. Tambin se le conoce como Estado de Equilibrio de Flujos.
4. Estndar. Punto de referencia de los cambios termodinmicos. Se define basndose en la com-
posicin, como el estado en que la actividad termodinmica de todos los componentes del sis-
tema vale uno. En la realidad, se aproxima a concentracin molar igual a uno y presin de una
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atmsfera para los componentes gaseosos del sistema. En Biologa y Bioqumica se aade la
condicin de pH = 7.
5. Metaestable. Estado que se presenta cuando el sistema est detenido por una barrera de ener-
ga que le impide alcanzar el equilibrio. En estas condiciones el sistema no realiza intercambios
con los alrededores y los valores de sus propiedades son constantes, pero cambios provocados
desde el exterior, que permitan rebasar la barrera, hacen que el sistema inicie un proceso, que
puede mantener por si mismo, y lo lleva al estado de equilibrio.
Proceso Termodinmico. Es cualquier cambio en el valor de una o ms de las propiedades de un
sistema. Segn la forma de los cambios, las propiedades se pueden dividir en:
1. Propiedad de Estado. Es aquella para la que podemos calcular el valor de sus cambios to-
mando en cuenta slo los estados inicial y final y no la ruta del proceso. Las propiedades cuyos
cambios dependen de la ruta del proceso se dice que no son propiedades de estado.
2. Propiedad Intensiva. Es aquella cuyo valor no cambia cuando cambia el tamao del sistema,
debido a que no depende de l.
3. Propiedad Extensiva. Es aquella cuyo valor cambia, al cambiar el tamao del sistema, o sea
que si depende de este.
Ecuacin de Estado. Expresin matemtica que describe una relacin entre propiedades de esta-
do. El ejemplo ms conocido es la Ley de los Gases Ideales, que relaciona composicin, Presin,
Volumen y Temperatura de un sistema en estado gaseoso.
Energa Interna (E). Suma de todas las formas de energa que posee un sistema, en virtud de su
tamao, composicin, temperatura, etc.; sin tomar en cuenta su posicin ni desplazamiento en el
espacio.
Calor (q) y Trabajo (w). Son las formas fundamentales de transferencia de energa. La principal
diferencia entre ellas radica en que el trabajo se considera como transferencia a escala macrosc-
pica mientras que el calor lo es en el mbito microscpico. Calor y trabajo NO son propiedades
de estado pues ambas dependen de la ruta a travs de la cual se efecta el proceso.
Leyes de la Termodinmica
El estudio de las transformaciones de energa que se producen durante cualquier cambio en el
Universo, est basado en las Leyes de la termodinmica.
Primera Ley o Ley de la Conservacin de la Energa. La primera ley, describe el balance de la
energa intercambiada en un proceso. Su forma ms conocida es la Ley de la Conservacin de la
Energa, que dice que: La energa no se crea ni se destruye, pero puede cambiar de una forma
a otra. En Termodinmica tambin se enuncia como: La energa total del universo es constan-
te o En un sistema aislado la energa interna es constante. Cuando un sistema intercambia
energa con sus alrededores, se producen cambios en la energa interna del sistema.
Simplificando, los cambios de Energa Interna (AE) en cualquier sistema, resultan del intercam-
bio de energa como calor (q) y trabajo (w), y deben cumplir la ecuacin de la primera ley:
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w q + = AE
Entalpa. Cuando el cambio de energa se efecta a presin constante, el trabajo que se realiza
es principalmente de expansin cambio de volumen, (AV):
) ( V P A = w
Al sustituir el trabajo de expansin en la ecuacin de la primera ley, esta se transforma en:
) ( - V P E A = A q
Transponiendo trminos se llega a:
) ( V P E A + A = q
Los cambios de energa y volumen se definen como:
1 2
E E E = A y
1 2
V V V = A
Entonces:
) ( ) ( ) ( ) (
1 1 2 2 1 2 1 2
PV E PV E V V P E E + + = + = q
De aqu, definimos la Entalpa (H) del sistema como:
PV E H + =
y:
1 1 1
PV E H + = y
2 2 2
PV E H + =
Finalmente obtenemos que: El cambio de entalpa de un proceso es igual al calor intercambiado
en condiciones de presin constante.
H H H A = =
1 2
q
La entalpa representa el contenido de energa trmica del sistema y es una propiedad de estado
porque est definida en funcin de propiedades de estado. Aunque es calor, el cambio de Entalpa
de un sistema depende slo de los estados inicial y final y no de la ruta que sigue el proceso, por-
que esta limitada a procesos efectuados a presin constante.
Dos clases de cambios de Entalpa, de importancia en Qumica son:
Cambio de Entalpa de Formacin (AH
f
). Calor intercambiado en la reaccin de sntesis de un
compuesto, a partir de los elementos qumicos que lo constituyen, en su forma ms estable.
Cambio de Entalpa de Combustin (AH
c
). Calor intercambiado en la reaccin de oxidacin to-
tal de un compuesto orgnico, hasta CO
2
y H
2
O.
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Termoqumica. Es la aplicacin de la Primera Ley de la Termodinmica a las reacciones qumi-
cas. Su principio fundamental es la Ley de Hess, nombrada as en honor a Germain Henri Hess,
quien la formul en 1840.
Ley de Hess. El cambio de entalpa de una reaccin qumica es independiente del nmero de
etapas en que se efecta y slo depende del estado inicial (reactivos) y final (productos):
REACTIVOS PRODUCTOS
H H H ) ( ) (

A A = A
f f
Aunque la ley de Hess est formulada en funcin de la Entalpa, tambin se puede aplicar a las
otras propiedades termodinmicas de estado.
Segunda Ley. La segunda ley pone un lmite a la eficiencia de una sistema. En su forma ms
simple, establece que: Para realizar trabajo, la energa debe fluir de un lugar caliente a uno
fro. En otras palabras: En el Universo, los procesos siempre proceden en una direccin, desde
estados de mayor energa hacia estados de menor energa.
La prdida de energa durante el cambio de estado, va acompaada de una prdida de organiza-
cin, o aumento de la libertad de variacin del sistema, que se mide como un cambio de Entro-
pa (AS, con unidades de Energa/Temperatura).
Entropa. Es el parmetro termodinmico que nos permite conocer la direccin de un proceso.
Se deriv originalmente para la expansin de los gases ideales como:
T
S
REV
q
= A
En donde
q
REV
es el calor absorbido en un proceso reversible a tem-
peratura constante (T). La Entropa de un sistema aislado siempre
tiende al mximo y lo alcanza en el equilibrio, por lo tanto, otra
forma de formular la Segunda Ley es: En un sistema aislado, los
procesos posibles, permitidos o espontneos tienen cambio de en-
tropa positivo.
0 > A
AISLADO SISTEMA
S
En 1871 Ludwig Boltzmann propuso una interpretacin estadstica
de la entropa segn la cual, la entropa de un sistema es proporcio-
nal al nmero total de arreglos posibles de las partculas del sistema,
(representado por O, la letra griega Omega mayscula) cuando este
se encuentra en un estado particular.
O = ln k S
Donde:
k = constante de Boltzmann
Figura 2 Ludwig Boltz-
mann
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Para cualquier sistema, el estado con mayor entropa es aquel que tiene mayor nmero de arre-
glos posibles y por lo tanto la mayor probabilidad de existir.
Cuando el sistema no est aislado, para determinar si un proceso es permitido, hay que medir el
cambio de entropa del Universo.
Usando la Entropa del Universo, la Segunda Ley tambin se puede enunciar diciendo que: En
los procesos espontneos la entropa del Universo siempre aumenta.
0 > A
UNIVERSO
S
Un sistema puede aumentar (+AS) o disminuir (-AS) su nivel de entropa, siempre que se cumpla
la segunda ley y la entropa del Universo aumente:
0 > A + A = A
UNIVERSO SISTEMA UNIVERSO
S S S
Para mantener un nivel bajo de Entropa los sistemas requieren de un gasto de energa constante,
el cual se logra nicamente en los sistemas abiertos, como los seres vivos.
Tercera Ley. Esta ley, marca un punto de referencia absoluto para la medicin de la entropa y,
al menos en teora, para todas las propiedades de estado. El enunciado ms simple de esta ley di-
ce que: Cuando la temperatura de un sistema se aproxima al cero absoluto, todos los procesos
cesan y la Entropa llega a un valor mnimo.
Un corolario de esta ley es que cuando un sistema est cerca del cero absoluto, la Entropa de-
pende nicamente de la Temperatura. Adems, cuando un sistema se encuentra en el cero absolu-
to, la Entropa tiene un valor constante que depende de la degeneracin del estado basal. Si un
sistema no tiene degeneracin, como un cristal perfecto, a la temperatura de cero absoluto tendr
cero Entropa.
Ley Cero. Esta ley constituye la base de la definicin del concepto de Temperatura estableciendo
que: Dos sistemas en equilibrio tienen la misma Temperatura si al ponerlos en contacto trmico
permanecen en equilibrio, o sea, sus propiedades permanecen constantes. O que: Cuando no
hay intercambio de calor entre dos sistemas en contacto trmico, es porque ambos sistemas tie-
nen la misma Temperatura. Se dice que dos sistemas estn en contacto trmico, cuando existe
la posibilidad de que intercambien calor, sin intercambiar trabajo o
materia.
Energa Libre
En 1878 Josiah Willard Gibbs combin la primera y segunda leyes
de la termodinmica y cre la funcin de energa libre (G) que per-
mite:
A. Calcular la mxima cantidad de energa til (1
a
ley) que se puede
intercambiar en un proceso:
S T H G A A = A
Figura 3 Josiah Willard
Gibbs
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Donde:
AG = Cambio de energa libre (energa til intercambiada)
AH = Cambio de entalpa (calor intercambiado)
T = Temperatura absoluta (en grados Kelvin)
AS = Cambio de entropa del sistema
B. Determinar la direccin del proceso (2
a
ley), tomando en cuenta nicamente el cambio de
energa libre del sistema:
0 < A
SISTEMA
G , Proceso Espontneo Permitido (Exergnico)
0 > A
SISTEMA
G , Proceso No Espontneo No Permitido (Endergnico)
El AG de un proceso est definido en funcin de propiedades de estado y por tanto, es una pro-
piedad de estado, independiente de la ruta que sigue el proceso y solo depende de los estados ini-
cial y final; por tanto, los cambios de Energa Libre en reacciones qumicas se pueden calcular
usando la ley de Hess.
La ecuacin que relaciona la concentracin de reactivos y productos, con el cambio de energa li-
bre de una reaccin qumica es:
| |
| | Reactivos
Productos
ln RT G G + A = A
Donde:
AG = Cambio de energa libre de la reaccin
AG = Cambio de energa libre en condiciones estndar
R = Constante de la ecuacin de los gases ideales
T = temperatura absoluta (en grados Kelvin)
[Productos] = Concentracin molar de los productos
[Reactivos] = Concentracin molar de los reactivos
El cambio de energa libre de una reaccin qumica es un criterio para determinar si la reaccin es
permitida:
1. Una reaccin es espontnea, esto es permitida, si tiene AG negativo.
2. Si el AG vale cero, entonces la reaccin est en equilibrio. En estas condiciones:
EQ
K ln RT G = A
3. Las reacciones con AG positivo no son espontneas, no son permitidas, es necesario suminis-
trarles energa libre para que se lleven a cabo.
El AG no proporciona informacin sobre el mecanismo o velocidad de una reaccin qumica; esta
informacin se puede obtener de la energa de activacin.
maov/mlvm/8
Cambios de Energa Libre en Reacciones Metablicas. Muchas de las reacciones que se efec-
tan en las clulas, tienen cambio de energa libre estndar positivo, o sea no son permitidas en
condiciones estndar. Para llevar a cabo estas reacciones, las clulas utilizan varias estrategias.
1. Relacin Productos/Reactivos menor que la unidad. Cuando en la ecuacin:
| |
| | Reactivos
Productos
ln RT G G + A = A
el cociente [Productos]/[Reactivos] es menor que 1, su logaritmo es negativo, lo cual favorece
que l cambio de energa libre se vuelva negativo y la reaccin se lleve a cabo. Para mantener
el valor pequeo, las substancias que se producen en una reaccin no deben acumularse. Para
evitar la acumulacin la sustancia debe ser metabolizada rpidamente, o transportada a otro
compartimiento, o de otro modo la reaccin se detiene y con ella toda la va metablica.
2. Acoplamiento de reacciones. Una reaccin endergnica se puede llevar a cabo, s acoplada a
ella se efecta otra exegnica, que libere suficiente energa. Dos reacciones se pueden acoplar
si existe un intermediario comn (i.e., el producto de una es reactivo de la otra), o mediante un
agente para acoplarlas. En el metabolismo, las enzimas son los agentes que acoplan las reac-
ciones. Muchas reacciones celulares se acoplan con la hidrlisis de ATP.
Con estos principios, podemos concluir que la aplicacin de la Termodinmica a los sistemas bio-
lgicos permite:
1. Definir la direccin de los procesos; en los procesos espontneos:
0 > A
UNIVERSO
S y 0 < A
SISTEMA
G
2. Conocer la cantidad de energa til que se puede obtener:
S T H G A A = A
3. Determinar cuando una reaccin ha llegado al equilibrio:
0 = A
SISTEMA
G , Mnima
SISTEMA
= G , 0 = A
UNIVERSO
S y Mxima
UNIVERSO
= S
4. Saber que condiciones deben variar para lograr que reacciones no permitidas se lleven a cabo:
cambios en la relacin [Productos]/[Reactivos] y acoplamiento de reacciones con +AG, y reac-
ciones con -AG.
Limitaciones de la Termodinmica
Los principios de la termodinmica se desarrollaron en sistemas aislados y en equilibrio mientras
que las clulas son sistemas abiertos y alejados del equilibrio en los cuales se realizan procesos
irreversibles.
Durante parte de su vida las clulas se encuentran en estado estacionario. La termodinmica de
los seres vivos es disipativa porque para mantener su estado estacionario las clulas deben con-
sumir energa en todo momento.
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La termodinmica no brinda ninguna informacin respecto de la velocidad a la cual se realiza un
proceso, porque es independiente del tiempo, esta informacin es el objeto de estudio de la Cin-
tica Qumica.
Cintica Qumica
La Cintica Qumica estudia los cambios en la concentracin de reactivos y productos, que se dan
durante el desarrollo de las reacciones qumicas y su relacin con el tiempo. Tambin se ocupa de
estudiar la ruta o mecanismo a travs del cual se lleva a cabo la reaccin, y el efecto de los facto-
res que la pueden modificar.
Velocidad de las Reacciones Qumicas
La velocidad (v) de una reaccin qumica se define como el cambio en la concentracin de pro-
ductos o reactivos en el tiempo:
| | | |
dt
Reactivos d
dt
Productos d
v = =
El signo negativo indica que la concentracin de los reactivos disminuye con el tiempo.
Para explicar los factores que afectan la velocidad, se usa un modelo de las reacciones qumicas
que considera las molculas como partculas en movimiento aleatorio, con niveles de energa que
siguen la Ley General de Distribucin de Energa de Maxwell-Boltzmann (Figura 4).
Figura 4. Ley de Distribucin de Energa de Maxwell-Boltzmann
En estas condiciones, la velocidad de reaccin depende de que:
1. Las molculas que van a reaccionar, se encuentren.
2. Que el encuentro, choque o colisin, se efectu con suficiente energa.
3. Al momento de la colisin, las molculas tengan la orientacin adecuada.
Estas condiciones se pueden expresar como la probabilidad (p) de que se cumpla cada una de
ellas, de esta manera, es posible definir la velocidad como una funcin de probabilidades:
) , , (
N ORIENTACI ENERGA COLISIN
p p p f v =
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Cualquier factor que modifique una o ms de estas probabilidades, afectar la velocidad de la re-
accin. Estudiaremos tres de los factores ms importantes que modifican la velocidad de una re-
accin qumica: (1) la concentracin de reactivos, (2) la temperatura y (3) la presencia de un cata-
lizador o una enzima.
Concentracin de Reactivos
El efecto de la concentracin de reactivos se resume en la Ley de Accin de Masas, que fue
enunciada en 1867 por los Noruegos Cato Maximilian Gouldberg y Peter Waage, y dice:
La velocidad de una reaccin qumica es proporcional a la concentracin de los reactivos.
Esta relacin se expresa como una Ecuacin de Velocidad:
| | Reactivos o v | | Reactivos k = v
Donde:
o = Smbolo de proporcionalidad
v = Velocidad de la reaccin
k = Constante de proporcionalidad, denominada constante
de velocidad especfica o simplemente velocidad especfica
[Reactivos] = Concentracin molar de los reactivos
En muchas reacciones, esta relacin no se cumple porque es-
t influenciada por el Orden de reaccin (N), que es un ex-
ponente al cual se debe elevar la concentracin de reactivos
para que se cumpla la ecuacin de velocidad:
| |
N
Reactivos k = v
El orden de reaccin es un parmetro propio de cada reaccin qumica; puede tener cualquier va-
lor igual o mayor que cero, y se determina en forma emprica. En la cintica de las enzimas, hay
tres valores del orden de reaccin que son importantes:
Orden Cero. En la cintica de orden cero, la velocidad de la reaccin es independiente de la con-
centracin de reactivo y se mantiene constante, aunque esta cambie:
| | k k = =
0
Reactivo v
En este tipo de reacciones, la concentracin de reactivos y productos depende en forma directa
del tiempo de reaccin transcurrido (t):
| | | | kt =
INICIAL
Reactivo Reactivo
En forma prctica se observa un seudo-orden cero cuando en una reaccin en la que participan
dos reactivos, uno de ellos se encuentra en exceso, entonces aunque se aumente su concentracin,
no hay cambio importante en la velocidad. Esta situacin corresponde a los casos de saturacin
que se presentan en fenmenos biolgicos como, unin a receptores, transporte a travs de mem-
brana y por supuesto, la catlisis enzimtica.
Figura 5. Cato M. Gouldberg y
Peter Waage.
maov/mlvm/11
Orden Uno. En este caso, cuando aumenta la concentracin de reactivo, la velocidad de la reac-
cin aumenta en la misma proporcin:
| | | | Reactivo Reactivo k k = =
1
v
En las reacciones de orden uno la concentracin de reactivos y productos vara con el tiempo en
forma exponencial.
| | | |
kt
e
-
=
INICIAL
Reactivo Reactivo
A concentraciones bajas de reactivo, casi todas las reacciones enzimticas tienen cintica de or-
den uno respecto de la concentracin de sustrato. Una caracterstica importante de las reacciones
de orden uno es que su Tiempo de Vida Media, esto es el tiempo que tarda en reducirse a la mi-
tad la concentracin de reactivo, es constante. Tambin siguen cinticas de orden uno procesos
como la absorcin y eliminacin de frmacos
Orden Dos. Una reaccin es de orden dos si su velocidad depende de la concentracin de dos re-
activos o del cuadrado de la concentracin de un solo reactivo:
| || |
2 1
Reactivo Reactivo k = v | |
2
Reactivo k = v
En reacciones de este orden la concentracin de un reactivo cambia en forma hiperblica con el
tiempo:
| |
| |
| | kt
INICIAL
INICIAL
Reactivo
Reactivo
Reactivo
+
=
1
Las enzimas que usan dos substratos, pueden presentar cinticas de orden dos.
Un resumen de las caractersticas de cada orden de reaccin se presenta en las ecuaciones de la
Tabla 1 y se muestra en forma grfica en la Figura 5.
Tabla 1. Resumen de Ecuaciones de Orden de Reaccin
Reaccin
R P R S P +
Orden 0 1 2a (R=S) 2b (RS)
Ecuacin de
Velocidad
| | v k R =
0
| | R v=k | |
2
R v=k | || | S R k v =
Ecuacin
Diferencial
| | kdt R d =
| |
| |
kdt
R
R d
=
| |
| |
kdt
R
R d
=
2
| |
| |
| |dt S k
R
R d
=
Forma Integrada
| | | | kt R R =
0
| | | |
kt
e R R

=
0
| |
| |
| | kt R
R
R
0
0
1+
=
| |
| |
| |
| |
| | | | ) S R kt(
e
S
R
S
R
0 0
0
0
=
Forma Lineal | | | | kt R R =
0
| | | | kt R R =
0
ln ln
| | | |
kt
R R
+ =
0
1 1 | |
| |
| |
| |
| | | | ) S R kt(
S
R
S
R
0 0
0
0
ln ln + =
Vida Media
| |
k
R
t
/
2
0
2 1
=
k
t
/
2 ln
2 1
=
| |
0
2 1
1
R k
t
/
=
| |
| |
| | | | ) S R k(
S
S
t
/
0 0
0
2 1
2 ln ln
=
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El efecto de la concentracin sobre la velocidad de las reacciones qumicas, se puede explicar
porque al aumentar el nmero de partculas por unidad de volumen, aumenta la probabilidad de
colisiones entre molculas.
(A) (B)
Figura 6. Orden de Reaccin. (A) Velocidad en funcin de la Concentracin. (B) Concentracin
en funcin del Tiempo de reaccin
Temperatura
La temperatura es una medida de la energa cintica molecular promedio de un sistema. En la
mayora de las reacciones qumicas la velocidad aumenta con la temperatura porque las molcu-
las se mueven con ms velocidad. A mayor velocidad, aumenta la distancia recorrida por unidad
de tiempo y con ella, aumenta la probabilidad de encuentros. Adems, mayor velocidad significa
que la energa de los choques tambin es mayor, y es ms probable que sea suficiente para provo-
car la reaccin. La relacin entre la velocidad y la temperatura de las reacciones qumicas est re-
sumida en la ecuacin de Arrhenius:
RT
A
E
A

= e k
Donde:
k = Constante de velocidad especfica
A = Constante de Arrhenius
e = Base de los logaritmos naturales (2.71828)
E
A
= Energa de Activacin
R = Constante de los gases ideales
T = Temperatura absoluta
Energa de Activacin. Es la energa necesaria para que los reactivos alcancen el estado activado
intermedio. Representa una barrera que los reactivos deben rebasar para convertirse en productos
(Figura 6.A).
La energa de activacin se relaciona en forma inversa con la velocidad (Figura 6.B). Las reac-
ciones termodinmicamente espontneas, pero que no se llevan a cabo debido que tienen energa
de activacin elevada, se dice que estn en un estado metaestable.
maov/mlvm/13
Constante de Arrhenius. El valor de esta constante est relacionado con el cambio de entropa
de la reaccin porque depende de la forma y tamao de las molculas, mientras ms complejas
son las molculas de reactivo, menor es el valor de la constante.
(A) (B)
Figura 7. Energa de Activacin. (A) Interpretacin. (B) Relacin con la velocidad
Catalizadores
Los catalizadores son substancias que acele-
ran las reacciones qumica, participando en
ellas pero sin consumirse. Los catalizadores
tienen algunas propiedades generales:
1. Actan a concentraciones bajas.
2. Participan, pero no se modifican ni con-
sumen durante la reaccin.
3. No cambian el equilibrio de las reaccio-
nes.
4. No modifican las propiedades termodi-
nmicas de las reacciones, solamente la
velocidad con que se alcanza el equili-
brio.
5. Cambian el mecanismo de las reacciones, estabilizando los estados intermedios de alta energa.
6. Disminuye la energa de activacin.
Estas propiedades se ilustran en la Figura 7.
Clasificacin
Existen dos tipos de catalizadores, los inorgnicos, sintetizados en laboratorios, y los orgnicos
o enzimas que sintetizan los seres vivos. Aunque ambos tipos tienen las mismas propiedades ge-
nerales, existen diferencias importantes entre enzimas y catalizadores inorgnicos.
Figura 8. Mecanismo de accin de los Cataliza-
dores
maov/mlvm/14
1. Tamao. Las enzimas son protenas o cidos nucleicos, ms grandes que los substratos, grupos
funcionales y catalizadores inorgnicos. Las enzimas tienen pesos moleculares mayores (desde
12,000 a 1 milln de Daltons) que los catalizadores inorgnicos.
2. Especificidad. La mayora de las enzimas son especficas de los substratos que usan y/o las re-
acciones que catalizan, mientras que la especificidad de los catalizadores inorgnicos an es
menor.
3. Capacidad Cataltica. Las enzimas aceleran las reacciones mucho ms que los catalizadores
inorgnicos, en el orden de 10
6
a 10
17
veces, comparadas con los 10
2
a 10
4
de los catalizadores
inorgnicos (Tabla 2).
4. Condiciones de Trabajo. Las enzimas son activas en condiciones de pH y Temperatura en las
que la mayora de los catalizadores inorgnicos no funcionan.
Tabla 2. Capacidad cataltica de las enzimas
Enzima
Constante de Velocidad
SIN Enzima
Constante de Velocidad
CON Enzima
Acele-
racin
Anhidrasa Carbnica 1 x 10
-4
1 x 10
2
8 x 10
6
Quimotripsina 4 x 10
-9
4 x 10
-2
1 x 10
7
Lisozima 3 x 10
-9
5 x 10
-1
2 x 10
8
Triosafosfato Isomerasa 4 x 10
-6
4 x 10
3
1 x 10
9
Fumarasa 2 x 10
-8
2 x 10
3
1 x 10
11
Amilasa 3 x 10
-9
1 x 10
3
3 x 10
11
Adenosina Desaminasa 2 x 10
-10
4 x 10
2
2 x 10
12
Ureasa 3 x 10
-10
3 x 10
4
1 x 10
14
Fosfatasa Alcalina 1 x 10
-15
1 x 10
2
1 x 10
17
Orotidin-5'-fosfato Descarboxilasa 3 x 10
-16
4 x 10 1 x 10
17
ENZIMAS
Funciones de las Enzimas. Adems de la catlisis, las enzimas tambin cumplen otras funcio-
nes.
1. Catlisis. La mayora de las reacciones qumicas del metabolismo son lentas, las enzimas ace-
leran las reacciones permitiendo que el metabolismo se efecte a la velocidad que las clulas
requieren.
2. Direccin. Las enzimas no permiten la formacin de productos secundarios, de esta manera
evitan que se pierdan precursores y energa que la clula necesita; esta caracterstica tambin se
conoce como catlisis negativa.
3. Control. La actividad de las enzimas se puede regular para ajustarla a las necesidades del me-
tabolismo. La velocidad del metabolismo es determinada por las enzimas.
4. Acoplamiento. Las enzimas son los agentes encargados de acoplar reacciones no permitidas
con reacciones espontneas, permitiendo que se realicen.
Composicin y Estructura
En 1905 Arthur Harden descubri que la actividad de las enzimas requera de dos fracciones, una
no ultrafiltrable y sensible a la temperatura, a la que llam zimasa, y otra filtrable y resistente al
maov/mlvm/15
calentamiento, la cozimasa. La zimasa de Harden, est formada por las protenas, mientras que la
cozimasa contena las sustratos y cofactores necesarios para que la actividad de las enzimas.
La mayora de las enzimas son protenas, como lo descubri James B. Sumner en 1926, al crista-
lizar la enzima Ureasa (EC 3.5.1.5) de la soya. Como tales, tiene todas las propiedades de las
protenas. El descubrimiento de las propiedades catalticas de molculas de RNA bautizadas co-
mo Ribozimas, realizado en 1981 por Thomas Cech, no modifica en forma importante los temas
a revisar ya que en esencia la actividad enzimtica de los RNA tiene las mismas caractersticas
cinticas que la de las protenas.
Figura 9. De izquierda a derecha Arthur Harden, James B. Sumner y Tomas Cech
La actividad enzimtica depende de la integridad de la estructura. Todos los niveles estructurales
son importantes, 1, 2, 3 y 4 de protenas, y 1, 2 y 3 de cidos ribonucleicos. Los agentes
que desnaturalizan protenas, destruyen la actividad enzimtica y lo mismo sucede con las ribo-
zimas.
Su estructura puede estar constituida slo por aminocidos (como la Ribonucleasa pancretica
(EC 3.1.27.5) y la Pepsina de la digestin), o pueden ser protenas conjugadas con otros grupos
qumicos para realizar acciones que los aminocidos no pueden. Las ribozimas conocidas slo
necesitan nucletidos para ser activas, aunque algunas se asocian con iones y protenas.
Los grupos qumicos no protenicos de las enzimas conjugadas se dividen en tres categoras.
1. Cofactores. De naturaleza inorgnica, frecuentemente iones metlicos, entre los ms comunes
estn Fe
2+
, Cu
1+
, Mg
2+
, Mo
2+
, Mn
2+
y Zn
2+
.
2. Coenzimas. Compuestos orgnicos, muchos de ellos derivados de vitaminas, tambin conoci-
dos como Cosubstratos. Algunos ejemplos son cido lipico, pirofosfato de tiamina, biotina y
vitamina B
12
. Tradicionalmente, se llaman coenzimas a los cosubstratos libres, que se separan
de la enzima por dilisis.
3. Grupos prostticos. Se denomina as a los Cofactores o Coenzimas que se unen con fuerza a
su enzima, a veces mediante enlaces covalentes, y no se separan por dilisis.
Las enzimas conjugadas pueden requerir tanto cofactores como coenzimas.
1. Holoenzimas. Son las enzimas conjugadas que tiene actividad cataltica alta porque estn uni-
das a su coenzima o cofactor.
maov/mlvm/16
2. Apoenzima. Es la parte protenica de una enzima conjugada, cuando no se encuentra presente
el cofactor o coenzima necesarios. En estas condiciones la protena pierde parte o toda su acti-
vidad cataltica.
Basndose en lo anterior, se dice que la protena es la parte responsable de la especificidad de la
enzima mientras que la coenzima o cofactor son responsables de la catlisis. Esta es una simplifi-
cacin y debe interpretarse con cautela.
Muchas enzimas son protenas oligomricas y algunas de sus subunidades tiene funciones de re-
gulacin.
Varias enzimas tienen ms de una forma molecular capaz de catalizar la misma reaccin dentro
de un organismo, un tejido, e incluso una sola clula. A estas molculas se les llama Isoenzimas.
Las isoenzimas catalizan la misma reaccin pero tiene propiedades cinticas diferentes, composi-
cin de aminocidos distinta y se pueden separar por mtodos de purificacin. Un ejemplo cono-
cido es la Lactato Deshidrogenasa (LDH EC 1.1.1.27) que tiene cinco formas isoenzimticas,
todas con caractersticas cinticas diferentes. La distribucin de las isoenzimas en un organismo
es el reflejo de las diferencias que hay entre los distintos sitios en que se localiza, por ejemplo:
1. Patrones metablicos diferentes. Las diferencias entre las isoenzimas de LDH de msculo
cardiaco y estriado reflejan las diferencia metablicas entre ambos tejidos, el primero es esen-
cialmente aerbico mientras que el segundo es facultativo.
2. Localizacin y funcin diferente dentro de una misma clula. La enzima Malato Des-
hidrogenasa (EC 1.1.1.37) se encuentra en formas diferentes, en la mitocondria y en el cito-
plasma de las clulas, catalizando la misma reaccin pero en vas metablicas distintas.
3. Diferencias en desarrollo de los tejidos. La LDH del hgado muestra un patrn isoenzimtico
en el feto distinto al del adulto
4. Ajustes en la velocidad del metabolismo. Varias enzimas reguladoras existen en distintas
formas isoenzimticas que difieren en su respuesta a los moduladores, como la Glucocinasa
(EC 2.7.1.2) y la Hexocinasa (2.7.1.1).
El primer paso en la catlisis enzimtica es la unin del substrato a la enzima para formar el lla-
mado complejo Enzima-Substrato (ES). El substrato se une a la enzima en un lugar especfico
de esta llamado Sitio Activo. En la Figura 9 se muestra el sitio activo de enzima Fosfofructoci-
nasa (EC 2.7.1.11) ocupado por sus substratos, ATP y Fructosa 6 - fosfato.
El complejo ES, se ha estudiado en varias enzimas usando tcnicas como la microscopia electr-
nica, difraccin de rayos X, Resonancia Magntica Nuclear y varios mtodos espectroscpicos,
determinndose que las propiedades ms importantes del sitio activo son:
1. Constituye slo una pequea parte de toda la estructura de la enzima.
2. Es el sitio de reconocimiento y unin del substrato.
3. Contiene los restos de aminocidos que participan en las reacciones qumicas.
maov/mlvm/17
4. Tiene una forma tridimensional caracterstica, determinada por el arreglo de restos de amino-
cidos provenientes de diferentes secciones de la cadena de aminocidos, que se aproximan en-
tre s, debido a las estructuras 2, 3 y 4.
Figura 10. Modelo del Sitio Activo de Fosfofructocinasa
Los substratos se unen al sito activo mediante interacciones no covalentes como:
1. Enlaces electrostticos.
2. Puentes de hidrgeno.
3. Fuerzas de van der Waals.
4. Interacciones hidrfobas.
Ocasionalmente tambin se pueden formar enlaces covalentes de corta duracin.
Mecanismos de la Catlisis Enzimtica
La complementariedad de forma tridimensional entre la enzima y el substrato permite disminuir
la energa de activacin de la reaccin, mediante factores como:
1. La orientacin de los substratos en el sitio activo es la ms apropiada para la reaccin.
2. La participacin de las cadenas laterales de los aminocidos en el complejo ES, permite estabi-
lizar los estados de transicin.
3. La unin del substrato al sitio activo, aumenta la concentracin efectiva de los grupos reactivos
y facilita la reaccin.
4. Los cambios de conformacin de la enzima, provocados por la unin del substrato al sitio acti-
vo, inducen tensin en la molcula y facilitan el rompimiento de enlaces.
Existen dos modelos para explicar la unin de la enzima y el substrato y la catlisis enzimtica:
1. Modelo de la llave y la cerradura. Fue propuesto por Emil Fischer a finales del siglo XIX.
Considera que la enzima es una estructura rgida a la cual se debe ajustar el substrato.
maov/mlvm/18
Figura 11. Modelo de la llave y la cerradura
2. Modelo de ajuste inducido. Desarrollado por Daniel Koshland en la dcada de 1960. Supone
que la enzima es flexible, capaz de cambiar de forma cuando es inducida por la unin del subs-
trato apropiado, moviendo los grupos R hacia posiciones que facilitan la reaccin.
Figura 12. Modelo de ajuste inducido
Especificidad
La especificidad de las enzimas por sus substratos es variable, y se pueden describir tres tipos ge-
nerales:
Especificidad absoluta. Una enzima une slo un substrato, cataliza una sola transformacin y
forma un solo producto.
1. Aspartasa (EC 4.3.1.1). Esta enzima de plantas y bacterias cataliza la adicin del amoniaco al
cido fumrico para formar el aminocido l-Aspartato. La enzima es absolutamente especfica
para la geometra trans del cido fumrico y la isomera ptica del l-Aspartato.
C
C
C H
C H
O
O
O
O
C
C
CH
2
C
O O
O O
N H
3
+
H
+
NH
4
+
Amonio Fumarato l-Aspartato
Esquema 1. Reaccin de la Aspartasa
2. Aconitasa (EC 4.2.1.3). Enzima del ciclo de Krebs que interconvierte en forma reversible el
Citrato y el Isocitrato. La especificidad es absoluta para los dos cidos y de los cuatro ismeros
posibles del Isocitrato slo forma y utiliza el ismero 2R, 3S.
maov/mlvm/19
C H
2
C
CH
2
C
C
C
O H
O
O
O
O
O
O C H
2
C
C
C
C
C
H
O
O
O
O
O
O
H O H
Citrato 2R,3S-Isocitrato
Esquema 2. Reaccin de la Aconitasa
Especificidad de grupo. Una enzima puede catalizar la misma reaccin en un grupo de substra-
tos con estructura semejantes.
1. Las enzimas digestivas Tripsina y Quimotripsina (EC 3.4.21.1) miembros de la familia de las
proteasas con serina, catalizan el rompimiento de cualquier enlace peptdico e incluso ster,
siempre que el grupo carboxilo provenga de aminocidos especficos, aromticos en el caso de
la Quimotripsina y catinicos en el de Tripsina.
Esquema 3. Especificidad de Tripsina y Quimotripsina
2. Enzimas de la Oxidacin de cidos Grasos. Este grupo de enzimas mitocondriales, es capaz
de oxidar cidos grasos, sin importar la longitud de la cadena de carbonos
Esquema 4. Beta-oxidacin de cidos grasos
maov/mlvm/20
Especificidad de reaccin. Estas enzimas catalizan una reaccin en substratos que pueden tener
estructuras muy diferentes.
1. Las enzimas de destoxificacin de frmacos son especficas para reacciones de oxidorreduc-
cin, hidrlisis, conjugacin, etc., pero los substratos tienen estructuras muy variadas.
2. La Mono Amino Oxidasa (MAO EC 1.4.3.4), cataliza la desaminacin oxidativa de varios neu-
rotransmisores con estructura diferente.
+
NH
4
+
OH
O H
C H
C H
2
NH
3
+
OH
OH
O H
C H
C H O
OH
Norepinefrina 3,4-Bihidroxifenilglicolaldehido
Esquema 5. Ejemplo de reaccin catalizada por la MAO
Algunos autores interpretan la especificidad enzimtica de otra forma, diciendo que:
Todas las enzimas son especficas porque la ausencia de una no puede ser substituida por nin-
guna otra.
Medicin de la Actividad Enzimtica
La unidad de actividad enzimtica se define como la cantidad de enzima que causa la transforma-
cin de 1 micromol (1 mol = 10
-6
mol) de substrato por minuto, a 25 C, en condiciones ptimas
de actividad.
Actividad especfica. Es el nmero de las unidades de actividad de enzima por miligramo de
protena. La actividad especfica es una medida de pureza de la enzima, aumenta durante la puri-
ficacin y alcanza el valor mximo y constante cuando la enzima est pura.
Clasificacin y Nomenclatura
En 1878. Friedrich Wilhelm Khne us por primera vez el trmino Enzima, que significa en la
levadura, para referirse al agente causante de la fermentacin del azcar, y distingui dicho
agente del organismo que lo produce.
En 1883. Pierre mile Duclaux introdujo la convencin de nombrar las enzimas aadiendo el su-
fijo asa, al nombre del sustrato para el que se reporta por primera vez su accin.
1. Ureasa, cataliza la hidrlisis de Urea.
+
2H
2
O
NH
2
C
O
N H
2
Urea
NH
4
+
C O
O
O
NH
4
+
Esquema 6. Reaccin de la Ureasa
maov/mlvm/21
2. Arginasa (EC 3.5.3.1) hidroliza el aminocido Arginina.
COO-
CH
CH
2
CH
2
CH
2
N H
3
+
NH
C
N H NH
2
+
H
2
O
COO-
CH
CH
2
CH
2
CH
2
N H
3
+
NH
3
+
NH
2
C
O
N H
2
+
Arginina Ornitina Urea
Esquema 7. Reaccin de la Arginasa
Este esquema se modific empleando el nombre del substrato o producto, seguido del tipo de re-
accin con terminacin asa.
1. Glutamina Sintetasa (EC 6.3.1.2), cataliza la sntesis del aminocido Glutamina a partir del
cido Glutmico y amoniaco.
COO-
CH
CH
2
CH
2
CH
2
N H
3
+
COO-
+
COO-
CH
CH
2
CH
2
CH
2
N H
3
+
C NH
2
O
+ NH
4
+
+ ATP ADP + P
i
Glutamato Glutamina
Esquema 8. Reaccin de la Glutamina Sintetasa
2. La ya mencionada Lactato Deshidrogenasa, es la enzima que cataliza la oxido-reduccin rever-
sible del cido lctico en cido pirvico.
COO-
CH
CH
3
O H
+
COO-
C
CH
3
O
+ NAD
+
NADH
l-Lactato Piruvato
+ H
+
Esquema 9. Reaccin de la LDH
Otros nombres no se relacionaron con el substrato o reaccin, sino con la fuente de donde se ob-
tena la enzima.
1. Pepsina, es una enzima digestiva que hidroliza protenas y se obtiene del jugo pptico.
2. Papana, es otra proteasa que se obtiene de la cscara de papaya.
Estas prcticas dieron como resultado posibles confusiones porque:
1. Una misma enzima puede tener varios nombres; por ejemplo, Citrato Sintetasa, Enzima
Condensante y Citrogenasa, son nombres que se han aplicado a la enzima que cataliza la
formacin de cido Ctrico a partir de cido Oxalactico y Acetil-CoA en el ciclo de Krebs,
que hoy se conoce como Citrato Sintasa (EC 4.1.3.21).
maov/mlvm/22
2. Un mismo nombre se puede dar a enzimas diferentes; por ejemplo, las proteasas son enzimas
que catalizan hidrlisis de protenas pero existen varios tipos extra e intracelulares.
Clasificacin y Nomenclatura Digital
En 1972. La Comisin de Nomenclatura Enzimtica, rgano creado por la Unin Internacional de
Bioqumica, hoy Unin Internacional de Bioqumica y Biologa Molecular, propuso un esquema
de nomenclatura y clasificacin de las enzimas, basado en los mecanismos de reaccin que se
ilustran en la Tabla 3, acompaados de ejemplos de nombres recomendados para algunas enzi-
mas representativas de cada categora.
Tabla 3. Mecanismos de Reaccin de la Clasificacin Digital
N
o
CLASE MECANISMO GENERAL EJEMPLOS
1 Oxidorreductasas
R
red
+ S
ox
R
ox
+ S
red
- Malato Deshidrogenasa
- Fenilalanina Hidroxilasa
- Citocromo Oxidasa
2 Transferasas
R + S-G R-G + S
- Ornitina Transcarbamilasa
- Glucocinasa, Hexocinasa
3 Hidrolasas
R-S + HOH R-OH + H-S
- Glucosa-6-fosfatasa
- Arginasa
4 Liasas
C X X + C
R S
R-S
X = C, N, O
- Citrato Sintasa
- Enolasa
- Fructosa-1,6-bifosfato al-
dolasa
- Fumarasa
5 Isomerasas
R
1
R
2
- Glucosafosfato Isomerasa
- Fosfoglicerato Mutasa
6 Ligasas
R + S +NTP R S + NDP o NMP
N=A,G,C o U
- Carbamilfofato Sintetasa
- Piruvato Carboxilasa
- Acetil-CoA Carboxilasa
Este sistema se conoce como la Clasificacin Digital, porque cada enzima se identifica con un
conjunto de cuatro nmeros, separados con puntos. Antes de los nmeros se escriben las iniciales
EC, correspondientes a Comisin de Enzimas, que es el organismo encargado de elaborar y
mantener dicha clasificacin. La clasificacin se hace con base en el mecanismo de la reaccin
que cataliza cada enzima, en especial el del primer paso de la reaccin que es determinante de
cualquier reaccin posterior. Se reconocen seis tipos de mecanismos de reaccin, que se designan
con nmeros, los cuales se escribe como el primer nmero de la clasificacin de las enzimas; los
tipos de mecanismos son:
1. Oxidorreductasas. Catalizan reacciones de transferencia de electrones en las que un substrato
se oxida (pierde electrones) y otro se reduce (gana electrones) con frecuencia, uno de los subs-
tratos es una coenzima.
2. Transferasas. Mueven radicales qumicos entre dos molculas distintas al agua.
maov/mlvm/23
3. Hidrolasas. Catalizan la transferencia de radicales qumicos al agua, lo cual equivale al rom-
pimiento de enlaces con adicin de los elementos de una molcula de agua.
4. Liasas. Catalizan reacciones de eliminacin, formando dobles enlaces, o reacciones de adicin
a dobles enlaces.
5. Isomerasas. Forman ismeros, moviendo radicales qumicos dentro de una misma molcula,
provocando cambios estructurales o geomtricos.
6. Sntetasas o Ligasas. Forman enlaces C-C, C-S, C-O, C-N, acoplando la formacin, al rom-
pimiento de molculas de Adenosn Trifosfato (ATP), u otro nucletido de alta energa de
hidrlisis (XTP).
En cada clase principal existen subclases y sub-subclases, que se representan con el segundo y
tercer nmeros, y proporcionan informacin sobre los substratos, productos, coenzimas, tipos de
enlace que se modifican, y datos caractersticos de cada tipo de reaccin, como se muestra en la
Tabla 4.
Tabla 4. Informacin en las subclases de la clasificacin digital
No Clase Subclase Sub-subclase
1 Oxidorreductasas Grupo donador de electrones Grupo aceptor de electrones
2 Transferasas Grupo transferido Grupo donador y/o aceptor
3 Hidrolasas Tipo de enlace hidrolizado Tipo de substrato
4 Liasas tomos unidos por el enlace Tipo de substrato
5 Isomerasas Tipo de isomerizacin Tipo de substrato
6 Ligasas Tipo de enlace formado Tipo de compuesto formado
Por ltimo, se agrega un cuarto nmero secuencial que indica el orden en que se incluyen las en-
zimas en la clasificacin.
Junto con la clasificacin digital, la comisin de nomenclatura asigna a cada enzima un nombre
sistemtico, que describe la reaccin, separando con dos puntos los nombres de los participantes
y el tipo de reaccin (ver Tabla 5). Estos nombres resultan engorrosos por ello, tambin se asigna
un nombre comn permitido, frecuentemente el ms usado antes de la clasificacin.
Como ejemplo de la nomenclatura digital, en el Esquema 10 se presenta la reaccin de transfe-
rencia de un grupo fosfato entre el ATP y la D-Glucosa.
O
O H
OH
OH
OH
CH
2
11
OH
O
O H
OH
OH
OH
C H
2
27
O P O
O
O
+ ATP + ADP
Glucosa Glucosa-6-fosfato
Esquema 10. Reaccin de fosforilacin de Glucosa
A una de las enzimas que cataliza esta reaccin, le corresponde el nmero de clasificacin EC
2.7.1.1, que significa:
maov/mlvm/24
2 = Clase principal = Transferasa
7 = Subclase = Grupo transferido = Fosfato proveniente de ATP
1 = Sub-subclase = Aceptor = el aceptor es un radical hidroxilo
1 = Numero secuencial de la enzima particular dentro de esta categora.
El nombre oficial asignado a la enzima es ATP : Glucosa : Fosfato Transferasa, y su nombre
comn recomendado es Hexocinasa.
Tabla 5. Estructura de los Nombres Sistemticos y Recomendados
No Clase Sistemtico Recomendado
1 Oxidorreductasas Donador : Aceptor Oxidorreduc-
tasa
Donador Deshidrogenasa
Aceptor Reductasa
Donador Oxidasa (si O
2
es el Acep-
tor)
2 Transferasas Donador : Aceptor Grupo Trans-
ferasa
Aceptor Grupo Transferasa
Donador Grupo Transferasa
3 Hidrolasas Sustrato : Molcula Liberada
Hidrolasa
Sustrato Hidrolasa
Sustratoasa
4 Liasas Sustrato : Grupo Liberado Liasa Sustrato Grupo Liberadoasa
Producto Sintasa (reaccin de con-
densacin)
5 Isomerasas Sustrato : Tipo de isomerizacin
Isomerasa
Sustrato Isomerasa
Sustrato Tipo de Isomerizacinasa
6 Ligasas Sustrato 1 : Sustrato 2 Ligasa
(Nucletido)
Molcula Formada Sintetasa
Cintica Enzimtica
La cintica enzimtica estudia el mecanismo, velocidad y los factores que modifican las reaccio-
nes catalizadas por enzimas. Los factores que estudiaremos son la concentracin de substrato,
temperatura, pH, concentracin de enzima, e inhibidores enzimticos.
Concentracin de Substrato
La concentracin del substrato tiene un efecto importante en la velocidad de las reacciones enzi-
mticas. El anlisis del efecto del cambio de concentracin de substrato, proporciona informacin
respecto del mecanismo de reaccin, especificidad y propiedades cinticas de las enzimas.
En 1902, al estudiar la cintica de la hidrlisis de Sacarosa, Adrian Brown descubre la saturacin
de la enzima Invertasa (EC 3.2.1.26) y propone que la reaccin se efecta en dos etapas, primero
la enzima (E) y el sustrato (S), se unen para formar un complejo (ES):
ES S E +
Que se disocia liberando el producto (P):
P E ES +
Despus, en 1903, Vctor Henri estudia el equilibrio de la formacin del complejo enzima-
substrato y propone una expresin cuantitativa entre la concentracin de sustrato y actividad en-
maov/mlvm/25
zimtica. En 1913, Leonor Michaelis y Maude L. Menten corrigieron el trabajo de Brown y Hen-
ri. Aplican condiciones estrictas para la medicin de la actividad enzimtica, y suponen que la
formacin del complejo ES, es rpida y reversible, mientras que la liberacin del producto es len-
ta.
P E ES S E + +
Lenta Rpida
Con base en este supuesto, proponen el modelo del Equilibrio Instantneo para determinar la
relacin entre la concentracin de substrato y la velocidad de las reacciones enzimticas. y obtie-
nen una relacin matemtica que describe dicho efecto, la cual se conoce como la ecuacin de
Michaelis y Menten:
| |
| | S
S
+
=
M
MAX
K
V
v
donde:
v = velocidad de la reaccin
[S] = Concentracin de substrato
V
MAX
= Mxima actividad enzimtica
K
M
= Constante de Michaelis
Figura 13. Leonor Michaelis (izquierda) y Maud Leonora Menten (derecha)
Como se muestra en la Figura 14, la ecuacin de Mi-
chaelis y Menten es una hiprbola; para valores peque-
os de [S] la cantidad del substrato limita la velocidad;
mientras que con valores grandes el lmite es la canti-
dad de enzima.
Las condiciones de equilibrio instantneo, propuestas
por Michaelis y Menten consisten en suponer que E y S
reaccionan muy rpidamente para formar ES mientras
que la disociacin del complejo hacia producto es rela-
tivamente lenta porque k
2
es muy pequea. Por lo tanto,
el complejo ES se encuentra en equilibrio con E y S. En
estas condiciones, K
M
es igual a la constante de equili-
brio de la disociacin del complejo ES:
Figura 14. Cintica de Michaelis
maov/mlvm/26
1
1
M
K
k
k
=
Ya que k
2
es pequea, a menudo es el factor que limita la velocidad y por ello se conoce como la
constante cataltica (k
cat
) de la enzima.
Aos despus, en 1925 George E. Briggs y John B. S. Haldane corrigieron el trabajo de Micha-
leis al establecer que la suposicin de que k
1
y k
-1
son mucho mayores que k
2
no siempre se cum-
ple, por lo tanto no se alcanza el equilibrio de la disociacin de ES. En su lugar proponen que la
concentracin de ES se encuentra en un Estado Estacionario (Figura 14) en el que la velocidad
de formacin de ES, es igual a la de descomposicin por disociacin y por formacin de produc-
to. Con esta suposicin la ecuacin no cambia de forma pero K
M
ya no es igual a la constante de
disociacin de ES, ahora es:
1
2 1
M
K
k
k k +
=

Figura 15. Variacin de la concentracin de E, S y ES, durante una reaccin enzimtica
Significado de V
MAX
Es la mxima actividad que puede alcanzar una enzima, tericamente se logra en condiciones de
[S] grande, porque entonces la enzima se satura y trabaja tan rpido como es posible. En la prc-
tica es imposible que la enzima alcance el valor de V
MAX
, debido a limitaciones de difusin de
productos y sustratos, desde y hacia el sitio activo.
Significado y Propiedades de K
M
Si la suposicin de Michaelis y Menten es valida, K
M
es la constante de disociacin de ES a E +
S, igual a k
-1
/k
1
. Por lo tanto, es una medida de la afinidad de la enzima por su substrato. Si K
M
es
grande significa que k
-1
es grande o que k
1
es pequea por lo que la reaccin inversa es mas favo-
recida que la reaccin directa y con ello la afinidad de la enzima por su substrato es baja. Por el
contrario, si K
M
es pequea, la afinidad de la enzima por el substrato es grande.
Por otro lado, segn Briggs y Haldane, K
M
representa el cociente (k
-1
+k
2
)/k
1
, este cociente sigue
siendo la constante de disociacin de ES, pero ahora tanto hacia S como hacia P, porque se supo-
ne que k
2
contribuye en forma significativa a la desaparicin de ES. De cualquier manera, valores
de K
M
grandes representan baja afinidad por el substrato y valores pequeos afinidad alta.
maov/mlvm/27
El valor de K
M
tambin corresponde a la concentracin de S en la cual v = V
MAX
/2, que se inter-
preta como la concentracin a la cual la enzima est saturada slo a la mitad.
Cuando ms de una enzima catalizan una reaccin, o si no estamos seguros de cual es el substrato
verdadero de una enzima, los valores de K
M
indican la relacin ms apropiada.
1. Tpicamente, si la enzima trabaja con varios substratos podra suponerse que el substrato con el
K
M
ms bajo es el substrato verdadero.
2. Para decidir qu enzima es la importante necesitamos saber la concentracin del substrato y el
valor de K
M
.
Segn las condiciones de [S], el orden de la reaccin es diferente.
1. Cuando [S] es pequea, esto es:
| | S >>
M
K
entonces:
| |
M M
K K ~ + S
y substituyendo en la ecuacin de Michaelis y Menten:
| |
M
MAX
K
V S
= v
Como V
MAX
y K
M
son constantes, su cociente tambin lo es (k) y se puede considerar que:
| | S ' v k =
Que corresponde a la ecuacin de una reaccin de primer orden.
2. Cuando [S] es grande:
| |
M
K >> S
se obtiene;
| | | | S S ~ +
M
K
y al sustituir en la ecuacin de Michaelis y Menten:
| |
| | S
S
MAX
V
~ v
que se simplifica a:
MAX
V = v
La reaccin es orden cero; la velocidad es constante e independiente de [S]
3. Por ultimo, cuando la concentracin es intermedia:
| | S =
M
K
entonces:
maov/mlvm/28
| | | |
M M
K K 2 2 S S ~ +
que en la substitucin queda:
| |
| | S
S
2
MAX
V
~ v
y finalmente:
2
MAX
V
~ v
Por lo general, los valores de K
M
y V
MAX
determinan usando la transformacin propuesta por
Hans Lineweaver y Dean Burk, que consiste en obtener la inversa de la ecuacin de Michaelis y
Menten, con lo cual la ecuacin de la hiprbola se convierte en la ecuacin de una lnea recta.
| |
|
|
.
|
\
|
+ =
S
1
V
K
V
1 1
MAX
M
MAX
v
Figura 16. Hans Lineweaver (izquierda) y Dean Burk (derecha)
En una grfica de 1/v en funcin de 1/[S], se pueden calcular los parmetros cinticos extrapo-
lando hasta la intercepcin en el eje de x = -1/K
M
y el eje de y = 1/V
MAX
.
Figura 17. Grfica de Lineweaver-Burk
Otro parmetro importante es el nmero de recambio o constante cataltica de la enzima (k
cat
),
que se define como el nmero de moles de substrato transformados por mol de enzima por se-
gundo. La k
cat
se puede determinar midiendo la velocidad a diferentes concentraciones de enzima,
en condiciones de saturacin.
maov/mlvm/29
Eficiencia de la catlisis enzimtica.
En condiciones fisiolgicas, la mayora de las enzimas no estn saturadas con sustrato, el cocien-
te [S]/K
M
est entre 0.01 y 1.0. Cuando [S] < K
M
, la actividad enzimtica es menor que k
2
porque
la mayora de los sitios activos estn vacos; la concentracin de la enzima libre [E] es casi igual
a la concentracin total de la enzima [E]
T
y la velocidad de la enzima depende del valor de k
cat
/K
M
y de [S].
Como ya vimos antes, s [S] << K
M
entonces:
| |
M
MAX
K
V S
= v
y como V
MAX
= k
cat
[E]
T
:
| | | |
M
T cat
K
S E k
= v
que se convierte en:
| | | | S E
T
M
cat
K
k
= v
El cociente k
cat
/ K
M
se utiliza a menudo para comparar eficacia de las enzimas porque:
1. Mientras ms bajo es el valor de K
M
, la afinidad de la enzima por el sustrato es mayor y ms
alto es el valor de k
cat
/ K
M
.
2. Un valor grande de k
cat
indica que la velocidad de reaccin es alta y que el valor del cociente es
grande.
Por lo tanto, el valor de k
cat
/K
M
proporciona una estimacin tanto de la eficacia como de la selec-
tividad de una enzima.
El lmite del valor de k
cat
/K
M
est determinado por k
1
, la constante de velocidad de la formacin
del complejo ES. Esta velocidad no puede ser mayor que la velocidad con que se encuentran por
difusin una enzima y su substrato y por lo tanto, la velocidad de la catlisis est restringida so-
lamente por la velocidad a la cual la enzima encuentra el substrato en la solucin. El valor de co-
ciente k
cat
/K
M
est entre 10
8
y 10
9
M
-1
s
-1
.
Tabla 6. Velocidad y K
M
de algunas Enzimas
ENZIMA k
cat
(s
-1
) K
M
(M) k
cat
/ K
M
Quimotripsina 0.14 1.5 x 10
-2
9.3
Anhidrasa Carbnica 4 x 10
5
2.6 x 10
-2
1.5 x 10
7
Fumarasa 8 x 10
2
5 x 10
-6
1.6 x 10
8
El lmite impuesto por el ndice de la difusin en la solucin puede ser superado en parte, confi-
nando los substratos y los productos en el volumen limitado de un Complejo Multienzimtico.
El Tiempo de Recambio es la inversa de k
cat
, y corresponde al tiempo que tarda la enzima en
transformar una molcula de substrato.
maov/mlvm/30
Temperatura
Igual que ocurre en las reacciones qumicas, al aumentar la temperatura aumenta la velocidad de
las reacciones catalizadas por enzimas. Esto se debe a que un mayor nmero de molculas alcan-
zan la energa cintica necesaria para superar la energa de activacin de la reaccin. Sin embar-
go, el aumento de temperatura tambin disminuye la estabilidad de la estructura de las protenas y
las enzimas comienzan a desnaturalizarse, de modo que a medida que aumente la temperatura la
actividad enzimtica tiende a bajar. Como consecuencia de estos efectos opuestos del aumento de
temperatura, existe una Temperatura ptima en la cual la actividad enzimtica tiene un mxi-
mo. Es de suponer que a la temperatura normal de los organismos las enzimas sean estables, y
por lo tanto estn por debajo de su temperatura ptima.
Figura 18. Efecto de la temperatura sobre la actividad enzimtica
La mayora de enzimas se desnaturalizan rpidamente a 100 C y pierden mucha de su actividad
al ser expuestas a temperaturas superiores a 60 C, an por perodos de tiempo cortos. La particu-
laridad de algunas enzimas, por ejemplo, la Adenilato Cinasa (EC 2.7.4.3) y la Ribonucleasa de
resistir la ebullicin, facilita enormemente su purificacin ya que el resto de enzimas pueden ser
destruidas por un tratamiento preliminar con calor.
Una resistencia excepcional al calor se observa en las enzimas de bacterias que viven en aguas
termales, a temperaturas de 60 a 80 C, como Thermophilus aquaticus, bacteria de la cual se ex-
trajo la enzima Polimerasa de DNA (EC 2.7.7.7) que se us para desarrollar la Reaccin en Ca-
dena de la Polimerasa (PCR) de gran importancia en la biologa molecular actual. Quiz ms
sorprendente sea el caso de algunas enzimas que pueden ser desnaturalizadas in vitro por una ca-
da de la temperatura. Esto se explica suponiendo que a la energa libre de formacin de los enla-
ces que determinan la conformacin de estas enzimas, proviene al menos en parte, de la entropa
del medio, la cual disminuye al disminuir la temperatura.
La importancia para los animales homeotermos de mantener su temperatura corporal constante
alrededor de 310 K (37 C) radica en que s la temperatura del organismo varia con la del am-
biente y esta disminuye a 10 C (283 K) la velocidad del metabolismo disminuye en un factor de
6, respecto de la de 37 C y esto es una desventaja para la supervivencia.
maov/mlvm/31
Para fines prcticos, una expresin conveniente de la relacin entre la velocidad de reaccin y la
temperatura es el llamado Q
10
, que corresponde al valor del cociente entre la velocidad de la re-
accin a dos temperaturas separada por 10 C
C
C 10) (
10
Q
+
=
T
T
v
v
Los Q
10
de las reacciones catalizadas por enzimas estn comprendidos dentro de un margen es-
trecho, entre 1.5 y 2.5, mientras que los de las reacciones no enzimticas estn entre 2.0 y 4.0. El
valor de Q
10
de una reaccin enzimtica es importante cuando la actividad de la enzima se mide a
temperaturas diferentes de la fisiolgica.
pH
El pH del medio afecta la actividad de las enzimas, porque muchos de los aminocidos tiene res-
tos ionizables. Los cambios de pH modifican el grado de ionizacin de todos o alguno de estos
grupos, lo que repercute en la ionizacin total de la molcula de enzima modificando la actividad
de la enzima al menos por tres mecanismos.
1. Los pH extremos, por debajo de 4.0, o por arriba de 10.0, cambian el grado de ionizacin de
casi todos los restos de aminocidos de la enzima, de forma que puede alterarse su estructura
tridimensional. Si este cambio es suficientemente grande, se desnaturaliza la enzima y se pier-
de su actividad de forma irreversible. Incluso, la disminucin del pH, que se presenta en las
muestras de fluidos corporales o de tejidos por dao o muerte celular, puede ocasionar la des-
naturalizacin de las enzimas.
2. Las variaciones de pH ms pequeas, entre 4 y 10, afectan a un nmero menor de grupos ioni-
zables, pero si stos estn presentes en el sitio activo, la actividad enzimtica cambia en forma
importante. Sin embargo, este cambio normalmente es reversible.
3. La variacin del pH tambin puede alterar la ionizacin del substrato, y modificar la unin en-
zima substrato.
Para muchas enzimas, el efecto del pH tiene forma de campana con un valor de pH ptimo bien
definido, pero para otras, la forma de la curva es muy diferente; por ejemplo, cuando en la inter-
accin enzima substrato participan muchos grupos ionizables. Los puntos de inflexin de la curva
pH/actividad corresponderan a los pK de los grupos responsables de la dependencia frente al pH.
Este tipo de informacin se ha utilizado para identificar de los aminocidos del sitio activo.
Figura 19. Efecto del pH sobre la actividad enzimtica
maov/mlvm/32
Algunas enzimas estn adaptadas para funcionar al pH propio de su ambiente. Por ejemplo, la
Pepsina tiene un pH ptimo de 2.0, que corresponde aproximadamente al pH del jugo gstrico.
Por otro lado, el pH ptimo de ciertas enzimas intracelulares est muy alejado del pH intracelu-
lar; por ejemplo, la Glicerato cinasa (EC 2.7.1.31) tiene un pH ptimo de 9.8, y la Fosfoglicera-
to mutasa (EC 5.4.2.1) de 5.9. Esto puede deberse a que las enzimas manifiestan propiedades di-
ferentes in vitro e in vivo, donde la interaccin con los componentes celulares pueda modificar su
dependencia del pH.
Concentracin de Enzima
Como se explico antes, la velocidad de la actividad enzimtica, depende de la constante cataltica
y la concentracin del complejo enzima substrato.
| | S E
cat
k = v
S la enzima se encuentra en condiciones de [S] constante, o de saturacin, su actividad depende
solamente de la concentracin de enzima con una cintica de orden 1 esto es, al aumentar la con-
centracin de enzima la actividad enzimtica aumenta en la misma proporcin. Este efecto tiene
relevancia biolgica en los procesos de induccin enzimtica, cuando la actividad de una enzima
que no exista o estaba a un nivel muy bajo, aumenta por la sntesis de la misma, provocada por la
acumulacin de su sustrato
Inhibicin Enzimtica
Los inhibidores enzimticos son molculas que se unen a las enzimas y disminuyen su actividad.
Las clulas emplean como inhibidores molculas de intermediarios metablicos o iones, para
controlar la actividad enzimtica como parte de la regulacin del metabolismo. En investigacin
se usan inhibidores para estudiar las propiedades de las enzimas. Muchos inhibidores enzimticos
son usados como medicamentos, venenos, pesticidas, etc. Existen dos tipos generales de inhibi-
dores enzimticos: Reversibles e Irreversibles.
Los inhibidores irreversibles se combinan o destruyen un grupo funcional de la enzima, necesa-
rio para la actividad cataltica. Los inhibidores irreversibles se disocian muy lentamente de la en-
zima porque se unen con fuerza, ya sea en forma covalente, la mayora, o no covalente, por tal
motivo se dice que no se pueden eliminar mediante dilisis. Ejemplos de inhibidores irreversibles
son:
1. Diisopropilfluorofosfato (DIFP). Inhibidor de la enzima Acetilcolina esterasa (EC 3.1.1.7)
que cataliza la hidrlisis del neurotransmisor acetilcolina. Esta reaccin es necesaria para la co-
rrecta transmisin nerviosa. Se usa en pesticidas como el Malatin. El DIFP se une especfica-
mente a un residuo de Serina en el sitio activo de la enzima.
C H O P
C H
3
C H
3
O CH
CH
3
CH
3
F
O
Ser
CH
2
OH
Ser
CH
2
O
C H O P
C H
3
C H
3
O CH
CH
3
CH
3
F
O
H
+
F
Ser
CH
2
O
C H O P
C H
3
C H
3
O CH
CH
3
CH
3
O
Esquema 11. Reaccin del DIFP
maov/mlvm/33
2. La yodo-acetamida es un inhibidor irreversible que reacciona especficamente con los grupos
sulfhidrilo de la Cisteina.
I CH
2
C NH
2
O
Esquema 12. Yodacetamida
3. El Cianuro(1-) interfiere con el transporte de electrones en el grupo Hemo de los citocromos.
4. Los iones Mercurio(II) y Plomo(II) inhiben las enzimas que tienen grupos tiol (-SH), en su si-
tio activo, unindose a ellos.
Por su parte, los inhibidores reversibles se unen a las enzimas con menos fuerza, casi siempre en
forma no covalente, de modo que se disocian rpidamente y se pueden eliminar por dilisis. No
modifican la estructura de los grupos funcionales de las enzimas y cuando se disocian, la enzima
recupera su actividad. Los inhibidores reversibles se clasifican segn su efecto cintico en tres
clases: Competitivos, No Competitivos e Incompetitivos.
1. Inhibidores Competitivos
a. Por lo general son anlogos del substrato. Su estructura tridimensional es semejante a la del
substrato natural.
b. Compiten con el substrato por el sitio activo. La enzima puede unir al substrato o al inhibi-
dor pero no ambos simultneamente, la unin de uno inhibe la unin del otro.
Figura 20. Unin de Inhibidores competitivos
c. El inhibidor unido a la enzima no es transformado, slo ocupa el sitio activo y evita la for-
macin del complejo ES, disminuyendo la proporcin de molculas de enzima que pueden
formar producto.
Esquema 13. Mecanismo de accin de los Inhibidores competitivos
maov/mlvm/34
d. La velocidad mxima de la enzima no cambia porque el efecto del inhibidor se puede rever-
tir, aumentando la concentracin de substrato; por eso se dice que la inhibicin competitiva
es remontable.
(A) (B)
Figura 21. Grficas de Michaelis-Mente (A) y Lineweaver-Burk (B) del efecto cintico de los In-
hibidores competitivos
e. La K
M
aumenta por un factor igual a (1+[I]/Ki) siendo [I] la concentracin del inhibidor y Ki
la constante de afinidad del inhibidor por la enzima.
2. Inhibidores No Competitivos
a. Su estructura tridimensional no necesita estar relacionada con la del substrato.
b. No compiten con el substrato, se une a la enzima en un sitio distinto del sitio activo. La en-
zima puede unir al substrato y al inhibidor simultneamente. Pueden formar complejos tanto
con la enzima libre como el complejo ES.
Figura 22. Unin de Inhibidores No competitivos
c. Al unirse a la enzima cambian la conformacin de esta, evitando que transforme el substrato
en producto.
d. Disminuyen el nmero de recambio de la enzima y la inhibicin no puede ser remontada con
concentraciones altas de substrato por lo que la V
MAX
disminuye en un factor igual a
(1+[I]/Ki).
maov/mlvm/35
Esquema 14. Mecanismo de accin los Inhibidores No Competitivos
e. La enzima que no est unida al inhibidor no cambia y por ello K
M
permanece constante.
(A) (B)
Figura 23. Grficas de Michaelis-Menten (A) y Lineweaver-Burk (B) del efecto cintico de los
inhibidores No competitivos
3. Inhibidores Incompetitivos o Acompetitivos
a. No tienen relacin estructural con el substrato.
b. Son incapaces de unirse a la enzima libre, primero se debe formar el complejo ES para que
la enzima adquiera una conformacin a la cual se une el inhibidor.
Figura 24. Unin de Inhibidores incompetitivos
c. La unin del inhibidor impide que la enzima adquiera la conformacin necesaria para trans-
formar el substrato en producto.
d. No se puede remontar la inhibicin porque la presencia de mayor cantidad de substrato favo-
rece la unin del inhibidor, y por ello V
MAX
disminuye en un factor igual a (1+[I]/Ki).
maov/mlvm/36
Esquema 15. Mecanismo de accin de los Inhibidores Incompetitivos
e. La interaccin del inhibidor con el complejo ES desplaza el equilibrio hacia la formacin del
complejo ES, por lo que K
M
tambin diminuye en un factor igual a (1+[I]/Ki).
(A) (B)
Figura 25. Grficas de Michaelis-Menten (A) y Lineweaver-Burk (B) del efecto cintico de los
Inhibidores incompetitivos
Las caractersticas de los inhibidores enzimticos reversibles se resumen en la Tabla 7.
Tabla 7. Propiedades de los Inhibidores Reversibles
Tipo de Inhibidor Mecanismo de accin K
M
V
MAX
Ecuacin
Competitivo Se unen slo a la enzima libre Aumenta No cambia
| |
| |
| | S
K
I
K
S V
v
i
M
MAX
+
|
|
.
|
\
|
+
=
1
No Competitivo
Se unen a al enzima libre y al
complejo enzima-sustrato
No cambia Disminuye
| |
| | ( )
| |
|
|
.
|
\
|
+ +
=
i
M
MAX
K
I
S K
S V
v
1
Incompetitivo
Se unen slo al complejo enzima
sustrato
Disminuye Disminuye
| |
| |
| |
|
|
.
|
\
|
+ +
=
i
M
MAX
K
I
S K
S V
v
1
Regulacin de la Actividad Enzimtica
Existen varios niveles de control de la actividad de las enzimas, los tres ms importantes para no-
sotros son:
1. Regulando la concentracin de enzima. La actividad de cualquier enzima es proporcional a
la cantidad que existe de ella.
maov/mlvm/37
2. Modificando la estructura covalente de la enzima. Diferentes formas de regulacin de la ac-
tividad enzimtica implican la formacin y el rompimiento de enlaces covalentes.
3. Alterando la forma de las enzimas. Como cualquier otra macromolcula, la funcin de las
enzimas depende de su forma tridimensional, modificaciones de esta alteran la actividad.
Regulacin de la Concentracin de Enzimas. La actividad de algunas enzimas se encuentra
presente durante toda la vida de la clula, an en momentos en los que no se usan. Este tipo de
enzimas se llama constitutivas. En contraste, existe otro grupo de enzimas que slo se sintetiza
cuando se van a usar, son las llamadas enzimas inducibles. Ejemplos de enzimas constitutivas
son las de Gliclisis, sntesis de protenas, metabolismo de cidos grasos, etc. Todas estas enzi-
mas son de gran importancia en el metabolismo energtico y de sntesis en las clulas. Entre las
enzimas inducibles se encuentran las que se encargan de la destoxificacin de frmacos, las en-
zimas de sntesis de colesterol y algunas encargadas de otras vas especiales y especficas de al-
gunos tipos celulares.
La regulacin de la concentracin de enzimas se lleva a cabo a travs del control de la sntesis de
protena, mediante el mecanismo conocido como Opern. El opern es la unidad de regulacin
de la expresin de la informacin gentica, y su funcionamiento detallado se discutir al estudiar
las funciones de los cidos nucleicos. En este momento, basta decir que cuando hace falta el pro-
ducto de una va metablica o se acumula el substrato de una enzima, se induce la sntesis de las
enzimas de la va respectiva. Por otro lado, cuando se acumula el producto de una va metablica,
o se adquiere del exterior, se reprime la sntesis de una o ms de las enzimas de la va. Esta for-
ma de regular la actividad de las enzimas tiene la caracterstica principal de ser econmica pues
las enzimas slo se sintetizan cuando se necesita su actividad. Por otro lado, tiene la desventaja
de ser lenta en respuesta porque es necesario que se sintetice la enzima, y adems irreversible,
una vez sintetizada la enzima su actividad no se detiene hasta que se degrada.
Modificaciones covalentes. Esta forma de regulacin se lleva a cabo mediante el rompimiento
y/o formacin de enlaces covalentes. Existen dos tipos bsicos.
1. Activacin de zimgenos o proenzimas. Los zimgenos o proenzimas son molculas de pro-
tena sin actividad cataltica que se sintetizan, se guardan y se convierten en enzimas activas por
hidrlisis de una parte de su estructura, cuando se necesita su actividad.
Por ejemplo, la Tripsina una proteasa de la digestin, se sintetiza en el Pncreas en forma de
Tripsingeno el cual se libera al intestino delgado donde es convertido en Tripsina por accin de
la enzima Enteropeptidasa (EC 3.4.21.9), que elimina seis aminocidos del extremo carboxilo
de la cadena peptdica. Todas las enzimas digestivas del Pncreas (Tripsina, Quimotripsina,
Elastasa (EC 3.4.21.36), Carboxipeptidasa (EC 3.4.16.5)), se regulan de esta forma.
Este mecanismo de regulacin tiene la ventaja de que la respuesta es ms rpida que en la regu-
lacin de la sntesis, pero es menos econmica porque se debe sintetizar la enzima, aunque no se
use, adems, sigue siendo irreversible.
2. Regulacin por Fosforilacin - Desfosforilacin. La adicin de fosfatos a la estructura de al-
gunas enzimas puede aumentar o disminuir su actividad. S la enzima desfosforilada es activa, la
fosforilacin la inhibe. Por el contrario, s la enzima sin fosfato no tiene actividad, la fosforila-
cin la activa. La eliminacin del fosfato devuelve la enzima a su estado de actividad inicial.
maov/mlvm/38
La fosforilacin de las protenas est a cargo de las
enzimas llamadas Proten Cinasas (EC 2.7.1.n) y
la desfosforilacin depende de las Proten Fosfata-
sas (EC 3.1.3.16). Ambos tipos de enzimas tambin
se pueden regular. Las proten cinasas se agrupan
en familias, segn el resto de aminocido al que
unen el fosfato, como proten cinasas de Tirosina,
Treonina o Serina.
Un buen ejemplo de este tipo de regulacin se en-
cuentra en las enzimas del metabolismo del Gluc-
geno. La sntesis de Glucgeno depende de la enzima Glucgeno Sintasa (EC 2.4.1.11), que sin
fosfato es activa y cuando es fosforilada disminuye su actividad. Por su parte, la Glucgeno Fos-
forilasa (EC 2.4.1.1) que degrada el Glucgeno, es inactiva cuando no tiene fosfato y se activa
por fosforilacin, de esta forma las dos vas no pueden funcionar simultneamente; los estmulos
que favorecen la fosforilacin de las enzimas, estimulan la degradacin y detienen la sntesis,
mientras que la desfosforilacin activa la sntesis y detiene la degradacin.
Con frecuencia los estmulos externos, como neurotransmisores y hormonas, provocan cambios
dentro de la clula activando las proten cinasas.
La regulacin por Fosforilacin - Desforforilacin, es costosa en cuanto a energa porque los fos-
fatos que se usan para fosforilar las protenas provienen de ATP y la energa se pierde al desfos-
forilarlas, pero es de respuesta muy rpida, por la intervencin de enzimas, adems, es reversible.
Por ltimo, la misma intervencin de enzimas en este tipo de regulacin, le da la capacidad de
amplificar seales, pues una sola proten cinasa activa es capaz de transformar muchas protenas.
Modificacin de la Conformacin. La actividad
de las enzimas depende de su forma tridimensional,
por lo tanto, la modificacin de dicha forma provo-
car cambios en la actividad de la enzima; esta es la
base de la regulacin alostrica. Todas las prote-
nas se encuentran en constante cambio de forma
tridimensional. En una enzima, una de esas con-
formaciones, llamada forma tensa, puede tener po-
ca afinidad por el substrato y por lo tanto poca acti-
vidad mientras que otra conformacin, la llamada
forma relajada, tiene gran afinidad por el substrato y gran actividad.
Alguna molcula, puede unirse a la enzima y estabilizar la forma relajada, activando la enzima;
en cambio, otra molcula puede unirse y estabilizar la forma tensa, inhibiendo la enzima. Las mo-
lculas que se unen a la enzima y modifican su actividad se llaman moduladores alostricos.
Los activadores se denominan moduladores positivo y los inhibidores, moduladores negati-
vos. Con frecuencia los moduladores negativos son los productos finales de una va sinttica,
mientras que los positivos son intermediarios o el propio substrato de la enzima. Tambin es fre-
cuente que intermediarios metablicos importantes sirvan como moduladores alostricos, como el
ATP que activa las vas que usan energa e inhibe las que la producen.
Figura 26 Regulacin por fosforilacin y
desfosforilacin
Figura 27 Regulacin por cambio de con-
formacin
maov/mlvm/39
Los moduladores se unen a la enzima en sitios reguladores, diferentes del sitio activo, de ah el
nombre de alostricos, y su unin por lo general no es covalente. Las enzimas alostricas son oli-
gomricas, tienen estructura cuaternaria.
Las enzimas alostricas tienen cintica sigmoidal, diferente a la cintica hiperblica clsica (Fi-
gura 27.A). La unin de activadores alostricos, desplaza la curva hacia una forma ms hiperb-
lica, mientras que los inhibidores la hacen ms sigmoidal (Figura 27.B). En las enzimas alostri-
cas la afinidad por el substrato se mide como la K
0.5
, que es la concentracin a la cual se satura el
50% de la enzima. Al igual que K
M
, la K
0.5
, es inversamente proporcional a la afinidad de la en-
zima por su substrato. Los activadores aumentan la afinidad y disminuyen la K
0.5
, los inhibidores
disminuyen la afinidad y aumentan la constante.
(A) (B)
Figura 28. (A) Cintica sigmoidal de enzimas alostricas. (B) Efecto de moduladores alostricos
La actividad de algunas enzimas alostricas tambin es controlada por protenas reguladoras co-
mo la Calmodulina. Esta familia protenas cambian su conformacin en respuesta a la variacin
del nivel intracelular de Calcio y se unen a muchas protenas, entre ellas varias enzimas, modifi-
cando su actividad a travs de interacciones alostricas. Muchas enzimas pueden ser reguladas
mediante ms de un mecanismo, por ejemplo, algunas enzimas alostricas al ser fosforiladas
pierden la capacidad de responder a los moduladores de actividad, inhibidores, activadores o am-
bos.
Aspectos de Inters Mdico
El estudio de las propiedades de las enzimas es de importancia en Medicina por mltiples razo-
nes. Primero, son la clave para entender los estados de salud y enfermedad porque determinan el
balance y control metablico. Muchas enfermedades son provocadas por defectos en la actividad
de las enzimas, ya sea por su ausencia o por deficiencias en su actividad o regulacin. Algunos
ejemplos de estos desordenes incluyen los que se muestran en la Tabla 8.
Para remediar estas enfermedades se han intentado varias estrategias para reemplazar la enzima
defectuosa. Una de las ms exitosas es el uso de enzimas encapsuladas. La terapia gnica es una
promesa para el tratamiento de este tipo de desordenes pero an se encuentra en etapa experimen-
tal y no es posible aplicarla en forma rutinaria.
Un aspecto interesante de la terapia gnica relacionado con las enzimas, es el uso de ribozimas
con el fin de corregir las molculas de RNA mensajero defectuosas. En experimentos realizados
maov/mlvm/40
recientemente, se emple una ribozima para corregir el RNA mensajero de la Hemoglobina S, y
permitir la sntesis de Hemoglobina A, normal. Esta estrategia podra convertirse en una nueva
arma en la terapia enzimtica de los desordenes genticos.
Tabla 8. Enfermedades provocadas por defectos en la actividad de enzimas
Enzima Desorden
Hidoximetilglutaril-CoA Reductasa Hipercolesterlemia congenita, cuando no responde a la
regulacin normal
Galactosa Cinasa Cataratas en la Infancia por falta de la enzima
Galactosa-1-fosfato Uridil Transferasa Su ausencia es la causa de la Galactosemia.
UDP-Galactosa-4-Epimerasa Galactosemia, cuando falta en el hgado
Fructocinasa Su ausencia produce Fructosura esencial (asintomtica)
Fructosabifosfato Adolasa (Aldolasa B) Cuando no est, se presenta la Intolerancia Hereditaria a
la Fructosa (variable)
Tirosina-3-Oxigenasa Albinismo, cuando falta en las clulas de la piel
Homogentisato Oxidasa Cuando falta se presenta Alcaptonuria
Titorina Hidroxilasa Su ausencia se asocia al mal de Parkinson
Fenilalanian Hidroxilasa Su ausencia provoca Fenilcetonuria
Hipoxantina-Guanina Fosforribosil-
Transferasa
La falta de la enzima provoca el Sndrome del Lesch-
Nyhan
Adenosina Desaminasa La falta de la enzima produce Inmunodeficiencia con-
gnita
Otro uso importante de las enzimas en Medicina es el apoyo en el diagnstico y seguimiento de
enfermedades. Varias enzimas se utilizan con fines de diagnsticos y seguimiento de desordenes.
Algunos ejemplos representativos se muestran en la Tabla 9.
Tabla 9. Algunas enzimas de empleadas en diagnstico
Enzima Uso Diagnstico Principal
Aspartato Amino Transferasa Infarto del Miocardio
Alanina Amino Transferasa Hepatitis viral
Amilasa Pancreatitis aguda
Ceruloplamina Enfermedad de Wilson (Degeneracin hepatolenticular)
Creatincinasa Trastornos musculares e infarto del miocardio
Fosfatasa cida Carcinoma metasttico de prstata
Fosfatasa alcalina Enfermedades seas y trastornos hepticos obstructivos
-Glutamil transpeptidasa Enfermedades hepticas
Lactato deshidrogenasa Infarto del miocardio
Lipasa Pancreatitis aguda
Por ltimo, las enzimas son el blanco de casi la mitad de todos los frmacos conocidos, el uso y
desarrollo racionales de estos, requiere del conocimiento slido de las propiedades de las enzimas
y de las vas metablicas en que participan.

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maov/mlvm/julio de 2009

Termodinmica, Cintica y Enzimas

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