“LA TECNICA HISTOLOGICA BASICA”

1- Haga un esquema de un sistema de deshidratación de tejidos e

impregnación con parafina (histoquinete).

2-la siguiente es la solución fijadora utilizada

en nuestro laboratorio de Histopatología. Explique cuál es la función de los dos
últimos componentes de la solución.

Formaldehido 37% 100ml

Agua destilada 900ml

Fosfato de sodio monobásico 4.0g

Fosfato de sodio dibásico 6.5g

Respuesta: Ayudan a mantener los tejidos.

3. Por que deben cambiarse regularmente los alcoholes utilizados en el proceso
de deshidratación?

Graduación de los alcoholes: en la práctica la operación de deshidratación se realiza empleando una

serie de alcoholes de gradación ascendente (50, 70, 80, 95, absoluto).

Esto se hace así porque la acción brusca de un alcohol de mayor gradación sobre el tejido provocaría
una marcada retracción de éste, el empleo de series más o menos largas de alcoholes de distinta
gradación así como la decisión de iniciar el proceso en un alcohol de gradación media o menor van a
estar en función primero de la experiencia del personal, de la fragilidad de los tejidos y del tipo de fijador
utilizado, ya que los fijadores con base alcohólica realizan cierta deshidratación durante el proceso de
fijación.

4-cuál es el punto de fusión de la parafina de uso histológico?

58-60 grados centígrados.

5- Que sustancia se utiliza para hacer virar la hematoxilina?

Para que lleve a efecto la coloración es indispensable recurrir al empleo de sustancias intermediarias que
faciliten la adhesión del colorante en las estructuras tisulares. La sustancia intermediaria que se utiliza se
denomina “mordiente”. El mordiente se aplica antes de la utilización de la solución colorante o puede
formar parte de ella. La combinación que se efectúa entre el mordiente y el colorante se denomina “laca”.
La mayoría de las soluciones colorantes de hematoxilina requieren de un mordiente para que aquella
proporcione color.

Los núcleos mediante una hematoxilina, previamente oxidada y transformada en hematina a la que se le
añade una sustancia mordiente para formar una laca (para tal fin se usan sales metálicas de aluminio,
plomo o fierro).

6-Cual es el solvente utilizado para preparar la eosina madre?

Etanol

7.- Indique cual es la afinidad tintorial de los siguientes componentes:

Cromatina: Basofílica.

Queratina: Eosinofílica.

Colágena: Eosinofílica.

Matriz Condral: Basofílica.

Matriz Ósea: Eosinofílica.

8.- Defina os siguientes términos:

Autolisis: desintegración de un tejido u órgano por las enzimas segregadas por el propio
organismo afectado.

Heterólisis: lisis celular por enzimas proteolíticas de otras células.

Putrefacción: transformación y fragmentación de la materia orgánica muerta en productos más

simples por acción de las bacterias.

Polímero: son materiales de origen natural como sintético, formado por moléculas de gran
tamaño, conocidas como macromoléculas.

Impregnación: proceso que tiene por objeto rellenar o infiltrar completamente la muestra
histológica con el medio que se va a usar para la imbicion del tejido

Viraje: someter a la acción de un líquido para fijar el color de la imagen o hacer tomar otro
color.

Buffer: es la mezcla de un acido débil y su base conjugada, su función es la de mantener

estable e pH de una solución.

Mordente: cualquier sustancia que forme compuestos insolubles con colorantes y determine su
fijación a las bacterias.

Artefacto: las moléculas de colorante forman en ocasiones precipitados o agregados que

parecen estructuras celulares autenticas, pero que son artificiales inducidas por el colorante.

9-Revise las dos primeras características que debe tener una solución fijadora ideal.

Indique cual función cumplen:

a) Ser de acción rápida: matar inmediatamente a las células, impidiendo la aparición de los
procesos autolíticos.

b) Tener adecuada capacidad de penetración: Mantiene de manera adecuada la estructura

y facilita la coloración posterior de los componentes celulares y tisulares.

10.-Defina los siguientes términos:

a) Biopsia incisional: se extirpa parte de la lesión, exclusivamente con un propósito
diagnostico (en lesiones de gran tamaño)
b) Biopsia excisional: se extirpa la lesión completa en un solo tiempo.
c) Biopsia por punción: se utiliza tanto en lesiones pequeñas como en las más grandes,
Mediante una aguja gruesa y con anestesia local se obtiene un cilindro de la lesión que
hay que estudiar.
 d) Pieza quirúrgica: son de mayor tamaño a menudo comprenden órganos e incluyen
toda la lesión.
e) Autopsia: se realiza una serie de manipulaciones instrumentales al cadáver con el
propósito de investigar en sus órganos la causa del fallecimiento.

TECNICAS DE TINCION HISTOLOGICA

Hematoxilina-eosina

La hematoxilina es un colorante catiónico mientras que la eosina es un colorante

aniónico perteneciente a los xantenos. Se teñirán los núcleos de azul, citoplasmas en
rosa, músculo en tonos rojizos a rosados fucsia, glóbulos rojos en naranja o rojo y la
fibrina en rosa intenso.

1º-Desparafinado.
Estufa durante 30 min. a 60º. 5º- Lavar en H2O-2min.
Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min.

2º- Hidratación.
Alcohol absoluto-5min.
6º-Eosina alcohólica-1min.
Alcohol 96º-5min.
Alcohol 70º-5min.

7º-Deshidratar.
Alcohol de 70º
3º- Lavar en H2O destilada. Alcohol de 96º.
Alcohol absoluto.
Xilol.

4º- Hematoxilina-5min. 8º- Montaje.

Giemsa

La técnica radica en la disociación controlada de las sales de eosinato que ocurre al

insolubilizar la mezcla del giemsa por disolución en H2O destilada; la eosina así
liberada colorea el componente extracelular y determinadas extructuras acidófilas; y los
derivados de azur, las estructuras de carácter basófilo. La cromatina nuclear adopta
una tinción azul violeta.

1º- Desparafinar. 7º- Alcohol de 96º- 2-3 pases rápidos.

Estufa durante 30 min. a 60ºC
 Sumergimos en xilol durnate 10 o 15 min.
2º- Hidratación.
Alcohol absoluto-5min.
8º- Alcohol isopropílico -3 min.
Alcohol 96º -5min.
Alcohol 70º -5min.
3º- Lavar en H2O destilada. 9º - Alcohol isopropílico -3 min.
4º- Solución Giemsa al 20 %- 45 min. 10º- Xilol.
5º -Lavar con agua corriente 5 - 10min. 11º- Montar.
6º-Alcohol 70º - 2-3 pases rápidos  

Gram

Permite la observación de bacterias, pero no su identificación específica. Permite

observar su morfología, e incluso si una vez teñidos son gram + ó gram - ó ácido
alcohol resistentes. Tiñe los organismos Gram+ de azul negruzco, Gram- de rojo y el
fondo rosa.

Desparafinar e hidratar. 8.- Lavar en agua corriente

2.- Solución cristal violeta ( filtrado ) - 2 min.
3.- Lavar rápidamente con agua corriente.
4.- Solución Lugol -1 min.
5.- Lavar en agua corriente.
6.- Decolorar con solución éter-acetona, gota a
gota, hasta que no suelte más color.
7.- Solución Fucsina básica ( filtrada ) - 3 min.
9.- Sumergir en acetona para que empiece la
diferenciación, y continuarla con la solución de
acetona-ácido pícrico, hasta que los cortes
estén amarillo-rosado.
10.- Lavar rápidamente en acetona.
11.- Lavar en solución acetona-xilol.
12.- Aclara con xilol
13.- Montar.
 

Tricromico de Masson

Es una técnica para la coloración de fibras colágenas y elásticas. Se observan tres

colores distintos; tejido conjuntivo de verde, tejido muscular de verde pardo, eritrocitos
de rojizo, núcleos azul negro y citoplasma y fibras musculares rosa.

1º-Desparafinado.
Estufa durante 30 min. a 60º. 7º- Ácido fosfomolíbdico 5 min.
Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min.
2º- Hidratación. 8º- Ácido fosfomolíbdico 5 min.
 Alcohol absoluto-5min.
Alcohol 96º-5min.
Alcohol 70º-5min.
3º- Lavar en H2O destilada. 9º- Verde luz 5-7 min.
10º-Deshidratar.
Alcohol de 70º
4º- Hematoxilina de Weigert 5 min.
Alcohol de 96º.
Xilol.
5º- Lavar con agua corriente 10 min. 11º- Montaje.
6º- Fucsina de Ponceau 5 min.  

PAS

Se usa como técnica de rutina para observar las membranas basales que separan el
tejido epitelial del corión. Tiñe los núcleos de color azul, el glucógeno de color púrpura y
el material PAS + (polisacáridos simples, mucopolisacáridos neutros, mucoproteínas,
glucoproteínas y glucolípidos) rojo rosa.

Desparafinar e hidratar. 7.- Hematoxilina de Mayer ------------ 10

min.
2.- Ácido periódico al 5 % --------------5 8.- Lavar con agua corriente -----------5
min. min.
3.- Lavar en agua corriente--------------5
min. 9.- Deshidratar.

4.- Reactivo de Shiff --------------------- 15

min. 10.- Aclarar con xilol.

5.- Bisulfito sódico al 2 % ------------------5

min. 11.- Montar.

6.- Lavar en agua corriente --------------5

min.

Elástica de Van Gieson

 Es una técnica para la coloración de fibras colágenas y elásticas. El colágeno parece
que capta un colorante ácido. Tiñe el colágeno de rojo, núcleos y fibras elásticas de
negro y citoplasma de amarillo.

Desparafinar e hidratar 6.- Picrofucsina -------------------1 pase

2.- Hematoxilina de Verhoeff ---------30
7.- Deshidratar
min.
3.- Lavar ------------------------------------1
8.- Aclara con xilol
pase
4.- Cloruro férrico al 1 % ---------------1
9.- Montar
pase
5.- Lavado en agua corriente ---------1
 
pase