SEMINARIO CURSO BIO-145

TOXINAS EN AGUA Y ALIMENTOS: VENENO PARALIZANTE DE MARISCOS.

KATIA SOTO LIEBE Estudiante de Doctorado en Ciencias-GMM

Toxinas asociadas con microalgas en ambientes marinos.

Paralytic Shellfish Poisoning Diarrhetic Shellfish Poisoning Neurotoxic Shellfish Poisoning Ciguatera Fish Poisoning Amnesic Shellfish Poisoning Cmo llegan estas toxinas a los humanos?

Acumulan Toxinas!

Toxinas asociadas con microalgas en ambientes de agua dulce: cianobacterias. Toxinas paralizantes Hepatotoxinas
Cilindrospermopsina Microcistina
Lyngbya wollei

Microcystis aeroginosa Aphanizomenon flosaquae

Cylindrospermopsis raciborskii

Anabaena lemmermanni Anabaena circinalis Anabaena sp.

Planktothrix agardhii

TEMAS
Veneno paralizante de Mariscos: Saxitoxina y sus anlogos. 1. Intoxicacin. 2. Distribucin. 3. Deteccin en agua y alimentos. 4. Aproximacin experimental hacia un tratamiento eficaz.

Veneno paralizante de Mariscos: Saxitoxina y sus anlogos.

Na+

STXs

1. Intoxicacin
El sndrome de intoxicacin asociado con niveles suaves a moderados consisten en: estado general de malestar, parestesia facial, astenia, distona, ataxia, dispnea, hipotensin, taquicardia, sensacin de fro y calor, vmito, disfagia, dolor de cabeza y malestar intestinal.

Toxinas VPM: Impiden la transmisin del impulso nervioso (muerte por paro respiratorio)

STX presenta la mayor tasa de mortalidad (13%) de todas las toxinas marinas.

2. Distribucin
Distribucin a nivel mundial de Toxinas Paralizantes.

TP

3. Deteccin
a) Bioensayo de ratn (40 g de PST por 100 g carne) ELISA b) HPLC (PSP=20 fg por 100 g de carne)

c) Ensayo electrofisiolgicos d) Ensayo en clulas de neuroblastoma de ratn (20 nM STX eq)

a) Bioensayo en ratn

http://www.ifop.cl/marearoja/toxinas2.htm

b) HPLC

4. Aproximacin experimental hacia un tratamiento eficaz.

Diseo experimental I Toxina

estmago

Durante 5 hpi Cada 30 min

Presin sangunea Sangre (vena femoral) Orina Toxinas

Gato (6)
Correspondera a una intoxicacin en humanos, con 379 g GTX2/3

Resultados

Deteccin de la toxina en muestras de sangre 240 min.p.i. muestra control

Deteccin de la toxina en muestras de orina 1 h.p.i. estndar

muestra
Muestra+estndar

estndar

control

La primera funcin vital que se ve afectada por intoxicacin con la toxina del VPM, es la presin arterial.

muerte

En los animales no-tratados con dobutamina se observ una disminucin de la presin arterial, hasta alcanzar un 25% del valor normal a los 240 min.p.i. En los animales tratados con dobutamina, nunca baj ms de un 50% del control. La produccin de orina se detiene a los 240 min.p.i., en los animales no tratados con dobutamina.

Toxicocintica para animales intoxicados con VPM.

La primera muestra de sangre positiva para la toxina del VPM es 1 h.p.i. La toxina est presente a los 30 min.p.i., pero en niveles bajo el lmite de deteccin del mtodo. Cuando se alcanza el plat en la curva, no se logra una disminucin de los niveles de toxina, debido a la falla en la diuresis.

La principal va de excrecin de la toxina es por la orina.

El total de toxina excretada por la orina durante las primeras 5 h.p.i., alcanz slo un 23,7% de la dosis suministrada. Se analizaron muestras de bilis como otra va de excrecin, pero no se detect la toxina. Al evaluar el proceso de filtracin gromerular mediante la deteccin de creatinina, se observa que hay una falla por efecto de la intoxicacin. En un animal con parmetros de presin y diuresis normales, la orina ser su principal va de eliminacin de la toxina.

Slo los epmeros suministrados al animal fueron detectados en las muestras analizadas, lo que indica que no ocurri transformacin enzimtica o qumica.

Toxicidad

La absorcin de los epmeros GTX2/3 de la toxina del VPM, se realiza a nivel intestinal.

Diseo experimental II Toxina

estmago duodeno 5 hpi

Presin sangunea Sangre (vena femoral) Orina Toxinas

Luego de 5 h.p.i., se recuper el 80% de la toxina suministrada y no se observ ningn sntoma de intoxicacin. Estos resultados indican, que la totalidad de la absorcin de la toxina se realiza a nivel intestinal.

Tratamiento en humanos

- Verano del ao 2002 se generaron 25 intoxicaciones en el rea de Quelln y Castro, con un saldo de 4 muertes. - El anlisis de los mariscos consumidos revel una concentracin de 8100 g/100 g de carne de molusco (la norma es de 80 g).

El tratamiento empleado en estos pacientes consisti en:

Hidratacin 1L solucin lctica, 1L de solucin salina suplementada con 4 g de KCl. Dobutamina droga vasoactiva requerida para revertir la baja presin arterial. Furosemida fu utilizado como diurtico para estimular la liberacin renal de STXs. Ranitidina.

frecuencia respiratoria

frecuencia cardiaca

presin arterial

Figure 1. A. Record of respiratory frequency (breaths/min) during 24 hours of the 4 patients intoxicated with PSP-contaminated shellfish. Arrow shows the starting time of the treatment in the hospital facility. B. Record of arterial blood pressure (mmHg) during 24 hours of the 4 patients intoxicated with PSP shellfish. ( systolic blood pressure; diastolic blood pressure). C. Record of heart rate (bpm). The values are Mean SEM, N = 4.

Antagonistas de STX
( bloqueador de los canales del potasio a nivel celular)

- 4-aminopiridina (4-AP) En experimentos in vivo en ratones, este tratamiento redujo la mortalidad de ratones tratados con dosis letal de STX, de 71 a 43% Chen y col, 1996
Na+ K+

Ca+

X 4-AP

STXs

- Estudios in vivo realizados en Guinea Pigs, demostraron que el uso de 4-AP fue eficaz en prevenir el colapso cardio-respiratorio en 3/7 individuos, en un grupo que fue tratado 10 minutos antes de la inyeccin con STX. - Cuando el antagonista se suministra en tiempos cercanos al colapso respiratorio causado por STX, se requiere aplicar ventilacin artificial y bicarbonato de sodio para promover la recuperacin de la falla respiratoria (Benton y col, 1998).

- No existen estudios en humanos que avalen el uso de 4-AP. - Una explicacin para eso, podemos encontrarla quizs, en un reporte del ao 1997, donde se ha descrito que su uso farmacolgico en humanos podra ser indicado slo en intoxicaciones subletales de STX, ya que las altas dosis de 4-AP requeridas para intoxicaciones letales pueden generar efectos secundarios indeseados (Chang y col, 1997).

Anticuerpos anti-STX

- En este caso el antdoto preparado no logr recuperar la frecuencia ventilatoria de los animales sometidos a dosis letales de STX. - En este trabajo se seala que el gran peso molecular de la -STX antitoxina (>150 kDa) limit la entrada de la molcula al sistema nervioso central (Benton y col, 1994).

CONCLUSIONES
Discusin abierta