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APUNTE Genetica Bacteriana
APUNTE Genetica Bacteriana
Gentica bacteriana
Luis A. Merino
Fig. 1: Estructura de
un nuclotido
Funciones de ADN
1. El ADN confiere a la bacteria todas sus caractersticas genticas. El cromosoma se subdivide en
segmentos denominados loci que actan como unidades genticas funcionales (genes). Cada gen
posee una secuencia de bases y por lo tanto, determina la estructura de un polipptido. La localizacin de cada gen dentro de un cromosoma constituye el denominado mapa gentico de la bacteria.
Se ha establecido que la composicin de bases de un cromosoma se expresa como el porcentaje de
guanina-citosina sobre el nmero total de bases y este porcentaje puede ser utilizado para estudiar
relaciones filogenticas entre diferentes bacterias.
2. Interviene en los mecanismos de transferencia gentica de bacteria madre a hija.
3. La duplicacin del ADN trae aparejada la simultnea divisin celular.
4. Regula la sntesis proteica ya que es capaz de portar genes que codifican hasta 4.000 cadenas polipeptdicas diferentes, cuya sntesis requiere la formacin inicial de ARN a partir del ADN mediante la
ARN-polimerasa en un proceso denominado transcripcin.
separan dividiendo el mesosoma sobre el cual estaban fijos, asegurando al mismo tiempo la divisin bacteriana mediante la formacin de septos.
ARN BACTERIANO
Son tres los tipos de ARN presentes en el citoplasma bacteriano:
1. ARN mensajero (ARNm) que lleva el menaje gentico que codifica la sntesis de protenas recogida
en forma de tripletes de bases (codones).
2. El ARN ribosmico (ARNr) que es quien traduce el mensaje del ARNm. Consta de dos subunidades
(50S y 30S) con dos lugares funcionales: aminoacil o aceptor (sitio A) donde se unen los aminocidos y peptidil o dador (sitio P).
3. El ARN de transferencia (ARNt) es el encargado de transportar los aminocidos hacia el ribosoma
para realizar la sntesis proteica. (Figura 4).
Fig. 4: Formacin de polirribosomas y sntesis proteica. A: subunidades ribosmicas; B: extremo 5
del ARNm; C,D y F: cadenas
polipeptdicas en desarrollo; F:
extremo terminal 3 del ARNm;
G: Sntesis completa del polipptido; H: subunidades ribosmicas
salientes.
ADN EXTRACROMOSMICO
Plsmidos
Se consideran como tales una serie de molculas facultativas no esenciales para la bacteria con las
siguientes caractersticas:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
5. Plsmidos degradantes: portan genes capaces de codificar enzimas que las bacterias utilizan para
degradar sustancias presentes en el ambiente como tolueno, alcanfor y salicilatos. Son frecuentes en
bacterias que habitan el suelo.
Fig. 6: modelo de plsmido portador
de genes de resistencia a diferentes
antimicrobianos.
FTR: factor de
transferencia de la resistencia. Cm:
cloramfenicol. Sm: estreptomicina.
Nm: neomicina. Su. sulfas. Tc: tetraciclina.
De sensibilidad a antimicrobianos: de gran importancia en infectologa. Se manifiesta por la produccin de enzimas inactivantes de antimicrobianos o por cambios en los sitios sobre los cuales
acta el antibitico. En algunos casos la mutacin no se expresa fenotpicamente y entonces a la
bacteria se la denomina mutante reprimida, pero en determinada circunstancia sta puede comenzar a expresar el nuevo fenotipo y entonces pasa a ser una mutante desreprimida.
5. La tasa de aparicin de mutaciones puede incrementarse ampliamente por el uso de radiaciones
ionizantes o ultravioletas, por productos qumicos como la mostaza nitrogenada, mitomicina C, 5bromouracilo, cido nitroso, etc. A todos estos agentes se los denomina mutgenos.
TRANSFERENCIA DE MATERIAL GENTICO
Las bacterias pueden cambiar su composicin gentica no slo por mutaciones sino por la adquisicin
de ADN proveniente de otras bacterias o virus. Estas transferencias pueden llevarse a cabo por los siguientes mecanismos: Transformacin, Transduccin, Transfeccin, Conversin y Conjugacin.
El ADN transferido se denomina exogenote por su condicin de extrao y puede permanecer libre en el
citoplasma bacteriano o incorporarse al ADN cromosmico (endogenote) en un proceso de recombinacin o integracin.
Transformacin
Ciertas bacterias son capaces de tomar ADN exgeno a partir del medio ambiente e integrarlo a su cromosoma propio. El ADN se fija a la pared celular, es dividido en pequeos fragmentos, atraviesa la
membrana citoplasmtica y en el interior se separan las dos cadenas de las cuales slo una se integrara
al cromosoma.
Transduccin
Es la transferencia de un fragmento de ADN de una bacteria a otra por intermedio de un bacterifago
cuyo cido nucleico es un ADN bicatenario. La transduccin puede ser generalizada o restringida.
Transduccin generalizada: al ingresar el fago induce una nucleasa que fragmenta el cromosoma bacteriano a la vez que se forma ADN vrico y protenas de envoltura viral. Las protenas rodean al ADN vrico
y a los fragmentos de ADN bacteriano. Se produce la lisis celular con liberacin de los bacterifagos
nuevos. Al infectarse una nueva clula con el fago portador del fragmento de ADN bacteriano, la bacteria
no es lisada sino que el fragmento de ADN se incluye en el ADN de la bacteria infectada (Figura 7).
Transduccin restringida o especializada: Cuando un fago no ltico infecta una bacteria, el ADN fgico se
incorpora al ADN bacteriano (profago) y la bacteria permanece en estado lisognico hasta que algn
factor induce la transformacin del profago en fago vegetativo y es en ese momento en el que el profago
se separa del ADN bacteriano arrastrando algunos genes circundantes y la bacteria inicia un ciclo ltico
con la liberacin de bacterifagos portadores de genes propios y ajenos. Cuando este bacterifago in5
fecta a otra bacteria le transfiere ciertas caractersticas de la bacteria anterior pero sin dar lugar a un
ciclo ltico. (Figura 8).
Transfeccin
Es la infeccin de la clula bacteriana con el ADN obtenido previamente de un virus. El resultado es la
produccin de virus completos dentro de la bacteria con la posterior lisis de sta. Para que se produzca
la transfeccin la bacteria debe estar en estado de competencia. Tiene gran aplicacin en ingeniera
gentica.
Conversin
Cuando el ADN de un bacterifago se integra a un cromosoma bacteriano estamos en presencia de una
conversin lisognica y aunque no hay transferencia de genes de una bacteria a otra, la bacteria infectada puede adquirir caractersticas que ante no posea como ser la produccin de toxinas.
Conjugacin
Es la transferencia de material gentico de una bacteria a otra por contacto directo entre ellas. La capacidad de transferir ADN est codificada en el plsmido que se conoce como factor de transferencia o
+
factor sexual. Las clulas que lo poseen se llaman F , masculinas o donantes y las que carecen de l
se denominan F , femeninas o receptoras. El resultado de la conjugacin es una bacteria con las caractersticas de las dos cepas progenitoras. Para que se realice la transferencia es necesaria la presencia
de pili sexuales (que son filamentos huecos) o de pili de sujecin o anclaje que mantendran juntas a
las dos clulas establecindose un puente entre las membranas citoplasmticas por las que pasara el
ADN. En algunas bacterias el factor F+ se encuentra integrado en el cromosoma y estas clulas pueden
transferir genes cromosmicos a bacterias F- con gran frecuencia y se denominan Hfr (high frecuency
recombination)
ESTUDIO DEL GENOMA BACTERIANO - MTODOS Y APLICACIONES
ELECTROFORESIS EN GEL DE AGAROSA
Extraccin del ADN: la lisis celular es el primer paso para la extraccin del ADN bacteriano. Las clulas
en crecimiento exponencial se someten a la accin de enzimas (lisozima), antibiticos (penicilina), calor,
agentes tensioactivos (polianetol sulfonato de sodio), lcalis (NaOH), etc. o una combinacin de stos,
lo que destruye la pared celular liberando sus componentes citoplasmticos incluyendo el ADN.
Purificacin del ADN: El ADN se purifica con solventes orgnicos como el alcohol o fenol y el ARN que
est presente se destruye por accin de una ARNasa.
Digestin: una vez extrado y purificado, el ADN cromosmico puede ser dividido en fragmentos pequeos por enzimas de restriccin, o sea enzima que cortan la cadena en secuencias de bases especficas que presentan simetra binaria alrededor de un punto dado.
Por ejemplo, la enzima EcoRi presente en Escherichia coli corta al ADN cuando encuentra la siguiente
secuencia:
5 . . . G-A-A-T-T-C . . . 3
3 . . . C-T-T-A-A-G . . . 5
Dado que esas secuencias pueden encontrarse varias veces dentro del genoma bacteriano, el ADN fragmentado resulta en numerosos fragmentos de diferente nmero de pares de bases y por ende de diferente peso molecular (Figura 9)
Lisis
Extraccin
Digestin
El producto de esta amplificacin puede evidenciarse en gel de agarosa teido con bromuro de etidio o
puede hibridizarse con una sonda marcada, que son los procedimientos ms usados.
Esta tcnica puede utilizarse para detectar pequeas cantidades de genoma de un agente infeccioso en
una muestra clnica o para detectar ciertos genes de secuencia conocida dentro del genoma de algn
agente infeccioso.
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