Biosynthesis of -sitosterol and stigmasterol proceeds exclusively mevalonate pathway in cell suspension cultures of Croton stellatopilosus (Resumen). Introduccin.

-sitosterol es un fitosterol ampliamente distribuido en todo el reino vegetal y se sabe que est implicado en la estabilizacin de membranas celulares. El estigmasterol est estrechamente relacionado con -sitosterol, pero a diferencia posee una insaturacin adicional en la cadena lateral de la molcula. La biosntesis de estos fitoesteroles en clulas vegetales ha demostrado que sus unidades isoprnicas se derivan exclusivamente de la ruta del mevalonato (MVA), la cual est localizada en el citoplasma. Por otro lado, las unidades isoprnicas de los grupos de terpenoides de monoterpenos, diterpenos y tetraterpenos son biosintetizados predominantemente de la ruta del fosfato deoxixilulosa (DXP), localizada en el plstido. Croton stellatopilosus, ha sido reportada que contienen una variedad de compuestos terpenoides, especialmente el diterpeno anti-pptico acclico, plaunotol el cual parece ser el constituyente principal de las hojas. Cultivos in vitro de C. stellatopilosus incluyendo callos y clulas en suspensin, han sido establecidos con el fin de observar su potencial para la biosntesis de terpenoides en comparacin con el sistema de la planta entera. Objetivo. Determinar la ruta biosinttica de -sitosterol y estigmasterol en cultivos de clulas en suspensin de C. stellatopilosus. Metodologa. Se indujeron los cultivos de clulas en suspensin de C. stellatopilosus, las cuales fueron alimentadas con [1-13C] glucosa y [2-13C] acetato de sodio y se cultivaron bajo condiciones controladas. -sitosterol y estigmasterol fueron aislados y los patrones de 13C marcados fueron examinados utilizando espectroscopa de RMN cuantitativa. Los resultados se compararon con los obtenidos de un trabajo anterior sobre cultivos de callos que se llevaron a cabo bajo las mismas condiciones experimentales y usando la misma fuente de material vegetal de. Se mantuvo en medio de Murashige y Skoog (MS) suplementado con 2 mg/L de cido 2,4-diclorofenoxiactico (2,4-D), 2 mg/L de benciladenina (BA) y 3% w/v de sacarosa. Fueron establecidas primeramente las curvas de crecimiento y la formacin de producto durante el ciclo de crecimiento del cultivo en suspensin. Resultados y Discusin. El anlisis de los patrones de 13C enriquecido revel que todas las unidades de isopreno de las molculas de ambos fitosteroles son originadas exclusivamente a partir de la ruta MVA. Estos resultados fueron en contraste con el estudio anterior utilizando cultivos de callos de C stellatopilosus, en cual muestra que las unidades de isopreno de -sitosterol y estigmasterol fueron derivados por igual de ambas rutas, de la ruta DXP y la ruta MVA. La observacin por microscopa de transmisin de electrones de estructuras subcelulares de ambos tipos de clulas revel que las clulas de callos contena cloroplastos parcialmente desarrollados, mientras que las clulas cultivadas en suspensin no contenan estos orgnulos. Dado que se conoce que la ruta DXP se encuentra en los cloroplastos, sugiere que la presencia de cloroplastos es esencial para la expresin de la ruta DXP. Conclusiones. Existe una operacin exclusiva de la ruta MVA en cultivos de clulas en suspensin de C. stellatopilosus en contraste con lo encontrado previamente a partir de cultivos de callos, lo cual probablemente fue resultado de la no-expresin de la va DXP en los cloroplastos libres de los cultivos de clulas en suspensin. Referencias. Kongduang, D., Wungsintaweekul, J. & De-Eknamkul, W. (2008). Biosynthesis of sitosterol and stigmasterol proceeds exclusively mevalonate pathway in cell suspension cultures of Croton stellatopilosus. Tetrahedron Letters. 4067-4072. Lilian D. Chel G.