Universidad Nacional Autnoma de Mxico. Facultad de Qumica. Laboratorio de Qumica Orgnica I Prctica 6 Cromatografa en capa fina.

2012-1

Introduccin.

La mayor parte de la purificacin se sustancias se hace por cromatografa (escritura de color), una tcnica de separacin que data del trabajo del qumico ruso Mikhail Tswett en 1903. En la actualidad, la cromatografa es de uso comn y existe una variedad de tcnicas, de las cuales trabajan bajo un principio similar. La mezcla a separarse se disuelve en un disolvente, llamada fase mvil, y pasa sobre un material adsorbente, llamado fase estacionaria. Debido a que los diferentes compuestos se adsorben en la fase estacionaria a intervalos diferentes, migran a lo largo de la fase a diferentes velocidades y se separa a medida que salen (se eluyen) desde el extremo de la columna de cromatografa. La cromatografa puede clasificarse de acuerdo al tipo de equilibrio involucrado, mismo que es gobernado por el tipo de fase estacionaria utilizada. As la cromatografa puede ser de: Adsorcin. Particin. Intercambio inico. Exclusin. Afinidad.

En la cromatografa de adsorcin, la fase estacionaria es un slido en el que los componentes de la muestra son adsorbidos. La fase mvil puede ser un lquido o un gas; los componentes se distribuyen entre dos fases a travs de la combinacin de los procesos de adsorcin y desorcin. La cromatografa de capa fina (TLC) es un ejemplo especial de cromatografa por adsorcin en la cual la fase estacionaria es un plano, en la forma de un soporte slido en un plato inerte. En la cromatografa de particin, la fase estacionaria de la cromatografa de particin es un lquido soportado en un slido inerte. Otra vez, la fase mvil puede ser un lquido o un gas. La cromatografa en papel es un tipo de cromatografa de particin en la cual la fase estacionaria es una capa de agua adsorbida en una hoja de papel. La cromatografa en capa fina se basa en la preparacin de una capa, uniforme, de un adsorbente mantenido sobre una placa de vidrio u otro soporte. Los requisitos esenciales son, pues, un adsorbente, placas de vidrio, un dispositivo que mantenga las placas durante la extensin, otro para aplicar la capa de adsorbente, y una

cmara en la que se desarrollen las placas cubiertas. Es preciso tambin poder guardar con facilidad las placas preparadas y una estufa para activarlas. La fase mvil es lquida y la fase estacionaria consiste en un slido. La fase estacionaria ser un componente polar y el eluyente ser por lo general menos polar que la fase estacionaria, de forma que los componentes que se desplacen con mayor velocidad sern los menos polares. La cromatografa en capa fina presenta una serie de ventajas frente a otros mtodos cromatogrficos ya que el utillaje que precisa es ms simple. El tiempo que se necesita para conseguir las separaciones es mucho menor y la separacin es generalmente mejor. Pueden usarse reveladores corrosivos, que sobre papel destruiran el cromatograma. El mtodo es simple y los resultados son fcilmente reproducibles, lo que hace que sea un mtodo adecuado para fines analticos. Al realizar la eleccin del adsorbente se debe tener en cuenta el tamao de las partculas del adsorbente, cuanto ms finamente dividido est mayor ser su adhesin al soporte, aunque tambin se le puede aadir un adherente. Algunos de los adsorbentes ms utilizados son: Celulosa. xido de aluminio (almina). Almidn. Carbn activo (carbn en polvo). Azucares. Gel de slice (silicagel). Kieselguhr. La eleccin del eluyente depender lgicamente del componente que se va a separar y del material en que la separacin se lleva a cabo. Principales eluyentes en orden creciente de polaridad: ter de petrleo. Etanol. ter dietlico. Cloroformo. Ciclohexano. Metanol. Acetato de etilo. Diclorometano. Tetracloruro de carbono. Agua. Piridina. cido actico. Benceno. En la eleccin del eluyente influyen varios factores: Precio. Pureza. No utilizar mezclas de eluyentes (reproducibilidad). No utilizar compuestos muy voltiles. Evitar que contengan trazas de metales (catalizadores).

La eleccin del eluyente se realiza de forma emprica. Hay que estudiar la polaridad del componente y probar con eluyentes cada vez menos polares. La constante RF (Ratio of Front) es simplemente una manera de expresar la posicin de un compuesto sobre una placa como una fraccin decimal, mide la retencin de un componente. Se define como:

La distancia recorrida por el compuesto se mide generalmente desde el centro de la mancha. Para que los RF sean reproducibles deben ser fijadas una serie de condiciones (Espesor de la placa, fase mvil, fase estacionaria, cantidad de muestra). El mximo valor de RF que se puede alcanzar es de 1, pero lo ideal es un RF entre 0.65 y 0.7. Tambin se puede operar de la manera siguiente: Se selecciona un compuesto (X), que tenga una posicin de desarrollo conveniente; todos los dems compuestos sobre la placa se relacionan con ste. De esta manera se tiene el RX , ya que:

Bibliografa. McMurry John. (2008).Qumica Orgnica. 7a edicin. Editorial Cengage Learning. http://www.pucpr.edu/marc/facultad/santos/Lizette%20Santos%20%20M%C3%A9todos%20de%20Biotecnolog%C3%ADa/Cromatograf%C3% ADa.pdf http://www.textoscientificos.com/quimica/cromatografia/capa-fina http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/Cromatografia.pdf

Resultados.

1. Efecto de la concentracin. a. Cul es la relacin existente entre la intensidad y tamao de las manchas con la concentracin de la sustancia aplicada en cada caso? Mientras ms concentrada este la sustancia, las manchas ms grandes y ms intensas. Podemos decir entonces que tanto la intensidad y el tamao de las manchas depende de la concentracin de la sustancia. b. Cul es el Rf de la mancha intermedia? 0.64 2. Polaridad de las sustancias y polaridad de los eluyentes. a. Cul es el eluyente donde se observa una mayor separacin de las manchas? En el acetato de etilo. b. Cul de las dos sustancias problema es ms polar? Por qu? La muestra 3 (benzoina) es ms polar porque tanto en el metanol como en el acetato de etilo, que son los eluyentes ms polares, se eluye ms que la muestra 2 (cafena), es decir, recorre una distancia mayor en cromatoplaca que la cafena ya que se ve ms atrada por el eluyente, ya que ambos son polares. c. Cul es la sustancia problema es menos polar? Por qu? La muestra 2 (cafena) es menos polar, porque tanto en el acetato de etilo como en el metanol (ambos polares) se eluye menos que la muestra 3 (benzoina). Esto quiere decir que se ve menos atrada por los eluyentes polares porque no estn polar como ellos. d. Cmo se prepara una cmara de elucin? La cmara de elucin puede ser un frasco de tamao apropiado, al cual previamente se le ha colocado por dentro un trozo de papel filtro que sirve para aumentar la saturacin de los vapores del eluyente, as como obviamente el eluyente con el que se trabajar. 3. Purezas de las sustancias. a. Cul es la sustancia pura? Por qu? La solucin 4 es la pura porque cuando una sustancia es impura al momento de revelar se nota que dejan rastro a lo largo de la cromatoplaca o se ve como si hubiera dos componentes. En el caso de la muestra cuatro no se presentaba ninguno de los dos casos, por lo que podemos concluir que es la muestra pura. b. Cul es la sustancia impura? Cuntas impurezas se observan? La muestra 5 es la impura (al revelar se nota la presencia de dos

muchas, donde una de ellas, es la impureza). Se observa una impureza. c. Cul es el Rf de la sustancia pura? 0.66 d. Cul es el Rf de la impureza? 0.5 4. La cromatografa en capa fina como criterio parcial de identificacin. a. Cul de las dos formas de elucin permiti mayor separacin de la mezcla? En la segunda elucin (hexano/acetato de etilo 4:1). b. A qu se debe esto? Explquelo. A que tanto el nipagin y el nipasol son sustancias con una polaridad media-baja, es decir, tienden a ser un poco ms no polares que polares pero aun as tienen cierta polaridad. En la elucin de con acetato de etilo ambos se eluyen porque tienen cierta polaridad, pero dado que el eluyente es muy polar no se nota la diferencia de polaridad de las sustancias, sin en cambio, en la elucin de hexano con acetato de etilo que es no polar se nota la diferencias de las polaridades ya que se eluyen mejor en elyentes no polares porque tienden a ser no polares. *Nota: las imgenes as como los clculos de los Rf estn contenidos en una hoja anexa. Anlisis de los resultados. Podemos observar que la polaridad de las sustancias a analizar y la de los eluyentes es un factor que influye bastante en la cromatografa, ya que conociendo las polaridades de ambas podemos predecir los resultados de la cromatografa. Tambin podemos observar que es un criterio parcial ya que en ningn momento nos dir cual es la sustancia analizada ni en que cantidad se encuentra. Puede hablarnos de de concentracin (cualitativamente), polaridad, pureza, etc. Conclusiones. Conocimos el mtodo de cromatografa en capa fina, as como sus caractersticas y los factores que la alteran. Adems aprendimos que esta tcnica puede utilizarse como criterio de pureza e identificacin de sustancias, aunque solamente sea parcial. Tambin calculamos los valores de Rf para las diferentes muestras y relacionamos dichos valores a la seleccin del eluyente ideal en los diferentes casos.

Aprendimos que la relacin existente entra las polaridades de las sustancias que se analizan y la de los eluyentes utilizados es muy importante. Cuestionario. a. En el experimento de polaridad, cul de las dos sustancias, la ms polar o la menos polar, recorre mayor distancia en la cromatoplaca a partir del punto de aplicacin? Por qu? La sustancia ms polar recorre mayor distancia tanto en el metanol como en el acetato de etilo porque ambos eluyentes son polares, as que se ve ms atrada. b. Cmo se elige al eluyente correcto para ccf? Depende de la muestra. Se deben conocer la polaridades tanto de la muestra como del eluyente para saber cual es el ms indicado en cada caso. c. El valor del Rf depende del eluyente utilizado? Si, ya que la distancia que recorre el eluyente se toma en consideracin para calcular el valor del Rf. Adems se toma en cuenta cuanto se eluye la muestra en presencia del eluyente. d. En el experimento identificacin, cul de las dos formas de elucin permiti mayor separacin de la mezcla?, a qu se debe esto? En la segunda elucin (hexano/acetato de etilo 4:1). Esto se debe a que tanto el nipagin y el nipasol son sustancias con una polaridad mediabaja, es decir, tienden a ser un poco ms no polares que polares pero aun as tienen cierta polaridad. En la elucin de con acetato de etilo ambos se eluyen porque tienen cierta polaridad, pero dado que el eluyente es muy polar no se nota la diferencia de polaridad de las sustancias, sin en cambio, en la elucin de hexano con acetato de etilo que es no polar se nota la diferencias de las polaridades ya que se eluyen mejor en eluyentes no polares porque tienden a ser no polares. e. Qu significa que una sustancia tenga: 1. Rf < 0.5 La sustancia es polar en ese eluyente. 2. Rf = 0.5 Es el eluyente ideal. 3. Rf > 0.5 La sustancia es no polar en ese eluyente. f. Por qu se dice que la ccf es un criterio parcial y no total de identificacin? Porque si se desconoce por completo la muestra, este mtodo no nos dir cual es el componente; nicamente sabremos la polaridad de este. Adems, es un mtodo cualitativo, es decir, nunca nos dir la cantidad de muestra.

g. Cul ser el resultado de los siguientes errores en cromatografa en capa fina? 1. Aplicacin de solucin muy concentrada. Pues que mientras ms concentrada est la muestra mayor ser el tamao de la mancha, y como generalmente en la cromatoplaca se pone ms de una muestra, los tamaos pueden ser tan grandes que se confundira cual es cual. 2. Utilizar eluyente de alta polaridad. Generalmente los eluyente que son muy polares tienden a correr la muestra, por lo que no es muy recomendable usarlos. 3. Emplear gran cantidad de eluyente en la cmara de cromatografa. Si se utiliza una cantidad tan grande que este por arriba de el punto de aplicacin, el eluyente correr la muestra.