MICROSCOPIO Histo: tejido logos: conocimientos (histologa: estudio de los tejidos)

Esos tejidos van a incluir desde el ms mnimo elemento celular hasta la formacin de los rganos que conforman al cuerpo. Vamos a estudiar desde los microcomponentes de la clula; que es una clula: est compuesta por un ncleo, una membrana celular, vescula, mitocondrias, aparato de golgi, retculo endoplasmatico rugoso o liso que conforman todo elemento celular, desde ese punto vamos a estudiar el tejido, que va a formar la clula, que va a formar los tejidos, hasta la conformacin de los rganos. Tejidos formados por clulas y las clulas van a formar rganos. El cuerpo humano est formado por agua y por clulas y esas clulas van a formar los rganos. Esas clulas las vamos a ver por un aparato llamado Microscopio. Microscopio: es un instrumento ptico que est formado por un sistema de lentes que permite la ampliacin de la imagen y eso es lo que conforma la parte ptica, para la observacin de elementos muy pequeos adems este microscopio de la parte ptica est constituido por una parte mecnica, es decir, el microscopio ptico esta conformado por una parte ptica y una parte mecnica. Parte ptica: Lentes (transmiten y retractan la luz) Condensador el objetivo el ocular Parte Mecnica: tubo platina carro diafragma tornillo micromtrico tornillo macromtrico

Hay diferentes tipos de microscopio: microscopio microscopio microscopio microscopio microscopio microscopio microscopio microscopio microscopio ptico de campo oscuro de contraste de fases de interferencia de luz polarizada de barrido confocal de luz ultravioleta de transmisin electrnico de barrido

Los que vamos a utilizar en los cortes histolgicos son: microscopio de transmisin, microscopio de barrido y microscopio ptico. Microscopio ptico: est formado por una parte ptica y una parte mecnica.

Parte ptica: Condensador el objetivo el ocular

Parte Mecnica: tubo platina carro diafragma tornillo micromtrico tornillo macromtrico

El poder de resolucin: es una distancia mnima que debe existir entre dos puntos del objeto para que se visualice, si esa medida no existe esos dos objetos se ven separados. Es la longitud de ondas del objetivo y el condensador, lo que nos va hacer posible que veamos ese corte como una imagen. Aumento: es la relacin que debe existir entre el tamao de la imagen y el objeto en sus valores lineales (cunto mide el objeto). El aumento va a estar dado por el objetivo ms el ocular.

El microscopio ptico va a ver elementos muy pequeos que si no son por el microscopio imposible que el ojo humano pueda ver. El ojo humano lo mnimo que ve es 2 mm (milmetros) y el microscopio ptico hasta 2 um (micras) de espesor. 6 y 20 min de grabacin. La parte ptica est compuesta por un sistema de lentes, esos lentes van a formar el condensador, el objetivo y el ocular. Por el condensador se va a emitir la luz que va a traspasar al tejido que se va a observar y lo vamos a ver por intermedio de los oculares, del objetivo y lo vamos a observar por medio del ocular.

Microscopio de transmisin: Microscopio de barrido: acta por difusin de electrones, todos tienen un ctodo y un nodo, todos tienen un lente, todos tienen una parte donde se coloca el material para poder observar la nica diferencia es que en el microscopio de transmisin tenemos un visor donde observamos la imagen del corte que esta ubicado de un (sitio distinto a los otros) ?

Cada microscopio tiene su utilidad el MACRO es para ver estructuras ultraestructura dependiendo de lo que nosotros queramos observar en el momento que estamos estudiando la muestra. Microscopio de Campo Oscuro: esta especficamente diseado para partculas pequeas, por supuesto como es un campo oscuro el condensador va hacer especial, no va a permitir que entre demasiada luz. Los elementos que vamos a observar se ven de forma brillante sobre el fondo oscuro y la luz muy importante que llega hacia esa estructura no es focal, no es directa a la estructura sino que viene como una luz panormica que va esparcida y recorre todo el espesor del espcimen. Microscopio de contraste de fases: vamos a ver que primero no se usa coloreado, los especmenes son muy delgados, la observacin puede ser vista ampliada o puede ser vista recogida, podemos tener un campo de mayor amplitud o podemos tener un paneo y podemos observar un conjunto de estructuras. Microscopio de interferencia: divide la luz de fuente nica en dos ases luminosos, esos ases luminosos van atravesar el objeto y el otro lo va a reventar ? Lo que va a dar un estudio de masas por unidad de volumen de ese tejido. Podemos calcular por el microscopio cuanto es la masa que tenemos en ese tejido. Microscopio de Fluorescencia: es la utilizada en procesos qumicos, en procesos de identificacin de anticuerpos en la parte de inmunologa, en la parte de alergias. Se inicia con la luz capaz de activar un colorante fluorescente. Hay un filtro por encima del objetivo del color de la nueva longitud de ondas. Dependiendo del colorante que utilicemos vamos a ver

mas o menos fluorescente esas estructuras que vamos a estudiar, siempre vamos a observar que es brillante fosforescente. Microscopio de Barrido Confocal: usamos un sistema que en vez de ser de luz es de laser, el sistema dirige el laser sobre la muestra y ilumina en un solo punto, podemos tener imgenes tridimensionales del corte que estamos estudiando. Microscopio de Luz Ultravioleta: que es para determinar los acidos nucleicos. Microscopio de Luz Polarizada: es la que vibra en un solo plano, son para estructuras bien negligentes ? Polarizador y analizador y sostiene informacin de la estructura molecular traducido quiere decir que la luz polarizada es una luz que no va a desenmascarar la estructura molecular del elemento, digamos que el tejido seo es un tejido que esta formado por aposicion de capas y que uno de los elementos que tiene esa capa es de un colgeno que esta formando una fibra colagena pero que esas fibras colagenas estn dependiendo de esas capas que forma ese tejido va a tener una direccin diferente entonces con la luz polarizada ellas actan sobre la birrefringencia de esas capas y va a penetrar entre ese tejido y esas capas de corte, y cada capa segn la piel negligente ? Que tenga o la incidencia de la luz sobre este tejido nos va a dar un color diferente ejemplo color verde es cuando la luz incide en 90 las fibras, color rojo cuando incide la luz en un 45% de angulacion, dependiendo de esa angulacion que es polarizada vamos a encontrar esas estructuras. Microscopio Electrnico de transmisin: remplaza la luz visible por una de electrn, el haz de electrones no atraviesa lentes de vidrio, sino lentes electromagntico, el poder de resolucin del microscopio electrnico de transmisin es de 0.2 micras. Cortes de tejidos muy delgados 0.5 utilizacin de alto vacio no se usa en clulas no vivas y la formacin de la imagen se forman por la dispersin de los electrones. Microscopio de barrido: los electrones no atraviesan el objeto, el preparado se va a cubrir con metal pesado en la superficie, no es necesario cortes ultrafinos y forma imagen de la superficie.

Para estudiar este tipo de tcnicas tenemos dos tipos: Vamos a estudiar las clulas en cultivo en vivo, aqu vamos a tener las clulas en cultivo vivo y la manipulacin experimental de las clulas. En el cultivo de tejidos vamos a ver que hay varios tipos de cultivo: *El cultivo de clulas *El cultivo de los tejidos: se toma la muestra que debe ser estril, eso se coloca en una solucin que va a fijar las condiciones naturales de esas muestras para que no se descompongan, no cambie ni altere su constitucin

original, adems vamos agregar a esa solucin un medio nutritivo para que ellos crezcan y se multipliquen y esas clulas en el medio nutritivo se van a mantener en solucin, van a crecer y van a formar una capa que va cubrir todo el campo donde se est preparando, esto tiene una temperatura aproximadamente de 37.5 C para que ellos tengan un ambiente tanto de nutricin como de temperatura propia para su crecimiento. Por cada cultivo un nico tipo celular. Entonces nosotros tenemos la clula que va estar activada mediante la fluorescencia (color morado) la seleccin de anticuerpos con colorantes fluorescentes, unin del anticuerpo a la clula, separacin de la clula y la solucin por la irrigacin celular ? Ese es el mecanismo por el cual acta los clones celulares ?. Tambin vamos a ver en esta tcnica de clulas vivas la tincin supravital y la tincin vital, vamos a ver la micromanipulacin mecnica, los microelectrodos, los microinyectores y la microcinematografa. Vamos a ver cortes solamente con tincin vital y tincin supravital. Todos esos mtodos permiten una manipulacin directa de la clula y no depende del medio circundante. En la tcnica de la tincin vital: vamos a inyectar en el animal de estudio una solucin, vamos a esperar a que eso circule por el torrente circulatorio, hacemos una extraccin de la sangre y analizamos entonces lo que nosotros inyectamos para ver hasta dnde ha llegado. En la tincin supravital: nosotros vamos a inyectar un elemento pero vamos a extraer un pedazo de la muestra y vamos a observar lo que nosotros queremos ver. Por ejemplo si nosotros queremos ver donde estn los procesos inflamatorios donde existan los macrogafos que son elementos celulares que se encargan de fagocitar elementos extraos, nosotros agarramos e inyectamos al tejido una solucin de tinta china el animal le sacan la muestran lo analizan y se donde esta la tinta china el colorante (se ve espacios negros, los macrogafos que captaron el colorante de la tinta china y que estn marcados por la tinta. Para utilizar la tincin vital y supravital vamos a utilizar el azul de tripan y el carmn de litio, el rojo neutro y el verde jano y la lisarina, cada uno de ellos va a estar indicado para una especifica accin. Por ejemplo la lisarina lo vamos a utilizar en los tejidos duros (tejido seo o catrilago). La micromanipulacion mecnica es cuando estamos en el periodo de estudiar la inseminacin artificial. Los microelectrodos es que por medio de diferencias potencial elctrica, vamos a estimular esa clula con ese tipo de microelectrodo y conjuntamente vamos a utilizar los microinyectores que son para inyectar o administrar sustancias dentro de la clula. *El cultivo de los rganos Y las clulas de tejido muerto

Lo ms importante en estudiar son los tejidos muertos que lo vamos a estudiar con coloracin, vamos a ver diferentes tejidos y vamos a utilizar una tcnica que es la tcnica de coloracin de HEMATOXILINA Y EOSINA, donde vamos a utilizar dos tipo de colorantes: la hematoxilina y la eosina y esa tcnica tiene 5 pasos: 1. Fijacin: vamos a extraer la muestra, que va a tener una medida exacta para poder tener procesar, lo vamos a colocar en una solucin que va a proteger esa clula que tiene una relacin de 50 partes de volumen con una parte de muestra, dependiendo de la muestra vamos a colocar la solucin, la vamos a poner dentro de esa solucin y esto va a detener los procesos celulares. Mantiene las estructuras con minimas modificaciones, insolubilizan los componentes de la clula, se forman los enlaces, se alcanza la fuerza mecnica y produce la inhibicin de enzimas, todo eso para decir que mantiene en su estado casi original el tejido que vamos a estudiar, sin mucha variacin. La fijacin va a tener un tiempo, si la hacemos menos del tiempo puede daar al tejido por falta de fijacin que se descomponga por accin de las enzimas, si dejamos sobretiempo ese tejido sobre la solucin vamos a daar el corte por la precipitacin de los elementos fijadores, tiene tiempo y una dosis de fijacin fija para cada tipo de tejido que vayamos a utilizar. En la fijacin vamos a utilizar dos elementos: el Glutaldehido y el Formaldehido que son fijaciones por inmersin, agarramos la muestra y la metemos en el liquido donde esta el liquido fijador. 2. Deshidratacin: Luego como el tejido esta lleno de agua lo vamos a deshidratar y despus lo vamos a colocar en parafina, esa parafina que vamos a utilizar es soluble en agua, si nosotros colocamos esa parafina con agua no vamos a tener que ese corte absorba la parafina, ese corte se deshidrata y se deshidrata con una serie de alcoholes de tipo creciente. Entonces vamos a pasar el tejido por diferentes tipos de alcoholes para lograr la deshidratacin y despus que lo tengamos vamos a meter ese tejido en un aclaramiento para eliminar todo exceso y vamos a colocar en sustancias para aclaramiento, luego lo colocamos en la parafina y la colocacin de ese tejido en la parafina es para darle dureza una forma al tejido para poderlo cortar. Entonces se hace con la finalidad de obtener consistencia necesaria para realizar los cortes con el espesor adecuado para su observacin en un microscopio ptico que va entre 5 a 10 micras, esa es la funcin de cubrir el corte en parafina, esa parafina esta en estado solido, se lleva a una temperatura que se derrita, se coloca en la muestra y espera que se soludifique otra vez y se empieza a cortar. Entonces la muestra la vamos a colocar en un envase, la muestra se obtiene un taco entonces la muestra se sumerge en la parafina liquida y

3. 4. 5.

6.

se deja enfriar para que se soludifique, se obtiene un taco entonces hay 3 mtodos de congelacin: Desecacin: se congela en una cmara de vaco y se seca por deshidratacin, este mtodo se usa en los quirfanos cuando se estn operando a las personas Sustitucin: es usando sacarosa-congelacion-deshidrata-inclusion-mayor de 20 grados-luz ultravioleta y medio de difusin ? Inclusin ese taco que conseguimos lo vamos a pasar por un microtomo, Corte: con ese micromotor vamos a lograr que haya un espesor entre 5 y 10 micras de espesor para la tcnica de visulizacion Coloracin: los colorantes se usan en soluciones acuosas, los colorantes deben ser desparafinados y rehidratados, el mtodo de tincin mas utilizado es la Eosina y despus se hidrata y se aclara, ese proceso con la tcnica de hematoxilina y eosina. Observacin

La hematoxilina es un colorante BASICO por consiguiente va hacer captado por los componentes ACIDOS de la clula que en este caso vamos a ver el ncleo. La Eosina es un colorante ACIDO por lo que es captado por los componentes BASICOS de la clula en este caso citoplasma, esa accin de captar un colorante tipo bsico se va a llamar basofilia y la capacidad que tiene el elemento la estructura de captar un colorante acido se llama acidofilia. El ncleo es BASOFILO El citoplasma es ACIDOFILO porque es la capacidad de captar los colorantes bien sean bsicos o acidos. Dentro de esas coloraciones vamos a ver la hematoxilina y eosina. El ncleo se ve oscuro y el citoplasma claro. Haban dos tipos de tcnica para los cortes de tejido muerto que es la tcnica de tejido blando (H y Eosina) y la tcnica para os tejidos mineralizados y los duros, se puede estudiar por dos tcnicas: Descalcificacin: ese tejido lo vamos a meter en una solucin por determinado tiempo para eliminar la parte mineralizada de ese tejido y solamente nos queda la parte orgnica. Desgaste: Tcnica de tejido blando es por descalcificacin y la tcnica de tejidos duros es por desgaste.

Si es por desgaste materia mineralizada y si es por descalcificacin vamos a ver la materia orgnica. Cuando vamos a utilizar el microscopio electrnico tambin vamos ? Glutaldehido Para darle un contraste a ese elemento que vamos a estudiar lo vamos a sumergir con tetrofilo de ocre ? Se va a deshidratar En estos casos del microscopio electrnico en diferencia al microscopio ptico que lo incluimos en parafina en este caso lo vamos a incluir en ?.... y con un micrtomo lo vamos a procesar en espesores muy pequeos para las muestras. Como a veces no tenemos una coloracin muy definida vamos a darle un aumento en el contraste y lo vamos a lograr con acetato de urano y luego se monta en una aparato que se llama grilla que es donde se va a observar el corte. Tambin podemos utilizarlo por la tcnica de congestin de fractura ? En donde la muestra se va a congelar en hidrogeno que va a estar dado por el vacio, se va a fracturar y lo vamos a poner en un vapor de platino para cubrirlo, lo vamos a obtener con este platino una plantilla, lo de la plantilla vamos a colocar un acido para poderlo ver y luego lo colocamos en la grilla y podemos verlo al microscopio electrnico. Tambin vamos a ver mtodos histoqumicos son nica y exclusivamente para lograr ver localizacin de donde estn las estructuras, entonces esto siempre se hace con una unin especifica a un colorante bien sea fluorescente, etc Metacromasia: es la capacidad que tiene el tejido de cambiar el color del colorante. Tambin en los mtodos histoqumicos vamos a ver los mtodos basados en la reaccin de Ship para grupos aldehdos. Tambin existe el mtodo Fernunger ? Para la localizacin y la demostracin de los acidos ribonucleicos DNA Tenemos tambin el estudio de los lpidos, los lpidos son tratados con la tcnica de hematoxilina y eosina la capacidad lipidica de la clula desaparecen por los procesos de la tcnica, si queremos observar las clulas adiposas en un tejido lipido tenemos que utilizar el SUDAN III que nos va a dar una coloracin rojiza como el de la clula Estas reacciones histoqumicas sirven para la localizacin de la enzima

En cuanto a la inmuquimica es donde vamos a utilizar el antgeno y el anticuerpo. Para poder observar bien los cortes histolgicos tenemos que tener en cuenta: Tcnica Tiempo (fijador) Coloracin

Microscopio de campo oscuro sirve para observar partculas pequeas, los especmenes se ven de una manera brillante en un fondo oscuro y la luz incide de manera dispersa. Microscopio de contraste de fase: se utiliza para elementos que no estn coloreados, van hacer de un espesor delgado y hay diferencias en la amplitud de la honda de la luz que va a ver en el espcimen. La diferencia es la placa de la base donde se encuentra los oculares para ver las imgenes que emite la luz Microscopio de interferencia: se determina masa por unidad de superficie, es decir se puede observar cuanto se mide esa masa. Microscopio de fluorescencia: se utiliza colorantes fluorecentes, (colorante especial) Que se activa con los primeros rayos de luz que salga de la fuente emisora. Microscopio confocal o barrido confocal: se observa los elementos de una manera tridimensional. Microscopio de luz ultravioleta: se determina los acidos nucleicos de la celula. En vez de ser de espejos son los elementos pticos son de quarzo. Microscopio de Luz polarizada: va a vibrar y va a separar las estructuras irrestringentes porque no todas las estructruras.