[MANUAL PARA EL ANÁLISIS DE AGUAS RESIDUALES

]

I.C. DAYANA KATERINE GRISALES PENAGOS I.M. LINDA JOELA ORTEGA LÓPEZ SERGIO ANDRÉS BLANCO LONDOÑO, ESP TATIANA RODRÍGUEZ CHAPARRO, PH. D.

FACULTAD DE INGENIERÍA PROGRAMA INGENIERÍA CIVIL UNIVERSIDAD MILITAR NUEVA GRANADA BOGOTÁ 2012

CONTENIDO
Pág.

PRESENTACIÓN....................................................................................................................... 8 PREPARACIÓN DE SOLUCIONES ............................................................................................. 9 A. SOLUCIÓN H2SO4 1.0N ................................................................................................... 9 B. SOLUCIÓN H2SO4 0.5N – 0.05N ...................................................................................... 9 C. FACTOR DE DILUCIÓN .................................................................................................. 10 ANÁLISIS FÍSICOS .................................................................................................................. 11 1. COLOR – MÉTODO Nº 2120 ...................................................................................... 11
A. MÉTODO ESPECTROFOTOMÉTRICO ......................................................................... 11 B. PRINCIPIO DEL MÉTODO ............................................................................................. 11 C. EQUIPOS Y MATERIALES .............................................................................................. 11 D. PROCEDIMIENTO ......................................................................................................... 12 E. CÁLCULOS ...................................................................................................................... 12

2. SÓLIDOS – MÉTODO Nº 2540.................................................................................... 13
A. MÉTODO GRAVIMÉTRICO .......................................................................................... 13 B. PRINCIPIO DEL METODO ............................................................................................ 13 C. EQUIPOS Y MATERIALES ............................................................................................. 13 D. PROCEDIMIENTO ......................................................................................................... 13

ANÁLISIS QUÍMICOS ............................................................................................................. 17 3. ALCALINIDAD Y ÁCIDOS VOLÁTILES TOTALES – MÉTODO Nº 2320 .......................... 17
A. MÉTODO DE TITULACIÓN POTENCIOMÉTRICA .................................................... 17 B. PRINCIPIO DEL METODO ............................................................................................ 17

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C. EQUIPOS Y MATERIALES ............................................................................................. 17 E. PREPARACIÓN DE REACTIVOS ................................................................................... 17 F. PROCEDIMIENTO .......................................................................................................... 19 G. CÁLCULOS .................................................................................................................... 20

4. REQUERIMIENTO EN DEMANDA OXIDANTE – MÉTODO Nº 2350 ............................ 22
A. MÉTODO SEMI BATCH DEMANDA DE OZONO ...................................................... 22 B. PRINCIPIO DEL MÉTODO ........................................................................................... 22 C. EQUIPOS Y MATERIALES ............................................................................................ 22 D. REACTIVOS ....................................................................................................................23 E. PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS ...........................................................................23 F. PROCEDIMIENTO ......................................................................................................... 24 G. CÁLCULOS .................................................................................................................... 24

5. CLORUROS – MÉTODO Nº 4500-Cl- ........................................................................... 26
A. MÉTODO ARGENTOMÉTRICO................................................................................... 26 B. PRINCIPIO DEL MÉTODO ........................................................................................... 26 C. EQUIPOS Y MATERIALES ............................................................................................ 26 D. REACTIVOS ................................................................................................................... 26 E. PREPARACIÓN DE REACTIVOS .................................................................................. 27 F. PROCEDIMIENTO ......................................................................................................... 27 G. CÁLCULOS .................................................................................................................... 28

6. FÓSFORO – ORTOFOSFATOS (PO4-2) – MÉTODO Nº 4500-P ..................................... 29
A. MÉTODO CLORURO ESTAGNOSO ............................................................................ 29

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B. PRINCIPIO DEL METODO ........................................................................................... 29 C. EQUIPOS Y MATERIALES ............................................................................................ 29 D. REACTIVOS ................................................................................................................... 29 E. PREPARACIÓN DE REACTIVOS .................................................................................. 30 F. PROCEDIMIENTO ......................................................................................................... 30 G. CALCULOS ..................................................................................................................... 33

7. SULFATOS – MÉTODO Nº 4500-SO42- ........................................................................ 34
A. MÉTODO TURBIDIMÉTRICO ..................................................................................... 34 B. PRINCIPIO DEL MÉTODO ........................................................................................... 34 C. EQUIPOS Y MATERIALES ............................................................................................ 34 D. REACTIVOS ................................................................................................................... 34 E. PREPARACION DE REACTIVOS .................................................................................. 34 F. PROCEDIMIENTO ..........................................................................................................35 G. CALCULOS .....................................................................................................................37

8. NITRÓGENO – MÉTODO Nº 4500-Norg ...................................................................... 38
A. MÉTODO MACRO-KJELDAHL .................................................................................... 38 B. PRINCIPIO DEL MÉTODO ........................................................................................... 38 C. EQUIPOS Y MATERIALES ............................................................................................ 38 D. PREPARACIÓN DE REACTIVOS ................................................................................. 38 E. PROCEDIMIENTO......................................................................................................... 39 F. CÁLCULOS ..................................................................................................................... 40

9. DEMANDA QUÍMICA DE OXIGENO (DQO) – MÉTODO Nº 5220 ............................... 41

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A. MÉTODO ESPECTROFOTOMÉTRICO ........................................................................ 41 B. PRINCIPIO DEL METODO ............................................................................................ 41 C. EQUIPOS Y MATERIALES ............................................................................................. 41 D. REACTIVOS .................................................................................................................... 41 E. PREPARACIÓN DE REACTIVOS .................................................................................. 42 F. PROCEDIMIENTO ......................................................................................................... 42

10.

DEMANDA BIOQUIMICA DE OXIGENO DBO5 – MÉTODO Nº 5210 ....................... 46

A. PRINCIPIO DEL METODO ........................................................................................... 46 B. EQUIPOS Y MATERIALES ............................................................................................ 47 C. REACTIVOS ................................................................................................................... 47 D. PREPARACIÓN DE REACTIVOS ................................................................................. 47 E. PROCEDIMIENTO......................................................................................................... 49 F. CÁLCULOS ..................................................................................................................... 50

11.

CONSTITUYENTES ORGÁNICOS ABSORCIÓN-UV – MÉTODO Nº 5910 .................. 52

A. PRINCIPIO DEL MÉTODO ........................................................................................... 52 B. EQUIPOS Y MATERIALES ............................................................................................ 52 C. PROCEDIMENTO.......................................................................................................... 52 D. CÁLCULOS .................................................................................................................... 52

12.

MÉTODO PARA DETERMINAR METANO POR DESPLAZAMIENTO ......................... 54

A. PRINCIPIO DEL MÉTODO ........................................................................................... 54 B. EQUIPOS Y MATERIALES ............................................................................................ 54 C. REACTIVOS ................................................................................................................... 54

5

E. ESQUEMA DEL MONTAJE ........................................................................................... 54 F. PROCEDIMENTO ...........................................................................................................55

ANÁLISIS DE SUELOS ............................................................................................................ 56 13. MÉTODO PARA DETERMINAR CALCIO Y MAGNESIO SOLUBLES EN SUELO .......... 56

A. MÉTODO CUANTIFICACIÓN COMPLEXOMÉTRICA............................................... 56 B. EQUIPOS Y MATERIALES ............................................................................................ 56 C. REACTIVOS ................................................................................................................... 56 D. PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS ......................................................................... 56 E. PROCEDIMIENTO......................................................................................................... 57 F. CÁLCULOS ..................................................................................................................... 57

14.

MÉTODO PARA LA MEDICIÓN DE PH EN SUELOS ................................................. 59

A. EQUIPOS Y MATERIALES ............................................................................................ 59 B. REACTIVOS ................................................................................................................... 59 C. PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS .......................................................................... 59 D. PROCEDIMIENTO ........................................................................................................ 59

15.

MÉTODO PARA LA MEDICIÓN DE LA MATERIA ORGÁNICA EN SUELOS ............... 60

A. EQUIPOS Y MATERIALES ............................................................................................ 60 B. PROCEDIMIENTO ........................................................................................................ 60 C. CÁLCULOS .................................................................................................................... 60

ANÁLISIS MICROBIOLÓGICOS............................................................................................... 61 16. TÉCNICA DEL FILTRO MEMBRANA PARA MIEMBROS DEL GRUPO COLIFORME ... 61

A. PROCEDIMIENTO DE FILTRO MEMBRANA PARA COLIFORMES FECALES .......... 61

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B. EQUIPOS Y MATERIALES ............................................................................................. 61 C. REACTIVOS .................................................................................................................... 61 D. PREPARACIÓN DE REACTIVOS .................................................................................. 61 E. PROCEDIMIENTO......................................................................................................... 62 F. CÁLCULO ....................................................................................................................... 62

ANÁLISIS BIOLÓGICOS .......................................................................................................... 63 17. ENSAYO DE TOXICIDAD CON BULBOS DE CEBOLLA ALLIUM CEPA L ..................... 63

A. MÉTODO DE EVALUACIÓN DE INHIBICIÓN DEL CRECIMIENTO PROMEDIO DE LAS RAICES ........................................................................................................................ 63 B. PRINCIPIO DEL MÉTODO ........................................................................................... 63 C. EQUIPOS Y MATERIALES ............................................................................................ 63 D. REACTIVOS ................................................................................................................... 63 E. PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS .......................................................................... 63 F. PROCEDIMIENTO ......................................................................................................... 64 G. CÁLCULOS .................................................................................................................... 66

BIBLIOGRAFÍA ....................................................................................................................... 68

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PRESENTACIÓN
El Laboratorio de Saneamiento de la Universidad Militar Nueva Granada presenta en este documento las técnicas de laboratorio para el análisis de la calidad del agua residual y suelos con el objetivo de unificar los procesos seguidos por los usuarios del laboratorio en el desarrollo de las diferentes prácticas. Para la elaboración de este manual se consultaron las normas del Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater de AWWA, APHA y WEF año 2005, así como el Manual Práctico de Análise de Água de Funasa Brasil año 2006 y el manual de Métodos Analíticos del Laboratorio de Suelos del IGAC 2006. En la primera parte del manual se abordan los análisis físicos que permiten establecer características organolépticas en aguas residuales. En la segunda parte se tratan parámetros de análisis químicos de compuesto inorgánicos y orgánicos presentes en las aguas residuales. En la tercera parte se presentan análisis para suelos y extractos de suelo. En la cuarta parte se muestra una metodología para la determinación de microorganismos del grupo Coliforme tanto en aguas como en suelos. En la última parte se presenta un ensayo biológico para la determinación de toxicidad en aguas. De acuerdo con lo anterior deseamos que este documento se utilidad para aquellas personas que deseen realizar ensayos de calidad del agua residual y suelos.

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PREPARACIÓN DE SOLUCIONES
A. SOLUCIÓN H2SO4 1.0N Para preparar una solución de H2SO4 1N diluir cuidadosamente 30mL de H2SO4 concentrado en un balón de 1000mL con agua destilada. B. SOLUCIÓN H2SO4 0.5N – 0.05N A partir de la solución de H2SO4 normalizada se obtienen las respectivas soluciones empleado la siguiente ecuación:

Donde: V1 = Volumen a tomar C1 = Concentración conocida V2 = Volumen a preparar C2 = Concentración esperada Como ejemplo para concentraciones de 0.5N se requiere diluir 500mL de solución 1N en un balón de 1.0L con agua destilada de acuerdo con lo siguiente:

Como ejemplo para concentraciones de 0.05N se requiere diluir 25mL de solución 1N en 500mL de agua destilada de acuerdo con lo siguiente:

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C. FACTOR DE DILUCIÓN Para obtener diferentes concentraciones de muestras se requiere realizar diluciones de la misma para esto se emplea el Factor de Dilución, el cual se presenta en la siguiente ecuación:

Donde: F.D = Factor de Dilución VF = VT = C= Volumen final que se coloca de la muestra Volumen total (VF + Vrestante para completar) Concentración

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ANÁLISIS FÍSICOS
1. COLOR – MÉTODO Nº 2120

A. MÉTODO ESPECTROFOTOMÉTRICO Usualmente cuando se examina el agua, las primeras propiedades que se suelen considerar son las siguientes: color, sabor y olor, características inherentes a ella. El agua de uso doméstico e industrial tiene como parámetro de aceptación la de ser incolora, pero en la actualidad, gran cantidad del agua disponible se encuentra coloreada y se tiene el problema de que no puede ser utilizada hasta que no se le trata removiendo dicha coloración. Las aguas superficiales pueden estar coloreadas debido a la presencia de iones metálicos naturales (hierro y manganeso), humus, materia orgánica y contaminantes domésticos e industriales como en el caso de las industrias de papel, curtido y textil; esta ultima causa coloración por medio de los desechos de teñido los cuales imparten colores en una amplia variedad y son fácilmente reconocidos y rastreados B. PRINCIPIO DEL MÉTODO Se pueden efectuar dos medidas de color en el agua: real y aparente. El color real del agua natural es el que presenta cuando se ha eliminado la turbidez (filtrando o centrifugando), siendo principalmente causado por materiales húmicos coloidales. Por el contrario, el color aparente es determinado directamente de la muestra original (sin filtración ni centrifugación), es debido a la existencia de sólidos en suspensión. Para la determinación de color en el agua existe el método espectrofotométrico, el cual se usa principalmente en aguas industriales contaminadas que tienen colores poco usuales, y que no pueden ser igualados por el método colorimétrico. El color se determina mediante un espectrofotómetro, cuyo esquema de funcionamiento se recoge en la figura, a tres longitudes de onda distribuidas por el conjunto del espectro visible: λ1 = 436nm; λ2= 525nm y λ3 = 620 nm, de acuerdo con lo sugerido por ÇeÇe (1999). C. EQUIPOS Y MATERIALES     Fotómetro: Espectrofotómetro. Bomba de vacío. Membrana de filtración. Probeta 50mL.

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D. PROCEDIMIENTO Para determinar el color real se debe filtrar la muestra en filtro de fibra de vidrio de 1,2 µm o en filtro de acetato de celulosa de 0,45 µm y para color aparente tomar la muestra de agua directamente de la original. 1. Encender el espectrofotómetro y seleccionar la longitud de onda en 436nm. 2. Calibrar el equipo con la lectura inicial del blanco. 3. Realizar la lectura de la absorbancia de la muestras de agua.

a) Paso 1

b) Paso 2 a 3

c) Paso 4

Figura 1. Pasos para el procedimiento de medición de color E. CÁLCULOS Lectura de la absorbancia en longitud de onda 436 nm expresada en cm-1.

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2.

SÓLIDOS – MÉTODO Nº 2540

A. MÉTODO GRAVIMÉTRICO Los sólidos se refiere a la materia en suspensión o disuelta en agua o agua residuales. Los sólidos pueden afectar el agua o adversamente la calidad del efluente. Aguas con alto contenido de sólidos disueltos en general son de menor potabilidad y pueden inducir a reacciones fisiológicas en el consumidor. Por estas razones, un límite de 500mg de sólidos disueltos/l es el deseado para el consumo en aguas. B. PRINCIPIO DEL METODO Son los materiales suspendidos y disueltos en un agua. Se obtienen después de someter al agua a un proceso de evaporación a temperaturas comprendidas entre 103 y 105ºC. La porción filtrable representa a los Sólidos Coloidales Totales Disueltos y la no-filtrable son los Sólidos Totales en Suspensión. El contenido de sólidos volátiles se interpreta en términos de materia orgánica, teniendo en cuenta que a 550±50°C la materia orgánica se oxida formando el gas carbónico y agua que se volatilizan. Sin embargo, la interpretación no es exacta puesto que la pérdida de peso incluye también pérdidas debido a descomposición o volatilización de ciertas sales minerales como por ejemplo las sales de amonio o carbonato de magnesio. C. EQUIPOS Y MATERIALES            Desecador Bomba de vacío. Balanza analítica. Horno tipo mufla 550ºC. Estufa (103ºC y 105ºC). Embudo tipo Buchner para membrana con diámetro de 47mm. Membrana filtrante tipo micro-fibra de vidrio, con tamaño nominal de abertura de 0,45µm-1,2µm. Capsulas de porcelana. Pinza metálica. Probeta de 50mL. Guantes para mufla.

D. PROCEDIMIENTO PREPARACIÓN DE CÁPSULA Y MEMBRANA PARA ST - SST

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a. Calcinar la capsula de porcelana en mufla a 550ºC hasta que la masa sea constante (aproximadamente 15 minutos) y dejar enfriar en el desecador. b. Colocar una membrana filtrante en el sistema de filtración. c. Hacer 3 lavados a la membrana con el sistema de filtración utilizando 20mL de agua destilada para cada lavado (total de 60mL) que deben ser despreciados. d. Colocar la membrana en la capsula de porcelana y calcinar en la mufla por 15 minutos y dejar enfriar. 1. DETERMINACIÓN DE SÓLIDOS TOTALES (ST) Este procedimiento es limitado a una cantidad de sólidos secos de 200mg, debido a la posibilidad de la formación de una capa que impide el secado de los residuos. a. b. c. d. Preparar una cápsula de porcelana Determinar la masa M1 en gramos en la balanza analítica. Transferir un volumen de la muestra V1 (en mililitros. Secar la muestra en el horno a 103ºC-105 ºC con tiempo suficiente para lograr una masa constante (24 horas) y determinar la masa después de enfriar en el desecador M2. ( )( )
( ) ( )

Ecuación 1

2. DETERMINACIÓN DE SÓLIDOS TOTALES FIJOS Y VOLÁTILES (STF – STV) a. Después de determinar la concentración de los sólidos totales, colocar la cápsula con la muestra en la mufla a 550ºC para alcanzar masa constante (en este caso, 15 minutos para una única muestra y, no más de 2 horas cuando son varias muestras). b. Determinar la masa después del enfriamiento en el desecador (M 3, en g) en la balanza analítica y calcular STF con la Ecuación 2 y STV con la Ecuación 3: ( ( )( ) )(
( ) ( ) ) ( )

Ecuación 2 Ecuación 3

)

(

3. DETERMINACIÓN DE SÓLIDOS SUSPENDIDOS TOTALES (SST) Este procedimiento es limitado a una cantidad de sólidos secos de 200mg debido a la posibilidad de la formación de una capa que dificulta el secado. a. Preparar una cápsula y una membrana para el ensayo. b. Determinar la masa del conjunto (membrana + cápsula) – M4 en (g). 14

c. Colocar con una pinza metálica la membrana calcinada en el sistema de filtración o vacio. d. Filtrar un volumen conocido (V2) de muestra, utilizando el sistema de filtración o vacio. e. Transferir la membrana que contiene el residuo a la cápsula de porcelana. f. Secar el conjunto (membrana + cápsula) a 103ºC – 105ºC hasta conseguir una masa constante (por 24 horas) y después enfriar en el desecador. g. Determinar la masa M5 en (g) y calcular con la Ecuación 4.
( ( ) )

Ecuación 4

Figura 2. Paso d a f 4. DETERMINACIÓN DE SÓLIDOS SUSPENDIDOS FIJOS Y VOLÁTILES (SSF – SSV) a. Después de la determinación de la concentración de sólidos suspendidos totales, colocar el conjunto en la mufla, a 550ºC por un tiempo suficiente hasta conseguir una masa constante (aproximadamente 15 minutos) y después de enfriar en desecador determinar la masa M6 en (mg). b. Calcular SSF con la Ecuación 5 y SSV con la Ecuación 6.
( ( ( ( ) ) ) )

Ecuación 5 Ecuación 6

5. DETERMINACIÓN DE SÓLIDOS DISUELTOS TOTALES, FIJOS Y VOLÁTILES (SDT, SDF Y SDV) Los valores de las concentraciones de sólidos disueltos se pueden obtener por la diferencia entre las masas de los sólidos totales y de los sólidos suspendidos, considerando las respectivas fracciones (totales, fijos y volátiles).

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Sólidos Totales (ST)

Sólidos Suspendidos Totales (SST)

Sólidos Disueltos Totales (SDT)

Sólidos Suspendidos Volátiles (SSV)

Sólidos Suspendidos Fijos (SSF)

Sólidos Disueltos Volátiles (SDV)

Sólidos Disueltos Fijos (SDF)

Sólidos Volátiles Totales (SST)
ST = SST + SDT = SSV + SSF + SDV + SDF = SVT + SFT; SVT = SSV + SDV y SFT = SSF + SDF; SST = SSV + SSF y SDT = SDV + SDF;

Sólidos Fijos Totales (SFT)

Figura 3. Clasificación de los sólidos

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ANÁLISIS QUÍMICOS
3. ALCALINIDAD Y ÁCIDOS VOLÁTILES TOTALES – MÉTODO Nº 2320

A. MÉTODO DE TITULACIÓN POTENCIOMÉTRICA La alcalinidad de un agua es su capacidad de neutralizar ácidos. Las sustancias más comúnmente encontradas en aguas superficiales causadoras de alcalinidad son los carbonatos (CO3-2), bicarbonatos (HCO3-) e hidróxidos (OH-). No obstante, algunas sales de ácidos débiles como boratos, silicatos, nitratos y fosfatos pueden también contribuir a la alcalinidad de estar también presentes. Estos iones negativos en solución están comúnmente asociados con iones positivos de calcio, magnesio, potasio, sodio y otros cationes. El bicarbonato constituye la forma química de mayor contribución a la alcalinidad. Dicha especie iónica y el hidróxido son particularmente importantes cuando hay gran actividad fotosintética de algas o cuando hay descargas industriales en un cuerpo de agua (APHA, 2005). La alcalinidad se expresa como la concentración equivalentes de iones hidroxilo, mg/l o como la cantidad equivalente de CaCO3 en mg/l. B. PRINCIPIO DEL METODO Los iones relacionados a la alcalinidad presentes en una muestra como resultado de la disociación o la hidrólisis de solutos, reacciona con la adición de un acido patrón. La alcalinidad como la acidez depende del valor del punto final del pH fijado. C. EQUIPOS Y MATERIALES        Medidor de pH, precisión ± 0.01 Buretas digitales o vidrio, 10, 25mL Pipeta volumétrica Beaker, 80mL Centrífuga Acido sulfúrico (H2SO4) concentrado, p. a. Hidróxido de Sodio (NaOH) en lentejas, p. a.

E. PREPARACIÓN DE REACTIVOS Solución normalizada de Acido sulfúrico (H2SO4) 1N Pipetear 27.5mL de (H2SO4) concentrado y transferir lentamente a un balón volumétrico de 1L con aproximadamente 500mL de agua y completar el volumen del balón. 17

La normalización de la solución de H2SO4 se realiza con patrón primario de Tetra Borato de Sodio Decahidratado (Bórax), Na2B4O7.10H2O. La normalización debe ser hecha por triplicado, con masas conocidas del patrón en torno de 0,1900 g, disueltas en cerca de 50mL de agua destilada. Se deben usar 2 gotas de solución de azul de bromotinol como indicador de punto final (color amarillo) o metil naranja hasta un punto final incoloro, el cálculo de la concentración normalizada es:

M H 2 SO4 

masa ( g )boraxx1000 volumenH 2 SO4 (mL ) x381,42

Para preparar una solución de H2SO4 0,05N tomar de la solución patrón 1,0N. Solución normalizada de Hidróxido de sodio (NaOH) 1N En un beaker limpio disolver 40 g de NaOH con agua destilada. Dejar enfriar y transferir la solución cuantitativamente para el balón volumétrico de 1000 ml. Completar el volumen del balón hasta la marca con agua destilada, agitar para homogenizar y transferir para la bureta. La solución de NaOH es inestable: la reacción con CO2 atmosférico exige normalización semanal. La normalización de NaOH debe ser hecha utilizando como patrón primario Biftalato Ácido de Potasio (KPH). El KPH se debe secar previamente en el horno a 120 ºC, por 24 horas y enfriar en desecador. La normalización deber ser realizada por triplicado. Se deben determinar masas de KPH próximas de 0,1022 g para normalidades menores o iguales de 0.05N pesar 0,01022g, y debe anotarse el valor exacto de cada una. Posteriormente, se disuelven en cerca de 25 ml de agua destilada, en frascos erlenmeyer. En los frascos erlenmeyer que contienen la solución de KPH, adicionar 2 gotas de solución de fenolftaleína, trabajar en fondo blanco, luego entonces, adicionar la solución de NaOH hasta alcanzar una leve coloración rosada que persista, anotar cada volumen. La molaridad o normalidad de la solución normalizada se calcula con la siguiente ecuación:
M NaOH  massaKPH ( g ) x1000 volumeNaOH x 204 ,22

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La solución del indicador de fenolftaleína se prepara, disolviéndose 80 mg de fenolftaleína en 60 ml de Etanol p.a., y completar con agua destilada hasta 100 ml en un balón volumétrico. Para preparar una solución de NaOH 0,02N tomar de la solución patrón 1,0N. NOTA: Cuando el indicador es la solución de fenolftaleína se tiene una solución trasparente para la región ácida y rosa en la región alcalina. F. PROCEDIMIENTO Calibración medidor de pH Calibrar el medidor de pH marca Schott con las soluciones buffer de pH 7,0 y 4,0 a temperatura ambiente. De la siguiente manera. a. Lavar la sonda (sensor) y secarlo. b. Presionar la tecla Cal en modo Ct 1 y sumergir en la solución buffer de pH 7,0. c. Presionar la tecla run/enter en modo Ct 1 AR parpadea y esperar a que se estabilice el valor de milivoltaje (el valor es estable cuando aparece modo Ct 2). d. Lavar la sonda (sensor) y secarlo. e. Sumergir la sonda en la solución buffer de pH 4,0. f. Presionar la tecla run/enter AR parpadea y esperar a que se estabilice el valor de milivoltaje. g. Presionar la tecla pH. 1. ALCALINIDAD PARCIAL a. Centrifugar la muestra por 3min a 1500rpm. La centrifugación se puede obviar si la muestra no presenta un contenido considerable de sólidos en suspensión. b. Homogenizar el contenido del frasco de la muestra. c. Medir 50mL de la muestra y transferir para un beaker de 100mL. d. Colocar una barra magnética y acomodar el beaker en un agitador magnético. e. Introducir el electrodo del potenciómetro en el contenido del beaker y dejar en agitación. f. Llenar una bureta de 50mL con H2SO4 0,05N y unir al conjunto del beaker y del electrodo. g. Esperar hasta que se estabilice el pH original de la muestra. h. Iniciar la titulación hasta que se obtenga un pH de 5.75 y anotar el volumen gastado (V1).

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2. ALCALINIDAD INTERMEDIA a. b. c. d. Homogenizar el contenido del frasco de la muestra. Medir 50mL de la muestra y transferir para un beaker de 100mL. Colocar una barra magnética y acomodar el beaker en un agitador magnético. Introducir el electrodo del potenciómetro en el contenido del beaker y dejar en agitación. e. Llenar una bureta de 50mL con H2SO4 0.5N y unir al conjunto del beaker y del electrodo. f. Esperar hasta que se estabilice el pH original de la muestra. g. Iniciar la titulación hasta que se obtenga un pH de 4.3 y anotar el volumen gastado (V2). 3. ÁCIDOS VOLÁTILES TOTALES a. Al terminar el ensayo de alcalinidad en pH 4,3 bajar el pH hasta 3,0 con H2SO4 sin contabilizar el volumen gastado. b. Agregar pocas perlas de vidrio y calentar en una plancha de calentamiento hasta que salga vapor y dejar por 3min hacer esto en un lugar aireado preferiblemente con campana extractora y no aspirar los vapores. c. Dejar enfriar en un lugar y luego subir el pH hasta 4,0 con solución normalizada 0,02N de NaOH, colocar en cero la bureta y titular con NaOH hasta pH 7,0. G. CÁLCULOS 1. ALCALINIDAD PARCIAL

Donde: N = Normalidad de H2SO4. = Volumen gastado en la titulación de H2SO4 (ml) = Volumen de muestra, (ml) 2. ALCALINIDAD INTERMEDIA

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Donde: N = Normalidad de H2SO4. = Volumen gastado en la titulación de H2SO4, (ml) = Volumen de muestra, (ml) 3. ALCALINIDAD TOTAL

Donde: V3 = V1+V2 N = Normalidad de H2SO4 = Volumen gastado en la titulación de H2SO4, (ml) =Volumen de muestra, (ml)

3. ÁCIDOS VOLÁTILES TOTALES ( Donde: Vtitulado = Volumen de la muestra titulada, (ml) NNaOH = Normalidad del Hidróxido de Sodio Vmuestra = Volumen de la muestra, (ml) )

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4.

REQUERIMIENTO EN DEMANDA OXIDANTE – MÉTODO Nº 2350

A. MÉTODO SEMI BATCH DEMANDA DE OZONO Los oxidantes se adicionan al agua potable y al agua residual para desinfectar. Otro beneficio incluye remoción de limos, la oxidación de especies inorgánicas no deseables (e.g. iones de hierro, reducción de manganeso, sulfuros, y amonio) y la oxidación de constituyentes orgánicos (e.g. compuestos productores de olor y sabor). La demanda oxidante se refiere a la diferencia entre la dosis oxidante agregada y la concentración oxidante residual medida después de un tiempo de contacto prescrito a un pH y temperatura dado. La demanda oxidante y los requerimientos de oxidación están significativamente afectados por las características físicas y químicas de la muestra y la manera en la cual se mide el consumo del oxidante. Particularmente, la reactividad oxidante está influenciada por la temperatura, el pH, el tiempo de contacto, y la dosis oxidante. La temperatura de la muestra afecta fuertemente las reacciones cinéticas y por ende la demanda a un tiempo de contacto dado. El pH de la muestra afecta la forma y naturaleza del oxidante y el grado de demanda. El ozono es inestable a valores de pH muy altos y la demanda de ozono es especialmente sensible al pH de la muestra. La demanda oxidante incrementa con el tiempo y por lo tanto la demanda debe ser definida para un tiempo de contacto dado. La demanda oxidante también es independiente de la dosis oxidante pues al incrementar la dosis oxidante usualmente se incrementa la demanda, pero es incorrecto que al duplicar la dosis oxidante se duplicará la demanda oxidante. B. PRINCIPIO DEL MÉTODO Este método semi-batch involucra la determinación de la demanda de ozono con una adición continúa de ozono gaseoso al reactor batch. Los resultados obtenidos de este método dependen de la transferencia de masa y las características del reactor. En adición, algunos componentes que consumen el ozono se pueden volatilizar durante el ensayo. C. EQUIPOS Y MATERIALES        Generador de ozono capaz de proveer por encima del 5% de ozono gaseoso. Botellas limpiadoras de gas, vidrio de borosilicato, con un volumen mínimo 250ml. Tubos, únicamente se deben usar tubos sin metal o un tubo TFE. Vidriería: bureta de 50ml; beaker de 400ml; cilindro graduado de 250ml. Botella de lavado 500ml. Agitador magnético (opcional). Balanza analítica. 22

Mortero.

D. REACTIVOS       Agua libre de demanda de ozono. Acido sulfúrico H2SO4. Potasio de yodo KI. Tiosulfato de sodio titulante normalizado Na2S2O3 0.1N Tiosulfato de sodio titulante normalizado Na2S2O3 0.005N Solución indicadora de almidón

E. PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS Acido sulfúrico H2SO4 2N: Con precaución adicionar 56mL concentrado de H2SO4 a 800mL de agua libre de demanda de ozono en un frasco volumétrico de 1L. Mezclar a fondo y adicionar hasta la marca con agua libre de demanda de ozono. Yoduro de potasio (2%) KI: Disolver 20 g de KI en 800mL de agua libre de demanda de ozono en un beaker y agitar por 1minuto, transferir la mezcla a un balón volumétrico de 1000mL y llenar hasta el aforo con agua libre de demanda de ozono. Tiosulfato de sodio titulante estándar Na2S2O3 0.1N: Disolver 25 g de Na2S2O3 * 5H2O en 1L de agua destilada hervida fresca, almacenar por 24h y normalizar contra el bi-yodato de potasio o con dicromato de potasio después de dos semanas de almacenamiento. Este almacenamiento inicial es necesario para permitir la oxidación de cualquier ion de bisulfito presente. Para minimizar la descomposición bacteriana adiciona agua destilada hervida y adiciona unos mililitros de cloroformo (CHCL3). Tiosulfato de sodio titulante estándar Na2S2O3 0.005N: Diluir 50mL de la solución de Tiosulfato de sodio 0.1N Na2S2O3 en un 1L de agua destilada. Normalización del Tiosulfato de Sodio Método del Yodato: Disolver 3.249g de Bioyodato de Potasio anhidro KH (IO3)2 o Yodato de Potasio KIO3 seco a 103ºC por 1h en 1L de agua destilada para mantener 0.1N.

23

En 80mL de agua destilada adicione en constante agitación 1mL de H2SO4 concentrado, 10,0mL de 0.1N de KH (IO3)2 y 1g de KI. Titular inmediatamente con tiosulfato de sodio 0.1N, antes de que el color amarillo desaparezca adicione 1mL de la solución del almidón y continúe titulando hasta que el color azul desaparezca. Calcule la normalidad con la siguiente expresión:

Solución indicadora de almidón: 1. Disolver 2g de almidón en 100ml de agua destilada caliente, adicionar 0.2g de acido salicílico y dejar enfriar. F. PROCEDIMIENTO 1. Determina la salida del generador de ozono pasando el ozono en fase gaseosa a través de KI (2%) por unos 10 minutos. La solución de KI se mantiene en un recipiente aforado con volumen conocido (mínimo 200mL). 2. Transferir cuantitativamente muestras del recipiente ozonizado en un beaker, y titular con 0.1N Na2S2O3 normalizado hasta que el color amarillo del yodo haya casi desaparecido. 3. Adiciona de 1 a 2ml de solución indicadora de almidón y continuar titulando hasta que desaparezca el color azul. G. CÁLCULOS CÁLCULO DE OZONO RESIDUAL:
( )

( )

Donde: V =Volumen gastado en la titulación de sodio (ml). N= normalidad del Na2S2O3. =0.1N eq = Numero del equivalente en gramos del Ozono = 24mg/m eq t = Tiempo de ozonización (min)

24

CÁLCULO DE LA PRODUCCIÓN Y DOSIS DE OZONO

( ⁄ ) = Volumen de tiosulfato gastado en la titulación de la muestra menos volumen gastado en la titulación del blanco (ml). = Volumen de yoduro de potasio ozonizado (ml). = Volumen de la muestra de yoduro de potasio titulado (ml). t = Tiempo de contacto (min) N = Normalidad del tiosulfato de sodio, preferible 0.025N normalizada.

DOSIS APLICADA (

)

(

)

( )

P = Producción de ozono en la columna de ozonización ( ⁄ ). t = Tiempo de contacto (min) V = Volumen de agua ozonizada (ml) = Dosis aplicada de ozono ⁄

DOSIS EFECTIVA ( ⁄) ( ) ( )

25

5.

CLORUROS – MÉTODO Nº 4500-Cl-

A. MÉTODO ARGENTOMÉTRICO Los cloruros, en forma del ión cloruro (Cl-), son unos de los mayores aniones inorgánicos presentes en las aguas. En el agua potable, el sabor salado producido por la concentración de cloruros es variable e independiente de la composición química del agua. En algunas aguas que contienen 250 mg Cl-/l se puede detectar sabor salado si el catión es sodio. Por otro lado, el sabor salado típico puede estar ausente en aguas que contienen hasta 1000 mg/l cuando los cationes predominantes son calcio y magnesio. La concentración de cloruros es mayor en aguas residuales que en agua cruda por causa del cloruro de sodio (NaCl) el cual es un elemento común de la dieta alimenticia y pasa a través del sistema digestivo sin cambios. A lo largo de las costas, los cloruros pueden estar en altas concentraciones por causa de la fuga del agua salada dentro de los sistemas de alcantarillado. Este también puede aumentar por procesos industriales. Un alto contenido de cloruros puede dañar las tuberías metálicas y las estructuras, así como afectar el crecimiento de las plantas. B. PRINCIPIO DEL MÉTODO En una solución neutra o ligeramente alcalina, el cromato de potasio puede indicar el punto final de titulación del nitrato de plata de los cloruros. El cloruro de plata se precipita cuantitativamente antes de que se vuelva rojo el cromato de plata. C. EQUIPOS Y MATERIALES    Frasco erlenmeyer, (250ml). Bureta, (50ml). Probeta, (100 ml).

D. REACTIVOS    Solución indicadora de cromato de potasio. Solución titulante de nitrato de plata estándar 0.0141N. Cloruro de sodio estándar 0.0141N.

26

E. PREPARACIÓN DE REACTIVOS Solución indicadora de cromato de potasio Disolver 50g de K2CrO4 en un litro de agua destilada. Adicionar solución de AgNO3 hasta que se forme un precipitado rojo. Esperar por 12h, filtrar y diluir a 1.0l con agua destilada. Solución titulante estándar de nitrato de plata 0.0141N Disolver 2395 g de AgNO3 en agua destilada y diluir hasta completar 1000 ml. Estandarizar con NaCl 0.0141 N; 1.00 ml = 500 µg Cl-. Almacenar en una botella café. Cloruro de sodio estándar 0.0141 N Disolver 824mg de NaCl (secados a 140ºC) en agua destilada y diluir a 1000ml; 1.00ml = 500µg Cl-. F. PROCEDIMIENTO 1. 2. 3. 4. Hacer un blanco por el método de titulación. No es usual un blanco de 0.2 a 0.3ml. Tomar 100 ml de muestra o una porción diluida a 100ml. Adicionar tres gotas de fenolftaleína. Ajustar el pH de la muestra entre 7 o 10 con H2SO4 o NaOH si no está en este rango. 5. Adicionar 1.0 ml de la solución indicadora de K2CrO4. 6. Titular con la solución estándar de AgNO3 hasta obtener un color ladrillo.

Figura 4. Pasos 1 a 6

27

G. CÁLCULOS ⁄ Donde: A = ml del titulante gastado para la muestra, B = ml de titulante gastado para el blanco, y N = Normalidad del AgNO3. ( )

28

6.

FÓSFORO – ORTOFOSFATOS (PO4-2) – MÉTODO Nº 4500-P

A. MÉTODO CLORURO ESTAGNOSO Los compuestos que contienen fósforo ocurren en aguas naturales y en efluentes (domésticos e industriales) en forma de fosfatos. Estas formas son clasificadas en: Orto fosfatos, fosfatos condensados (Poli fosfatos) y fosfatos orgánicos; pueden presentarse en forma de solución, de partículas o de desechos o en la constitución de organismo acuáticos. Los compuestos que contiene fosforo son esenciales para el crecimiento de organismos y pueden ser considerados como nutrientes que limitan la producción de nuevas células. B. PRINCIPIO DEL METODO Es un método de reducción con cloruro estagnoso. El fosfato reacciona con el molibdato amónico y luego es reducido por el cloruro estagnoso para formar un complejo azul. Los resultados se expresan en (mg/L) de P. C. EQUIPOS Y MATERIALES             Fotómetro: Espectrofotómetro. Bomba de vacío. Balanza Analítica. Pipeta automática de 10ml. Balones volumétricos de 100ml. Pipetas automáticas de 200µL y 1000µl. Campana de extracción. Agitador magnético. Beaker. Barras agitadoras. Perlas de vidrio. Erlenmeyers.

D. REACTIVOS        Fenolftaleína. Fosfato dihidrogeno de potasio (KH2PO4). Acido sulfúrico (H2SO4). Persulfato de Potasio (K2S2O8). Acido Nítrico (HNO3). Molibdato de amonio (NH4)6Mo7O24 · 4 H2O. Cloruro estagnoso dihidratado (SnCl2.2H2O). 29

 

Glicerol (C3H8O3). Hidróxido de sodio (NaOH).

E. PREPARACIÓN DE REACTIVOS Solución estándar de fosfato (KH2PO4): Disolver 219.5mg de Fosfato dihidrogeno de potasio (KH2PO4) en 1L de agua destilada. Solución Acido Sulfúrico (H2SO4) 1.59N: Diluir 15mL de Acido Sulfúrico (H2SO4) en 35mL de Agua destilada. Acida Fuerte En un balón volumétrico adicionar a 60mL de agua destilada 30ml de acido sulfúrico concentrado (H2SO4), 0.4mL de acido Nítrico (HNO3) y llenar hasta 100ml con agua destilada. Solución de Molibdato de amonio Disuelva 25g de molibdato de amonio (NH4)6Mo7O24 · 4 H2O.en 175ml de agua destilada. En 400mL de agua destilada agregar 280mL de Acido sulfúrico (H2SO4) concentrado, dejar enfriar y luego agregar la solución del paso 1. Cloruro estagnoso Disuelva 2.5g de Cloruro estagnoso dihidratado (SnCl2.2H2O) en 100ml de glicerol (C3H8O3). Calentar la solución al baño maría y revolver con varilla de vidrio. Este reactivo es estable y no requiere preservativos ni almacenamiento especial. Hidróxido de sodio (NaOH) 1N. Disuelva 40g de Hidróxido de sodio (NaOH) en 1l de agua destilada. F. PROCEDIMIENTO DETERMINACIÓN DE LA CURVA DE CALIBRACION 1. En un erlenmeyer adicionar el volumen de la solución estándar de fosfato determinada (Tabla 1) y llenar hasta 50mL con agua destilada. 1ml de solución estándar P = 0.05mg P 30

Tabla 1. Volúmenes de la solución estándar de fosforo para la curva de calibración mg P ml (Sol. Estándar) mg P ml (Sol. Estándar) 0.00 0.01 0.05 0.08 0.10 0.15 0.0 0.2 1.0 1.6 2.0 3.0 0.20 0.25 0.30 0.40 0.50 4.0 5.0 6.0 8.0 10.0

2. Colocar en agitación y adicionar 2 gotas de fenolftaleína, 1mL de Solución Acido Sulfúrico (H2SO4), 0.5g de Persulfato de Potasio (K2S2O8) y 4 perlas de vidrio. 3. Llevar a digestión hasta que el volumen reduzca a 10mL y se deja enfriar. 4. Agregar a cada erlenmeyer 30mL de agua destilada y 2 gotas de fenolftaleína. 5. Adicionar gotas de Hidróxido de sodio (NaOH) hasta que cambie a color rosado. 6. Luego agregar acida fuerte hasta que el color rosado desaparezca. 7. Transferir las soluciones a balones volumétricos de 100mL y llenar hasta el aforo con agua destilada. 8. Adicionar 4mL de Solución de Molibdato de amonio y 10 gotas de Cloruro estagnoso. 9. Después de 5 minutos medir la absorbancia con longitud de onda de 690nm.

Figura 5. Pasos 1 a 7

31

Tabla 2. Medida de absorbancia CURVA DE CALIBRACION FOSFORO mg P ml Abs.cm-1 mg P ml Abs.cm-1

(Sol. Estándar) (690nm) 0.00 0.01 0.05 0.08 0.10 0.15 0.0 0.2 1.0 1.6 2.0 3.0 0.000 0.039 0.045 0.055 0.085 0.140 0.20 0.25 0.30 0.40 0.50

(Sol. Estándar) (690nm) 4.0 5.0 6.0 8.0 10.0 0.160 0.250 0.300 0.400 0.600

Para la curva de calibración, dibujar la absorbancia medida en el eje de las abscisas, versus la cantidad de mg P/l en el eje de las ordenadas y determinar la ecuación de la recta obtenida (Figura 7).
0.60 0.50 0.40

(mgP)

0.30 0.20 0.10 0.00 0.000

y = 0,8706x + 0,0213 R² = 0,9713

0.200

0.400

0.600

0.800

ABSORBANCIA (cm-1)

Figura 6. Curva de calibración P, Absorbancia vs mg P

32

DETERMINACIÓN DE CONCENTRACIÓN DE FÓSFORO 1. Se toma 50ml de la muestra y 50ml de agua destilada (Blanco) en dos erlenmeyers. 2. Colocar en agitación y adicionar 2 gotas de fenolftaleína, 1ml de Solución Acido Sulfúrico (H2SO4), 0.5g de Persulfato de Potasio (K2S2O8) y 4 perlas de vidrio. 3. Llevar a digestión hasta que el volumen reduzca a 10ml y se deja enfriar. 4. Agregar a cada erlenmeyer 30ml de agua destilada y 2 gotas de fenolftaleína. 5. Adicionar gotas de Hidróxido de sodio (NaOH) hasta que cambie a color rosado. 6. Luego agregar acida fuerte hasta que el color rosado desaparezca. 7. Transferir las soluciones a balones volumétricos de 100ml y llenar hasta el aforo con agua destilada. 8. A cada muestra se le adicionar 4ml de Solución de Molibdato de amonio y 10 gotas de Cloruro estagnoso (al blanco no se le agrega Cloruro estagnoso) 9. Después de 5 minutos medir la absorbancia con longitud de onda de 690nm. 10. Llevar el valor de la diferencia a la curva para encontrar la concentración de sulfatos. G. CALCULOS CONCENTRACIÓN DE FÓSFORO Con el valor obtenido de concentración de fósforo (P) en la curva calcular: (( ) )

mg P= Valor encontrado de la Concentración de fósforo P en la curva de calibración. Vm= Volumen de la muestra, (ml).

33

7.

SULFATOS – MÉTODO Nº 4500-SO42-

A. MÉTODO TURBIDIMÉTRICO Los sulfatos (SO42-) están altamente distribuidos en la naturaleza y pueden estar presentes en el agua en concentraciones que varían de pocos a cientos de miles de miligramos por litro. Los residuos del drenaje de la minería pueden contribuir con grandes cantidades de SO42- a través de la oxidación de la pirita. B. PRINCIPIO DEL MÉTODO El Ion sulfato (SO42-) es precipitado en un medio de ácido acético con cloruro de Bario (BaCl2) para formar sulfato de de bario (BaSO4) en cristales de tamaño uniforme. La luz de absorbancia del (BaSO4) es medida por un fotómetro y la concentración de sulfato (SO42-) es determinada por la comparación de la lectura en la curva de calibración. C. EQUIPOS Y MATERIALES         Fotómetro: Espectrofotómetro. Bomba de vacío. Balanza Analítica. Pipeta automática de 10ml. Balones volumétricos de 100ml. Pipetas automáticas de 200µl y 1000µl. Campana de extracción. Agitador magnético.

D. REACTIVOS       Sulfato de Sodio (Na2SO4). Cloruro de Magnesio (MgCl2). Acetato de Sodio (CH3COONa). Nitrato de potasio (KNO3). Acido acético (CH3-COOH (C2H4O2). Cloruro de Bario (BaCl2).

E. PREPARACION DE REACTIVOS Solución estándar de sulfato: Disolver 147.9 mg de Sulfato de Sodio (Na2SO4) en 1l de agua destilada.

34

Solución Buffer: Disolver 30g de Cloruro de Magnesio (MgCl2), 5g Acetato de Sodio (CH3COONa), 1g de Nitrato de potasio (KNO3) y 20ml de Acido acético (CH3-COOH (C2H4O2).en 500ml de agua y completar a 1l en un balón volumétrico. F. PROCEDIMIENTO DETERMINACIÓN DE LA CURVA DE CALIBRACION 1. En un erlenmeyer adicionar el volumen de la solución estándar determinada (Tabla 3) y completar a 100mL con agua destilada. 1ml de solución estándar de sulfato = 0.1mg SO2 Tabla 3. Volúmenes de la solución estándar de sulfatos para la curva de calibración mg SO4 ml (Sol. Estándar) 0.0 0.1 0.5 1.0 1.5 0 1 5 10 15 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 mg SO4 ml (Sol. Estándar) 20 25 30 35 40

2. Colocar en agitación y adicionar 20ml de solución buffer por 1 minuto, durante la agitación añadir 1g de Cloruro de Bario (BaCl2) y se deja agitar por 1 minuto. 3. Después de 5 minutos medir la absorbancia y la turbidez.

35

Tabla 4. Medida de la absorbancia y turbidez. mg SO4 ml (Sol. Estd) 0.0 0.1 0.5 1.0 1.5 0 1 5 10 15 Abs.cm-1 (420nm) 0 0 0.03 0.045 0.080 0.15 5.25 30.10 40.40 54.00 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 UNT mg SO4 ml (Sol. Estd) 20 25 30 35 40 Abs.cm-1 NUT (420nm) 0.12 0.17 0.22 0.29 0.37 65 75 95 145 155

Para la curva de calibración, dibujar la absorbancia media en el eje de las abscisas, versus la cantidad de mgSO4 en el eje de las ordenadas y determinar la ecuación de la recta obtenida (Figura 8).
5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0.0 0.000 0.100 0.200 0.300 0.400 y = 10,936x + 0,3609 R² = 0,9599

(mgSO4)

ABSORBANCIA (cm-1)

Figura 7. Curva de calibración SO4, absorbancia vs mgSO4 DETERMINACIÓN DE CONCENTRACIÓN DE SULFATOS 1. Se toman 100mL de la muestra en dos erlenmeyer más el blanco. 2. Se agrega 20mL de buffer a las muestras y agitar por 1 minuto. 3. A una de las muestras agregar 1g Cloruro de Bario (BaCl2) agitar por 1 minuto y dejar en reposo por 5 minutos. 36

4. Calibrar el espectrofotómetro a 420nm con la muestra del blanco o calibrar el turbidímetro con los patrones según sea el caso. 5. Medir a la muestra que tiene solo buffer la absorbancia o turbidez (Lectura inicial). 6. A la muestra con Cloruro de Bario (BaCl2) medir la absorbancia o turbidez (Lectura final). 7. Hacer diferencia de absorbancias. ( )

8. Llevar el valor de la diferencia a la curva para encontrar la concentración de sulfatos. G. CALCULOS CONCENTRACIÓN DE SULFATOS Con el valor obtenido de concentración de sulfatos (SO4) en la curva calcular: (( ) )

mgSO4=Valor encontrado de la Concentración de sulfatos SO4 en la curva de calibración. Vm= Volumen de la muestra, (ml).

37

8.

NITRÓGENO – MÉTODO Nº 4500-Norg

A. MÉTODO MACRO-KJELDAHL El Nitrógeno es uno de los nutrientes de mayor importancia en el vertido de las aguas residuales tratadas. Un agua que contenga gran cantidad de nitrógeno acelerará la eutrofización de embalses, ríos y lagos, y puede provocar el estímulo del crecimiento de algas y plantas en cursos de agua poco profundos. La reducción de la concentración de oxígeno disuelto en las aguas receptoras y la toxicidad para la vida acuática son algunos de los efectos negativos de la elevada concentración de nitrógeno amoniacal en efluentes tratados. El análisis de este ensayo suele determinar el NTK (Nitrógeno Total Kjendahl) que incluye el nitrógeno orgánico y el amoniacal. B. PRINCIPIO DEL MÉTODO La suma de amonio libre y compuestos orgánicos nitrogenados que son convertidos a una sal de amonio (NH4)2SO4 después de la digestión de la muestra en medio ácido y en presencia de un catalizador. El amonio es destilado en medio alcalino y recuperado nuevamente para su cuantificación. La presencia de acido sulfúrico (H2SO4), sulfato de potasio (K2SO4), y sulfato de cobre (CuSO4), como catalizador, convierten el nitrógeno amonio de cualquier material orgánico a amonio. El amoniaco liberado también es convertido a amonio, después se adiciona base y el amoniaco es destilado del medio alcalino y absorbido en ácido bórico o sulfúrico. El amonio liberado es determinado titulando con una solución estándar de ácido sulfúrico (H2SO4). Los resultados se expresan en mgN /L. C. EQUIPOS Y MATERIALES        Equipo de digestión con sistema de recolección de gases (Digestor y Scruber). Equipo de destilación con flujo de vapor. Equipo titulador. Potenciómetro. Erlenmeyers de 250 ml. Vasos de precipitado. Tubos de ensayo para nitrógeno (para digestor y destilador).

D. PREPARACIÓN DE REACTIVOS Hidróxido de Sodio 6N (NaOH):

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Diluir 320g en agua destilada y completar 1l. Solución de Ácido Bórico: Disolver 20g de reactivo analítico en agua y diluir a 1l. Solución indicadora de ácido bórico: Disolver 20g de H3BO3 en agua, agregar 10ml de la solución indicadora mixta y diluir a 1l. Preparar mensualmente. Solución indicadora mixta: Disolver 200mg de indicador rojo de metilo en 100ml de alcohol etílico del 95%. Disolver 100mg de azul de metileno en 50ml de alcohol etílico del 95%. Combinar las soluciones. Preparar mensualmente. Solución de acido sulfúrico (H2SO4) al 0.02N para titulación: Diluir 3ml de acido sulfúrico (H2SO4) concentrado en 1l con agua destilada libre de CO2.Luego diluir 200ml de esta solución a 1l con agua destilada. Normalizar el ácido 0.02N contra una solución de Na2CO3 0.02N (1.060g de Na2CO3 anhidro secado a 140ºC, diluido a 1000ml con agua destilada). E. PROCEDIMIENTO VOLUMEN DE LA MUESTRA 1. El volumen de la muestra es 25ml. Para casos particulares de muestras líquidas se puede seguir la siguiente tabla: Tabla 5. Medida de la absorbancia y turbidez. Nitrógeno Orgánico en la muestra, mg/l Volumen de muestra, ml 4-40 8-80 20-200 50 25 10

2. Para muestras de lodos y sedimentos, pesar una porción de muestra húmeda que contenga entre 0.2mg y 2mg de nitrógeno orgánico. Transferir la muestra al tubo de digestión limpiando el recipiente de pesaje varias veces con pequeñas 39

cantidades de agua. Hacer esta operación con la cantidad más pequeña posible de agua, sin exceder un volumen de 50ml. DIGESTIÓN 1. Encender el digestor y scrubber 15min antes de iniciar el ensayo y limpiarlos. En el tubo agregar: 25ml de la muestra, 15ml de acido sulfúrico (H2SO4), 3,0g de Sulfato de Potasio, 1,0g de Sulfato de cobre. 2. Colocar el digestor en 60ºC-80ºC (temperatura). Colocar la “Flauta” (tapa del digestor para desviar los gases) y conectar la manguera de la “flauta” al scrubber. 3. Dejar en digestión aproximadamente 2 horas o hasta que las muestras tengan un color azul claro. 4. Al alcanzar ese color se apaga el digestor y se deja enfriar 30min con el scrubber prendido. DESTILACIÓN 1. Encender la unidad de destilación hasta que caliente (aproximadamente 15min). 2. Transferir las muestras frías de los tubos de digestión a los tubos de destilación con mucho cuidado. 3. Agregar a los tubos poco a poco 30ml de agua destilada y agregar Hidróxido de Sodio 6N (NaOH) con la válvula dosificadora hasta obtener un colar café. 4. En los frascos erlenmeyers que recibirán el destilado adicionar 100ml de acido bórico al 2% y de 3 a 4 gotas de indicador mixto. 5. Destilar entre 150-250mL en los erlenmeyer. TITULACIÓN Tomar los erlenmeyers y titular entre 150-250mL de destilación con acido sulfúrico H2SO4 0.02N hasta llegar al color rosado. F. CÁLCULOS ( ( Donde: V(H2SO4).= Volumen gastado de H2SO4 en la muestra, (ml). VBlanco= Volumen gastado de H2SO4 en el blanco, (ml). Vm= Volumen inicial de la muestra, (ml). 40 ) )

9.

DEMANDA QUÍMICA DE OXIGENO (DQO) – MÉTODO Nº 5220

A. MÉTODO ESPECTROFOTOMÉTRICO La demanda química de oxigeno es la medida del oxigeno necesario para oxidar la materia orgánica e inorgánica susceptible de oxidación, contenida en una muestra bajo condiciones de un agente especifico, temperatura y tiempo. Los valores de este parámetro están asociados al grado de avance de la oxidación de los contaminantes. B. PRINCIPIO DEL METODO Las sustancias orgánicas e inorgánicas oxidables presentes en la muestra, se oxidan mediante reflujo en solución fuertemente ácida (H2SO4) con un exceso conocido de dicromato de potasio (K2Cr2O7) en presencia de sulfato de plata (AgSO4) que actúa como agente catalizador, y de sulfato mercúrico (HgSO4) adicionado para remover la interferencia de los cloruros. Después de la digestión, el remanente de K2Cr2O7 sin reducir se titula con sulfato ferroso de amonio; se usa como indicador de punto final el complejo ferroso de ortofenantrolina (ferroina). La materia orgánica oxidable se calcula en términos de oxígeno equivalente. C. EQUIPOS Y MATERIALES               Espectrofotómetro. Bomba de vacío. Balanza Analítica. Pipeta automática de 5.0ml. Digestor de DQO. Dispensadores de 5.0ml. Estufa (103ºC y 120ºC). Embudo tipo Buchner para membrana con diámetro de 47mm. Membrana filtrante tipo micro-fibra de vidrio. Balones volumétricos de 10.0ml, 500ml, y 1000ml. Beaker de 500ml y 1000ml. Pipetas automáticas de 200µl y 1000µl. Tubos DQO. Campana de extracción.

D. REACTIVOS  Sulfato de plata (Ag2SO4). 41

   

Ácido sulfúrico (H2SO4, 96-97% Pureza). Sulfato de mercurio (HgSO4). Dicromato de potasio (K2Cr2O7). Hidrogenoftalato ácido de Potasio (KPH) HOOCC6H4COOK.

E. PREPARACIÓN DE REACTIVOS Solución de sulfato de plata en acido sulfúrico Solución de 5.5g/Kg de H2SO4 ,96-97% Pureza. ATENCION: Trabajar en la campana. Triturar con bastón de vidrio 10.12g de sulfato de Plata (Ag 2SO4) y transferir para un frasco con un contenido de 1l de Ácido sulfúrico (H2SO4, 96-97% Pureza), adicionar ene le mismo frasco de origen del acido). Cerrar el frasco herméticamente. La mezcla deberá ser mantenida en oscuro durante dos días antes de ser utilizada. Solución de Digestión (2l) Solución de K2Cr2O7 + HgSO4. ATENCIÓN: Trabajar en campana y con guantes. Secar cerca de 25g de K2Cr2O7 a 103ºC en una estufa durante 24 horas. Enfriar en el desecador. Transferir 1.5L de agua destilada para un beaker de 2.0l. Adicionar cuidadosamente 334mL de Ácido sulfúrico (H2SO4) sobre un baño de hielo. Retirar del baño, adicionar 66.6g de HgSO4 y agitar para disolver. Adicionar 20.432g de K2Cr2O7 previamente seco a 105ºC por 2 horas y mantener en agitación. Dejar Enfriar y transferir a un balón volumétrico de 2.0L y completar el volumen con agua destilada. La utilización de una nueva solución de digestión exige una nueva preparación de una recta de calibración. F. PROCEDIMIENTO DETERMINACIÓN DE LA CURVA DE CALIBRACION 1000mg de Hidrogenoftalato de Potasio (KHP)= 1.176mg DQO 1. Secar aproximadamente 500mg de KHP en capsulas de porcelana a 120ºC en estufa hasta que la masa sea constante (24h) y enfriar el KHP en desecador. 2. Disolver cerca de 0.425g aproximadamente de KHP en agua destilada, transferir cuantitativamente al balón volumétrico de 500ml y completar el volumen con agua destilada. Entonces como caso de ejemplo:

42

Tomamos 0.4639g KHP 436.9mg KHP

1000mg KHP→1176mgDQO 436.9mg KHP→ X

X=513.79mgDQO Lo llevamos a Litros: 513.79mgDQO→500mL X→1000mL

X=1027.58mgDQO/L X=1.02758mgDQO/ml Luego aplicar C1V1=C2V2 para determinar DQOTeorica. (1.02758mgDQO/ml)V1= DQOTeorica 2.5mL

DQOTeorica=

(

)

Hacer la curva de calibración con concentraciones conforme a los volúmenes deseados para el procedimiento de la determinación de concentración de DQOTeorica. (Tabla 6) y completarlos con agua destilada para un volumen total de 2.5mL.

43

Tabla 6. Curva de calibración para hallar la DQOTeorica CURVA DE CALIBRACION DQO V1
Sol.KHP

DQOTeorica ABS.1 ABS.2 41.10 82.21 164.41 246.62 411.03 657.65 739.86 822.06 904.27 986.48 1027.58 0 0.006

ABS (Xmed) 0.003 0.016 0.040 0.072 0.119 0.175 0.199 0.222 0.240 0.276 0.275

100 200 400 600 1000 1600 1800 2000 2200 2400 2500

0.016 0.016 0.04 0.040

0.063 0.080 0.119 0.119 0.177 0.172 0.199 0.198 0.228 0.216 0.238 0.241 0.268 0.283 0.273 0.276

Para la curva de calibración, dibujar la absorbancia media en el eje abscisas, versus la DQOTeorica en el eje de las ordenadas y determinar la ecuación de la recta (Figura 9).

44

1200.00 1000.00 800.00 600.00 400.00 200.00 0.00 0.000 y = 3489,1x + 53,611 R² = 0,9792

0.100

0.200

0.300

ABSORBANCIA

Figura 8. Curva de calibración DQO, absorbancia vs DQOTeorica. DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN DE DQO. 1. En tubos de borosilicato con tapa de rosca, adicionar 2.5ml de la muestra concentrada o diluida (la dilución de la muestra se hace necesaria cuando la DQO esperada es mayor que 800mg/l) o 2.5ml de agua destilada (para el blanco) o de las soluciones patrón preparadas para la curva de calibración. 2. Adicionar enseguida con ayuda de dispensadores 1.5ml de solución de digestión y vigorosamente 3.5ml de la solución de sulfato de plata en acido sulfúrico. 3. Cerrar herméticamente los tubos y agitar. 4. Colocar los tubos en el digestor a temperatura de 150ºC y dejarlos calentando por un periodo de 120 minutos. 5. Después enfriar y limpiar los tubos con papel absorbente humedecido con alcohol y en seguida secar. 6. Observar el espectrofotómetro ½ hora antes de la lectura y fijar la longitud de onda en 620ηm. 7. Reiniciar el equipo con la solución de la muestra para el blanco. Leer la absorbancia de la solución patrón y de las muestras.

45

10.

DEMANDA BIOQUIMICA DE OXIGENO DBO5 – MÉTODO Nº 5210

La Demanda Bioquímica de Oxigeno (DBO) es un método empírico en el cual su procedimiento es usado para determinar la cantidad de oxigeno relativo en aguas naturales, efluentes domésticos e industriales. El test de DBO es empleado para determinar los niveles de contaminación, evaluar cargas contaminantes y para evaluar la eficiencia de un determinado sistema de tratamiento. A. PRINCIPIO DEL METODO Gran parte de los organismos vivos dependen, directa o indirectamente del oxigeno para mantener sus proceso metabólicos que producen la energía necesaria para su crecimiento y reproducción. Se le llaman organismos aerobios a aquellos que dependen exclusivamente del oxigeno de forma libre para la mineralización de materia orgánica, resultando como producto final substancias inorgánicas más simples, tales como CO2, NH3, H2O, etc. La materia orgánica presente en aguas naturales y en los efluentes domésticos e industriales tienden a ser mineralizadas naturalmente por los microorganismos aerobios existentes, consumiendo oxigeno disuelto en el medio acuoso. El test de DBO tiene por objetivo, determinar esas cantidades de oxigeno consumido, y así mismo, relacionar con las cantidades de materia orgánica biodegradable presente en una muestra. Los métodos usualmente empleados para la determinación de la DBO es el de la dilución, incubación por un periodo de 5 días a 20ºC, con una determinación de los niveles iníciales y finales de oxigeno a través del método de Azida modificado. Para garantizar una mejor eficiencia en el metabolismo de los microorganismos desarrollados en el test es adicionado a el frasco de incubación, soluciones nutritivas y una solución buffer, con el fin de garantizar un pH neutro de 6.5 a 7.5 (Llamada agua de dilución). Es importante que durante los 5 días del test, la muestra se encuentre en un ambiente sin luz, a fin de evitar el aparecimiento de seres clorofilados fotosintéticos.

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B. EQUIPOS Y MATERIALES        Incubadora (Termo regulable). Frascos DBO. Pipetas volumétricas. Balones Volumétricos. Beaker. Erlenmeyer. Equipo de titulación (Bureta de 50mL).

C. REACTIVOS             Solución Buffer de Fosfato. Solución de Sulfato de Magnesio (MgSO4.7H2O). Solución de Cloruro de calcio (CaCl2). Solución de Cloruro Férrico (FeCl3). Agua de dilución. Inhibidor de Nitrificación Sulfito de Sodio. Cloruro de Cobalto. Solución Patrón de ácido glutámico/glucosa. Solución de sulfato Manganoso (MnSO4.H2O) Solución de álcali –Ioduro-Azida (AIA). Ácido Sulfúrico Concentrado. Solución Indicadora de Almidón.

D. PREPARACIÓN DE REACTIVOS Solución Buffer de Fosfato Disolver en aproximadamente 600mLde agua destilada, 8.5g de fosfato monobásico de Potasio (KH2PO4), 21.75g de fosfato bibásico de Potasio (KHPO4), 33.4g de Fosfato bibásico de sodio heptahidratado (Na2HPO4.7H2O) y 1.7g de Cloruro de Amonio (NH4Cl). Transferir para un balón volumétrico de 1L y completar el volumen con agua destilada, tal solución debe ser guardada en baja temperatura y en ausencia de luz. Solución de Sulfato de Magnesio (MgSO4.7H2O) Disolver 22.5g de sulfato de magnesio heptahidratado en aproximadamente 800ml de agua, transferir para un balón volumétrico de 1l y completar el volumen; tal solución debe ser guardada en baja temperatura y en ausencia de luz.

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Solución de Cloruro de Calcio (CaCl2) Disolver 27.5g de Cloruro de Calcio anhidro en aproximadamente 800ml de agua, transferir para un balón volumétrico de 1L y completar el volumen; tal solución debe ser guardada en baja temperatura y en ausencia de luz. Solución de Cloruro Férrico (FeCl3) Disolver 0.25g de Cloruro Férrico hexahidratado en aproximadamente 800ml de agua, transferir para un balón volumétrico de 1l y completar el volumen; tal solución debe ser guardad en bajas temperaturas y en ausencia de luz. Agua de dilución Adicionar en un garrafón previamente limpio y estéril agua destilada de acuerdo con las necesidades a ser empleada en la prueba. Mantener el contenido de este garrafón en aireación por un mínimo de 24 horas; dejar en reposo por aproximadamente 30 minutos y añadir al agua 1ml de cada una de las soluciones mencionadas anteriormente para cada litro de agua destilada usado. Solución Patrón de ácido glutámico/glucosa Disolver, previamente seco en estufa a 103ºC por 1hora, 150mg de glucosa y 150mg de ácido glutámico, en aproximadamente 800mL de agua destilada. Transferir para un balón volumétrico de 1L. Preparar semanalmente. Tal solución debe presentar una DBO teórica de 194mg/L (Siendo tolerado un desvió patrón de hasta +/-15%). Solución de sulfato Manganoso (MnSO4.H2O) Disolver 364g de sulfato Manganoso monohidratado (MnSO4.H2O) en aproximadamente 800mL de agua destilada, filtrar en papel de filtro Watman Nº4 y diluir en balón volumétrico de 1l. Solución de álcali –Ioduro-Azida (AIA). Disolver en aproximadamente 800mL de agua, 500g de Hidróxido de Sodio (NaOH), 135g de Iodeto de sodio (NaI) y diluir en 1L de agua destilada; adicionar 10g de Azida Sódica (NaN3), previamente disuelta en 40mL de agua destilada. Guardar en un frasco de PVC. Solución Patrón de Tiosulfato de Sodio (Na2S2O3.5H2O) 0.025N Disolver 6.205g de Tiosulfato de sodio pentahidratado con 1.5ml de Hidroxido de sodio 6N (o 0.4g de NaOH), en aproximadamente 800ml de agua destilada, transferir para un balón volumétrico de 1l y completar el volumen. 48

Normalización: Normalizar con 10ml de solución de Dicromato de Potasio (K2Cr2O7) 0.1N, 1ml de ácido sulfúrico concentrado y cerca de 80ml de agua. Se debe dejar por 6 minutos y en la oscuridad, en seguida adicionar con una espátula (+/-1g) de KI y titular la solución de Tiosulfato hasta que aparezca una coloración amarillo paja, en ese punto adicionar almidón y proseguir la titulación hasta que cambie de azul a incoloro. Calcular la normalidad real del tiosulfato: Na2S2O3= Solución Indicadora de Almidón Disolver 2g de almidón en 100 ml de agua destilada hervida, mezclar y dejarla sedimentar por una noche. E. PROCEDIMIENTO PREPARACIÓN DE LOS FRASCOS DBO 1. Dejar con jabón extran alcalino por 1 día. 2. Enjuagar varias veces con agua del grifo y en seguida con agua destilada. 3. Autoclavar los frascos a una temperatura de 120ºC y 1kg/cm2 de presión, por 30 minutos. 4. Dejar enfriar en lugar limpio y seco. 5. Almacenar en lugar limpio y seco. PROCEDIMIENTO DBO SIN INOCULO 1. Adicionar una muestra a los frascos preparados de DBO y completar hasta la tasa de dilución de acuerdo con la Tabla 7, hacer por lo menos 4 diluciones diferentes. 2. Anotar el número Nº y el volumen del frasco. 3. Adicionar si es necesario inhibidor de nitrificación. 4. Completar el volumen del frasco con agua de dilución evitando la formación de bolas y turbulencia. 5. Agregar a cada botella 1ml de sulfato manganoso y posteriormente 1ml de reactivo alcalino. 6. Tapar la botella y agitar 20 veces, luego agregar 1mL de acido sulfúrico concentrado (H2SO4) alrededor del cuello de la botella con mucho cuidado y volver a agitar por 20 veces. 7. Transferir 200mL de la muestra que se encuentra en la botella Winkler a un beaker y poner en agitación.

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Tabla 7. Tabla de Diluciones. Tasa de dilución (ml) 0.001 0.002 0.005 0.02 0.1 0.2 1 128000-130000 118000-125000 60000-115000 12000-42000 6000-21000 300-10000 600-2100 Rango de DQO Tasa de dilución Rango de DQO (ml) 2 5 10 20 50 100 300 300-1050 120-420 60-210 30-105 12-42 6-21 0-7

ODi - ODf ≥ 2mg/L; 1 ≤ ODf ≤ 6 mg/L. 8. Titular la muestra con Tiosulfato de Sodio 0.025N hasta que la muestra tenga un color amarillo paja y agregar 1mL de almidón. 9. Seguir titulando con Tiosulfato de Sodio 0.025N hasta que el color cambie de azul oscuro a transparente. 10. Medir el OD inicial. 11. Llevar a la incubadora la réplica de las botellas y después de 5 días de encubar medir OD final. F. CÁLCULOS OXIGENO DISUELTO Si la normalidad del Tiosulfato de Sodio es 0.025N el volumen gastado es la misma concentración de OD, sino utilizar la siguiente ecuación. ( )( )( )

50

PORCENTAJE DE REDUCCIÓN OXIGENO DISUELTO ( DBO SIN INOCULO ( ) ( ) ) ( )

Donde

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11.

CONSTITUYENTES ORGÁNICOS ABSORCIÓN-UV – MÉTODO Nº 5910

Algunos compuestos orgánicos comunmente encontrados en agua y aguas residuales, tales como la lignina, tanino, sustancias húmicas, y varios compuestos aromáticos, fuertemente absorbidos por la radiación ultravioleta (UV). Puede existir una fuerte correlación entre la absorción UV y el contenido de carbón orgánico, color y precursores de trihalometanos (THM) y otros productos de la desinfección. Este método se pretende ser empleado como una indicación de la concentración de los constituyentes orgánicos de abdorción-UV. A. PRINCIPIO DEL MÉTODO Los constituyentes orgánicos de absorción-UV de una muestra absorben la luz UV en proporción a su concentración. Las muestras son filtradas para controlar las variaciones en absorción UV causadas por partículas. El ajuste del pH es opcional. La absorción UV se mide a 253.7 nm (a menudo redondeado hasta 254 nm). B. EQUIPOS Y MATERIALES    Espectofotómetro Filtro de fibra de vidrio Bomba de vacio.

C. PROCEDIMENTO 1. 2. 3. 4. Filtrar al menos 50mL de muestra a través de la membrana filtrante. Preparar un blanco con agua destilada. Encender el espectofotómetro 15min antes de iniciar el ensayo. Ajustar a una longitud de onda de 240nm y ajustar en cero de absorbancia con el blanco de agua destilada. 5. Medir la absorbancia UV a 240nm al menos a dos porciones de la muestra filtrada a temperatura ambiente. D. CÁLCULOS Reportar el valor medio de absorción UV en unidades de cm-1 empleando la siguiente notación. Para reportar unidades en m-1 multiplicar la ecuación por cien.

52

[ ] Donde: UVλpH =Valor medio de absorción UV, cm-1 (el subíndice denota la longitud de onda, nm, y denota el pH empleado si es diferente de 7.0). b= Ā= D= longitud de la celda, cm. absorbacia media medida, y factor de dilución resultante del ajuste con agua destilada.

53

12.

MÉTODO PARA DETERMINAR METANO POR DESPLAZAMIENTO

A. PRINCIPIO DEL MÉTODO B. EQUIPOS Y MATERIALES        Equipos para venoclisis Botellas para digestión Recipientes de plástico Manguera Agujas Soportes Mallas

C. REACTIVOS   Hidróxido de Sodio (NaOH) 1N Fenolftaleina

D. PREPARACIÓN DE REACTIVOS Solución de Hidróxido de sodio (NaOH) 1N En un beaker limpio disolver 40 g de NaOH con agua destilada. Dejar enfriar y transferir la solución cuantitativamente para el balón volumétrico de 1000 ml. Completar el volumen del balón hasta la marca con agua destilada. E. ESQUEMA DEL MONTAJE

Figura 9. Montaje método por desplazamiento 54

F. PROCEDIMENTO

MÉTODO PARA DETERMINAR METANO POR DESPLAZAMIENTO

Agregar la solución de hidróxido de sodio 1 N en una botella para digestión.

Agregar 10 gotas de fenolftaleina.

Instalar el equipo para venoclisis en las botellas con la solución de NaOH y unirlas al biodigestor.

Unir con la ayuda de una manguera y aguja la botella para digestión con el recipiente plástico.

Colocar las botellas en las mallas y colgarlas de forma invertida en el soporte.

El volumen atrapado en el recipiente de plástico será el volumen de metano.

Si se torna transparente la solución SOLO se puede reutilizar si se agrega NaOH

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ANÁLISIS DE SUELOS
13. MÉTODO PARA DETERMINAR CALCIO Y MAGNESIO SOLUBLES EN SUELO

A. MÉTODO CUANTIFICACIÓN COMPLEXOMÉTRICA. B. EQUIPOS Y MATERIALES       Balanza analítica de 0.0001g de precisión. Materiales. Erlenmeyer de 125ml. Pipetas aforadas de 1.5 y 20ml. Microbureta de 10ml. Soporte universal.

C. REACTIVOS        Solución EDTA 0.02N. Solución patrón de Ca 0.02N. Solución amortiguadora cloruro de amino-hidróxido de amonio. Hidróxido de sodio 6N. Solución de carbamato al 1.5%. Indicador murexide. Indicador Negro de Eriocromo T.

D. PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS Solución EDTA 0.02N Pesar en un vaso de 250 ml 7.4448 g de sal disódica del ácido etilen-diamino tetraacético ( ), adicionar 100ml de agua destilada y agitar. Transvasar a un balón aforado de 2l y completar el volumen. Normalizar la solución estándar de ZnO 0.02N. Solución patrón de Ca 0.02N Pesar 1g de Cp., pasar cuidadosamente la muestra a un erlenmeyer de 250 ml de forma alta. Tapar el vaso con un vidrio de reloj y agregar poco a poco HCL al 10%. Hasta que cese la efervescencia. Llevar a sequedad en plancha caliente y disolver luego el residuo con HCL 0.01N. Pasar a un balón aforado de 1l y ajustar el volumen con el mismo ácido.

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Solución amortiguadora cloruro de amino-hidróxido de amonio Disolver 67.5g de cloruro de amonio en 570ml de hidróxido de amonio concentrado y llevar a 1l con agua destilada. Hidróxido de sodio 6N Disolver 240 g de NaOH, en 1l de agua destilada. Almacenar en frasco de plástico. Solución de carbamato al 1.5% Disolver 1.5g de sal del acido dietilditiocarbámatico en agua destilada y llevar a volumen de 100ml con agua destilada. E. PROCEDIMIENTO 1. Del filtrado proveniente de la muestra de agua tomar con una pipeta aforada una alícuota de 5ml y colocar en un Erlenmeyer de 125ml. Llevar muestra a control y blanco de proceso. 2. Diluir con 20 ml de agua destilada y agregar 5ml de solución de carbamato. 3. Agregar 1ml de hidróxido de sodio 6N y mezclar bien. Agregar 0.05g de indicador murexide. 4. Titular con EDTA 0.02N hasta que cambien el color de rosado a púrpura. 5. Consignar el número de ml de EDTA gastados. 6. Tomar una alícuota de 5ml con una pipeta aforada en un Erlenmeyer de 125ml. 7. Diluir con 20ml de agua destilada y agregar 1ml de solución buffer. 8. Agregar 5 gotas de solución de carbamato y agregar 0.05g de indicador negro ericromo T. 9. Titular con EDTA hasta que desaparezca el color vinotinto y se torne azul celeste o verde. 10. Anotar el número en ml de EDTA gastado. F. CÁLCULOS Se deben realizar los siguientes cálculos:

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(

)

(

)

Donde: V = Volumen de EDTA gastados en la titulación. N = normalidad del EDTA

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14.

MÉTODO PARA LA MEDICIÓN DE PH EN SUELOS

A. EQUIPOS Y MATERIALES  Potenciómetro.

B. REACTIVOS    Solución amortiguadora (Buffer) de ácido ftalato de potasio (0.05M). Solución de cloruro de calcio. Solución de cloruro de calcio (0.01M).

C. PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS Solución amortiguadora (Buffer) de ácido ftalato de potasio (0.05M) Se disuelven 10.21g (secado por una hora) de ftalato en agua y se diluye hasta 1l. El pH de esta solución deberá ser 4.0 a 20°C. Se protege la solución contra la evaporación y la contaminación de mohos. Se debe remplazar la solución en presencia de mohos. El efecto demuestra que el pH de la solución no cambia en los límites de temperatura de 5 a 37°C. Solución de cloruro de calcio Disolver 147 g de volumen con agua y mézclese. en agua, en un frasco volumétrico de 1l, enfriar, diluir su

Solución de cloruro de calcio (0.01M) Diluir en 20ml de solución de trabajo 1.0M deberá estar entre 5 y 7. D. PROCEDIMIENTO 1. Se coloca el suelo al aire para poder tamizarlo por un tamiz No. 10 (2mm). 2. Se pesan aproximadamente 10g de suelo seco al aire. Se coloca el suelo en un recipiente de vidrio y se añaden aproximadamente 20ml de 0.01M. se mezcla por 30 minutos y se deja reposar por 30 minutos. 3. Leer el pH del medidor. a 2l de agua. El pH de esta solución

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15.

MÉTODO PARA LA MEDICIÓN DE LA MATERIA ORGÁNICA EN SUELOS

A. EQUIPOS Y MATERIALES      Horno. Balanza (sensibilidad de 0.01g). Mufla. Crisoles o platos de evaporación. Desecadores.

B. PROCEDIMIENTO PREPARACIÓN DE LA MUESTRA 1. Se deberá tomar una muestra representativa, que pese al menos 100g, de una porción de material que pase el tamiz de 2mm. 2. Se coloca la muestra en un recipiente y se lleva al horno a una temperatura de 105°C para secarla hasta peso contante. Posteriormente se remueve la muestra del horno y se lleva a un desecador y se permite su enfriamiento. MEDICIÓN MATÉRIA ORGÁNICA 1. Se coge una muestra que pese aproximadamente de 10 a 40g, se coloca en crisoles tarados o en platos de evaporación de porcelana y se pesa. 2. Se coloca el crisol o el plato que contiene la muestra dentro de la mufla durante 6 horas a 445°±10°C. Se saca la muestra de la mufla, se coloca en un desecador y se permite su enfriamiento. 3. Se remueve del desecador la muestra y se pesa. C. CÁLCULOS El contenido orgánico deberá expresarse como un porcentaje del peso del suelo en el horno de la siguiente forma

Dónde: A = Peso del crisol más el suelo antes de la ignición. B = Peso del crisol o plato de evaporación después de la ignición. C = Peso del crisol. 60

ANÁLISIS MICROBIOLÓGICOS
16. TÉCNICA DEL FILTRO MEMBRANA PARA MIEMBROS DEL GRUPO COLIFORME

A. PROCEDIMIENTO DE FILTRO MEMBRANA PARA COLIFORMES FECALES Este procedimiento se realiza para determinar la densidad de bacterias fecales en una muestra de agua o suelo. Se trata de separar los microorganismos del agua por filtración a vacio a través de membranas filtrantes de 0.45 micras de tamaño de poro, y depositar las membranas con el residuo en cajas de Petri, que contienen un medio de cultivo M-FC para el crecimiento de los microorganismos que se desea determinar, en un soporte de papel de filtro. Todo el material que se utiliza debe estar esterilizado con el objeto de que no exista contaminación externa. El medio de cultivo propuesto es líquido ya que este medio tiene más facilidad para penetrar en los poros de las membranas y bañar la superficie de las mismas. B. EQUIPOS Y MATERIALES        Placas de cultivo. Unidades de filtración. Filtro de membrana diámetro de poro de 45 micras. Almohadillas absorbentes (Pads). Pinzas sin dientes esterilizados. Incubadora. Lupa para aumento.

C. REACTIVOS  Medio M-FC

D. PREPARACIÓN DE REACTIVOS Medio M-FC La necesaria uniformidad obliga a emplear medios deshidratados. Nunca se preparan medios a partir de sus ingredientes básicos, si se dispone de medios deshidratados adecuados.

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Para la rehidratación se siguen las instrucciones del fabricante. Para este caso y de acuerdo al producto que se tiene, se disuelve el 3.7g del polvo en 100ml de agua purificada o destilada, añadiendo 1ml de ácido rosólico al 1 por 100. Se debe calentar hasta casi ebullición y dejar enfriar. Luego ajustar si es necesario el pH a 7.4. El medio debe ser usado para un solo día, luego desecharlo. E. PROCEDIMIENTO 1. En el caso del suelo, en el laboratorio se debe tomar 5g del mismo en un tubo para centrifuga con 10ml de agua destilada y centrifugar a 2000 revoluciones durante 5 minutos. Luego tomar el sobrenadante como muestra para filtrar. 2. La selección del tamaño de la muestra dependerá de la densidad bacteriana que se espere, y estará limitada por el grado de turbidez o por el crecimiento de no Coliformes en el medio. Un volumen ideal de muestra es el que proporciona alrededor de 20 a 60 colonias fecales por membrana. 3. Se filtran 10 ml de cada muestra si la dilución es menor a estos. 4. A cada caja Petri debidamente esterilizadas se pone un pad y se impregna con la pipeta alrededor de 2 a 3 ml del medio M-FC, preparado como se ha descrito, hasta saturar el pad. 5. Se coloca con pinzas estériles un filtro de membrana estéril con la trama hacia arriba sobre la placa porosa del receptáculo, se sitúa la unidad de embudo sobre el receptáculo y se fija. Se filtra la muestra diluida o no según el caso y se hace un enjuague final con un poco de agua destilada. La filtración se lleva a cabo bajo un vacio parcial. 6. Luego se desconecta el proceso de vacío, se desbloquea y retira el embudo, inmediatamente se quita el filtro de membrana con unas pinzas estériles colocándolo sobre el pad impregnado con el caldo M-FC. 7. Se tapa cada caja y se voltea. Luego se llevan a incubación durante 24 ± 2 horas a 44.5°C ± 2°C. 8. Las colonias producidas por bacterias Coliformes Fecales en el medio M-FC presentan distintos matices de azul. Las colonias se cuentan a simple vista o mediante la lupa. F. CÁLCULO La densidad de Coliformes se presenta como el total de Coliformes Fecales por 100ml. Se calcula a partir de las cantidades de muestra que producen recuentos en FM dentro de los límites deseados de 20-80 colonias de Coliformes Fecales. Empleando la siguiente ecuación: ( )

62

ANÁLISIS BIOLÓGICOS
17. ENSAYO DE TOXICIDAD CON BULBOS DE CEBOLLA ALLIUM CEPA L

A. MÉTODO DE EVALUACIÓN DE INHIBICIÓN DEL CRECIMIENTO PROMEDIO DE LAS RAICES B. PRINCIPIO DEL MÉTODO Cuando un bulbo de cebolla (Allium Sp.) se rehidrata se produce una estimulación del crecimiento de las células, lo cual permite la elongación de las raíces de la planta. Sin embargo, cuando la hidratación se lleva a cabo en presencia de sustancias tóxicas, la división celular de los meristemos radiculares puede inhibirse, ya sea retardando el proceso de mitosis o destruyendo las células. Este tipo de alteraciones generalmente impide el crecimiento normal de la raíz, y por tanto su elongación (Fiskesjo 1985, 1993, 1997). C. EQUIPOS Y MATERIALES       Potenciómetro. Balanza analítica. Tubos de ensayo. Gradilla. Pipeta. Agitador.

D. REACTIVOS   Acido clorhídrico HCl. Sulfato Cúprico Pentahidratado CuSO4·5H2O. (Control positivo).

E. PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS Control negativo El control negativo se realizó con una muestra de agua de llave. Control positivo Se preparan tres diferentes soluciones de sulfato de cobre (CuSO4·5H2O) diluidas en agua así:

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Al 25% 25 mg/L Al 15% Al 5% Solución agua problema El agua problema consiste en el agua cuya toxicidad será analizada, en este caso en particular fue escogida el agua residual proveniente del Hospital Militar Central, tratada por medio de un reactor anaerobio de flujo ascendente y de biomasa inmovilizada, se analizó tanto el efluente como el afluente del sistema. El valor de pH de todas las muestras debe ser analizado y estandarizado en 7. De esta forma se descarta, que la inhibición en el crecimiento de la raíz pueda ser derivada de que tan acida o básica este el agua. Se realizaron dos tipos de controles el positivo, solución de sulfato de cobre con el fin de inhibir por completo el crecimiento de la raíz y por otro lado el control negativo, el cual no posee ningún componente causante de inhibición por esta razón usamos agua de la llave. Ambos controles se realizan con el fin de estandarizar la longitud de las raíces y determinar la toxicidad. F. PROCEDIMIENTO SELECCIÓN DE LOS INDIVIDUOS Los bulbos utilizados fueron cebollas Allium Cepa L, una planta bienal de la familia de las liliáceas. Sus hojas son semicilíndricas y nacen de un bulbo subterráneo, sus raíces son poco profundas. 1. Seleccionar los bulbos de las cebollas que estén libres de contacto con pesticidas, con un diámetro aproximado de 20 mm. 2. Cortar las raíces muertas. 15 mg/L 5 mg/L

64

Figura 10. Selección de los bulbos de cebolla MONTAJE DEL EXPERIMENTO 1. Retirar cuidadosamente la primera capa de piel de la cebolla, tomando cuidado de no lastimar la superficie donde crece la raíz.

Figura 11. Pelado de cebollas 2. Determinar los diámetros de las cebollas hicimos uso de un calibrador, con el fin de establecer una medida promedio y lograr uniformidad. 3. Medir el pH de las muestras. 4. Se exponen 12 bulbos a las muestras correspondientes, situando una por cada tubo con el área radicular en contacto con la solución por 72 horas (3 días). Positivo 1: Sulfato de cobre (CuSO4·5H2O) 25mg/L Positivo 2: Sulfato de cobre (CuSO4·5H2O) 15mg/L Positivo 3: Sulfato de cobre (CuSO4·5H2O) 5mg/L 65

Efluente Efluente Afluente

Figura 92. Exposición de bulbos con diferentes diluciones 5. Se debe reponer hasta 1.5mL por cada tubo cada 24 horas con la muestra correspondiente (por que se pierde por evaporación), ayudados de una pipeta Pasteur manteniendo las raíces inmersas. Los bulbos deben estar alejados de fuentes luminosas, además de permanecer a una temperatura constante de 20 0C. 6. Las raíces son medidas en papel milimetrado, aquellas que sean muy largas o muy cortas deben ser descartadas. G. CÁLCULOS Porcentajes de inhibición (Soluciones al 100%) % inhibición =
longitudmediacontro ln egativo  longitudmediamuestra *100 longitudmediocontro ln egativo

Calculo del CE50 – ensayo de toxicidad con Allium cepa L. De acuerdo con Fiskesjo (1993), el CE50 en el ensayo de toxicidad con Allium cepa L, significa, la dilución de la sustancia estudiada que permite el crecimiento de la raíz del 50% cuando comparada con el control negativo. El cálculo se realiza con la siguiente ecuación:

%crecimientoraiz 

longitudraiztratamientox100 % longitudmediacontro ln egativo

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En la Tabla 8 se tiene un ejemplo de cálculo para un experimento realizado aplicando ozono en diferentes tiempos de reacción. Tabla 8. Datos para cálculo del CE50 % crecimiento tratamiento 1 38,78 44,90 67,35 61,25 % crecimiento tratamiento 2 64,24 65,31 89,90 80,61 Dilución tratamientos (%) 100 50 25 12,5

La concentración CE50 se obtiene de forma grafica así.

100

Trat 1 Trat 2
75

Crecimiento de la raiz (%)

50

25

CE50=45%
0 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Dilucion muestra (%)

Figura 103. Determinación del CE50 para un ensayo de toxicidad utilizando Allium cepa L.

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BIBLIOGRAFÍA
APHA, AWWA, WEF. (2005). Standard methods for the examination of water & wastewater (21st ed.). Baltimore: Port City Press. ÇEÇEN, F. (1999). Investigation of sustrate degradation and nonbiodegradable portion in several pulp bleaching wastes. Water Science and Technology , 40 (11-12), 305-312. FUNASA. (2006). Manual práctico de análise de água (2a ed.). Brasília: Fundação Nacional de Saúde. IGAC. (2006). Métodos analíticos del laboratorio de suelos (6a ed.). Bogotá: Instituto Geográfico Agustín Codazzi.

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