Taller Basico Uv Vis

Curso Bsico de Espectroscopa Ultravioleta -visible. Amzquita L. Fernando, Mendoza O.
Diana
Universidad de Guanajuato Facultad de Qumica
Impartido por: Q. Fernando Amzquita Lpez Q. Diana Mendoza Olivares

2008
Curso Bsico de Espectroscopa Ultravioleta -visible. Amzquita L. Fernando, Mendoza O. Diana
Es importante comprender la diferencia entre el color en la luz y el color en la pintura. Cuando se hace pasar la luz blanca por un prisma, sta se descompone y podemos ver los colores del espectro.
Ahora piensa en una caja de pintura o de lpices de colores. En la pintura, cada color se hace con un pigmento. Los pigmentos son polvos de color que se obtienen moliendo una variedad de materiales como pueden ser diferentes tipos de tierras, rocas, plantas. Todas estas cosas tienen un color natural, pero los colores de los pigmentos no son tan puros como los colores del espectro. La luz blanca e incolora del Sol o del filamento caliente de una bombilla est constituida por los colores del espectro. Se conocen los tres colores rojo, verde y azul como los colores primarios de la luz. Mezclndolos forman luz blanca. Los colores
secundarios son el magenta (rojo azulado), el cian (verde azulado) y el amarillo. Los tres colores primarios de la pintura son el rojo, el azul y el amarillo. Puedes obtener casi
cualquier color que quieras usando slo estos tres colores. Cuando
mezclas los tres colores en las proporciones exactas, obtienes negro y no blanco.
Cuando la luz da sobre un objeto, parte del espectro visible se absorbe y la otra parte se refleja. Las partes que se reflejan se combinan para formar los colores que ven nuestros ojos.
Puede que te preguntes cmo es que vemos algunas cosas como blancas y negras. Si un objeto absorbe todos los colores del espectro, no se refleja nada de luz y lo vemos negro. Si todos los colores se reflejan, no hay ningn cambio en la luz blanca y vemos el objeto blanco.
Vemos los colores gracias a clulas especiales en nuestros ojos llamados conos. Hay tres tipos de conos y cada uno responde a uno de los tres colores primarios. Nuestro cerebro percibe toda la gama de colores al mezclar las seales que le llegan de cada tipo de cono.
Mezclando luz roja y verde, vemos amarillo. Solo necesitas aadir la cantidad correcta de luz azul a la amarilla para conseguir luz blanca. Decimos que el azul y el amarillo son colores complementarios porque, cuando se juntan, dan luz blanca. Ms adelante se mostrarn en una tabla los colores de la radiacin visible. Si mezclas colores complementarios, el resultado ser siempre luz blanca. La razn de esto es que todos los colores primarios resultan reflejados por cada par de colores complementarios.
En pintura se mezclan los colores de manera diferente, Como seguramente sabes, al mezclar pinturas azul y amarilla, sale verde. La pintura azul aparece azul porque los pigmentos que tiene reflejan la luz azul.
Con las pinturas habrs descubierto que puedes hacer la mayora de los colores que necesites mezclando azul, amarillo y rojo. Cuando mezclas rojo, azul y amarillo en los tonos y matices exactos obtienes negro. De hecho, es ms probable que consigas un marrn grisceo oscuro, ya que los pigmentos utilizados en la pintura no son puros.
Bases del Color y Colorimetra.

Si la energa absorbida es mayor para algunas longitudes de onda del visible que para otras, el haz emergente aparecer coloreado. La siguiente tabla, proporciona las longitudes de onda de las bandas designadas con los nombres comunes de los colores, junto con sus complementos. Estas longitudes de onda estn tomadas de un estudio
iniciado en la Oficina Nacional de Pesas y Medidas y son algo arbitrarias. El color aparente de la solucin es siempre el complemento del color absorbido. De modo que una solucin que absorba en la regin del azul, aparecer como amarilla; la que absorbe en el verde aparecer como morada, etctera.
COLORES DE LA RADIACION VISIBLE Rango aproximado de longitud de onda en nm 400-465 465-482 482-487 487-493 493-498 498-530 530-559 559-571 571-576 576-580 580-587 587-597 597-617 617-780 Violeta Azul Azul verdoso Azulverde Verde azuloso Verde Verde amarillento Amarillo verde Amarillo verdoso Amarillo Naranja amarillento Naranja Naranja rojizo Rojo Verde amarillo Amarillo Naranja Rojo-naranja Rojo Rojo prpura Prpura rojizo Prpura Violeta Azul Azul Azul-verdoso Azul-verde Azul-verde Color Complemento
Al referirnos al color, estamos restringiendo por el momento la discusin a la regin del visible del espectro.
Para un qumico analtico, la importancia de las soluciones coloreadas descansa en el hecho de que la radiacin absorbida es caracterstica del material que efecta la absorcin. Una solucin que contenga iones cpricos hidratados absorber el mbar y ser transparente al azul, de modo que el cobre podr determinarse midiendo el grado de absorcin de la luz amarilla bajo condiciones previamente uniformadas.
Cualquier material soluble coloreado puede determinarse cuantitativamente en esta forma. Adems, es posible determinar una sustancia que sea incolora o muy poco
coloreada, al agregar un reactivo que la convierta en un compuesto intensamente coloreado. Por consiguiente, la adicin del amoniaco a una solucin de cobre produce un color mucho ms intenso que el del ion cprico hidratado, lo que constituye un mtodo analtico ms sensible.
El trmino generalmente empleado en los anlisis qumicos basados en la medida de la absorcin de la radiacin es el de absorciometra. El trmino colorimetra debe aplicarse solamente en relacin a la regin del espectro visible. La espectrofotometra es una
divisin de la absorciometra que se refiere especficamente al uso del espectrofotmetro.
Ley de Beer
Introduccin.
Muchos compuestos absorben luz ultravioleta (UV) o visible (Vis.). En el siguiente diagrama se muestra un haz de radiacin monocromtico de poder radiante P0 dirigido a una solucin de muestra. Se efecta la absorcin del haz y al salir de la muestra tiene un poder radiante P.
La
cantidad
de
radiacin
absorbida puede ser medida en distintas formas: Transmitancia, T = P / P0 % Transmitancia, %T = 100 T Absorbencia, A = log 10 P0 / P A = log 10 1 / T A = log 10 100 / %T A = 2 - log10 %T Es til recordar la ecuacin, A = 2 - log10 %T, porque permite calcular fcilmente la absorbencia a partir de los datos de porcentaje de transmitancia. La relacin entre absorbencia y transmitancia se ilustra en el diagrama siguiente:
As, si toda la luz pasa a travs de una solucin sin absorcin, entonces la absorbencia es cero, y el por ciento de transmitancia es 100%. Si toda la luz es
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absorbida, entonces el porciento de transmitancia es cero, y la absorcin es infinita.
La Ley de Lambert-Beer
Ahora veamos la Ley de Lambert-Beer y exploremos su significado. Esto es
importante porque quien usa la ley a menudo no la entiende, incluso aunque la ecuacin que la representa es tan simple como: A=bc
Donde A es absorbencia, adimensional, puesto que A = log10 P0 / P, y
es la absortividad molar con unidades de L mol-1 cm-1

b es la longitud del paso ptico de la muestra; que es, el espesor de la celda en que la muestra esta contenida y la expresaremos en centmetros. c es la concentracin del compuesto en solucin, expresada en mol L-1
La razn por la que se prefiere expresar la ley con esta ecuacin es porque as la absorbencia es directamente proporcional a los otros parmetros, cuando la ley es obedecida. Por ahora no consideraremos las desviaciones de la ley de Lambert Beer.
Hagmonos unas preguntas. Pregunta: Por qu preferimos expresar la ley de Lambert-Beer usando absorbencia como una medida de la Absorcin en lugar de %T? Respuesta: Para empezar, pensemos sobre las ecuaciones... A=bc %T = 100 P/P0 = e -bc Ahora, suponga que tenemos una solucin de sulfato de cobre (que aparece azul porque tiene una absorcin mxima en 600 nm). Si analizamos la forma en la cual
cambia la intensidad de la luz (poder radiante) cuando pasa a travs de una celda de un centmetro de espesor, observaremos reduccin, cada 0,2 cm segn el diagrama de abajo. La Ley de Lambert - Beer dice que la fraccin de la luz absorbida por cada capa de solucin es la misma. Para nuestro ejemplo,
supondremos que esta fraccin es de 0,5 para cada "capa" de 0,2 cm y obtendremos los datos siguientes: Paso ptico %T Absorbencia 0 100 0 0,2 50 0,3 0,4 25 0,6 0,6 12,5 0,9 0,8 6,25 1,2 1,0 3,125 1,5
El grfico de este comportamiento corresponde a la siguiente forma, exponencial:
La expresin A = bc nos dice que la absorbencia depende de la cantidad total de compuesto en el paso ptico de la luz a travs de la celda. Si graficamos la
absorbencia contra concentracin, obtenemos una lnea recta que pasa a travs del origen (0,0).
Observe obedecida
que a
la
ley
no
es
concentraciones
altas. Esta desviacin de la ley se denomina negativa, cuando la
parte curvada es ascendente se la denomina positiva.
Dado que la relacin lineal entre concentracin y absorbencia es sencilla y se mantiene a bajas concentraciones es la razn por la que preferimos expresar la ley de Lambert - Beer usando absorbencia como una medida de la absorcin preferentemente a %T. Pregunta: Cul es el significado de absortividad molar, ? Respuesta: Para empezar despejmosla de A = bc:
= A / bc
En palabras, esta relacin define a , como la cantidad de luz absorbida por unidad de concentracin, o la extincin causada por un mol de solucin, teniendo en cuenta la concentracin expresada en moles/L, lo que le explica el nombre con que tambin se la conoce, coeficiente de extincin molar.
La absortividad molar es una constante para una sustancia particular, as si la concentracin de la solucin es reducida a la mitad, de igual manera se afectar la absorbencia, que es exactamente lo que usted supondra.
Refirmonos a un compuesto con un valor muy alto de absortividad molar, digamos 100 000 L mol-1 cm-1, que est en una celda, con un paso ptico de 1 cm y la lectura de absorbencia es de 1.
=1/1c
Por lo tanto, c = 1 / 100 000 = 1 X 10-5 mol L-1 Ahora, estudiemos un compuesto con un valor muy bajo de , por decir 20 L mol-1 cm-1 que est en solucin en un paso ptico de 1 cm y da una absorbencia de 1.
=1/1c
Por lo tanto, c = 1 / 20 = 0,05 mol L-1
La respuesta es ahora evidente; un compuesto con una absortividad molar alta es muy eficaz absorbiendo luz (de la longitud de onda apropiada), y por tanto los compuestos con una absortividad molar alta pueden ser fcilmente identificados. Cul es el absortividad molar de los iones Cu2+ en una solucin
Pregunta:
acuosa de CuSO4 ?. Es de 20 L mol-1 cm-1 o 100 000 L mol-1 cm-1 Respuesta: Creemos que usted piensa que el valor ms alto es el correcto, porque usted ha visto que las soluciones de sulfato de cobre tienen normalmente un bello color azul brillante. Sin embargo, el valor de la absortividad es 20 L mol-1 cm-1. El color azul brillante que se observa es debido a que la concentracin de la solucin es muy grande. El -caroteno es un compuesto orgnico que se encuentra en vegetales y es responsable del color de las zanahorias. -caroteno es 100 000 L mol-1 cm-1 !. Se encuentra en concentraciones
sumamente bajas. Usted no debe sorprenderse que la absortividad molar del
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Revisin para aprendizaje:

*
Ahora has comprendido la ley de Beer; Las diferentes formas en que se reporta la absorcin, y
como se relacionan las variables * Adems de la importancia de la absortividad molar y
como sta afecta el lmite de deteccin de un compuesto en particular.
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ESPECTROSCOPA DE ABSORCIN UV-VIS

Principios Tericos.
Introduccin.
Muchas molculas absorben luz visible o ultravioleta.
La absorbencia de una La absorbencia es
solucin aumenta cuando la atenuacin del haz aumenta.
directamente proporcional a la longitud del paso ptico, b, y la concentracin, c, de las especies absorbentes. La Ley de Beer establece que A = bc, donde es una constante de proporcionalidad, llamada absortividad molar.
Muchas molculas absorben radiacin a longitudes de onda diferentes. espectro de absorcin mostrar un nmero de bandas de
Un
absorcin
correspondientes a grupos estructurales que estn dentro de la molcula. Por ejemplo, la absorcin que se observa en la regin UV para el grupo carbonilo en la acetona es de la misma longitud de onda que la absorcin del grupo carbonilo en la dietilcetona.
Transiciones electrnicas
La absorcin de radiacin UV o visible corresponde a la excitacin de los electrones externos. Hay tres tipos de transiciones electrnicas a considerar: 1. Transiciones que involucran electrones , y n. 2. Transiciones que involucran electrones de transferencia de carga. 3. Transiciones que involucran electrones d y f.
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Cuando un tomo o molcula absorbe energa, sus electrones son promovidos de su estado basal a un estado excitado. En
una molcula los tomos pueden rotar o vibrar con respecto a ellos.
Estas vibraciones y rotaciones tambin tienen estados de energa discretos, que pueden ser considerados como empacados arriba de cada nivel electrnico.
Especies absorbentes que contienen electrones , y n.

La absorcin de radiacin ultravioleta y visible en las molculas orgnicas est restringida a ciertos grupos funcionales (cromforos) que contienen electrones de valencia de baja energa de excitacin. El espectro de una molcula que contiene estos cromforos es complejo. Esto es debido a la superposicin de transiciones rotacionales y vibracionales en las transiciones electrnicas que da una combinacin de lneas sobrepuestas. absorcin continua.
2.61 2.4
Esto da como resultado una banda de
Espectro de absorcin UV-Vis de la cafena, correspondiente transiciones *

(Proporcionado por D. Mendoza O.)
2.2 2.0 1.8 1.6
las
1.4 ABS 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 -0.01 190.0 250 300 350 400 450 500 550 NM 600 650 700 750 800 850 900.0
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Las transiciones electrnicas posibles para los electrones , , y n son;
Transiciones *
Un electrn en un orbital es excitado al orbital de antienlace correspondiente. La energa requerida es grande. Por ejemplo, el metano (que solo tiene enlace sencillos C-H, y sus electrones nicamente pueden efectuar transiciones *) muestra una absorcin mxima a 125 nm. La absorcin mxima debida a transiciones * no se observa en un espectro tpico UV-Vis (200 nm a 700 nm).
Transiciones n*
Los compuestos saturados que contienen tomos con pares de electrones solos (electrones de no enlace) son capaces de efectuar transiciones n*. Estas transiciones generalmente necesitan menor energa que las transiciones *. Pueden ser iniciadas por una radiacin de longitud de onda en el rango de 150 nm a 250 nm. El nmero de grupos funcionales orgnicos con seales n* es pequeo.
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Transiciones n* y *
La mayora de los estudios de espectroscopa de absorcin, en la regin UV, de compuestos orgnicos est basada en las transiciones de los electrones n y al estado excitado *. Esto es debido a que las bandas de absorcin para estas transiciones caen en una regin del espectro (200 nm a 700 nm)
experimentalmente til. Estas transiciones necesitan un grupo insaturado en la molcula que proporcione los electrones . La absortividad molar de las transiciones n* son relativamente pequeas, con un rango de 10 L mol-1cm-1 a 100 L mol-1cm-1. En cambio las transiciones * dan absortividades molares del orden de 1 000 L mol-1cm-1 a 10 000 L mol-1cm-1.
El disolvente de la muestra tambin tiene un efecto notable sobre el espectro de absorcin. Las bandas de absorcin de las transiciones n* son desplazadas a longitudes de onda menores (desplazamiento azul o hipsocrmico) cuando se incrementa la polaridad del disolvente. Esto es debido al incremento de la
solvatacin de los electrones n que da como consecuencia una disminucin de la energa de su orbital.
Generalmente (aunque no siempre), el efecto opuesto (el desplazamiento rojo o batocrmico) se observa para las transiciones *. Esto es debido a las fuerzas polares de atraccin entre el disolvente y el absorbente, que disminuye la diferencia de energa entre los niveles basal y excitado. Este efecto es mayor para el estado excitado, y as la diferencia de energa entre los estados basal y excitado es ligeramente disminuida, dando como resultado un aumento en la longitud de onda de absorcin (desplazamiento rojo o batocrmico). Este efecto tambin influye en las transiciones n*, pero es eclipsado por el efecto azul que resulta de la solvatacin de los pares de electrones solos. Ejemplos de grupos que absorben en la regin ultravioleta:
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Absorcin Mxima para las Transiciones * de algunos Grupos Funcionales

TRANSICION, nm GRUPO FUNCIONAL
*
ABSORCION INTENSA
n*
ABSORCION DEBIL
170 170 166 190 280 300 340 500 665
Absorcin Mxima y Absortividad Molar aproximada de la Transicin * en varios Enlaces de Carbono. ESTRUCTURA max nm -C=C-C=CC=C-C=CC=CC=C170 220 260 16 000 21 000 35 000
Absorcin Mxima para las Transiciones * de algunos Grupos Funcionales TRANSICION, nm * n*

GRUPO FUNCIONAL ABSORCION INTENSA ABSORCION DEBIL
-C=O -C=CC=O -C=CC=CC=O

1,4-Benzoquinona
166 240 270 245
280 320 350 435
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Absorcin de transferencia de carga

Muchas especies inorgnicas muestran absorcin de transferencia de carga y se las llama complejos de transferencia de carga. Para que un complejo muestre el comportamiento de transferencia de carga, uno de sus componentes debe tener propiedades de donador de electrones y otro debe ser capaz de aceptar electrones. As la absorcin de radiacin involucra la transferencia de un electrn del donador a un orbital asociado con el aceptor.
Las absortividades molares de transferencia de carga son grandes (mayores de 10 000 Lmol-1cm-1).
Transiciones que involucran electrones d y f.

Los compuestos y iones de los metales de transicin presentan dos tipos de espectros electrnicos. Adems de las bandas intensas de absorcin por transferencia de carga ( de 103 a 104) descritas anteriormente, presentan bandas dbiles de absorcin debidas al campo ligante (con valores de
10-1 a 10-2).
Mientras que las bandas de transferencia de carga ocurren completamente en la regin ultravioleta, las bandas de campo ligando, generalmente se encuentran en la zona visible, an cuando pueden extenderse, ocasionalmente, al cercano infrarrojo o al cercano ultravioleta.
El color caracterstico de los iones y complejos de los metales de transicin puede ser atribuido siempre a la absorcin del campo ligante. El nombre de
campo ligante es debido a que el tomo o ion del metal de transicin en el vaco tiene orbitales d los cuales estn degenerados, o iguales en energa, mientras que la presencia de los ligantes produce un campo electrosttico que fracciona los orbitales en niveles de energa diferentes.
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Si las subcapas d o f estn parcialmente llenas la radiacin de longitud de onda puede causar transiciones electrnicas entre estos niveles de diferente energa.
El patrn de los fraccionamientos de los niveles de energa en un campo ligando depende de la simetra del complejo formado, puede tener estructura tetradrica, octadrica, tetragonal, o plano cuadrada., y la distribucin de energa de los orbitales d ser distinta. Y en el caso de que para un mismo metal haya varios compuestos con la misma simetra, los ligantes definirn las diferencias de energa, lo que se llama "abertura del campo ligante" y este efecto se apreciar en los espectros de absorcin, que servirn para caracterizarlos.
Revisin de aprendizaje
Ahora ya ests enterado de porque las molculas absorben radiacin en las regiones UV-Vis, y porque sus espectros de absorcin tienen una forma tan caracterstica.
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ESPECTROSCOPA DE ABSORCIN UV-VIS

Instrumentacin.
Este es un diagrama esquemtico de un espectrofotmetro UV-VIS de doble haz.
Los instrumentos para medir la absorcin de radiacin UV o visible constan de los siguientes componentes;
1. Fuentes (UV y visible). 2. Selector de longitud de onda (monocromador). 3. rea de muestra. 4. Detector. 5. Procesador de seal y presentacin de lectura.
Cada de estos componentes sern considerados a continuacin.
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Componentes instrumentales. Fuentes de UV radiacin.

Es importante que el poder de la fuente de radiacin no cambie bruscamente sobre el rango de longitud de onda.
La excitacin elctrica de deuterio o hidrogeno a baja presin produce un espectro UV continuo. El mecanismo para sta implica la formacin de una especie
molecular excitada, D2*, que se rompe para dar dos especies atmicas y una fotn ultravioleta. Este puede ser mostrado como; D2 + energa elctrica D2* D' + D'' + h
Las lmparas de deuterio e hidrgeno emiten radiacin en el rango 160 nm a 375 nm. Es necesario usar ventanas y celdas de cuarzo, porque el vidrio absorbe radiacin de longitud de onda menor que 350 nm.
Fuentes de radiacin visible.

La lmpara de filamento de tungsteno se emplea comnmente como una fuente de luz visible. Este tipo de lmpara es usada en el rango de longitud de onda de 350 nm a 2500 nm. La energa emitida por una lmpara de filamento de tungsteno es proporcional a cuatro veces la potencia del voltaje de operacin. Esto significa que para que la energa de salida de la fuente sea estable, es necesario que el voltaje de lmpara sea verdaderamente estable. Para asegurar lo anterior, se usan reguladores de voltaje electrnico o transformadores.
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Las lmparas de tungsteno/halgeno contienen una pequea cantidad de yodo en la coraza de cuarzo, que tambin contiene el filamento de tungsteno. El yodo reacciona con el tungsteno gaseoso, formado por sublimacin, produciendo el compuesto voltil WI2. Cuando las molculas de WI2 golpean el filamento
descompuesto, vuelven a depositar tungsteno sobre en el filamento. El tiempo de vida de una lmpara de tungsteno/halgeno es aproximadamente el doble de una lmpara ordinaria de filamento de tungsteno. Las lmparas de
tungsteno/halgeno son muy eficientes y la emisin cubre muy bien la regin ultravioleta y visible. modernos. Por ello son utilizadas en muchos espectrofotmetros
Selector de longitud de onda (monocromador).

Todos los monocromadores contienen los siguientes componentes;
Una rendija de entrada. Una lente colimadora. Un dispositivo de dispersin (normalmente un prisma o una rejilla). Una lente de enfoque. Una rendija de salida.
La radiacin policromtica (radiacin de ms que una longitud de onda) entra al monocromador a travs de la rendija de entrada. El haz es colimado, y entonces llega al elemento de dispersin (rejilla de difraccin o prisma) en cierto ngulo. El haz es dividido en sus longitudes de ondas componentes por la rejilla o el prisma. Moviendo el elemento dispersante o la rendija de salida, sale del monocromador la radiacin de una longitud de onda particular (monocromtica) a travs de la rendija de salida.
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SELECCIN DE ANCHURA DE LAS RENDIJAS

La anchura de banda efectiva de un monocromador depende de la dispersin de la red o del prisma as como de la anchura de las rendijas de entrada y salida.
Cuando se necesita resolver estrechas bandas de absorcin o de emisin es preferible usar anchuras de rendija muy pequeas.
Por otra parte, un estrechamiento de las rendijas origina una disminucin pronunciada de la potencia radiante disponible, siendo ms difcil realizar mediciones exactas de dicha potencia.
Por lo tanto, las anchuras de rendija amplias pueden usarse ms para los anlisis cuantitativos que para los
trabajos cualitativos, en los que el detalle espectral es importante.
Efecto de la anchura de banda en los detalles espectrales:

(a) 0,5 nm; (b) 1,0 nm; (c) 2,0 nm. (De V. A. Kohler, Amer. Lab., 1984 (11), 132. Copyright 1984 por International Scientific Commuinications, Inc.)
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Monocromador
del
tipo
Czerney - Turner, con rejilla de difraccin.
Celdas.
Los recipientes para la muestra y la solucin de referencia deben ser transparentes a la radiacin que pasar a travs de ellas. Para espectroscopa en la regin ultravioleta se requieren de cuarzo o slice fundida. Estas celdas tambin son transparentes en la regin visible. Aunque, en ella, pueden utilizarse vidrios de silicato para la fabricacin de celdas transparentes entre 350 nm y 2 000 nm.
Detectores.
El tubo fotomultiplicador es el detector comnmente utilizado en espectroscopia UV - Vis. Consiste de un ctodo
fotoemisivo (un ctodo que emite electrones cuando es alcanzado por fotones de radiacin), varios dnodos (que emiten por choca varios cada con
Seccin transversal de un tubo fotomultiplicador
electrones electrn que
ellos) y un nodo.
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Un fotn de radiacin entra al tubo y choca sobre el ctodo, causando la emisin de varios electrones. Estos electrones son acelerados hacia el primer dnodo (que es 90 V ms positivo que el ctodo). El choque de los electrones sobre el primer dnodo, causa la emisin de varios electrones por cada electrn incidente. stos son entonces acelerados hacia el segundo dnodo, para producir ms electrones que son acelerados hacia el tercer dnodo y as sucesivamente. Finalmente, los electrones son recogidos en el nodo. En ese momento, cada fotn original ha producido 106 - 107 electrones, la corriente resultante es amplificada y medida.
Los fotomultiplicadores son muy sensibles a la radiacin UV y visible. Tienen tiempos de respuesta rpida. La luz intensa daa los fotomultiplicadores por ello estn limitados a medir radiacin de baja potencia.
El arreglo lineal de fotodiodos es un ejemplo de un detector multicanal de fotones. Este detector es capaz de medir todos los elementos de un haz de radiacin dispersada simultneamente. Un arreglo lineal de fotodiodos consta de muchos fotodiodos de silicio pequeos dispuestos en un chip sencillo de silicio. Donde puede haber entre 64 a 4 096 elementos sensores, los ms comunes son de 1 024 fotodiodos. Por cada diodo hay tambin un capacitor de almacenaje y un conector. diodo-capacitor puede ser examinado secuencialmente. El circuito individual
Cuando se usa. el arreglo de fotodiodos est posicionado en el plano focal del monocromador (despus del elemento dispersante) de tal manera que el espectro llega sobre el arreglo de diodos. Este detector es til para registrar rpidamente espectros de absorcin en UV-Vis de muestras, cuando la radiacin pasa a travs de una celda de flujo, tal como en un detector de cromatografa de lquidos de alta resolucin (HPLC).
Dispositivo acoplados de carga (CCDs).
Es similar al detector de arreglo de
diodos, pero en lugar de diodos consisten de un arreglo de fotocapacitores.
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Revisin para aprendizaje.
Ahora habrs comprendido sobre los componentes que constituyen un espectrofotmetro, y como se disponen en un instrumento manual de doble haz (de la Hitachi 100 - 60), observa que el haz pasa simultneamente a travs de ambas celdas.
Entiendes que hace cada componente?
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A continuacin observars el exterior de un equipo de un solo haz, identifica cada parte con el diagrama superior.
Esta es una ilustracin de un espectrofotmetro de doble haz.
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A continuacin se muestran en la Figura 1 los espectros de absorcin de la ampicilina sdica (a), la dicloxacilina sdica (b) y de la mezcla (c). Observe la sobreposicin de los espectros de (a) y (b) en la porcin aproximada a 200 nm, adems de que (b) tiene una mayor absorcin en todo la zona espectral utilizada, por lo que no podramos realizar estudios cuantitativos ni una caracterizacin confiable.
Si obtenemos la primera derivada de los espectros, Figura 2, se aprecian diferencias, puesto que ya se empiezan a resolver mejor. Finalmente en la segunda derivada de los espectros es notoria la estructura fina que nos permite diferenciar para este caso los puntos de cruce en cero para la ampicilina sdica en 248,8 nm y para la dicloxacilina sdica en 215,2 nm y 221,6 nm que nos serviran para realizar estudios cuantitativos adems de los mnimos notoriamente definidos que nos ayudan a su caracterizacin.
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CRITERIOS PARA SELECCIONAR METODOS ANALITICOS
CRITERIO
1.- Precisin
PARMETRO DE CALIDAD
Desviacin estndar absoluta, desviacin estndar relativa, coeficiente de variacin, varianza.
2.- Exactitud 3.- Sensibilidad 4.- Lmite de deteccin
Error absoluto sistemtico, error relativo sistemtico. Sensibilidad de calibracin, sensibilidad analtica. Blanco ms tres veces la desviacin estndar del blanco.
5.- Intervalo de concentracin
Concentracin entre el lmite de cuantificacin (LOQ) y el lmite de linealidad (LOL).
6.- Selectividad
Coeficiente de selectividad.
1. Precisin: Es el grado de concordancia mutua entre los datos que se han obtenido de una misma forma. La precisin mide el error aleatorio, o indeterminado, de un anlisis. Para fines analticos es recomendable expresarlo en trminos de repetibilidad y reproducibilidad, siendo el primero referido al trabajo de un analista en un da y el segundo al trabajo de varios analistas en diferentes das aplicando en mismo mtodo.
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Trminos para expresar la Precisin
Definicin
Desviacin estndar absoluta, s
s=
(x i x ) 2
i =1
Desviacin estndar relativa, (RSD)
Desviacin estndar de la media, sm
Coeficiente de variacin, CV Varianza

_
N 1 s RSD = _ x s sm = N s CV = _ x 100% x 2
s
xi = valor numrico de la isima medida.
x
= media de N medidas =
i =1
2.- Exactitud. Indica la proximidad de una medida a su valor aceptado y se expresa en trminos de error. La exactitud mide el error sistemtico, o determinado, de un mtodo analtico. A mayor concordancia mayor exactitud. E = xi xt xi Valor observado; xt Valor aceptado
En general, al desarrollar un mtodo analtico, todos los esfuerzos se dirigen hacia la identificacin de la fuente de error y a su eliminacin o correccin mediante el uso de blancos y la calibracin del instrumento.
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Anlisis de errores.
Tipos de Errores Experimentales. Errores Sistemticos: son por lo general de un solo signo. Pueden en principio ser eliminados. Errores Aleatorios: son fluctuaciones tanto positivas como negativas. Las fuentes de este tipo de error no siempre se pueden identificar. Los errores sistemticos pueden ser de cuatro tipos: 1. Instrumentales: Equipos o instrumentos no calibrados. 2. Observacionales: Por ejemplo errores de paralaje al tomar las lecturas en una escala. 3. Del medio ambiente: Fluctuaciones impredecibles en las condiciones en las que se realiza el experimento; temperatura, humedad, alimentacin elctrica, que afectan los valores de las lecturas hacindolos consistentemente ms bajos o altos del valor verdadero. 4. Tericas: Simplificaciones del modelo o aproximaciones en las ecuaciones que lo describen. Por ejemplo no incluir los efectos de fuerzas de friccin en un modelo mecnico.
3. Sensibilidad.
La sensibilidad de un instrumento o de un mtodo mide su
capacidad de discriminar entre pequeas diferencias en la concentracin del analito. Dos factores limitan la sensibilidad: la pendiente de la curva de calibracin y la reproducibilidad o precisin del sistema de medida.
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Sensibilidad de calibracin (IUPAC) Union of Pure and Applied Chemists. S = mc + Sbl S seal medida, c es la concentracin del analito, Sbl es la seal instrumental para un blanco y m es la pendiente de la lnea recta. En dichas curvas, la sensibilidad de calibracin es independiente de la concentracin c simplemente es igual a m. y
Sensibilidad Analtica (J. Mandel y R.D. Stiehler, J. Res. Natl, Burd. Std., 1964, A53, 155)
m s
m es la pendiente de la curva de calibracin s es la desviacin estndar de las seales
4. Lmite de Deteccin. La definicin cualitativa ms aceptada del lmite de deteccin viene dada por la concentracin o el peso mnimo de analito que pueden detectarse para un nivel de confianza dado. Este lmite depende de la relacin entre la magnitud de la seal analtica y el valor de las fluctuaciones estadsticas de la seal del blanco. La mnima seal analtica distinguible Sm se toma por tanto como la suma de la seal media del blanco Sbl ms un mltiplo k de la desviacin estndar del mismo. Esto es:
Sm = Sbl + ksbl
k = 3,3
Experimentalmente Sm se puede determinar realizando 20 30 medidas del blanco, preferiblemente a lo largo de un perodo de tiempo extenso. A continuacin, los datos se tratan estadsticamente para obtener Sbl y sbl. Al final se sustituye Sm en la ecuacin de la recta de calibracin y se reordena para dar:
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LD =
3,3 sbl m
Donde sbl es la desviacin estndar de las seales del blanco.
5. Lmite de cuantificacin. Es la concentracin ms pequea con la que puede realizarse medidas cuantitativas. Puede ser expresado siguiente manera: de la
LD =
10 s bl m
En la figura se aprecia el intervalo til de un mtodo analtico, representado como la porcin de la recta comprendida entre LOQ (lmite de cuantificacin) y LOL (lmite de respuesta lineal), LD es el lmite de deteccin.
5. Selectividad.
La selectividad de un mtodo analtico denota el grado de
ausencia de interferencias debidas a otras especies contenidas en la matriz de la muestra.
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Otras caractersticas a tener en cuenta en la eleccin del mtodo.
1. Velocidad 2. Facilidad y comodidad 3. Habilidad del operador 4. Coste y disponibilidad del equipo 5. Coste por muestra
RESUMEN PARA EL TRATAMIENTO DE INCERTIDUMBRES ALEATORIAS

1. Repita las mediciones N veces. 2. Calcule xprom, la desviacin estndar s, y la desviacin estndar del promedio sm. Reporte los resultados como: Xprom sm
O bien puede reportar, calculando el coeficiente de variacin (CV o % RSD)
Xprom CV
Xprom %RSD
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Ejercicio para el Clculo de Sensibilidad y Lmite de Deteccin.

Los siguientes datos de calibracin se obtuvieron por medio de un mtodo instrumental para la determinacin de la especie X en solucin acuosa.
Conc. de X Cx
ppm
No. de repeticiones 25 5 5 5 5 5
Media de la seal analtica, 0,031 0,173 0,422 0,702 0,956 1,248
Desviacin estndar 0,0079 0.0094 0,0084 0,0084 0,0085 0,0110
0,00 2,00 6,00 10.00 14,00 18,00 a) b) c) d)
Calcule la sensibilidad de calibracin. Calcule la sensibilidad analtica a cada concentracin. Cul es el lmite de deteccin del mtodo? Calcule el coeficiente de variacin para la media de cada serie de repeticiones.
Respuesta
Curva de calibracin para la especie X y = 0.067x + 0.03

R = 0.9996
2
Seal analtica
1,500 1,000 0,500 0,000 0 5 10 ppm de X 15 20
a) m= 0,067 ppm-1 b) y d) Cx 2,00 6,00 10,00 14,00 18,00 c) LD= 0,39 ppm
= m/sx 71 80 80 79 61
CV 5,4 % 2,0 1,2 0,89 0,88
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USO DE LOS DISOLVENTES EN LAS DETERMINACIONES ANALTICAS. Los disolventes utilizados es espectrofotometra deben de cumplir con ciertos requisitos para asegurar resultados exactos y precisos. a) El disolvente escogido debe disolver la muestra y debe de ser compatible con los materiales de las celdas. b) El disolvente tambin debe ser relativamente transparente en la regin
espectral de inters. c) Para evitar una pobre resolucin y dificultades en la interpretacin de los espectros, un disolvente no debe ser utilizado para mediciones cerca o debajo de su longitud ultravioleta de corte, esto es, la longitud de onda en la cual la absorbencia del disolvente solo se aproxima a una unidad de absorbencia. d) La curva de absorbencia de un disolvente tal como se suministra, no debe de tener picos de impurezas extraas en la regin de inters. Por lo que se
recomienda par anlisis con un lmite de deteccin bajo, utilizar disolventes grado espectroscpico.
DISOLVENTES GRADO ESPECTROSCPICO CON SU LONGITUD DE ONDA DE CORTE EN EL RANGO ULTRAVIOLETA.

DISOLVENTE Acido Actico Acetona Acetonitrilo Cloroformo Ciclohexano Etanol Metanol Tolueno Metil-etil cetona Agua
(nm)
260 330 190 245 210 210 210 286 330 191
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RESUMEN DE PASOS PARA REALIZAR UN ANLISIS CUANTITATIVO. 1. Seleccione la longitud de onda adecuada para realizar el anlisis. 2. Prepare estndares de diferentes concentraciones, dentro del rango lineal. 3. Lea absorbencia de los estndares a la longitud de onda seleccionada. 4. Construya un grfico absorbencia en funcin de la concentracin. 5. Determine la absorbencia de la muestra problema. 6. Auxiliado con algn programa como Lotus 123, Excel, etc., realice una regresin lineal para calcular la ecuacin de la recta. Calcule la concentracin de la muestra problema con los datos obtenidos de la ecuacin de la recta. 7. En caso de haber realizado dilucin, calcule la concentracin real de la muestra.
Curva de calibracin para manganeso en forma de ion permanganato por espectrofotometra UV-VIS. ( = 545 nm)
Caractersticas de la determinacin de manganeso obtenidas por espectrofotometra UV-VIS. Funcin de calibracin Coeficiente de correlacin R2 Limite de deteccin Limite de cuantificacin Precisin (CV, %) c = 1 g mL-1 Precisin CV, %) c = 10 g mL-1 y = 0.02046 X - 0.00105 0.9999 0.21 g mL-1 0.70 g mL-1 7.4% 0.7%
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BUENAS PRCTICAS DE LABORATORIO EN ESPECTROFOTOMETRIA DE ULTRAVIOLETA-VISIBLE.

Verifique el espectrofotmetro una vez a la semana, utilizando el material de referencia de xido de holmio para verificar la escala de longitud de onda. En caso de alguna desviacin de los parmetros revisados con el material de referencia, solicite el servicio del proveedor para su revisin. Antes de encender el espectrofotmetro verifique que el compartimento de muestras est vaco. Recuerde que el equipo es de doble haz por lo que el ajuste a cero se realiza colocando en la celda de atrs y en la del frente la solucin de referencia. Tome las celdas siempre de la parte esmerilada para evitar dejar manchas de grasa de las manos por donde atraviesa la luz. Mantenga las celdas limpias, despus de usarlas se deben limpiar con metanol y dejarlas secar. Seque las celdas con un pauelo desechable suave humedecido con metanol, si se encuentran muy sucias emplee jabn lquido al 20% v en agua destilada y lmpielas con un cotonete, despus enjuague abundantemente para eliminar totalmente el detergente y enjuague con agua deionizada, al final con metanol. Procure colocar las celdas siempre hacia el mismo lado. Generalmente traen unas letras en la parte superior, stas pueden tomarse como referencia para mantener siempre la misma posicin. Nunca sacuda las celdas para eliminar los restos de lquido, mejor permita que escurran sobre un papel absorbente. Cuando se analicen substancias voltiles utilice las celdas con tapa. Nunca introduzca las celdas en el portamuestras del espectrofotmetro con restos de lquido en la parte externa. Las celdas deben llenarse a de su capacidad, el volumen equivale a 3 mL.
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CALIBRACIN DEL ESPECTROFOTMETRO ULTRAVIOLETAVISIBLE
I.
Caracterizacin del Espectrofotmetro.
1.1 Caracterizacin de la escala de longitud de onda. 1.1.1 Caracterizacin de la longitud de onda con el uso del xido de holmio. 1.1.2 Caracterizacin de la longitud de onda con el uso de la lmpara de mercurio. 1.1.3 Caracterizacin de la longitud de onda con el uso de xido de didymio (neodimio y praseodimio). 1.2 Caracterizacin de la escala fotomtrica. 1.2.1 Caracterizacin de la escala fotomtrica con el uso de filtros.
II. Pruebas Espectrofotomtricas.
2.1 Linealidad de la escala fotomtrica. 2.2 Ruido fotomtrico. 2.3 Estabilidad fotomtrica. 2.4 Lnea base plana. 2.5 Confirmacin de ancho de banda espectral. 2.6 Energa radiante extraviada. 2.7 Angulo de incidencia.
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CALIBRACIN DE UN ESPECTROFOTMETRO ULTRAVIOLETA-VISIBLE.
El equipo se calibra obteniendo el espectro de una solucin de nitrato de holmio o de un cristal de xido de holmio comparando los picos obtenidos con lo reportado para la calibracin.
Espectro de Absorcin del cristal de xido de holmio
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Sesin Prctica
1. Se mostrarn los diferentes equipos de Espectroscopa Uv-vis y su funcionamiento. Coleman Lambda 4b Lambda 40 2. Identifique los diferentes tipos de celdas y las fuentes de Deuterio y de tungsteno. 3. Se mostrar el cristal de Oxido de Holmio y de Didimio y obtenga su espectro para la verificacin del equipo. 4. Obtenga el espectro de la celda de plstico y de vidrio para ver su rango de transparencia. 5. Obtenga los espectros de los disolventes ms comunes (ciclohexano, cloroformo, acetona, metanol, etanol, cido clorhdrico 0,1N, hidrxido de sodio 0,1 N y agua). 6. Obtenga los espectros de fenol y anilina para observar cambios del espectro con el pH. 7. Determinacin espectrofotomtrica de fierro con 1,10 fenantrolina. Construya curva de calibracin. Calcule lmite de deteccin Calcule lmite de cuantificacin
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DETERMINACION ESPECTROFOTOMTRICA DE HIERRO

TEORIA: Se forma un complejo de hierro (II) con 1,10-fenantrolina
[Fe(C12H8N2)32+], y con un espectrofotmetro se mide la absorbancia de esta solucin colorida. Se grafca el espectro para determinar el mximo de absorcin. Se aade hidroxilamina (como clorhidrato para aumentar la solubilidad) para reducir el Fe3+ a Fe2+ y mantenerlo en este estado. ECUACIONES: 4Fe3+ + 2NH2OH 4Fe2+ + N2O + 4H+ + H2O
1,10-fenantrolina
tris(1,10-fenantrolina)hierro(II)
SOLUCIONES Y PRODUCTOS QUIMICOS QUE SE NECESITAN: 1. Solucin estndar de hierro (II). Prepare una solucin estndar de hierro pesando 0.0702 g de sulfato frrico amnico, Fe(NH4)2(SO4)2.6H2O. Transfiera cuantitativamente la muestra pesada a un matraz volumtrico de un litro y aada suficiente agua para disolver la sal. Aada 2,5 mL de cido sulfrico concentrado, afore exactamente hasta la marca con agua destilada y mezcle a la perfeccin. Esta solucin contiene 10,0 mg de hierro por litro (10 ppm); si se pesa una cantidad distinta a la indicada, calcule la concentracin. 2. Solucin de 1,10 fenantrolina. Disuelva 100 mg de monohidrato de 1,10-fenantrolina en 100 ml de agua. 3. Solucin de cloruro de hidroxilamonio. hidroxilamonio en 100 ml de agua. Disuelva 10 g de cloruro de
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4. Solucin de acetato de sodio. Disuelva 10 g de acetato de sodio en 100 ml de agua.
PROCEDIMIENTO: Aada con pipeta a una serie de matraces volumtricos de 25 mL, 0,2 mL, 1,5 mL, 2,5 mL, 5 mL y 6,5 mL de la solucin estndar de hierro. Coloque 12,5 mL de agua destilada en otro matraz volumtrico de 25 mL para emplearla como blanco. La muestra problema tambin debe colocarse en un matraz volumtrico de 25 mL. A cada matraz (incluyendo el problema) aada 0,3 mL de solucin de cloruro de hidroxilamonio y 1,5 ml de solucin de 1,10fenantrolina. Amortigue cada solucin aadiendo 2,0 mL de acetato de sodio hasta que se produzca el color rojizo de la 1,10-fenantrolina ferrosa (el complejo de hierro (II)) y la fenantrolina se forma a un pH de 2 a 9. El acetato de sodio neutraliza el cido presente y ajusta el pH a un valor al que se puede efectuar la formacin del complejo. Antes de efectuar las mediciones de absorbancia, deben transcurrir por lo menos 15 minutos despus de haber aadido los reactivos, para que el color del complejo se desarrolle en su totalidad. Una vez desarrollado, el color es estable durante varios das. Diluya cada solucin a 25 mL exactamente. Los estndares corresponden a 0,08, mg/L 0,6 mg/L, 1, 2 mg/L y 2,6 mg/L de hierro, respectivamente. Obtenga el espectro de absorcin de la solucin de 2,6 mg/L midiendo la absorbancia de 400 nm a 700 nm aproximadamente (o el mbito que abarque el instrumento). Tome lecturas a intervalos de 25 nm hasta llegar cerca del mximo de absorcin, en cuyo caso deben tomarse lecturas a intervalos de 5 nm o 10 nm. Siga las indicaciones del instructor para manejar el aparato. La solucin de referencia ser el blanco. Haga un grafico de la absorbancia en funcin de la longitud de onda y elija la longitud de absorcin mxima. Basndose en la concentracin molar de la solucin de hierro y en la longitud de la celda, calcule la absortividad molar del complejo de hierro (II)-fenantrolina en el mximo de absorcin. Prepare una curva de calibracin midiendo la absorbancia de cada una de las soluciones estndar a la longitud de onda de mxima absorbancia. Mida el problema del mismo modo. Haga un grfico de la absorbancia de los estndares en funcin de las concentraciones en mg/l. A partir de esta grafica y la absorbancia del problema, determine la concentracin final de hierro en la solucin problema. Calcule el lmite de deteccin y cuantificacin preparando 5 soluciones blanco (agua, solucin de 1,10 fenantrolina, solucin de acetato de sodio, corrija la lnea de fondo con agua. Realice las lecturas de las soluciones de los blancos a la misma longitud de onda de mxima absorcin del complejo de hierro (II)fenantrolina. Calcule la desviacin estndar de las lecturas de absorbencia y emplee las ecuaciones para calcular el lmite de deteccin y de cuantificacin.
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GLOSARIO DE TRMINOS UTILIZADOS EN ESPECTROSCOPIA

Absorbencia: Medida de concentracin del material presente: log (de base10) negativo de la Transmitancia (-logT) del producto de coeficiente de extincin, paso ptico y la concentracin escrito como A=bc y en funcin de T, A= log(1/T). La absorbencia es adimensional. Absortividad: Probabilidad de absorber la luz a una longitud de onda particular por un analito especfico bajo condiciones especficas, por ejemplo, pH, disolvente y temperatura. As una cantidad especfica de material a condiciones determinadas absorber una fraccin especfica de la luz que choc con l. Absortividad es abreviado por una o por una a. Se usa cuando la concentracin se expresa en Moles/L y sus unidades son Lmol-1cm-1, a es para cuando las unidades de concentracin son en cualquier otro tipo y se hace el ajuste que corresponda a la expresin A/b(cm) Concentracin. Ajuste: Es la seleccin de las condiciones apropiadas para el funcionamiento adecuado de un instrumento, o de un sistema de medicin. Alcance de medicin: Conjunto de valores del mensurando, para los cuales se supone que el error de un instrumento de medicin se encuentra entre lmites especificados. Analito: El material particular o cualidad a ser determinada en un anlisis. Anchura de Rendija: Tamao de la abertura de la rendija a travs de la cual emerge la luz. El tamao depende del rango de la longitud de onda, habilidad de separacin del selector de longitud de onda y aislamiento deseado de longitud de onda especifica. Generalmente fijada o programada automticamente. Calibracin: Conjunto de operaciones que establecen, bajo condiciones especificadas, la relacin entre los valores indicados por un instrumento o un sistema de medicin o los valores representados por una medida materializada y los valores correspondientes realizados por los patrones o materiales de referencia. Colormetros: Los colormetros utilizan el ojo humano como detector y el cerebro como transductor. Los mtodos colorimtricos requieren siempre la utilizacin de uno o ms patrones en el momento en el que se realiza el anlisis. Concentracin: La cantidad de un soluto en un volumen determinado de solucin, Ej., moles por litro.
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Corte de Disolvente: La longitud de onda en la cual el disolvente absorbe una porcin significativa de la luz, causando una prdida de la seal e inhabilidad para ejecutar un anlisis. En otras palabras, el disolvente se vuelve opaco a las longitudes de onda usadas. Esto es comn en el ultravioleta, raro en la zona visible. En forma prctica es la longitud de onda que corresponde a un absorbencia de uno, utilizando una celda de 1 cm de paso ptico. Cubeta o celda: Receptculo transparente en el cual las soluciones de muestra son introducidas en la senda de la luz del espectrmetro. Generalmente cuenta con dos lados iguales Ej., 1 cm, 1 cm mientras que la tercera dimensin es alargada posiblemente tan grande como 15 cm. Para trabajos en ultravioleta, el material es cuarzo. El trabajo en zona visible permite utilizar celdas de vidrio o plstico. Curva de Calibracin: Los resultados de una calibracin cuando son graficados, generalmente en coordenadas Cartesianas, Ej., concentracin (en molaridad) contra la absorbencia. Detector: Dispositivo usado para detectar la intensidad de la radiacin de la muestra de los haces de la muestra o referencia. Generalmente un diodo de silicio sencillo o un tubo fotomultiplicador ms sensible. Disolvente: Lquido usado para disolver la muestra a analizar. Comnmente agua o metanol de alta pureza. Generalmente designado, especialmente o purificado para trabajo en ultravioleta , Ej., "Spectro-Quality" o "Spectro-Grade". Espectro: Series de longitudes de onda de la radiacin, pertenecientes a una porcin especfica del electromagntico continuo, Ej. El espectro visible, donde los "colores" son examinados aumentando la longitud de onda. Para la porcin visible del continuo, los colores son rojo, anaranjado, amarillo, verde, azul, ndigo y violeta. Espectrofotmetro de Doble Haz: Es un instrumento en el cual el haz se divide para permitir la comparacin de la muestra y el disolvente ( o reactivo que sirve como blanco) al mismo tiempo. Por lo general, la operacin de este aparato est muy automatizada. Espectrofotmetro de Simple Haz (Un solo haz): Es un instrumento que tiene una trayectoria ptica. La muestra y el disolvente puro (o el reactivo que funciona como blanco) se examinan por separado para establecer P y Po y realizar las mediciones de absorbencia. Por lo general, se opera en forma manual. Error aleatorio: Es el resultado de una medicin menos la media de un nmero infinito de mediciones del mismo mensurando, efectuadas stas en condiciones de repetibilidad.
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Error de medicin: Es el resultado de una medicin menos un valor convencionalmente verdadero del mensurando. Error sistemtico: Es la media que resultara de un nmero infinito de mediciones del mismo mensurando, efectuadas bajo condiciones de repetibilidad, menos un valor verdadero del mensurando. Estndar de Referencia: Analito en que la pureza est documentada, usado para construir la curva de calibracin. Exploracin: El proceso en donde el rango de longitud de onda del sistema es inspeccionado en orden, generalmente de la longitud de onda ms baja a la ms alta. Esto generalmente ocurre cuando la red de dispersin es rotada sobre su eje. Extincin/Coeficiente de Extincin: Sinnimo para la absorbencia y la absortividad, respectivamente. Fotmetro: Es un dispositivo sencillo relativamente barato para los anlisis por absorcin. El equipo utiliza una lmpara de filamento de tungsteno, lentes para proporcionar un haz paralelo de radiacin, un obturador, un filtro, un atenuador de haz en forma de cua y un detector (microampermetro). Fototubo: Es un detector fotoelctrico comn para las regiones ultravioleta-visible e infrarrojo cercano y se encuentra en los instrumentos ms baratos. Frecuencia: El nmero de veces por unidad de tiempo que la magnitud de una onda electromagntica va de un mximo a un mnimo y posteriormente regresa a la amplitud mxima. La unidad para el nmero de ondas por segundo es el hertz (Hz). Fuente: Tambin conocida como "lmpara". Este es el origen de la luz utilizada en el espectrmetro, y puede ser una fuente incandescente para la zona visible o una lmpara de descarga de gas de deuterio para el ultravioleta. Incertidumbre de medicin: Parmetro asociado al resultado de una medicin, el cual caracteriza la dispersin de los valores que se podran atribuir razonablemente a l mensurando. Lmpara de Tungsteno: Es una lmpara de luz, elctrica, que tiene un filamento calentado por electricidad y que es tungsteno metlico. Al igual que otros slidos incandescentes, el filamento da una longitud de onda continua que se aproxima a la radiacin de cuerpo obscuro. En condiciones normales de operacin, la lmpara es adecuada como una fuente para la regin visible del espectro y es til slo para distancias cortas en las regiones ultravioleta e infrarrojo.
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Ley de Beer: Relacin entre la cantidad de luz absorbida por un analito y su concentracin, paso ptico (b) y absortividad (a), expresada en gramos por 100 mL o molaridad, escrito como A=bc. Ley de Bouguer: Algunas veces se le llama ley de Lambert. Dividamos un medio absorbente homogneo en capas imaginarias de igual espesor. Cada capa absorbe la misma fraccin de radiacin monocromtica que choca contra ella. Con todas las dems sucede lo mismo y la absorbencia es directamente proporcional a la longitud de la trayectoria del haz a travs del medio. Ley de Bouguer-Beer: Es una combinacin de las leyes de Bouguer y de Beer. Con frecuencia se escribe como A=bc, en donde A=absorbencia, =absortividad molar y b=longitud de la trayectoria de haz (paso ptico) a travs de una solucin con una concentracin molar de soluto igual a c. Lneas de Franhoufer: Son las lneas obscuras en el espectro del sol y que son ocasionadas por la absorcin de la envoltura solar que est ms fra que la superficie. Es de especial inters histrico para la espectrofotometra de absorcin atmica. Lmite de Cuantificacin: Es la concentracin ms pequea con la que pueden realizarse medidas cuantitativas, en base a la desviacin estndar y la pendiente de la curva de calibracin, puede expresarse como LC=10/S donde es la desviacin estndar de las lecturas de la referencia y S es la pendiente de la curva de calibracin Lmite de Deteccin: La cantidad, ms pequea de analito que puede ser vista sobre el nivel de ruido del instrumento, esto es lo que puede detectarse para un nivel de confianza dado. Est determinado por el anlisis de muestras con concentracin desconocida de analito y por el establecimiento del nivel mnimo al cual puede ser detectable. Basado en la desviacin estndar de la respuesta y la pendiente de la curva de calibracin se expresa LD=3/S, donde es la desviacin estndar de las lecturas de la referencia y S es la pendiente de la curva de calibracin. Lineal: Lnea recta: En el contexto, esto significa que para el doble de concentracin del analito la seal de absorbencia ser duplicada. Esto permite la prediccin de la concentracin utilizando la curva de calibracin. Linealidad: Un experimento que demuestra que la respuesta de un instrumento cambia de una manera previsible con el incremento de analito.
Longitud de Onda: La distancia de una cresta, de una onda electromagntica a la misma posicin en la onda subsecuente. Distancia pico a pico, generalmente medida en nanmetros.
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Luz Extraviada (luz parsita): Cualquier radiacin que llega al detector que no es emitida por la muestra a la longitud de onda seleccionada. Magnitud (Medible): Atributo de un fenmeno, de un cuerpo o de una sustancia, el cual es susceptible de ser identificado cualitativamente y determinado cuantitativamente. Material de referencia: Material o sustancia para el cual uno o varios, de los valores de una o varias, de sus propiedades son lo suficientemente homogneos y bien establecidos para ser utilizados en la calibracin de un instrumento, en la evaluacin de un mtodo de medicin, o para asignar valores a las propiedades de otros materiales Material de referencia Certificado: Material de referencia, acompaado de un certificado, para el cual uno o varios, de los valores de una o varias, de sus propiedades estn certificados por medio de un procedimiento que establece su trazabilidad a una realizacin exacta de la unidad en la que se expresa el valor de cada propiedad. Cada valor certificado se especifica con su incertidumbre respectiva. Matriz: Medio en el que se encuentra el analito. Mensurando: Magnitud particular sujeta a medicin. Monocromador: En los espectrofotmetros es un instrumento que asla una banda estrecha de longitud de onda de toda la energa radiante que llega hasta l. Sus partes principales son un elemento dispersante (un prisma o una rejilla de difraccin) y un sistema de rendijas. nanmetro, nm: Antiguamente milimicrn o milimicra, m. Es una unidad comn para la longitud de onda, en particular para la regin ultravioleta-visible. I nm=10-9 m. Paso ptico: La distancia por la que pasa la luz a travs de la muestra y su contenedor. En trminos prcticos la dimensin de la cubeta o celda. Patrn de Medicin: Medida materializada, instrumento de medicin, material de referencia o sistema de medicin, destinado a definir, realizar, conservar o reproducir una unidad o uno o varios valores de una magnitud para servir de referencia. Razn Seal/Ruido: La razn numrica de la seal total a 100por ciento de Transmitancia al ruido del instrumento. Red de Dispersin: Una superficie de reflexin cubierta con ranuras microscpicas uniformemente espaciadas, cuyo propsito es separar las
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longitudes de onda individuales de la luz blanca. La distancia entre las ranuras y el ngulo de las caras est determinado por las longitudes de onda a separar. La red de dispersin (excepto para arreglo de diodos) es rotada a una velocidad determinada y la longitud de onda deseada es emitida a travs de una rendija de salida sobre la muestra o el estndar. Referencia. (Blanco): En el contexto, todo lo que est en el paso de luz de la muestra excepto el analito de inters: cubeta, disolvente y cualquier buffer o matriz para preparar la muestra. Regin Ultravioleta: Es una porcin del espectro electromagntico que se encuentra entre el final de la longitud de onda larga de la regin de los rayos X, aproximadamente a 40 nm (400 ), y el lmite violeta de la regin visible, cerca de los 400 nm (4000 ). Los qumicos emplean de rutina bandas de absorcin entre 200 y 400 nm. Ruido: Cualquier seal generada por el detector que no responde directamente a la luz transmitida en la longitud de onda requerida. Selectividad: La selectividad de un mtodo analtico denota el grado de ausencia de interferencias debidas a otras especies contenidas en la matriz de la muestra. Sensibilidad: La sensibilidad de un instrumento o de un mtodo analtico mide su capacidad de discriminar entre pequeas diferencias en la concentracin del analito. Dos factores la limitan, la pendiente de la curva de calibracin y la reproducibilidad o precisin del sistema de medida. La sensibilidad de calibracin es la pendiente de la curva de calibracin a la concentracin de inters. La sensibilidad analtica se expresa como = S/, donde S es la pendiente y la desviacin estndar de las mediciones. Sensor: Elemento de un instrumento de medicin o de cadena de medicin, que est directamente afectado por el mensurando. Seal: La salida del detector debida a su respuesta a la luz emergente del contenedor de la muestra o de referencia. Titulacin Fotomtrica: Es una titulacin en la cual el punto final se detecta por medio de mediciones de absorbencia. Transmitancia, T: Es la fraccin de la energa radiante incidente que transmite o emite la muestra. T=P/Po. A menudo se expresa como un porcentaje: %T=(P/Po) x 100. Trazabilidad: Propiedad del resultado de una medicin o de un patrn de medicin, por medio de la cual estos pueden relacionarse a referencias establecidas, generalmente patrones nacionales o internacionales, por medio de
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una cadena ininterrumpida de comparaciones teniendo todas ellas incertidumbres determinadas. Tubo de Descarga de Hidrgeno: (Con frecuencia es de deuterio.) Es una fuente para la espectrofotometra de ultravioleta en la cual las lneas de emisin del gas de relleno (H2 o D2) tienen un ensanchamiento de presin suficiente para proporcionar una longitud de onda continua a travs de la regin ultravioleta. Tubo Fotomultiplicador: Es un detector fotoelctrico comn para las regiones ultravioleta-visible e infrarrojo cercano; ms sensible que los fototubos ordinarios , se encuentra en los mejores instrumentos. Transmitancia: Razn del poder radiante transmitido por una muestra al poder radiante transmitido por una referencia, en una celda equivalente o por algunos medios de compensacin para la absorcin, perdidas por reflexin, etc. Se relaciona con A mediante T=1/10A y se expresa en tanto por ciento. Validacin: Confirmar objetivamente el cumplimiento de requisitos particulares par un uso especifico propuesto. Verificar: Confirmar objetivamente el cumplimiento de requisitos para el funcionamiento de un instrumento o de un sistema de medicin. Visible: La porcin del espectro electromagntico detectable por el ojo humano. La porcin del espectro desde 350 780 nm.
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Bibliografa:
(1) Bauer/Christian/O'Reilly, (543.08 INS), Instrumental Analysis, Allyn & Bacon Inc., Boston, 1978. (2) B.N. Figgis, Introduction to Ligand Field, Intersciencie Publishers, New Yor, 1966. (3) Christian Gary D., (543 CHR), Qumica Analtica, Segunda Edicin, Editorial Limusa, Mxico, 1981. (4) Dyer, (547.346 DYE), Aplicaciones de Espectroscopa de Absorcin en Compuestos Orgnicos, Prentince-Hall Internacional, Espaa, 1973. (5) Ewing Galen, (544.EWI), Instrumental Methods of Chemical Analysis, Fifth Edition, McGraw-Hill, New York, 1985. (6) Olsen Eugene D., Modern Optical Methods of Analysis, McGraw-Hill Book Co., New York, 1975. (7) Silverstein/Bassler/Morril, (547.346 SIL), Spectrometric Identification Compounds, Fifth Edition, John Wiley & Sons, New York, 1991. of Organic
(8) Skoog/West, (543.08 SKO), Anlisis Instrumental, 4ta. Edicin, McGraw-Hill, Espaa, 1992. (9) Skoog/West, (546 SKO), Qumica Analtica, 6ta. Edicin, McGraw-Hill, Mxico, 1995. (10) Strobel Howard A., (543.08 STR), Chemical Instrumentation, 2nd. Edition,Addison-Wesley Publishing Co., Menlo Park, Calif., 1973. (11) Willard/Merrit/Dean, (543.08), Mtodos Instrumentales de Anlisis, 7ma. Edicin, Grupo Editorial Iberomerica, Mxico, 1991. (12) Amzquita L. Fernando, Fundamentos de la Espectroscopia Aplicada a la Instrumentacin Qumica, Segunda reimpresin de la cuarta edicin, Universidad de Guanajuato, Mxico, 2007, ISBN 978-968-864-363-1
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Curso Bsico de Espectroscopa Ultravioleta -visible. Amzquita L. Fernando, Mendoza O.

Universidad de Guanajuato Facultad de Qumica

Impartido por: Q. Fernando Amzquita Lpez Q. Diana Mendoza Olivares

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Bases del Color y Colorimetra.

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divisin de la absorciometra que se refiere especficamente al uso del espectrofotmetro.

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absorbida, entonces el porciento de transmitancia es cero, y la absorcin es infinita.

Donde A es absorbencia, adimensional, puesto que A = log10 P0 / P, y

es la absortividad molar con unidades de L mol-1 cm-1

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El grfico de este comportamiento corresponde a la siguiente forma, exponencial:

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altas. Esta desviacin de la ley se denomina negativa, cuando la

parte curvada es ascendente se la denomina positiva.

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sumamente bajas. Usted no debe sorprenderse que la absortividad molar del

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Revisin para aprendizaje:

como se relacionan las variables * Adems de la importancia de la absortividad molar y

como sta afecta el lmite de deteccin de un compuesto en particular.

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ESPECTROSCOPA DE ABSORCIN UV-VIS

Muchas molculas absorben luz visible o ultravioleta.

La absorbencia de una La absorbencia es

solucin aumenta cuando la atenuacin del haz aumenta.

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Especies absorbentes que contienen electrones , y n.

Esto da como resultado una banda de

Espectro de absorcin UV-Vis de la cafena, correspondiente transiciones *

2.2 2.0 1.8 1.6

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Las transiciones electrnicas posibles para los electrones , , y n son;

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Absorcin Mxima para las Transiciones * de algunos Grupos Funcionales

170 170 166 190 280 300 340 500 665

Absorcin Mxima para las Transiciones * de algunos Grupos Funcionales TRANSICION, nm * n*

-C=O -C=CC=O -C=CC=CC=O

166 240 270 245

280 320 350 435

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Absorcin de transferencia de carga

Transiciones que involucran electrones d y f.

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ESPECTROSCOPA DE ABSORCIN UV-VIS

Este es un diagrama esquemtico de un espectrofotmetro UV-VIS de doble haz.

Cada de estos componentes sern considerados a continuacin.

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Componentes instrumentales. Fuentes de UV radiacin.

Fuentes de radiacin visible.

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Selector de longitud de onda (monocromador).

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SELECCIN DE ANCHURA DE LAS RENDIJAS

trabajos cualitativos, en los que el detalle espectral es importante.

Efecto de la anchura de banda en los detalles espectrales:

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