INFORME N 02 INSTRUMENTACION DEL LABORATORIO, ESTERILIZACION, METODOS FISICOS Y QUIMICOS.

I. OBJETIVOS: El alumno determinara lo siguiente: Entrenar al alumno en el reconocimiento de los diferentes equipos y materiales de laboratorio. Aprender a usar con propiedad los materiales de laboratorio que sern utilizados en la realizacin de los ejercicios de laboratorio. Adiestrar al alumno en la limpieza y preparacin del material para su esterilizacin. I.-MATERIAL DE VIDRIO Y OTROS Aparte del instrumental y variado equipo que se requiere en todo laboratorio de Microbiologa, el material de vidrio constituye una de las principales herramientas de esta disciplina -Matraces y balones (graduados) Un matraz aforado es un recipiente de fondo plano y con forma de pera, que tiene un cuello largo y angosto. Una lnea fina grabada alrededor del cuello indica (generalmente) un cierto volumen de lquido contenido a una temperatura definida, entonces se dice que est graduado para contener. El cuello de un matraz aforado se hace relativamente angosto de modo que un pequeo cambio de volumen de un lquido provocar una considerable diferencia en la altura del menisco.

Kitasatos Son frascos muy semejantes a los Erlenmeyer pero tienen una ramificacin lateral, en la que puede conectarse una bomba de vaco. Se usan para hacer filtraciones al 12 vaco, conectndole por medio de un tapn de goma, un embudo Bchner

Probetas graduadas Son recipientes cilndricos, graduados, de vidrio grueso, de boca ancha, abierta y con pico, y las hay de distintos volmenes. Como la superficie libre del lquido es mucho mayor que la de los matraces aforados, de igual volumen la exactitud es mucho menor. Por eso solo son tiles para medidas aproximadas.

Pipetas (volumtricas, Pasteur), automticas y Micro pipetas Son tubos estrechos subdivididos en muchas divisiones que se emplean para medir cantidades variables de lquido. El orificio de una pipeta debe ser de un tamao tal que la salida del lquido no se produzca demasiado rpida, porque de otro modo llegaran a ser demasiados los errores debidos a pequeas diferencias en el tiempo de escurrido. Se usan habitualmente pipetas de: 2, 5, l0, 25 mL y muchas otras. Cabe mencionar que de acuerdo al volumen que escurran y otras caractersticas (como por ejemplo la graduacin al centsimo o al dcimo) tendrn en la parte superior unas bandas de colores que las distinguen. Ej. las de 5 mL tienen una banda de color azul

Tubos de ensayo Son tubos de vidrio de diferentes anchos y largos, recibiendo en general nombres genricos o habituales (de acuerdo a los parmetros antedichos) de: tubos de ensayo comunes, de hemlisis, de Kahn, de centrfuga cortos, etc. Tambin se ha desarrollado toda una serie de tubos plsticos (desechables) de diferentes tamaos. Las gradillas son los elementos que se utilizan para colocar los tubos generalmente en posicin vertical. Las hay de los ms diversos tamaos y construidas con diferentes materiales (madera, metal, etc.)

Cpsulas de porcelana
Se emplean para evaporaciones de soluciones, son poco profundas y con pico.

Esptulas de Drigalsky Es una varilla fina de vidrio, acodada en ngulo recto en uno de sus extremos, en forma de L o de tringulo equiltero. Se utiliza para inoculacin masiva de placa (impregnacin), aunque su uso es muy limitado.

Fiolas Matraz volumtrico o aforado es un recipiente con forma de pera, fondo plano, cuello largo y delgado. Suelen fabricarse en materiales como vidrio simple, vidrio borosilicatado o polipropileno. Algunos tienen una marca grabada alrededor del cuello que indica el volumen de lquido.

Varillas de Vidrio Son unas varillas de unos 20 cm de longitud que se utilizan para agitar las disoluciones ayudando a que los slidos se disuelvan en los disolventes ms rpidamente.

Beaker o vasos de precipitacin Para el uso corriente los ms convenientes tienen pico, siendo los altos de Berzelius y los bajos de Griffin. El pico tiene las siguientes cualidades: Facilita verter el lquido. Permite mantener una varilla de vidrio en el caso de precipitados, cubierto con un vidrio de reloj. Forma una salida para el desprendimiento de gases y vapores cuando el vaso est tapado por el vidrio de reloj. Se elegir el tamao del vaso segn el volumen de lquido que deba contener.

Jeringas y agujas hipodrmicas Jeringas desechables con aguja con cono luer esterilizadas con xido de etileno y envasadas en bilsters individuales. Las jeringas con aguja llevan la aguja incorporada para mayor comodidad del profesional sanitario que ha de realizar la puncin y administrar la inyeccin. Las jeringas vienen preparadas con las agujas ms comunes: intravenosas e intramusculares.

Frascos viales para Hemocultivos, vacunas, cultivos de tejidos

-Perlas de vidrio

QU ES Y POR QU ES IMPORTANTE? En un cuerpo de agua se produce y a la vez se consume oxgeno. La produccin de oxgeno est relacionada con la fotosntesis, mientras el consumo depender de la respiracin, descomposicin de sustancias orgnicas y otras reacciones qumicas. Tambin puede intercambiarse oxgeno con la atmsfera por difusin o mezcla turbulenta. La concentracin total de oxgeno disuelto ([OD]) depender del balance entre todos estos fenmenos. Si es consumido ms oxgeno que el que se produce y capta en el sistema, el tenor de O caer, pudiendo alcanzar niveles por debajo de los necesarios para la vida de muchos organismos. Los peces son particularmente sensibles a la hipoxia (bajas [OD], tabla 1). Tabla 1.- Rangos de concentracin de oxgeno disuelto y consecuencias eco sistmicas frecuentes. [OD] mg/L Condicin Consecuencias 0 Anoxia Muerte masiva de organismos aerobios 0-5 Hipoxia Desaparicin de organismos y especies sensibles 5-8 Aceptable [OD] adecuadas para la vida de la gran mayora de 8-12 Buena especies de peces y otros organismos acuticos >12 Sobresaturada Sistemas en plena produccin fotosinttica Durante el da suelen encontrarse concentraciones mayores de OD cuando la fotosntesis llega a sus mayores niveles luego del medioda, mientras ms bajas se registran durante la noche. Tambin es posible observar variaciones estacionales. As mismo la [OD] ser dependiente de la temperatura (tabla 2). Aguas ms clidas son capaces de disolver menores cantidades de oxgeno. Por esto, una descarga de agua caliente puede significar la disminucin del OD a niveles por debajo del lmite necesario para algunas formas de vida. Los animales acuticos suelen ser ms vulnerables a bajas [OD] por la maana en das clidos de verano, ya que las plantas acuticas no producen oxgeno desde el atardecer anterior. Por otra parte, en los lagos el nivel de OD vara fundamentalmente con la profundidad, mientras en los ros y arroyos los cambios suelen estar ms vinculados a la dimensin horizontal. El OD se puede expresar en miligramos por litro (mg/L) o en porcentaje de saturacin (%). La primera de las opciones expresa directamente la masa de oxgeno por litro de agua, mientras la segunda se expresa como el porcentaje de la concentracin de saturacin para determinada temperatura (tabla 2). Como ejemplo a 14C el agua disuelve aproximadamente 10 mg/L de O. Si se determina que a esa temperatura la [OD] es de 5 mg/L el porcentaje de saturacin ser de 50%.

METODOLOGA El OD puede determinarse en el campo utilizando sensores especficos. Sin embargo, debido al elevadsimo costo de los mismos, se utilizar la metodologa propuesta por Winkler. De acuerdo a este mtodo, la muestra ser fijada en el campo y conducida al laboratorio donde se realizar la titulacin y clculos finales. Paso 1) Las muestras de oxgeno se toman utilizando una botella de DBO (fig.1). Etiquete la botella utilizando la cinta de papel y lpiz o marcador indeleble. La muestra debe ser tomada eliminando absolutamente el burbujeo, ya que el mismo modificara la [OD]. Con este fin se ha construido un dispositivo muestreador. Permita desbordar varias veces el frasco de DBO para eliminar la interaccin con l O 2 atmosfrico. Tape la botella antes de sacarla del agua y controle que no quede ninguna burbuja de aire. Ya que la [OD] ser la del sitio exacto donde fue tomada la muestra, registre por escrito exactamente el lugar donde fue tomada, profundidad y temperatura. Paso 2) Los reactivos a utilizar son custicos, utilice proteccin y lvese bien las manos si se moja con los mismos. El OD se fijar agregando 1 ml. del reactivo I introduciendo la punta de la pipeta por debajo de la superficie. Tape siempre cuidando que no queden burbujas atrapadas y agite. De forma equivalente, agregue 1mL del reactivo II. Tape y mezcle cuidadosa pero vigorosamente. Se formar un precipitado marrn en cantidad proporcional al OD que contuviese la muestra. El OD fijado no se ver afectado por el oxgeno atmosfrico. Conduzca las muestras al laboratorio de ser posible en posicin vertical y cubriendo el tapn con agua de la misma muestra. Paso 3) En el laboratorio se titularn esos compuestos formados por fijacin del OD. La titulacin involucra la adicin gota a gota de un reactivo titulante (tiosulfato de sodio) que causa un cambio de color en la solucin. El punto en el que el color desaparece se denomina punto final, y el gasto necesario del reactivo titulante para lograr este punto es proporcional a la [OD]: a) La titulacin se realizar bajo bureta. Complete y enrase (ver cartilla de alcalinidad) la bureta con la solucin de tiosulfato de sodio 0,01N. b) Destape el frasco de DBO de la muestra y agregue 1ml de cido sulfrico concentrado lentamente y por la pared de la botella. Tome todas las precauciones necesarias para la manipulacin del cido sulfrico! Tape nuevamente y agite. Si no logra disolver todo el precipitado, agregue un poco ms de cido. c) Mida lo ms exactamente posible 100mL en matraz aforado y transfiralo a un erlenmeyer. d) Titule con el tiosulfato de sodio agitando constantemente hasta obtener un color amarillo plido.

e) Aada unas gotas (ej. 3) de reactivo indicador (almidn), la solucin tomar una coloracin azul-violcea. f) Contine lentamente la titulacin hasta que desaparezca el color y permanezca incoloro al menos 20 segundos. g) Calcule la concentracin de oxgeno disuelto en mg/L

[OD] =g.0,8 V DBO (V DBO -2) Siendo g el gasto del tiosulfato de sodio y V DBO el volumen de la botella de DBO (escrito en la propia botella) h) Calcule el porcentaje de saturacin utilizando la tabla 1. DBO

Seguridad: Manipule todas las sustancias con mximo cuidado. Particularmente el CIDO SULFRICO es corrosivo pudiendo generar quemaduras graves y txico por ingestin. El docente encargado debe planificar la actividad con el fin de disminuir los riesgos asociados a la utilizacin de esta sustancia. Utilcese proteccin para los ojos. En caso de contacto con la piel o los ojos lvese prontamente con agua en abundancia y acdase inmediatamente al mdico. Se adjunta ficha de datos de seguridad.

LABORATORIO Parte terica.OXGENO DISUELTO El Oxgeno Disuelto (OD) es la cantidad de oxgeno que est disuelta en el agua. Es un indicador de cmo de contaminada est el agua o de lo bien que puede dar soporte esta agua a la vida vegetal y animal. Generalmente, un nivel ms alto de oxgeno disuelto indica agua de mejor calidad. Si los niveles de oxgeno disuelto son demasiado bajos, algunos peces y otros organismos no pueden sobrevivir. El oxgeno disuelto en el agua proviene del oxgeno en el aire que se ha disuelto en el agua, por lo que estn muy influidos por las turbulencias del ro (que aumentan el OD) o ros sin velocidad (en los que baja el OD). Parte del oxgeno disuelto en el agua es el resultado de la fotosntesis de las plantas acuticas, por lo que ros con muchas plantas en das de sol pueden presentar sobresaturacin de OD. Otros factores como la salinidad, o la altitud (debido a que cambia la presin) tambin afectan los niveles de OD.

Adems, la cantidad de oxgeno que puede disolverse en el agua (OD) depende de la temperatura. El agua ms fra puede contener ms oxgeno en ella que el agua ms caliente. Los niveles de oxgeno disuelto tpicamente pueden variar de 7 y 12 partes por milln (ppm o mg/l). A veces se expresan en trminos de Porcentaje de Saturacin. Los niveles bajos de OD pueden encontrarse en reas donde el material orgnico (vertidos de depuradoras, granjas, plantas muertas y materia animal) est en descomposicin. Las bacterias requieren oxgeno para descomponer desechos orgnicos y, por lo tanto, disminuyen el oxgeno del agua

INSTRUMENTOS UTILIZADOS 1 Matraz Winkler de 250 ml. 1 Soporte Universal 1 Pinza de bureta 1 Bureta de 50ml. 1 Pipeta de 10ml. 3 cuenta gotas 1 Probeta de 100 ml. 1 Matraz erlenmeyer de 100 ml. 1 Matraz aforado de 100 ml. 1 Varilla de vidrio 1 Frasco de agua destilada 1 Vaso de precipitacin de 200 ml. 1 Fiola de 250ml. Pipetas de vidrio Bureta de vidrio

Pinza de bureta

Soporte Universal

Probeta de vidrio

Botella con agua

Matraz erlenmeyer

Fiola de vidrio de 250 ml.

Vaso precipitado de vidrio

MATERIALES UTILIZADOS Sulfato de manganeso Tiosulfato de sodio

Hidrxido de sodio

Yoduro de potasio

cido sodio

Almidn

II. TEORIA EXPERIMENTAL: Mtodo de Winkler 1. Muestra problema + Reactivo N 1 (Agua 500 ml. Sulfato manganeso

2 ml. Agitar por 8 minutos: OD ppdo Marrn OD ppdo Amarillo oxigeno disuelto

Reactivo N 2 Mezcla de: KOH hidrxido HI yoduro NaN3 acido 2 ml.

oxigeno pero en pocas cantidades

2. Luego titular con el Tiosulfato de sodio 0,025 N. 2 ml. 3. Mg. Ppm OD = (ml. Gastado de NaS2O3)(NNaS2O3)*8000 Lt. ml. de muestra 4. Con 1 gr. De almidn 100 ml. 0,4 gr. Na2S2O3 P/100 ml

III. REPORTE:

Mezclar 2 ml. de sulfato de manganeso a una botella llena de agua. Agregar a la mezcla el reactivo N 2 (2 ml.) agitamos por 8 minutos y se observa el color marrn a la combinacin de los 2 reactivos con el agua. Agregar a las botellas agitadas durante 8 minutos el H2SO4 durante 5 minutos agitar (acido sulfrico) En un vaso precipitado preparar agua destilada con 0,4 gr. De NaS2O3 (Tiosulfato de sodio). Vaciamos a la Fiola hasta completar los 250 ml. de solucin. Agregamos a la bureta la solucin en 20 ml. Sacar a un vaso precipitado la mezcla de las 3 sustancias por 100 ml. Colocar la bureta con la mezcla del Tiosulfato y valorar con la mezcla de los 3 reactivos, Gotear hasta que se observe un color amarillo. que hay reaccin positiva y que ha reaccionado y hay una precipitacin y esta

IV. CONCLUSIONES: El nivel de oxgeno disuelto obtenible en un estanque est estrechamente ligado a condicionantes fsico naturales y muy especialmente a la temperatura del agua. Hay varias opciones a elegir como mtodo de oxigenacin, unas ms eficientes que otras Al contrario de otras sustancias solubles al agua, el oxgeno es menos soluble en agua caliente Si bien los kois solo requieren 6 mg/l de oxgeno disuelto, tanto ellos como otros organismos se beneficiarn si el nivel de oxgeno es superior Minsculas burbujas son ms efectivas que grandes burbujas

Cascadas tienen un gran impacto visual, pero generalmente solo airean las capas superficiales del agua del estanque El rendimiento de los filtros mejora si se oxigena las cmaras biolgicas Los kois necesitan ms oxgeno con tiempo clido y durante un tratamiento del agua, ya que ambos factores reducen la capacidad de retener oxgeno del agua