El Microscopio

El microscopio, de micro- (pequeo) y scopio (observar), es un instrumento que permite observar objetos que son demasiado pequeos para ser vistos a simple vista. El tipo ms comn y el primero que se invent es el microscopio ptico. Se trata de un instrumento ptico que contiene una o varias lentes que permiten obtener una imagen aumentada del objeto y que funciona por refraccin. La ciencia que investiga los objetos pequeos utilizando este instrumento se llama microscopa

Partes del microscopio:

En general, cualquier microscopio requiere los siguientes elementos: una fuente (como un haz de fotones o de electrones), una muestra sobre la que acta dicha fuente, un receptor de la informacin proporcionada por la interaccin de la fuente con la muestra, y un procesador de esta informacin (en general, un ordenador). Platina: Base plana, de vidrio, donde se ponen las preparaciones para su observacin en el microscopio. Con el macrometrico puedes subir y bajarlo hasta aconseguir un primer enfoque ptimo. Foco sirve para dar la suficiente luz a la platina para que se pueda ver perfectamente la muestra. Base sirve de base al microscopio y tiene el peso suficiente para dar estabilidad al aparato. Cabezal es el extremo superior del tubo sobre el que estn situados los oculares. Brazo une el tubo con el pie, sta es la parte por la que se debe coger el microscopio para transportarlo Desplazamiento de platina-dispositivo con el que se puede desplazar la preparacin a lo largo y a lo ancho. Macrometrico-mueve la platina hacia arriba y hacia abajo Micromtrico permite enfocar con precisin El trmino condensador es un sistema de lentes cuya funcin es concentrar la luz , procedente de la fuente de iluminacin sobre el objeto situado en al platina.

Tipos de microscopios:
Microscopio ptico El tipo de microscopio ms utilizado es el microscopio ptico, que se sirve de la luz visible para crear una imagen aumentada del objeto. El microscopio ptico ms simple es la lente convexa doble con una distancia focal corta. Estas lentes pueden aumentar un objeto hasta 15 veces. Por lo general se utilizan microscopios compuestos, que disponen de varias lentes con las que se consiguen aumentos mayores. Algunos microscopios pticos pueden aumentar un objeto por encima de las 2.000 veces. El microscopio compuesto consiste en dos sistemas de lentes, el objetivo y el ocular, montados en extremos opuestos de un tubo cerrado. El objetivo est compuesto de varias lentes que crean una imagen real aumentada del objeto examinado. Las lentes de los microscopios estn dispuestas de forma que el objetivo se encuentre en el punto focal del ocular. Cuando se mira a travs del ocular se ve una imagen virtual aumentada de la imagen real. El aumento total del microscopio depende de las longitudes focales de los dos sistemas de lentes.

El equipamiento adicional de un microscopio consta de un armazn con un soporte que sostiene el material examinado y de un mecanismo que permite acercar y alejar el tubo para enfocar la muestra. Los especmenes o muestras que se examinan con un microscopio son

transparentes y se observan con una luz que los atraviesa, y se suelen colocar sobre un rectngulo fino de vidrio. El soporte tiene un orificio por el que pasa la luz. Bajo el soporte se encuentra un espejo que refleja la luz para que atraviese el espcimen. El microscopio puede contar con una fuente de luz elctrica que dirige la luz a travs de la muestra. La fotomicrografa, que consiste en fotografiar objetos a travs de un microscopio, utiliza una cmara montada por encima del ocular del microscopio. La cmara suele carecer de objetivo, ya que el microscopio acta como tal. El trmino microfotografa, utilizado a veces en lugar de fotomicrografa, se refiere a una tcnica de duplicacin y reduccin de fotografas y documentos a un tamao minsculo para guardarlos en un archivo. Los microscopios que se utilizan en entornos cientficos cuentan con varias mejoras que permiten un estudio integral del espcimen. Dado que la imagen de la muestra est ampliada muchas veces e invertida, es difcil moverla de forma manual. Por ello los soportes de los microscopios cientficos de alta potencia estn montados en una plataforma que puede moverse con tornillos micromtricos. Algunos microscopios cuentan con soportes giratorios. Todos los microscopios de investigacin cuentan con tres o ms objetivos montados en un cabezal mvil que permite variar la potencia de aumento. Microscopios pticos especiales Hay diversos microscopios pticos para funciones especiales. Uno de ellos es el microscopio estereoscpico, que no es sino un par de microscopios de baja potencia colocados de forma que convergen en el espcimen. Estos instrumentos producen una imagen tridimensional. El microscopio de luz ultravioleta utiliza el rango ultravioleta del espectro luminoso en lugar del rango visible, bien para aumentar la resolucin con una longitud de onda menor o para mejorar el detalle absorbiendo selectivamente distintas longitudes de onda de la banda ultravioleta. Dado que el vidrio no transmite las longitudes de onda ms cortas de la luz ultravioleta, los elementos pticos de estos microscopios estn hechos con cuarzo, fluorita o sistemas de espejos aluminizados. Adems, dado que la radiacin ultravioleta es invisible, la imagen se muestra con fosforescencia (vase Luminiscencia), en fotografa o con un escner electrnico. El microscopio de luz ultravioleta se utiliza en la investigacin cientfica. El microscopio petrogrfico o de polarizacin se utiliza para identificar y estimar cuantitativamente los componentes minerales de las rocas gneas y las rocas metamrficas. Cuenta con un prisma de Nicol u otro tipo de dispositivo para polarizar la luz que pasa a travs del espcimen examinado (vase ptica: Polarizacin de la luz). Otro prisma Nicol o analizador determina la polarizacin de la luz que ha pasado a travs del espcimen. El microscopio tiene un soporte giratorio que indica el cambio de polarizacin acusado por el espcimen. El microscopio en campo oscuro utiliza una luz muy intensa en forma de un cono hueco concentrado sobre el espcimen. El campo de visin del objetivo se encuentra en la zona hueca del cono de luz y slo recoge la luz que se refleja en el objeto. Por ello las porciones claras del espcimen aparecen como un fondo oscuro y los objetos minsculos que se estn analizando aparecen como una luz brillante sobre el fondo. Esta forma de iluminacin se

utiliza para analizar elementos biolgicos transparentes y sin manchas, invisibles con iluminacin normal. El microscopio de fase ilumina el espcimen con un cono hueco de luz, como en el microscopio en campo oscuro. Sin embargo en el microscopio de fase el cono de luz es ms estrecho y entra en el campo de visin del objetivo, que contiene un dispositivo en forma de anillo que reduce la intensidad de la luz y provoca un cambio de fase de un cuarto de la longitud de onda. Este tipo de iluminacin provoca variaciones minsculas en el ndice de refraccin de un espcimen transparente, hacindolo visible. Este tipo de microscopio es muy til a la hora de examinar tejidos vivos, por lo que se utiliza con frecuencia en biologa y medicina. Entre los microscopios avanzados se encuentran el microscopio de campo cercano, con el que pueden verse detalles algo menores a la longitud de onda de la luz. Se hace pasar un haz de luz a travs de un orificio diminuto y se proyecta a travs del espcimen a una distancia equivalente a la mitad del dimetro del orificio, formando una imagen completa. Microscopio electrnico La potencia amplificadora de un microscopio ptico est limitada por la longitud de onda de la luz visible. El microscopio electrnico utiliza electrones para iluminar un objeto. Dado que los electrones tienen una longitud de onda mucho menor que la de la luz pueden mostrar estructuras mucho ms pequeas. La longitud de onda ms corta de la luz visible es de alrededor de 4.000 ngstroms (1 ngstrom es 0,0000000001 metros). La longitud de onda de los electrones que se utilizan en los microscopios electrnicos es de alrededor de 0,5 ngstroms. Todos los microscopios electrnicos cuentan con varios elementos bsicos. Disponen de un can de electrones que emite los electrones que chocan contra el espcimen, creando una imagen aumentada. Se utilizan lentes magnticas para crear campos que dirigen y enfocan el haz de electrones, ya que las lentes convencionales utilizadas en los microscopios pticos no funcionan con los electrones. El sistema de vaco es una parte relevante del microscopio electrnico. Los electrones pueden ser desviados por las molculas del aire, de forma que tiene que hacerse un vaco casi total en el interior de un microscopio de estas caractersticas. Por ltimo, todos los microscopios electrnicos cuentan con un sistema que registra o muestra la imagen que producen los electrones. Hay dos tipos bsicos de microscopios electrnicos: el microscopio electrnico de transmisin (Transmission Electron Microscope, TEM) y el microscopio electrnico de barrido (Scanning Electron Microscope, SEM). Un TEM dirige el haz de electrones hacia el objeto que se desea aumentar. Una parte de los electrones rebotan o son absorbidos por el objeto y otros lo atraviesan formando una imagen aumentada del espcimen. Para utilizar un TEM debe cortarse la muestra en capas finas, no mayores de un par de miles de ngstroms. Se coloca una placa fotogrfica o una pantalla fluorescente detrs del objeto para registrar la imagen aumentada. Los microscopios electrnicos de transmisin pueden aumentar un objeto hasta un milln de veces. Un microscopio electrnico de barrido crea una imagen ampliada de la superficie de un objeto. No es necesario cortar el objeto en capas para observarlo con un SEM, sino que

puede colocarse en el microscopio con muy pocos preparativos. El SEM explora la superficie de la imagen punto por punto, al contrario que el TEM, que examina una gran parte de la muestra cada vez. Su funcionamiento se basa en recorrer la muestra con un haz muy concentrado de electrones, de forma parecida al barrido de un haz de electrones por la pantalla de una televisin. Los electrones del haz pueden dispersarse de la muestra o provocar la aparicin de electrones secundarios. Los electrones perdidos y los secundarios son recogidos y contados por un dispositivo electrnico situado a los lados del espcimen. Cada punto ledo de la muestra corresponde a un pxel en un monitor de televisin. Cuanto mayor sea el nmero de electrones contados por el dispositivo, mayor ser el brillo del pxel en la pantalla. A medida que el haz de electrones barre la muestra, se presenta toda la imagen de la misma en el monitor. Los microscopios electrnicos de barrido pueden ampliar los objetos 100.000 veces o ms. Este tipo de microscopio es muy til porque, al contrario que los TEM o los microscopios pticos, produce imgenes tridimensionales realistas de la superficie del objeto. Se han desarrollado otros tipos de microscopios electrnicos. Un microscopio electrnico de barrido y transmisin (Scanning Trasnmission Electron Microscope, STEM) combina los elementos de un SEM y un TEM, y puede mostrar los tomos individuales de un objeto. El microanalizador de sonda de electrones, un microscopio electrnico que cuenta con un analizador de espectro de rayos X, puede analizar los rayos X de alta energa que produce el objeto al ser bombardeado con electrones. Dado que la identidad de los diferentes tomos y molculas de un material se puede conocer utilizando sus emisiones de rayos X, los analizadores de sonda de electrones no slo proporcionan una imagen ampliada de la muestra, como hace un microscopio electrnico, sino que suministra tambin informacin sobre la composicin qumica del material. Microscopio de sonda de barrido En los microscopios de sonda de barrido se utiliza una sonda que recorre la superficie de una muestra, proporcionando una imagen tridimensional de la red de tomos o molculas que la componen. La sonda es una afilada punta de metal que puede tener un grosor de un solo tomo en su extremo. Un tipo importante de microscopio de sonda de barrido es el microscopio de tnel de barrido (siglas en ingls de Scanning Tunelling Microscope, STM) desarrollado en 1981. Este microscopio utiliza un fenmeno de la fsica cuntica, denominado efecto tnel, para proporcionar imgenes detalladas de sustancias conductoras de electricidad. La sonda se coloca a una distancia de pocos ngstroms de la superficie del material y se aplica un voltaje pequeo entre la superficie y la sonda. A causa de la poca distancia entre el material y la sonda algunos electrones se escapan a travs del hueco, generando una corriente. La magnitud de la corriente del efecto tnel depende de la distancia entre la superficie y la sonda. El flujo de corriente es mayor cuando la sonda se acerca al material y disminuye cuando se aleja. A medida que el mecanismo de barrido mueve la sonda por encima de la superficie, se ajusta de modo automtico la altura de la sonda para mantener constante la corriente del efecto tnel. Estos ajustes minsculos permiten dibujar las ondulaciones de la superficie. Despus de muchas pasadas hacia adelante y hacia atrs se utiliza una computadora para crear una representacin tridimensional del material. Otro tipo de microscopio de sonda de barrido es el microscopio de fuerza atmica (Atomic Force Microscope, AFM), que no emplea la corriente de efecto tnel y que por lo tanto

puede utilizarse tambin en materiales no conductores. A medida que la sonda se mueve a lo largo de la superficie de la muestra los electrones de la sonda de metal son repelidos por las nubes electrnicas de los tomos de la misma. La altura de la sonda se ajusta de modo automtico para mantener constante la fuerza recibida. Un sensor registra el movimiento ascendente y descendente de la sonda y entrega la informacin a una computadora, que a su vez la utiliza para dibujar una imagen tridimensional de la superficie del espcimen.

Microscopio ptico Microscopio simple Microscopio compuesto Microscopio de luz ultravioleta Microscopio de fluorescencia Microscopio petrogrfico Microscopio en campo oscuro Microscopio de contraste de fase Microscopio de luz polarizada Microscopio confocal Microscopio electrnico Microscopio electrnico de transmisin Microscopio electrnico de barrido Microscopio de iones en campo Microscopio de sonda de barrido Microscopio de efecto tnel Microscopio de fuerza atmica Microscopio virtual Microscopio de antimateria

Historia del microscopio:

El microscopio fue inventado hacia los aos 1610, por Galileo, segn los italianos, o por Zacharias Janssen, en opinin de los holandeses. La palabra microscopio fue utilizada por primera vez por los componentes de la Accademia dei Lincei, una sociedad cientfica a la que perteneca Galileo y que publicaron un trabajo sobre la observacin microscpica del aspecto de una abeja. Sin embargo, las primeras publicaciones importantes en el campo de

la microscopa aparecen en 1660 y 1665, cuando Malpighi prueba la teora de Harvey sobre la circulacin sangunea al observar al microscopio los capilares sanguneos y Hooke publica su obra Micrographia. En 1665 Robert Hooke observ con un microscopio un delgado corte de corcho y not que el material era poroso. Esos poros, en su conjunto, formaban cavidades poco profundas a modo de cajas a las que llam clulas. Hooke haba observado clulas muertas. Unos aos ms tarde, Marcelo Malpighi, anatomista y bilogo italiano, observ clulas vivas. Fue el primero en estudiar tejidos vivos al microscopio. A mediados del siglo XVII un comerciante holands, Anton Van Leeuwenhoek, utilizando microscopios simples de fabricacin propia describi por primera vez protozoos, bacterias, espermatozoides y glbulos rojos. El microscopista Leeuwenhoek, sin ninguna preparacin cientfica, puede considerarse el fundador de la bacteriologa. Tallaba l mismo sus lupas sobre pequeas esferas de cristal, cuyos dimetros no alcanzaban el milmetro (su campo de visin era muy limitado, de dcimas de milmetro). Con estas pequeas distancias focales alcanzaba los 275 aumentos. Observ los glbulos de la sangre, bacterias y protozoos; examin por primera vez los glbulos rojos y descubri que el semen contiene espermatozoides. Durante su vida no revel sus mtodos secretos y a su muerte, en 1723, 26 de sus aparatos fueron cedidos a la Royal Society de Londres. Durante el siglo XVIII continu el progreso y se lograron objetivos acromticos por asociacin de vidrios flint y crown obtenidos en 1740 por H. M. Hall y mejorados por Dollond. De esta poca son los estudios efectuados por Newton y Euler. En el siglo XIX, al descubrirse que la dispersin y la refraccin se podan modificar con combinaciones adecuadas de dos o ms medios pticos, se lanzan al mercado objetivos acromticos excelentes. Durante el siglo XVIII el microscopio tuvo diversos adelantos mecnicos que aumentaron su estabilidad y su facilidad de uso aunque no se desarrollaron por el momento mejoras pticas. Las mejoras ms importantes de la ptica surgieron en 1877 cuando Abbe publica su teora del microscopio y, por encargo de Carl Zeiss, mejora la microscopa de inmersin sustituyendo el agua por aceite de cedro, lo que permite obtener aumentos de 2000. A principios de los aos 1930 se haba alcanzado el lmite terico para los microscopios pticos, no consiguiendo estos aumentos superiores a 500X o 1000X. Sin embargo, exista un deseo cientfico de observar los detalles de estructuras celulares (ncleo, mitocondria, etc.). El microscopio electrnico de transmisin (T.E.M.) fue el primer tipo de microscopio electrnico desarrollado. Utiliza un haz de electrones en lugar de luz para enfocar la muestra consiguiendo aumentos de 100.000 X. Fue desarrollada por Max Knoll y Ernst Ruska en Alemania en 1931. Posteriormente, en 1942 se desarrolla el microscopio electrnico de barrido (SEM).

La evolucin del microscopio se podra reconstruir del siguiente modo: 1590: En Midelburg (Holanda), Juan y Zacharias Janssen (imagen izquierda) construyen el que sera el primer microscopio compuesto de la historia (imagen derecha). De una simplicidad absoluta el mismo consista en dos lentes soportados en sendos tubos de latn de unos 25 cm de largo que se deslizaban (facilitando el enfoque) dentro de otro. 1612: Galileo Galilei incursiona en el trabajo con lentes. Ya lo haba hecho con los telescopios y los microscopios no quedaron al margen de su creatividad. Es as que fabrica uno de pequeo tamao (unos 12 cm) instalando dos lentes en sendos tubos de madera que se deslizaban dentro de uno exterior de cartn al que se le practicaron terminaciones en cuero al estilo de la poca. 1632: En Layden (Holanda), Antoni van Leeuwenhoek (imagen inferior), fabrica un microscopio simple de unos 10 cm con el que logr convertirse en el descubridor de los eritrocitos.

1665: Giuseppe Campana genera un salto cualitativo, ya que construye un microscopio de 9 cm donde el avance sustancial lo aporta un mecanismo de tornillo que facilita el desplazamiento mejorando notablemente la calidad del enfoque y una base circular de madera con un orificio central que permita observar por transparencia. 1668: Eustacchio Divini (imagen derecha), en Bologna (Italia), desarrolla un microscopio compuesto de mayor porte. El sistema estaba basado en tubos telescopados. En la parte superior del mismo coloc dos lentes enfrentados desde su lado convexo; mientras que, en la parte inferior ubic un lente montado sobre madera. La estructura estaba sostenida sobre un pie metlico.

1670: Christopher Cock y Robert Hooke (imagen inferior centro), uno aportando la construccin y el otro el diseo, son los responsables de la creacin de un microscopio compuesto de 50 cm (imagen izquierda) con el que Hooke logr observar celdillas de corcho (imagen inferior derecha) a las que denomin "clula", instaurando por primera vez el uso de esta palabra.

1680: La estructura microscpica del tejido seo es observada a travs de un microscopio simple (imagen derecha) por Juan Crisstomo Martinez (imagen inferior).

1700: En Inglaterra, John Marshall, no solo mejora la tecnologa de la platina permitiendo su desplazamiento y mejor calidad de observacin por transparencia sino que tambin optimiza el tornillo paralelo a la barra convirtindolo en micromtrico aumentando, as, la agudeza del enfoque fino. Fabrica con fines comerciales un modelo de gran tamao (aproximadamente 50 cm).

1715: Nace el modelo "Lieberkhn", el que contaba con una pieza cncava plateada (lieberkhn) que cumpla funciones de espejo condensador de la luz. La muestra es fijada mediante una pinza. 1720: Es Edmund Culpeper quien, en Inglaterra, desarrolla un microscopio de 40 cm (imagen derecha) con el aporte de un espejo colocado bajo la platina que permita una mejor iluminacin de la muestra y su mejor evaluacin por transparencia. La lente objetivo (inferior) se enroscaba en el soporte para facilitar el enfoque. 1750: Obra del alemn Nuremberg, este microscopio de 40 cm se diferencia en el hecho que la muestra era colocada en un sistema cilndrico. Para la misma poca, John Cuff mejora la estructura diseada por Culpeper, utilizando dos barras metlicas, una fija y la otra mvil. Un tornillo sujeto a ambas barras permita el enfoque fino (imagen inferior).

1770: Benjamn Martin (imagen centro) construye un modelo de 20 cm muy popular en las zonas germnicas de Europa (imagen derecha).

1835: Pequeo microscopio de 15 cm, modelo Oberhauser. 1850: Microscopio invertido modelo Lawrence Smith. 1860: Microscopio compuesto Dollond (imagen inferior) de 32 cm con espejo orientable y tornillo de tipo micromtrico con cremallera.

1880: Nachet fabrica un microscopio monocular de 28 cm y aporta la adaptacin de los binoculares graduables a un microscopio. Tambin para la poca aparece el sistema revolver para el cambio de objetivos.

1900: Microscopios de diseccin de Carl Zeiss.

Siglo XX: El microscopio va a conservar sus caractersticas generales. Pequeas modificaciones solo mejoran algunas prestaciones sin apartarse de la esencia alcanzada. Alguna de stas, fueron la incorporacin de un carro para desplazar la muestra sobre la platina, el sistema elctrico de iluminacin incorporado, etc. En la actualidad, la utilizacin de Microscopios Electrnicos de Transmisin y los de Barrido han permitido obtener imgenes de gran resolucin en materiales ptreos, metlicos y orgnicos.

Ilustracin 1 Microscopio de barrido electrnico

Ilustracin 2 Microscopio compuesto fabricado en 1751

Ilustracin 3 Microscopio Optico

Ilustracin 4 Microscopio simple

Ilustracin 5 Microscopio de sonda de barrido

Ilustracin 6 Microscopio electronico