La teora del microscopio

Leica es uno de los lderes mundiales en la fabricacin de microscopios que combinan alto rendimiento con diseo prctico. La lnea educacional ofrece microscopios de calidad, altamente resistentes que proporcionan los mejores resultados.

Leica DM E ptica corregida a infinito que proporciona una imagen de alta calidad Lmpara de 20W o 35W, fcil de intercambiar, de 2000 horas de duracin til. Fuente de alimentacin sensible al voltaje Sistemas avanzados de iluminacin crtica o Koehler, que pueden utilizarse con la ptica de mayor calidad y que son compatibles con toda la serie Leica DM Disponibilidad de gran cantidad de accesorios, como pe.: campo oscuro, polarizacin, contraste de fases, observadores mltiples, sistemas fotogrficos y de vdeo

Leica CM E Grandes prestaciones y ptica de alta calidad de la serie Leica E Objectivos de campo claro, acromticos y planacromticos y planacromticos de contraste de fases Lmpara Halgena de Tungsteno a 20W con una duracin de 2,000 horas sin prdida de color o intensidad

Leica BM E Grandes prestaciones y ptica de alta calidad de la serie Leica E Sistema de iluminacin con lmpara Halgena de Tungsteno a 12W con una duracin superior a 2,000 horas o sistema de fluorescencia a 7W con una duracin de 10,000 horas Gran variedad de accesorios de video y fotografia que proporcionan una alta flexibilidad Diseado para cumplir con todas las normativas elctricas internacionales

Leica ZOOM 2000 Imgenes tridimensionales de alta calidad Sistema ptico cerrado muy resistente Capacidad de zoom infinita sin perder enfoque Sistema eficaz de iluminacin triple

Leica sistemas de video Se puede elegir entre el cmara de vdeo Multipropsito Leica o la cmara de vdeo Leica de alto rendimiento Los distintos accesorios que se pueden acoplar al microscopio permiten diversificar las posibilidades de trabajo de los estudiantes

La teora del microscopio

1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0 15.0 16.0 17.0 18.0 19.0 20.0 Introduccin..............................................................2 Cmo funciona el microscopio .............................2 Los lmites del aumento .........................................3 El poder de resolucin ............................................3 La apertura numrica..............................................4 La profundidad de foco...........................................5 Aberraciones de la imagen....................................6 Aberraciones en el interior del microscopio ......9 Objetivos apocromticos......................................11 Diferentes tipos de oculares................................12 Observacin binocular..........................................14 El sistema de iluminacin.....................................14 Diferentes tipos de lentes condensadoras .......16 Iluminacin crtica .................................................17 Filtros selectivos ....................................................18 Iluminacin de campo oscuro .............................20 Luz polarizada.........................................................21 Fluorescencia .........................................................21 Microscopa de contraste de fases ...................22 Conclusiones ..........................................................24

1.0 Introduccin
El objetivo de este cuaderno es explicar al microscopista los rasgos fundamentales de la teora del microscopio con los detalles necesarios para que pueda comprender los principios tericos en los cuales se basan las tcnicas de microscopa reconocidas. Pensamos que estos conocimientos no slo aumentarn su inters por trabajar con el microscopio, sino que tambin le servirn a la hora de solucionar los problemas con los que se tenga que enfrentar en el futuro cuando tenga que recordar los conocimientos adquiridos en los aos de estudio. Se han evitado, en la medida de lo posible, las frmulas matemticas en favor de las explicaciones concretas o las representaciones grficas, ya que stas suelen entenderse con ms facilidad y retenerse mejor en la memoria, que las explicaciones basadas en la matemtica.

2.0 Cmo funciona el microscopio?

La Figura 1 muestra cmo funciona el sistema de lentes de un microscopio para producir una imagen aumentada de una muestra diminuta. Con la finalidad de simplificar el dibujo 3 aqu slo se ve el sistema de lentes del microscopio. Ms adelante veremos el sistema completo, inclusive el sistema de iluminacin, la lente condensadora, situada bajo la platina, y los espejos y prismas del interior del tubo binocular. En la figura 1, a la derecha, se ve el esquema del microscopio tradicional. La funcin del objetivo es comparable a la de una pequea lente de proyeccin. Sin embargo, en vez de proyectar la imagen en una pantalla, proyecta la imagen primaria aumentada del objeto hacia arriba, cerca del extremo superior del tubo del microscopio. Esta imagen primaria se forma en el aire y por lo tanto se denomina "imagen area. (La presencia de esta imagen podra visualizarse si se retirara el ocular y se instalara una pequea pantalla translcida en el plano de esta imagen area.). En la realidad, sin embargo, no utilizamos una pantalla sino que visualizamos esta imagen a travs del ocular. El ocular funciona prcticamente como una lupa, con la diferencia principal de que aumenta una imagen area en vez de un objeto real.
Figura 1
IMAGEN EN LA RETINAL IMAGE RETINA PUPILA EYEPOINT

EYEPIECE OCULAR

DIAFRAGMA DE FIELD CAMPO DIAPHRAGM

OBJECTIVE OBJETIVO

EJE OPTICO OPTICAL AXIS PLANO DEL OBJETO OBJECT PLANE OBJETO OBJECT
VIRTUALVIRTUAL IMAGEN IMAGE FIXED POWER MICROSCOPE MICROSCOPIO DE AUMENTOS FIJOS

La imagen final se forma en la retina del ojo, pero el ojo la percibe como si estuviera en el plano de la imagen virtual, situado cerca del pie del diagrama. Esta ltima imagen se llama 'imagen virtual' ya que los rayos de luz no provienen en realidad de esta imagen, tan slo parece que se originan all. Las lneas trazadas hacia ambos extremos de la imagen virtual estn punteadas para indicar que no se trata de verdaderos rayos de luz, sino slo de extensiones de los rayos reales. Los rayos verdaderos estn dibujados con trazo continuo entre el ocular y el punto focal. El trazar lneas punteadas ayuda a clarificar el hecho de que stas son extensiones de rayos reales. El aumento total del microscopio se produce en dos pasos. El inicial por medio del objetivo y el secundario por el ocular. El aumento total es el producto matemtico de ambos. Trabajando con un objetivo de 10x y un ocular de 10x, el aumento total es el producto de ambos, o sea 100x.

3.0 Los lmites del aumento

En realidad no hay un lmite mximo de aumentos en un microscopio, slo existe un lmite en cuanto a los aumentos tiles. La limitacin fundamental no consiste en el aumento sino en el poder de resolucin, o sea, la capacidad del microscopio de visualizar los detalles ms finos del objeto. Una vez que el objeto se ha aumentado hasta el punto en donde la imagen se vuelve borrosa, el hecho de aumentar el objeto an ms producir, debido al lmite del poder de resolucin, una imagen de tamao ms grande, pero tambin ms borrosa y sin visualizacin de ms detalles. Este tipo de incremento intil del aumento se llama "aumentos vacos, indicando que se trata de aumentos ms all del lmite til en cuanto a la reproduccin fiel de los detalles finos.

4.0 El poder de resolucin

El poder de resolucin de un microscopio por lo general depende del diseo del objetivo. Un objetivo capaz de aprovechar un gran cono angular de luz procedente de la muestra, tendr mejor poder de resolucin que un objetivo limitado a un cono de luz ms pequeo. Esto se aprecia mirando las imgenes comparativas, vase Figura 2. El objetivo que recibe un cono de luz mayor, proporciona una imagen que reproduce mucho mejor los detalles ms finos.

Figura 2 Microfotografas, ilustrando la dependencia del poder de resolucin de la apertura numrica (A.N.)

U-6 54 NA=N sin U=0.12

U-14 29 NA=N sin U=0.25

La imagen de un objeto puntiforme no es un punto, sino, debido al fenmeno de difraccin, una pequea mancha redonda de luz rodeada de aros luminosos (vase Figura 3). Este fenmeno fue investigado matemticamente por primera vez por el astrnomo Sir George Airy en 1834, quien demostr que la distribucin de la luz de esta forma (la cual se conoce hoy bajo el nombre de disco de Airy es de tal manera que el radio del primer aro oscuro (h' en la Figura 3) es una medida de la distancia resoluble dentro de la imagen. Adems puede demostrarse que esta distancia h en la imagen se corresponde en el objeto con una distancia h definida por la ecuacin: h = 0.61 A.N.

en la cual ( es la longitud de onda de luz (aproximadamente 0.0005 mm) y A.N. es la 'apertura numrica' del objetivo.
Figura 3 El disco de Airy. Microfotografa de un poro en un espejo de aluminio, tomada con un objetivo de 4mm, 0.65 A.N., el radio del primer aro oscuro h', es una medida del poder de resolucin

5.0 Apertura Numrico

La cantidad N sin U en Figura 2 se llama apertura numrica o A.N. de un objetivo. Por definicin: A.N. = N sin U, siendo N el ndice de refraccin en el espacio objeto. Dado que es una caracterstica muy importante de la lente, por regla general, los fabricantes marcan la A.N. en los objetivos. Cuanto mayor sea la A.N. tanto ms complejo y costoso ser el sistema de lentes. Por eso, a la hora de comprar un microscopio es aconsejable asegurarse de que las A.N. correspondan a las aplicaciones estndar del laboratorio. La ecuacin h = 0.61 A.N.

indica que el lmite factible de definicin h es inversamente proporcional a la A.N. del objetivo. Como indica la frmula anterior, existen tres mtodos para aumentar el poder de resolucin o, lo que es lo mismo, para disminuir la distancia resoluble h. El primer mtodo consiste en la disminucin de la longitud de onda (, el segundo en aumentar el ngulo U en el espacio objeto, (vase Figura 2), y el tercero en el incremento del ndice N en el espacio objeto.

Trabajando con filtros selectivos, la longitud de onda ( puede disminuirse acercndose al extremo del espectro de la longitud de onda violeta o corta. Por medio de una ptica y tcnicas especiales, este efecto puede extenderse a la longitud de onda ultravioleta, a fin de disminuir an ms los lmites factibles de definicin. La posibilidad de aumentar el ngulo U al mximo terico de los 90, (o sea, A.N. = 1,00) se ve limitada en la prctica. La lente apocromtica de A.N. 0,95 proporciona el valor U ms alto que todava resulta til. Valores de A.N. ms altos de 0,95 se consiguen por medio de lquidos de inmersin, como vamos a explicar en el prrafo siguiente. El mtodo final de disminuir la distancia resoluble consiste en incrementar el ndice N dentro del espacio objeto. Esto se consigue trabajando con "objetivos de inmersin en los cuales se aplica un lquido entre el portamuestras y la lente frontal del objetivo. El lquido de inmersin suele ser aceite (N = 1.52) aunque tambin suelen aplicarse de vez en cuando agua (N = 1.33) y bromuro de naftalina (N = 1.66). Por medio de los baos de inmersin, se han realizado objetivos con valores A.N.. hasta 1,60, pero se ha comprobado que el lmite til corresponde a un valor de A.N. de aproximadamente 1,40.

6.0 Profundidad de foco

Al enfocar un objeto por medio de un microscopio, hay un margen finito por encima y por debajo de este objeto, en el cual se visualizan ntidamente otros objetos. Este margen se llama profundidad de foco del microscopio y vara considerablemente en funcin de la A.N. del objetivo, segn la relacin: d = (N2 (NA)2 (NA)2

en donde d es la profundidad de foco para microfotografa. Para la visualizacin del objeto, hay que aadir ms profundidad, ya que el ojo es capaz de realizar un cierto grado de acomodacin. En este caso, la profundidad d es d = d + 250 M2

siendo M el aumento del microscopio. En esta ecuacin se asume que el ojo puede acomodar una imagen que se encuentra a una distancia de 250 mm. Si en la expresin anterior reemplazamos las incgnitas por nmeros concretos, resulta que a los tres objetivos ms comunes les corresponden las siguientes profundidades de foco. Objetivo
10x, 0,25 A.N. 40x, 0,65 A.N. 100x, 1,25 A.N.

Ocular
10x 10x 10x

Profundidad de foco
Para microfotografa Visual

0.0080mm 0.0010mm 0.0003mm

0.0335mm 0.0026mm 0.0005mm

7.0 Aberraciones de la imagen

El sistema de lentes perfecto an est por disear. Todos los sistemas de lentes tienen un nmero menor o mayor de aberraciones o defectos segn la habilidad del ingeniero constructor y segn la complejidad del diseo en cada caso concreto. Los sistemas de lentes estn compuestas por lentes individuales con superficies esfricas; y una de las caractersticas de las superficies esfricas es que no forman imgenes perfectas. El diseador de lentes, por medio de combinaciones inteligentes de formas de lentes y tipos de cristal consigue, por lo general, contrarrestar los defectos de una superficie aplicando defectos iguales u opuestos en otras superficies de forma que el resultado final se aproxime a la perfeccin, aunque nunca alcance la perfeccin total. Las aberraciones principales de una imagen formada por una lente esfrica son las siguientes: l. Aberracin esfrica Trmino aplicado para describir el hecho de que los rayos procedentes de un punto y que atraviesan la parte ms externa de la lente tienen distinto foco que los que pasan por el centro de la misma. Para superar este problema se realizan combinaciones de lentes convergentes y divergentes, diseadas adecuadamente con este propsito. La Figura 4 muestra la imagen de un objeto puntiforme, disco de Airy, afectada por aberracin esfrica. Comparando esta imagen con la Figura 3, se nota que debido a la aberracin esfrica algunos rayos de luz que deberan pasar por el centro han sido dispersados hacia fuera, a la estructura de aro. Esta difusin desfavorable causa una prdida de contraste en las preparaciones microscpicas ordinarias.
Figure 4 La apariencia del disco cuando hay aberracin esfrica.. Microfotografa tomada con un objetivo de 4mm, 0.65 de A.N., distanciado incorrectamente para mostrar como la distancia de las lentes repercute en la aberracin esfrica. Comprese con la Figura 3.

2. Astigmatismo se produce cuando objeto puntiforme situado fuera del eje se visualiza como dos imgenes lineales separadas, las cuales se encuentran a diferentes distancias de la superficie de la lente. Como en el caso de la aberracin denominada curvatura del campo, el resultado es un deterioro general de la imagen desplazada del eje, sin embargo, al contrario de lo que ocurre con la curvatura del campo, una imagen astigmtica nunca puede enfocarse de modo que resulte una imagen ntida, a excepcin de los detalles que son paralelos o perpendiculares al radio del campo.

En Figura 5 se ve el grave deterioro que sufre la imagen de un objeto puntiforme (poro) en un espejo de aluminio a causa del astigmatismo.
Figura 5 La imagen de un objeto puntiforme afectada por astigmatismo. Comprese con la Figura 3.

3. Coma se dice que una lente est afectada por coma cuando diferentes zonas circulares concntricas de la superficie de la lente proporcionan aumentos diferentes a una imagen desplazada del eje. Debido a este defecto, la imagen de un objeto puntiforme aparece en forma de cometa, y, como en las dos aberraciones anteriores, la imagen desplazada del eje ser de mala calidad. En la figura 6 se puede apreciar el grave deterioro que sufre la imagen de un objeto puntiforme debido a la aberracin de coma. Si en el centro del campo tenemos aberracin de coma, ser un claro ejemplo de que el objetivo est daado.
Figura 6 La imagen de un objeto puntiforme afectada por la aberracin de coma. Comprese con la Figura 3.

4. Distorsin

Es la aberracin que provoca que la imagen de un objeto rectangular se visualice con contornos curvados. Este defecto se puede observar en la Figura 7 que representa la imagen de un rayado cruzado rectilneo. Vase cmo las rayas prximas al contorno aparecen curvadas hacia el interior. Este fenmeno se conoce bajo el trmino "distorsin de almohadilla. Tambin se encuentra de vez en cuando el efecto contrario, es decir, las rayas aparecen curvadas hacia el exterior, en cuyo caso el efecto se llama "distorsin de barrilete. La distorsin se debe al hecho de que el grado de aumento en la superficie de la lente es diferente en el contorno y el centro de la imagen.
Figure 7 Distorsin en el sistema de lentes provoca que las lneas rectas aparezcan curvadas. Fjese en las lneas curvadas cerca del contorno.

5. Curvatura del campo Como su nombre indica, esta aberracin produce una imagen curvada de un objeto plano. Esto se debe a que el centro y los lmites de la imagen se enfocan a distancias distintas. Como consecuencia, cuando la parte central de la imagen est claramente enfocada los lmites del campo parecen quedar fuera del foco, y viceversa. La figura 8 muestra la imagen del mismo rayado cruzado que se ve en Figura 7, sin embargo, aqu la lente sufre de curvatura del campo.

Figura 8 Curvatura del campo. El centro est enfocado con nitidez, la periferia queda fuera del foco.

6. Aberracin cromtica Se debe a que la distancia focal de la lente vara con la longitud de onda. Este defecto se controla combinando adecuadamente los diferentes tipos de cristal que se utilizan en la fabricacin de las lentes convergentes y divergentes que forman el sistema de lentes. 7. Aberracin cromtica de aumento Se produce cuando los rayos de luz de un determinado color se proyectan con ms aumentos que los rayos de luz de otro color. Esta aberracin provoca que la imagen de un objeto puntiforme desplazada del eje sea diseminada en un espectro diminuto, fenmeno que se llama diseminacin de color.

8.0 Aberraciones en el interior del microscopio

De todas aberraciones, la esfrica es aquella que el microscopista mejor debera entender y saber controlar. La aberracin esfrica se manifiesta por prdida de contraste, dndole a la imagen una apariencia poco ntida. Suponiendo que se disponga de un microscopio de calidad, la presencia de aberracin esfrica por lo general indica que se est usando un cubreobjetos de grosor equivocado. El grosor apropiado de un cubreobjetos aparece en el exterior del objetivo, y se aconseja trabajar con ese grosor para obtener unos resultados ptimos. Esto es especialmente importante al trabajar con objetivos secos de grandes aumentos. La mayora de los objetivos est diseada para cubreobjetos de 0,17 mm de espesor, y toda divergencia notable de este grosor causa aberracin esfrica, especialmente con los objetivos secos de grandes aumentos, resultando en una imagen de bajo contraste y de apariencia borrosa. Astigmatismo Normalmente, slo est presente en la imagen desplazada del eje y, all, en escala muy limitada. En este caso es una caracterstica de diseo y no puede ser controlada por el microscopista. Si est presente en la imagen axial suele ser debido a mala calidad de los objetivos. Lo que acabamos de decir en el prrafo anterior tambin es vlido para las aberraciones de coma en la imagen desplazada del eje. Sin embargo, la presencia de aberracin de coma axial se debe a que algunas de las lentes que forman el sistema estn descentradas, lo que indicara que el microscopio, posiblemente, ha sido tratado de manera inapropiada. Distorsin Por lo general no suele ser un problema importante en el campo de la microscopa. Algunos de los sistemas antiguos de lentes divergentes que se usaban en microfotografa solan dar problemas de distorsin considerables, pero an en este caso, los tipos de objetivos ms comunes no exigan una correccin de distorsin muy sofisticada, y estas lentes habitualmente solan ser de una calidad bastante aceptable.

Curvatura del campo Tradicionalmente ha sido la aberracin ms difcil de eliminar a la hora de disear microscopios, siendo especialmente difcil en los objetivos de grandes aumentos cuyos elementos frontales de muchos aumentos enfrentaban al diseador con el problema prcticamente irresoluble de corregir la curvatura del campo. En los aos 50 y 60 de este siglo, varios fabricantes de microscopios disearon una variedad de objetivos, elaborados con esmero, que tenan buenas propiedades de correccin de campo plano y que se vendan a precios muy altos. En 1965, se introdujeron los objetivos de campo plano que reemplazaron los objetivos acromticos convencionales, dando comienzo a una nueva era en el diseo de objetivos para microscopios. En este nuevo diseo, una combinacin negativa de dos lentes de aumento 5x acta como componente comn a todos los objetivos. (Como asuma una parte del aumento este sistema 5x disminua las exigencias en cuanto a la capacidad de aumento de los objetivos y permita obtener imgenes de campo plano sin la complejidad extrema y los costes enormes de los sistemas ms antiguos). La figura 9 muestra los sistemas convencionales de objetivos acromticos los cuales, durante muchos aos, fueron los objetivos estndares usados en todos los microscopios de laboratorio. La figura 10, en comparacin, muestra los sistemas ms recientes de objetivos de campo plano en donde la combinacin de los lentes en la parte ms interna funciona como un sistema de lentes comn a todos los objetivos. Fjese en que en los objetivos de campo plano de mayores aumentos, el elemento frontal consiste en una gruesa lente de menisco, mientras que en los sistemas acromticos ms antiguos, el elemento frontal sola ser una lente semiesfrica que era la causa principal de las aberraciones de curvatura de campo en estos sistemas.
Figura 9 Algunos sistemas de objetivos acromticos.

CAMPO de 450mm 4.0X, A.N. 0.10 ACROMATICO

CAMPO de 5.20mm CAMPO de 1.80 mm CAMPO de 0.42mm CAMPO de 0.18mm 35X, A.N. 0.09 10X, A.N. 0.25 43X, A.N. 0.65 97X, A.N. 1.30 ACROMATICO ACROMATICO ACROMATICO ACROMATICO

Figura 10 Algunos sistemas de objetivos de campo plano.

OIL 4.50mm 450mm CAMPO deFIELD 4.0 X 0.09 N.A. 4.0X, A.N. 0.10 FLAT FIELD ACROMATICO 1.80mm 5.20mm CAMPO deFIELD 10 X 0.25 N.A. 35X, A.N. 0.09 FLAT FIELD ACROMATICO 0.90mm 1.80 mm CAMPO deFIELD 20 X 0.50 N.A. 10X, A.N. 0.25 FLAT FIELD ACROMATICO 0.45mm 0.42mm CAMPO deFIELD 4.0 X 0.65 N.A. 43X, A.N. 0.65 FLAT FIELD ACROMATICO 0.18mm 0.18mm CAMPO de FIELD 100 X 1.25 N.A. 97X, A.N. 1.30 FLAT FIELD ACROMATICO

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Chromatic aberration is normally not present to any appreciable degree in a well made microscope, whereas lateral color may often be found, particularly where the incorrect combination of objective and eyepiece is used. With the older achromatic series, Figure 9, the correction for lateral color was different from one objective to another, so that one usually compromised on lateral color in selecting an eyepiece for this series. With the new flat-field series, Figure 10, the degree of correction for lateral color is constant, and one eyepiece serves for the entire series. Note that the 4X objective in the flat-field series is more complex than its counterpart in the achromatic series. This is due to the design requirement that the entire series should have the same lateral color correction.

9.0 Objetivos apocromticos

Hace ya bastante tiempo se descubri que los objetivos que combinaban lentes de fluorita y de cristal proporcionaban mejores resultados que los objetivos acromticos, los cuales consistan nicamente en objetivos de cristal. Este tipo de objetivos pronto se conoceran como "fluoritas. Los fluoritas de vez en cuando se llaman tambin "semi-apocromticos ya que su capacidad de correccin se sita entre la de los acromticos y la de los apocromticos. Los objetivos apocromticos son superiores a los acromticos en cuanto a su capacidad de correccin tanto para aberracin esfrica como para aberracin cromtica y tambin tienen algunos elementos realizados en fluorita. Su A.N. suele ser algo mayor, y por consecuencia, su poder de resolucin superior. Vase figura 11 - muestra un serie de cuatro objetivos apocromticos que se pueden comparar con los de la Figura 9. Los elementos sombreados en la figura 11 corresponden a objetivos de fluorita.
Figura 11 Varios sistemas de objetivos apocromticos.12

OIL

CAMPO de 1.8 mm 10X, 0.30 N.A. APOCHROMAT 10X, A.N. 0.30 APOCROMATICO

FIELD 1.8MM

CAMPO deN.A. mm 20X, 0.65 0.9 APOCHROMAT 20X, A.N. 0.65 APOCROMATICO

FIELD 0.9MM

CAMPO de N.A. mm 47X, 0.95 0.38 APOCHROMAT 47X, A.N. 0.95 APOCROMATICO

FIELD 0.38MM

CAMPO1.400.30 mm 61X, de N.A. APOCHROMAT 61X, A.N. 1.40 APOCROMATICO

FIELD 0.30MM

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10.0 Diferentes tipos de oculares

Como explicamos en los primeros captulos, el ocular es bsicamente una lupa que aumenta la imagen formada por el objetivo. El ocular ms comn y a la vez menos costoso es el de Huygens, (figura 12), que lleva el nombre de su inventor, Christian Huygens, un famoso cientfico holands del siglo XVII. El ocular de Huygens funciona bien con los sistemas de campo plano y con los objetivos acromticos de bajos aumentos, pero presenta problemas de aberracin cromtica de aumento cuando se usa en combinacin con objetivos acromticos de grandes aumentos o con objetivos apocromticos. Por otro lado, el tamao de campo que proporciona es pequeo y la distancia focal es corta. No obstante, a pesar de estas imperfecciones, se usa frecuentemente ya que es econmico y, por lo general, proporciona una imagen muy fiel.
Figura 12 Construccin general del ocular de Huygens.
RE AZD BLU UL E

AZ REDUL BLUE RO JO

ROJ O

El ocular de Huygens utiliza dos lentes simples para corregir la aberracin cromtica de aumento. La luz que atraviesa la primera lente, llamada "lente frontal, se dispersa en un espectro limitado por el color rojo en un extremo y por el azul en el otro. Sin embargo, si las dos lentes estn situadas a la distancia apropiada, la luz roja incide sobre la segunda lente, llamada "lente ocular, a una distancia tal del punto de incidencia de la luz azul que la dispersin angular entre los rayos rojo y azul queda compensada y , en consecuencia, los rayos emergen paralelos tal como puede apreciarse en la Figura 12. Finalmente, en el ojo, enfocado al infinito, los rayos rojo y azul se unen formando una imagen sin color. El ocular de gran campo, diseado originalmente para microscopios estereoscpicos o Zoom, se modific posteriormente para funcionar con los microscopios de laboratorio convencionales. Este ocular est reemplazando paulatinamente el ocular de Huygens ya que su campo visual es ms amplio y tiene una mayor distancia focal, lo que permite una operacin ms ergonmica. Su poder de correccin de la aberracin cromtica de aumento es similar al del ocular de Huygens, y por lo tanto funciona bien con los objetivos de campo plano. Existe una versin especial de este ocular para trabajar con los microscopios esteroscpicos y obtener una correccin ptima de la aberracin cromtica de aumento en esta aplicacin. En la figura 13, se pueden observar las dos versiones del ocular de gran campo, el uno para microscopios de aumentos fijos y el otro para los microscopios Zoom.

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AZU RED L
L ROUE JO B

Figura 13 Dos tipos de oculares de gran campo. El inferior tiene un doblete adicional para la correccin de la aberracin cromtica de aumento para que funcione de forma ptima con los microscopios Zoom.

AZUL BLUE ROJO

RED

RED U Z L BLU R E

OJO

Los oculares hiperplanos y los oculares compensadores, vase Figura 14, son similares en construccin al ocular de Huygens, con la excepcin de que su lente ocular consiste en un doblete. Esta construccin, como se ve en el dibujo, proporciona mayor correccin para la aberracin cromtica de aumento. Los oculares compensadores son los mejores en cuanto a la correccin de esta aberracin. La capacidad de correccin de los oculares hiperplanos se sita entre la del ocular de Huygens y la de los oculares compensadores. Observe en la Figura 14 que los rayos rojos y azules que forman la imagen primaria no coinciden esto se debe a que el objetivo no est suficientemente corregido para la aberracin cromtica de aumento. Esta imperfeccin es compensada por el ocular, de donde los rayos rojos y azules emergen paralelos produciendo una imagen libre de color en la retina del ojo. Tanto los oculares hiperplanos como los compensadores de grandes aumentos son ms complejos que los dibujos esquemticos de la figura 14.
Figure 14 Construccin general de lus oculares compensadores de bajos aumentos.

AZUE BL UL
D ROJO RE

AZ IMAGENGE UL BLUE IMA RED IMAGEROJA IMAGEN

En microfotografa se usan con frecuencia sistemas de lentes divergentes (negativas) especiales en vez de los oculares tradicionales. En estos sistemas no hay formacin de una imagen intermedia como en los oculares estndar. En vez de eso, la imagen se capta antes de llegar al plano focal y se proyecta hacia fuera, en la pelcula fotogrfica. Los sistemas de lentes divergentes tpicos son los llamados ultraplanos, y estn disponibles en tres grados de correccin para cromatismo de aumento, se utilizan con cmaras fotogrficas externas y con un amplio rango de objetivos, desde los acromticos de bajos aumentos hasta los apocromticos de grandes aumentos. Las cmaras modernas integradas tambin funcionan con el sistema de lentes divergentes. En este caso, el sistema est corregido para ser usado con todos los objetivos de campo plano, est permanentemente centrado y parfocalizado con el sistema de visin binocular que se puede usar como dispositivo de mira de enfoque para la cmara.

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11.0. Observacin binocular

Hasta aqu slo hemos considerado los microscopios monoculares. Para uso durante perodos largos, es preferible un sistema binocular e inclinado ya que permite una posicin de observacin ms natural y, por lo tanto, ms cmoda. En la figura 15 se observa la seccin lateral de un microscopio binocular. La visin binocular se obtiene por medio de un prisma divisor de rayos y de tres espejos. Este sistema divide la luz a partes iguales, dirigiendo la mitad al ojo izquierdo y mitad al ojo derecho. Los espejos llevan un revestimiento especial de aluminio, que consiste en una capa de aluminio recubierta por varias capas de un material transparente para aumentar la capacidad de reflexin y a la vez proteger el aluminio. Para evitar que el polvo entre en el tubo binocular, se emplean dristales protectores hermticos.

12.0 El sistema de iluminacin

El sistema de iluminacin es otra de las partes integrantes del microscopio. La iluminacin da al usuario mayor cantidad de posibilidades de influir sobre la capacidad funcional de microscopio, pero a la vez es la parte del microscopio de la cual menos se sabe. Se ha explicado en los captulos anteriores que la capacidad de resolucin depende de la A.N. del objetivo. Para poder aprovechar un objetivo al mximo la lente condensadora tiene que ser capaz de producir un haz luminoso del tamao mximo que el objetivo es capaz de aprovechar. Con esto no queremos decir que la A.N. del objetivo deba iluminarse siempre por completo. Por lo general, no se trabaja con la mxima iluminacin que permite la A.N., ya que, cuando la A.N. de iluminacin es casi igual a la A.N. mxima del objetivo, se disminuye el contraste. En cuanto a la A.N. que hay que iluminar, cada muestra tiene sus propias leyes. En las muestras de contraste alto con detalles diminutos se debera iluminar la A.N. por completo, pero si la muestra tiene poco contraste se debe disminuir el cono de iluminacin de la A.N. para impedir que la imagen quede borrosa debido al poco contraste. El cono de luz que ilumina la A.N. se controla por medio del diafragma de iris ubicado debajo de la platina. Es instructivo retirar el ocular y observar la lente posterior del objetivo mientras se abre y cierra el diafragma iris. Se visualizar una imagen ntida del iris cerca de la lente posterior del objetivo. La A.N. est totalmente iluminada si se abre el diafragma de iris justamente lo suficiente para que incluya la A.N.. mxima del objetivo. Un error cometido con frecuencia por los principiantes en la microscopa consiste en limitar excesivamente la A.N.. Con esto se consigue muy buen contraste, pero al mismo tiempo se empeora la capacidad de resolucin. La prdida de los detalles finos no se nota tan fcilmente como el aumento de contraste. La limitacin excesiva de la A.N. iluminada tambin causa alteraciones en la imagen a causa de la difraccin. El microscopista experto sabe que

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Figura 15

15

el ajuste ptimo de la A.N. iluminada corresponde al mejor compromiso entre poder de resolucin y contraste. Si un microscopio tiene diafragma iris, ste se debe usar para controlar el tamao del campo visual iluminado de la muestra. La lente condensadora debe ajustarse de modo que se forme una imagen ntida del iris en el plano de la muestra. Entonces debe ajustarse el tamao del diafragma de modo que est justamente fuera del campo visual del microscopio.

13.0 Diferentes tipos de lentes condensadoras

La funcin de la lente condensadora es dirigir sobre la muestra un haz luminoso de la A.N. y del campo deseados. Existen varios tipos de condensadores, tres de los cuales se muestran en la Figura 16. El condensador de Abbe tiene una A.N. de 1.30 y est formado slo por dos lentes. Debido a su diseo sencillo y su buena capacidad de captacin de luz, se usa mucho para las aplicaciones de microscopa general. Por supuesto, no est corregido para aberracin esfrica o cromtica, pero sirve perfectamente para aplicaciones de observacin estndar. Hay condensadores que incorporan una lente abatible que puede retirarse para disminuir los aumentos del condensador e iluminar un campo visual ms amplio. Cuando la lente abatible no se desplaza la A.N. es ms alta y se puede utilizar con objetivos de grandes aumentos sin deterioro de los resultados. Con el fin de adaptar el rendimiento del condensador a los distintos objetivos se puede utilizar un condensador de foco variable que est formado por dos lentes y tiene una A.N. mxima de 1.30. La lente superior est fija mientras que la inferior es enfocable. Con este sistema es posible iluminar por todo el campo de los objetivos de bajos aumentos sin que sea necesario quitar la lente abatible. Esta lente condensadora es muy similar al condensador de Abbe de A.N. de 1.30. Al bajar la lente enfocable, el plano focal de la luz se introduce entre los dos elementos y, cuando este foco se encuentra en el punto indicado en el diagrama, la luz sale en forma de haz paralelo de gran dimetro. El condensador acromtico tiene una A.N. de 1.40 N.A. y est corregido tanto para aberracin cromtica como para aberracin esfrica. Por su excelente poder de correccin se recomienda para la microscopa de investigacin y para la microfotografa de color, en ambas aplicaciones se desea la mayor perfeccin posible en la imagen. Como recordarn, ya hemos visto al tratar el tema de los objetivos que trabajan en inmersin, que para obtener unas A.N. superiores a 0.95 es necesario introducir aceite de inmersin entre el sistema de lentes y el portaobjetos. Una gota de aceite de inmersin, aplicada sobre la superficie inferior del portaobjetos o sobre la superficie superior de la lente condensadora, incrementa la A.N. del condensador. Habitualmente no se requiere la inmersin del condensador, pero es necesaria en aplicaciones especiales para obtener resultados ptimos.

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OBJECT SLIDE

PORTAMUES TRAS

PORTAMUES OBJECT TRAS SLIDE ELEMENTO STATIONARY ELEMENT FIJO

PORTAMUES TRAS

OBJECT SLIDE

Figura 16 Diferentes tipos de lentes condensadoras

ELEMENTO ENFOCABLE
FOCUSABLE ELEMENT

Condensador de Abbe

Condensador de enfoque variable

Condensador acromtico

14.0 Iluminacin crtica

La iluminacin crtica es la forma de iluminacin en la que la fuente de luz se proyecta en el plano de la muestra. Se aplica en la microscopa de alto poder de resolucin, en la microproyeccin, y en la microfotografa, donde se necesita un haz de luz intenso y controlado. La iluminacin crtica se consider la mejor durante muchos aos, ya que las primeras consideraciones tericas indicaban que este tipo de iluminacin debera permitir una capacidad de resolucin ms alta que otras formas de iluminacin. Esta hiptesis se fund en la teora de que dos puntos en una muestra que se hallen muy prximos podan separarse mejor si su fondo iluminado no tuviera una relacin de fase punto a punto. La iluminacin crtica proporciona el tipo de fondo deseado puesto que proyecta directamente la fuente de luz en la muestra y los distintos puntos que componen la fuente de luz tienen la distribucin de fase completamente aleatoria, caracterstica de la emisin trmica. Con los aos, la iluminacin crtica ha sido reemplazada poco a poco por otra forma de iluminacin intensa, la llamada iluminacin de Koehler. Los dos sistemas se muestran en la Figura 17.

SOURCE IMAGED IN SPECIMEN PLATE

Figura 17 Esquema de las iluminaciones crtica y Koehler

CRITICAL ILLUMINATION

LAMP CONDENSER IMAGED IN SPECIMEN PLANE FIELD DIAPHRAGM SOURCE IMAGED IN APERATURE DIAPHRAGM

KOEHLER ILLUMINATION

17

La iluminacin de Koehler tiene ciertas ventajas sobre la iluminacin crtica por lo cual ha ido reemplazndola poco a poco. Por ejemplo, el sistema Koehler permite incluir el control del diafragma de campo. Otra ventaja del sistema de iluminacin Koehler estriba en que la distribucin desigual de energa en la fuente de iluminacin no resulta en intensidad de iluminacin desigual en el campo visual ya que la fuente se proyecta en el diafragma de apertura. Por estas ventajas prcticas, la iluminacin crtica ha sido reemplazada gradualmente por la iluminacin de Koehler, y cuando M. Berek comprob que los dos sistemas son tericamente equivalentes en cuanto a capacidad de resolucin, el ltimo argumento en favor de la iluminacin crtica fue eliminado. Muchos microscopios modernos tienen sistemas de iluminacin integrados. Estos sistemas estn precintados para que no haga falta ningn ajuste por parte del microscopista. En la mayora de los casos funcionan con lmparas incandescentes de baja tensin con las cuales se obtiene un alto nivel de luminosidad. En cuanto a la ptica, estos sistemas son equivalentes a la iluminacin de Koehler, cuyo esquema aparece en la parte inferior de la Figura 17.

15.0 Filtros selectivos

El contraste de la imagen de una preparacin microscpica de colores puede controlarse por medio de filtros coloreados o selectivos. Si, por ejemplo, en la preparacin microscpica hay zonas rojas y azules, el uso de un filtro rojo, que absorbe el azul pero no el rojo, va a ensombrecer las zonas azules, lo que har aparecer las zonas rojas en un color muy brillante comparadas con las zonas azules. Este tipo de control de contraste es especialmente til en microfotografa, por lo que los equipos de microfotografa casi siempre se suministran con un juego de filtros selectivos. En el pasado se han usado principalmente filtros coloreados de cristal y de gelatina, pero existe otro tipo de filtro que funciona segn el principio de interferencia y que tiene ciertas ventajas sobre los filtros ms antiguos. Este filtro se va a describir en el prrafo siguiente. Los filtros de interferencia aprovechan el principio de la interferencia ptica con la finalidad de conseguir transmisin ptica selectiva o coloreada. El principio se puede ver en la Figura 18. En la parte superior de este esquema vemos que la adicin de dos ondas sincronizadas da lugar a una sola onda aditiva. En la situacin recproca, en donde las ondas estn totalmente desfasadas, se ve que el resultado es interferencia destructiva, o sea, oscuridad. Por lo general el primer caso resulta ms fcil de entender que el segundo. Sin embargo, la idea de la "destruccin de una energa por medio de otra queda ms clara si se aplica el trmino 'redistribucin' de energa en vez de 'destruccin'. En realidad, la energa reaparece en otro lugar. Por ejemplo, si a causa de una interferencia destructiva disminuye la energa transmitida en una superficie, al mismo tiempo aumentar la energa reflejada. Con el filtro de interferencia se utiliza este principio para obtener interferencia constructiva en una banda estrecha dentro del espectro visual, mientras que para el resto del espectro se produce interferencia destructiva, de modo que slo una banda estrecha de luz coloreada atraviesa el filtro. El filtro consiste en dos capas semitransparentes de plata

18

separadas por una capa fina de un material transparente (habitualmente fluoruro de magnesio). El grosor de la capa transparente est controlado de forma que reflexiones mltiples entre las capas de plata generen una interferencia constructiva para una determinada longitud de onda. El grosor seleccionado es justamente demasiado grueso para generar interferencia constructiva de las longitudes de onda ms cortas y demasiado fino para producir interferencia constructiva de longitudes de onda ms largas. El resultado es que slo las longitudes de onda muy similares a la longitud de onda deseada pasan a travs del filtro. La curva de transmisin espectral de un filtro de interferencia tpico se ve en Figura 18.
Figura 18 Los filtros de interferencia aprovechan el principio de interferencia ptica para obtener una transmisin selectiva o coloreada.

INTERFERENCIA CONSTRUCTIVA (ADITIVA)

A+ A=2A
A+ A=2A

CONSTRUCTIVE (ADDITIVE) INTERFERFENCE

2A

NTERFERENCIA DESTRUCTIVA (SUBSTRACTIVA)

A- A=0 CERO
A- A=0

CERO
ZERO

DESTRUCTIVE (SUBTRACTIVE) INTERFERFENCE

30

20

10

0 400m

500m

600m

700m

19

16.0 Iluminacin de campo oscuro

En la Figura 19 se ven dos tipos de condensadores de campo oscuro. Estos condensadores producen un cono hueco concentrado con punto vrtice (o focal) en el plano de la muestra. Si la muestra es completamente transparente y homognea, la luz la atraviesa y no entra en el objetivo, ya que la A.N. del haz de iluminacin es superior a la del objetivo. El campo visual aparecer entonces oscuro. Sin embargo, si dentro de la muestra hay detalles finos transparentes cuyo ndice de refraccin es diferente al del medio de inclusin, la luz va a ser difractada y aparecern iluminados ya que una parte de la luz difractada incidir sobre el objetivo. ste mtodo de iluminacin, llamado "de campo oscuro es til sobre todo al trabajar con materiales transparentes y sin teir que no se logran visualizar en campo claro debido al bajo contraste de estas muestras. En la figura 20 se ve una microfotografa de una muestra de este tipo adquirida con iluminacin de campo oscuro
Figura 19 Dos tipos de condensadores de campo oscuro. Cada uno de ellos produce un intenso cono hueco de luz de A.N. superior a la del objetivo de forma que las muestras slo se visualizan por medio de la luz que difractan.

OBJECTIVE

OBJECTIVE

OBJECT

OBJECT

PARABOLOID CONDENSER

CARDIOD CONDENSER

Figure 20 Emulsin aceite sulfonado en campo oscuro. Microfotografa tomada por G.G. Schneider.

Los condensadores de campo oscuro dependen del uso de un cono luminoso hueco de una A.N. alta, y deben conectarse a la cara inferior del porta por medio de aceite de inmersin para obtener la A.N. necesaria en el cono iluminado. Por supuesto tambin es necesario emplear un objetivo con una A.N. algo inferior a la A.N. que ilumina el condensador de campo oscuro para evitar que luz directa entre en la imagen. Los objetivos de A.N. superior a 1,0 tienen que estar equipados con un diafragma adecuado para A.N. a 1,0. Este diafragma se inserta en la parte posterior del objetivo para reducir la apertura en la superficie posterior de la lente.

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La eficacia de un sistema de campo oscuro depende tambin de que el haz de luz luminoso sea intenso y no dispersado, para ello se utiliza una fuente luminosa homognea y brillante, como pe. un filamento incandescente.

17.0 Luz Polarizada

La energa de la luz se transmite por ondas, conocidas como 'ondas transversales'. Esto quiere decir simplemente que las ondas oscilan en ngulo recto a la direccin de transmisin de la luz. Por regla general, las ondas oscilarn en todos los planos del espacio, siempre en ngulo perpendicular a la direccin de transmisin. Sin embargo, es posible restringir la oscilacin a un solo plano por medio de unos dispositivos conocidos por "polarizadores. Si se insertan dos de estos polarizadores en el haz luminoso, de manera que el segundo transmite la luz en un ngulo perpendicular a la direccin de transmisin del primero, la luz se extinguir. Esta disposicin de polarizadores se llama "polarizador de prismas cruzados. Sin embargo, si insertamos un objeto cristalino entre los dos polarizadores cruzados, ste va a aparecer luminoso sobre el fondo oscuro causado por los polarizadores cruzados. Adems, va a aparecer alternativamente ms brillante y ms oscuro con cada 90 de rotacin alrededor del eje ptico del microscopio. Este fenmeno se debe a que materias cristalinas, en general, muestran propiedades diferentes en direcciones diferentes, y como consecuencia cambian el estado de polarizacin de la luz y de hecho "descruzan los polarizadores. Esta forma de iluminacin da resultados excelentes en el estudio de componentes qumicos y minerales cristalinos. Con este mtodo, se pueden obtener colores magnficos y muy vivos.

18.0 Fluorescencia
Una muestra se llama fluorescente, si, al ser irradiada con luz de un determinado color, emite a su vez luz de otro color. Como la fluorescencia suele ser bastante dbil, se necesita un fuente luminosa de mucha intensidad junto con filtros especiales para acentuar la imagen fluorescente. Como fuente de iluminacin se usa normalmente una lmpara de vapor de mercurio a alta presin, la cual tiene un nmero de lneas de emisin fuertes en la zona espectral de entre 300 y 600 nm. La mayor parte del espectro visible se filtra a travs de filtros "filtros de excitacin que estn situados en el haz luminoso y que slo son atravesados por aquellas longitudes de onda necesarias para excitar la fluorescencia de la muestra. Como el filtro de excitacin no elimina completamente la energa visible de color azul oscuro y violeta, dentro del sistema de formacin de la imagen (es decir, despus de que la fluorescencia haya tenido lugar), se aplica otro filtro, llamado filtro supresor, que elimina las ondas azules y violetas, pero deja pasar las radiaciones de longitud de onda ms larga, emitidas por la muestra.

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Otro mtodo de eliminar los colores azul y violeta no deseados, consiste en el empleo de iluminacin de campo oscuro, de forma que no pase luz directa de ninguna longitud de onda. Mediante la combinacin de los filtros supresores con la iluminacin de campo oscuro, se consigue eliminar prcticamente todo el fondo no deseado de luz azul-violeta.

19.0 Microscopa de contraste de fases

Una muestra microscpica normal se visualiza porque su densidad vara de unas zonas a otras. Es muy difcil ver los detalles de una muestra completamente transparente con iluminacin de campo claro ya que todas las zonas son de la misma densidad. Sin embargo, no todas tienen el mismo ndice de refraccin. El ndice de refraccin provoca alteraciones en la fase de la onda, pero las diferencias debidas a los cambios de fase segn las zonas no son perceptibles por el ojo humano. La iluminacin de campo oscuro ilumina los contornos de este tipo de muestras totalmente transparentes gracias a la dispersin de los bordes y a la difraccin. Cuando se trata de muestras transparentes con propiedades direccionales o cristalinas tambin es til trabajar con luz polarizada. Sin embargo, hay otra forma de iluminacin, conocida bajo el nombre de contraste de fases, que permite observar los medios transparentes y que se usa mucho para estudiar muestras transparentes vivas, a las que no se pueden aplicar los mtodos de tincin necesarios cuando se trabaja con iluminacin estndar. El contraste de fases se basa en el hecho de que cuando interfieren ondas que tiene un determinado desfase, dependiendo del desfase se producir una interferencia constructiva o substractiva que en el caso de que el desfase sea de media longintud de onda da lugar a la oscuridad total. El objetivo ser manipular el desfase de los dos haces de luz para obtener el resultado deseado. El contraste de fases, bsicamente, es un mtodo de iluminacin que trata una determinada porcin de la luz (la que ha sufrido difraccin al atravesar el objeto) de forma diferente al resto (la que no ha sufrido ninguna alteracin) para, a continuacin, provocar que la primera porcin de la luz interfiera con el resto, de manera que resulte una imagen visible de una muestra transparente. El sistema necesario para el contraste de fases se muestra en Figura 21. En el plano focal del condensador se coloca un diafragma anular que proyecta en el infinito la imagen de un haz anular. Esta imagen es proyectada por el objetivo en su plano focal posterior. A su vez, en el plano focal posterior del objetivo, se coloca una lmina que contiene un anillo, llamado anillo de fase, construido de forma que la luz que pase a travs de l (la luz no difractada) sufra un disminucin en intensidad y un desplazamiento de fase de un cuarto de longitud de onda en relacin con la luz difractada, (el resto de la lmina est compuesta por un material que no genera ningn tipo de alteracin en la luz que lo atraviesa). El efecto final es que la imagen formada por el haz no difractado al interferir con la luz difractada simula la imagen de una muestra que tuviera variaciones de densidad en lugar de variaciones de ndice de refraccin.

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Plano de la imagen Image Plane

Plano focal posterior Rear Focal Plane of Objective del objetivo

Objective objetivo Undiffracted Order Parte del haz no difractada Diffractedhaz no difractada Parte del Orders

Specimen Planemuestra Plano focal de la

Condenser Condensador

Light Source Fuente luminosa

Figura 21 Formacin de la imagen por contraste de fases. Una diafragma anular, situado en el plano focal del condensador, controla la iluminacin de la muestra. La imagen de la apertura se forma, por medio del condensador y del objetivo, en el plano focal posterior, o pupila de salida, del objetivo. En este plano se instala la lmina de fases. Al atravesar el anillo de fases, el haz luminoso que no ha sido refractado por la estructura de la muestra, (representado en lneas slidas), se anticipa un cuarto de onda a la luz que es difractada por la estructura de la muestra (lneas punteadas).. La luz no difractada atraviesa la lmina de fases por la zona que no est ocupada por el anillo y, por lo tanto, no sufre ninguna alteracin. La imagen final se forma cuando interfieren ambas porciones de luz. Los elementos que hay dentro de la muestra alteran la relaciones de fase entre los rayos de iluminacin que, con la intervencin de la lmina de fases, se traducen en diferencias de luminosidad, haciendo visibles los elementos de la muestra que, de otro modo, no lo seran. Para obtener unos resultados ptimos se utiliza luz monocromtica correspondiente al color verde, que se consigue utilizando un filtro de este color. En el diagrama no se ha representado el ocular.

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20.0 Conclusiones
El objetivo de este cuadernillo ha sido el de ayudar al microscopista a comprender algunos aspectos de la teora bsica del microscopio. Reconocemos que se ha tratado de forma abreviada un tema sobre el cual se podra escribir con facilidad una obra mucho ms detallada. Nuestro objetivo ha sido presentar el material de una forma interesante y no matemtica, y reconocemos que en algunos casos las explicaciones han sido simplificadas sobremanera. Esperamos haber estimulado al lector a que estudie obras mas extensas sobre el tema y haber despertado su inters al efecto.

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