Manual

de Indicaciones
Tcnicas para Insectarios

Dra. Omayda Prez, Lic. Jinnay Rodrguez, Lic. Juan A. Bisset PhD,
Tc. Maureen Leyva, Tc. Manuel Daz, Lic. Omar Fuentes,
Tc. Francisco Ramos, Tc. Ral Gonzlez y Lic. Israel Garca PhD

Ciudad de La Habana, Editorial Ciencias Mdicas, 2004

CONTENIDO
Resumen / 1.
Introduccin/ 2-3.
Captulo I: Reglamento y regulaciones internas /4.
Captulo II: Caractersticas de las instalaciones/5-8.
Captulo III: Normas generales del insectario/9.
Captulo IV: Principios ticos/10.
Captulo V: Medidas higinico sanitarias/11-12.
Captulo VI: Especies perjudiciales/13-15.
Captulo VII: Manejo de las especies en insectario: metodologa de cra y
medidas de bioseguridad/16-53.
ndice de fotos.
Foto 1. Instalacin de la fase larval de cualquier especie de culcido/5.
Foto 2. Instalacin para la fase adulta de cualquier especie de insecto/6.
Foto 3. La araa Nesticodes rufipes aislada en nuestro laboratorio/13.
Foto 4. Tapinoma melanocephalum hormiga depredadora de huevos de Aedes
aegypti/14.
Foto 5. Diferentes estadios inmaduros de Aedes aegypti/18.
Foto 6. Jaula para adultos de mosquitos Aedes aegypti/27.
Foto 7. Animales utilizados para la hematofagia. A: Curiel, B: Ave corral, cepo
que la contiene/29-30.
Foto 8. Diferentes estadios inmaduros (larvas y pupas) de Culex
quinquefasciatus/33.
Foto 9. Eliminacin de larvas o pupas y el lquido de cra con tamiz/36.
Foto 10. Tratamiento para desechar torundas con azcar utilizados en la fase
adulta de culcidos/38.
Foto 11. Alimentacin de Triatoma flavida, utilizando curiel/41.
Foto 12. Recipiente de mantenimiento de Blattella germanica/43.
Foto 13. Bandeja con medio contenida en la de aserrn/51.
Foto 14. Larvas y pupas que migraron del medio al aserrn/52.
Bibliografa/54-59.
Agradecimientos/60.

MANUAL DE INDICACIONES TCNICAS PARA INSECTARIOS.

RESUMEN.
El insectario constituye la base para la cra y el mantenimiento de insectos que se
utilizan con fines investigativos, docentes u otros.
El presente trabajo, responde a la necesidad de que exista un manual para la
cra y manejo de las diferentes especies de insectos, vectores de enfermedades
del hombre y otros animales, que se colonizan en el Insectario del Instituto de
Medicina Tropical Pedro Kour , que permita homogenizar los parmetros a
tener en cuenta, con el propsito de obtener un material biolgico de ptima
calidad. Este manual tambin incluye las medidas de bioseguridad que deben ser
consideradas para el trabajo con estos insectos.
En este documento se describen procedimientos o metodologas para la cra de
insectos de las familias: Culicidae (Aedes aegypti y Culex quinquefasciatus),
Blattellidae (Blatella germanica), Muscidae ( Musca domestica ) y Reduviidae
(Triatoma flavida ) elaborados en base a la propia experiencia de 5 aos de
trabajo, y a lo descrito en la literatura. Se incluyen adems, aspectos relativos a:
Reglamento y regulaciones internas del insectario, caractersticas de las
instalaciones (iluminacin, temperatura y humedad relativa), rea de cuarentena,
principios ticos, medidas higinico sanitarias y organismos perjudiciales.

INTRODUCCION
El Insectario constituye la base para la cra y mantenimiento de los insectos que
se utilizan con fines investigativos, docentes u otros. El Insectario del
Departamento de Control de Vectores del Instituto de Medicina Tropical Pedro
Kour , en la Ciudad de la Habana, Cuba, se dedica a la colonizacin de algunas
especies de insectos que resultan de inters para las investigaciones mdicoepidemiolgicas, que estn directamente vinculadas a las prioridades de los
Programas Nacionales de Salud del pas. Las principales especies representadas
pertenecen a las familias: Culicidae (Aedes aegypti y Culex quinquefasciatus),
Blattellidae (Blatella germanica), Muscidae (Musca domestica)

y Reduviidae

(Triatoma flavida).
Es un requisito fundamental en la cra y mantenimiento de insectos, el
conocimiento de las

tcnicas y condiciones ambientales necesarias para el

desarrollo de estos, lo que justifica la creacin de una gua o manual que las
refleje, con el objetivo de lograr homogeneidad, tanto en una como en otro,

as poder obtener un material biolgico ptimo para el trabajo con los mismos.
Otro aspecto importante es el relacionado con el control y la exigencia al personal
involucrado en el trabajo con estas especies, ya que constituyen vectores de
enfermedades del hombre y otros animales.
Entre los pocos trabajos que reflejan de manera integrada el manejo de insectos
en condiciones de insectarios se encuentran: Manual de la OPS, 1984, Consoli e
De Oliveira, 1994,

adems en nuestro pas existe la necesidad de buscar

uniformidad en el trabajo de la cra y mantenimiento de los diferentes insectos

que se utilizan en las investigaciones bsicas y aplicadas en el campo de la
2

entomologa mdica y en el control de vectores. Por estas razones nos dimos a la

tarea de elaborar el presente manual, para las condiciones propias de Cuba.

Captulo I: Reglamento y Regulaciones internas

Este reglamento constituye un documento oficial, y fue elaborado por directivos
e investigadores del Departamento de Control de Vectores del IPK. Contiene las
indicaciones para el trabajo en el insectario, y se cre para regular la actividad
del mismo desde su inicio. Este contempla los siguientes acpites:
1. - Acceso al Insectario. Ser limitado para el personal ajeno al mismo, el
cual deber ser autorizado por los directivos establecidos. Se dispondr de un
libro de registro y control del personal.
2. Regulacin de especies vectoras a colonizar. Las especies en cra se
expondrn de manera visible y su utilizacin se justificara debidamente, acorde
con los temas de investigacin de nuestra Institucin, u otros autorizados por
el personal correspondiente.
En cada cubculo,

se deben delimitar

las especies de mosquitos,

u otros

insectos, de riesgo biolgico con barreras fsicas para evitar su fuga.

3. -

Solicitud de material biolgico institucional.Todo material biolgico

que se solicite; se debe controlar mediante un registro.

4. - Solicitud de transportacin de material biolgico del Insectario a
otros centros. Se realizar con previa autorizacin de los directivos establecidos.

Captulo II: Caractersticas de las Instalaciones

II.1 Distribucin de los locales.
Nuestro insectario se proyect segn normativas nacionales e internacionales que
responde a los requisitos descritos por algunos artculos tales como: Consoli e De
Oliveira ( 1994 ),
de Vectores

OPS OMS, (1983, 1984) y el Curso Internacional Control

y Epidemiologa y Control de Enfermedades Transmitidas por

Vectores, Universidad Carolina del Sur, EUA (1982). *

Presenta una puerta de

entrada y

salida del personal, y tiene en total 10

instalaciones:
-

4 cuartos para la cra de la fase larval. Ver Foto 1.

Foto 1. Instalacin de la fase larval de cualquier especie de culcido

4 para la cra de adultos de diferentes especies de insectos. Ver Foto 2

Foto 2. Instilacin para la fase adulta de cualquier especie de insecto.

- Un rea independiente,

para bioensayos de culcidos, donde se evala la

susceptibilidad a insecticidas,

la cual dispone de estantes movibles, donde se

mantienen los animales (mamferos) que sirven de fuente de alimentacin para

los insectos hematfagos.
- Un ltimo cuarto, destinado a la cuarentena de los insectos que ingresan al
Laboratorio procedente de la naturaleza.
Cada grupo de trabajo, dispone de una o dos instalaciones para desarrollar la
colonizacin de las especies de acuerdo

a sus requerimientos bioecolgicos.

Estas instalaciones cumplen con los siguientes requisitos:

Para la fase adulta, se disponen de cubculos que tienen los

compartimientos (tres) limitados por puertas con mallas de orificios
pequeos (1 mm cuadrado), para evitar la fuga de insectos voladores.

Para las larvas, poseen una sola barrera, que es la puerta que comunica
la instalacin con la puerta de salida.

Todos los conductos de salida

de ventilacin,

as como las puertas

estn protegidos por mosquiteros.

El piso posee un tragante especfico con tapa de rosca.

* En lo adelante se designara con las siglas CICVECETV( 1982).

II. 2 Iluminacin.
Debe ser permanente y estable, segn OPS- OMS (1983) que plantea que tanto
la intensidad como el foto perodo afectan el ciclo de vida de los mosquitos, y
que ambos tienen valores especficos para cada especie. No obstante, otros
investigadores Consoli e De Oliveira (1994), CICVECETV (1982); sealan que 10
horas de oscuridad y 14 de luz es lo ms indicado para la mayora de la especies.
En nuestro laboratorio,
lmpara de

disponemos de iluminacin artificial fluorescente, una

40 Watt en cada compartimiento de la instalacin,

con un foto

perodo de 10 horas de luz y 14 de oscuridad para todas las especies. Existen

otras experiencias ( CICVECETV, 1982 ) en las que se ha aplicado este mismo
foto perodo para el estadio larval de mosquitos, y completa oscuridad para la
fase adulta, a fin de estimular

la reproduccin. En condiciones similares

trabajaron Gonzlez (1985) y Flaming (1987) para la colonizacin de Anophele,

las cuales no mantuvieron para otras especies.

II. 3 Temperatura y Humedad Relativa.

Las larvas de los mosquitos viven en medio acutico, y las mismas pueden verse
afectadas por variaciones de la temperatura ambiente. De manera general, se
reconoce la existencia de un rango de temperatura,

cuyo limite mnimo

corresponde al retardamiento o parada del desarrollo de la larva ,y el limite

mximo a un efecto letal . Existe otro rango favorable al desarrollo larval , que
se identifica en base a la tasa de mortalidad,

se sita entre 20 y 30

C,

aunque se pueden observar casos como el del Aedes aegypti, con un intervalo
de 14 a 30 0 C (Forattini, 2002).
La temperatura optima para el desarrollo, varia para cada especie, encontrndose
entre 24 y 28

C para la mayora de los mosquitos tropicales; y la humedad

relativa se describe, entre 70 80 % ( Consoli e De Oliveira, 1994 ) . Segn la

OPS (1983), la mayor dificultad en los pases tropicales es mantener estas
condiciones, para lo que recomiendan instalar plantas de aire acondicionado y
equipos humidificadores que provean de la temperatura y humedad necesaria.
Similares condiciones existen en nuestro insectario.
II. 4 rea de Cuarentena.
Se debe crear con el propsito de observar adecuadamente a los insectos que se
ingresan de la naturaleza, para evitar la reproduccin de especies que no sean las
deseadas. Las deseadas debern reproducirse al menos una generacin bajo
estas condiciones, y despus se deben eliminar los individuos que les

dieron

origen. (Ponencia Normas en la manipulacin del Insectario, Avila, 1989, sin

publicar).De esta manera, se impide la introduccin de patgenos al local donde
se encuentran las colonias establecidas. El resultado ser una F1, a partir de la
cual se trabajar (Hernndez y Garca, 2000).

Captulo III. Normas generales del Insectario.

Las normas generales (Consoli e De Oliveira, 1994) para este tipo de instalacin
son:

Deben estar alejadas del almacenamiento de productos qumicos.

Deben tener buen aislamiento trmico y de la humedad.

No debe tener ventanas.

Las superficies de las paredes deben ser lisas, claras y lavables, y el piso
de cermica.

Debe haber suficiente agua potable en las llaves y al menos una debe estar
instalada al agua declorinada.

Solamente se dispondr de una puerta de entrada y salida al insectario,

aledao a una antecmara pintada de color claro y bien iluminada la cual
debe poseer otra

puerta de cierre hermtico. Antes de salirse

del

insectario, se debe revisar bien para evitar que escapen mosquitos.

Proteger con mosquiteros las salidas de ventilacin.

Tratar por filtracin o ebullicin el agua de las cras de culcidos antes de

desechar.

Los huevos se pondrn a eclosionar en bandejas tapadas.

Diariamente se recolectan las pupas de las bandejas y se colocan

en

recipientes con agua dentro de las jaulas.

Se recomienda, para alimentar a los adultos, colocar los animales sobre la

jaulas y no dentro de ellas.

Captulo IV. Principios ticos.

Existen regulaciones para la cra de mosquitos y otros insectos, que constituyen
vectores de enfermedades humanas y de otros animales. Estas regulaciones han
sido dictadas por: el Ministerio de Salud Pblica de Cuba (MINSAP), la Unidad
Nacional de Vigilancia y Lucha Antivectorial (UNVLA), el Reglamento Interno del
Departamento de Control de Vectores del IPK para el trabajo en este tipo de
instalaciones y, ms recientemente la Resolucin 103 del 2002 de la Academia
de Ciencias de Cuba (ACC), que plantea que se debe justificar correctamente la
cra de especies transmisoras

de

enfermedades

y evitar la introduccin de

especies vectores que no existan en el pas. Investigadores como Consoli e De

Oliveira (1994) y Torrealba (1998),

coinciden con el criterio de que estas

especies deben ser colonizadas de manera justificada.

Para el uso de los animales como fuente de alimentacin en el insectario, se han
tenido en cuenta las regulaciones de los Principios ticos Internacionales

para

la experimentacin animal. Entre ellos se plantean como aspectos generales mas

importantes La responsabilidad del experimentador de evitar al animal todo
sufrimiento fsico o psquico. Debe llevar a cabo los mtodos que permitan limitar
el sufrimiento y los dolores en caso que estos sean inevitables (Revista de
Experimentacin Animal (SEEA) 1990), vigentes en nuestro pas y de
conocimiento del Instituto Medicina Veterinaria de Cuba. (Consulta personal, Dr.
Oscar Ricardo Reyes (Julio, 2004).

10

Captulo V. Medidas Higinico Sanitarias.

Nuestras experiencias de trabajo nos permiten sugerir las siguientes medidas:
1. Todo el instrumental que se utiliza en el

laboratorio, se

debe

limpiar

mecnicamente con abundante agua potable sin detergente (en caso de aplicarse,
debe enjuagarse bien y no utilizarse en el momento). Las jaulas de mosquitos y
cepos de animales si debe incluirse la desinfeccin mecnica con soluciones de
detergente y despus de enjuagarse bien, aplicar secado con rayos solares, para
utilizar la accin bactericida de los rayos ultravioletas.
2. Asimismo se debe evitar el contacto con el piso, u otras fuentes de infeccin,
del material para el mantenimiento de los insectos.
3. Otro aspecto de importancia es la desinfeccin: Fsica (por autoclave) de las
bandejas esmaltadas o metlicas, as como la qumica de las mismas con cidos
fuertes (mezcla sulfocrmica), con una periodicidad, semestral.
4. No se debe poner en contacto ningn material del insectario (jaulas, bandejas,
jamos y tamices entre otros) con insecticidas qumicos.
5. El personal que trabaja en el rea, debe utilizar artculos de proteccin

higiene como: Batas sanitarias, guantes, nasobucos u otros, segn se requiera.

Estas medidas estn encaminadas a proteger el

material biolgico que se

reproduce en estas instalaciones, pues de este modo evitamos la incorporacin

de agentes infecciosos. Sobre este aspecto, Consoli e De Oliveira, 1994 sealan
que la contaminacin accidental de colonias de mosquitos puede ocurrir a travs

11

del agua, el alimento no esterilizado y los utensilios contaminados. Sin embargo

especficamente para la cra de

Anopheles nueztovari,

Avila et al, 1993

apuntaron que el elemento clave consiste en la limpieza diaria del medio de cra.

12

Captulo VI. Especies perjudiciales.

De acuerdo a nuestras experiencias podemos decir que, en las condiciones de
nuestro insectario, existen especies que conviven con los organismos en cra, y
que son ajenas a ellos, algunas de las cuales les
identificado araas en

diferentes sitios

provocan daos. Se han

siendo la ms perjudicial Nesticodes

rufipes (Lucas, 1846), la cual habita en las jaulas de los mosquitos adultos. Se
muestra en la Foto 3

Foto 3: La araa Nesticodes rufipes, aislada en nuestro laboratorio.

As como la cucaracha Periplaneta americana (Linnaeus, 1758),que invade las
colonias de B. germanica, y la hormiga Tapinoma melanocephalum (Fabricius
1793),que daa los huevos de los culcidos en cra. Ver Foto 4. (Ref Pg. 14).

13

A: Vista lateral

B: Vista dorsal

Foto 4. Tapinoma melanocephalum hormiga depredadora de huevos de Aedes

aegypti.
Imagen tomada; base de datos Japonesa, disponible en:
http//ant.edb.miyakyo-u.ac.jp/E/Taxo/F70301.htm
Las muestras fueron procesadas y diagnosticadas por especialistas del Instituto
de

Ecologa

Sistemtica

del

Museo

Nacional

de

Historia

Natural,

pertenecientes a la Academia de Ciencias de Cuba.

La hormiga T. melanocephalum estuvo presente en el insectario en todas las
estaciones del ao, y es capaz de depredar huevos de Aedes aegypti

tanto en

las tiras de papel como en los recipientes donde se produce la ovipuesta ( Prez
O, 2004; en Publicacin. Efecto de Tapinoma melanocephalum ( Hymenoptera:
Formicidae) sobre huevos de Aedes aegypti ( Dptera:Culicidae ). Tambin fue
hallada depredando los huevos de Triatoma flavida.
Las araas identificadas en las instalaciones de cras, se consideran inofensivas
para el hombre, sin embargo, la especie Nesticodes rufipes, aislada del interior
de las jaulas de mosquitos de la especie Culex quinquefasciatus y Aedes aegypti,
provoca inmovilizacin de los adultos por medio de la tela de araa que
construye, lo que le permite extraer los lquidos corporales y

queda slo el

exoesqueleto de estos. Estas observaciones coinciden con las realizadas en Aedes

albopictus por Sulaiman et al (1996),

al aplicar una tcnica serolgica e

identificar especies de
14

araas que representaron nuevos registros de hospederos depredadores de esta

especie de mosquito.
Las cucarachas

Periplaneta americana,

agentes infecciosos,

se consideran vectores mecnicos de

y pueden ser encontradas dentro de los cuartos de cra

(Consoli e De Oliveira, 1994).

15

Captulo VII. Manejo de las especies en el Insectario: Metodologa de

cra y medidas de seguridad biolgica.
Para la cra de mosquitos y otras especies, resulta importante lograr un clima
estable a temperatura y humedad ptimas, similares a las de su habitats.
La mayora de las especies,

admite

parmetros de temperatura y humedad

similares( para fase inmadura y adulto ), y muchos investigadores coinciden en

que los rangos ptimos son los siguientes: 24 - 28 0 C para la temperatura y 70
-80 % de humedad relativa ( Consoli e De Oliveira, 1994, Carrillo et al, 1981,
Van Handel E, 1986 y Moreno S, 1999). No obstante, cada especie debe tener su
cuarto de cra independiente, ya que su desarrollo no depende slo de la
temperatura y la humedad relativa, sino que cada una tiene otros requerimientos
que le son propios, segn su bioecologa.
Aedes aegypti ( Linnaeus , 1762).
Huevos
Se recolectan sobre una superficie slida hmeda, proporcionada por un papel
de filtro (o de cualquier tipo rugoso) de 4-5 cm de dimetro, que se coloca en el
interior del recipiente de ovipuesta, y que se le aade agua hasta una altura en el
papel, por encima de los 2,5 cm. La misma debe estar lo ms limpia posible por
las exigencias de esta especie.
Despus de que se extraen los huevos de estos recipientes, se someten a un
proceso de maduracin del embrin. Para guardar huevos que puedan servir en
otro momento, estos deben ser secados entre 24 y 48 horas de puestos, ya que
este es el tiempo requerido para que se complete el desarrollo embrionario. Si

16

este proceso se asegura, entonces resisten la desecacin por perodos de seis

meses a un ao. (CICVECETV, 1982), Consoli e De Oliveira, 1994, Moreno. S,
1999, Hernndez et al, 2000).
Otros autores, como Pumpini et al (1992),

proponen un rango de 30 a 40 horas

para este proceso de maduracin.

Segn Pumpini (1992) y Forattini (2002), existe un fenmeno llamado diapausa
que puede ocurrir en mosquitos que depositan sus huevos fuera del agua, como
los de los

gneros: Aedes, Haemagogus y Psorophora, el cual provoca una

suspensin temporal de la eclosin del huevo por quedar inconcluso

desarrollo embrionario;

para

el

evitar dicha suspensin, se sugiere dejar que el

embrin madure. Adems plantean que existen varios factores extrnsecos que
propician
este fenmeno: Foto perodo, temperatura y nutricin de la hembra en su etapa
larval.
Posteriormente al periodo de maduracin, los huevos recolectados se almacenan
en el laboratorio a una temperatura de 25 280 C y una humedad relativa de 70
80 %, envueltos en papel gaceta

debidamente rotulados y se mantienen en

estuches de nylon, protegidos de la accin de las hormigas depredadoras.

Nuestra experiencia nos permite inferir, que para la eclosin de los huevos, los
mismos se deben colocar en agua declorinada (libre de Cloro) a una temperatura
de 27 370 C y dejar en reposo 24 horas.
Burguess (1959) recomienda, para favorecer la eclosin, la utilizacin de agua
desoxigenada, la cual se obtiene por ebullicin de agua potable que se mantiene
tapada hasta su utilizacin. Cuando se desea eclosionar los huevos, se coloca el
17

papel que los contiene en el interior del recipiente tapado, con agua procesada
a la temperatura (ideal) de 28 - 29 0 C.
Los huevos no se deben utilizar antes de las 72 horas de la ovipuesta, pues de
hacerlo, no se producira la eclosin, debido a la no maduracin del embrin
referida anteriormente. (Pg. 16, ultimo prrafo y 17, 1er prrafo)
Fase larval o fase inmadura.
Esta fase se desarrolla en un medio acutico. Del huevo eclosionado emerge una
larva de primer estadio, cuyo tamao es de 1 mm al inicio y al final, de 7mm, la
cual pasa por tres estadios

ms (II, III, IV). La diferencia entre los estadios

larvales radica en el tamao, como se muestra en la Foto 5.

Foto 5. Diferentes estadios inmaduros de Aedes aegypti.

18

En esta fase, es importante que se tenga en cuenta el espacio vital, de acuerdo

al tamao de las bandejas. Segn el Instituto Pasteur (1998) se mide en
centmetros cuadrados el rea de la bandeja (A= ancho x largo) y al resultado
se le aplica una Regla de Tres. En el caso de Aedes aegypti , las bandejas
utilizadas fueron de 25x 25 cm2 para 500 700 larvas con 2 litros de agua, y en
el caso de Culex quinquefasciatus de 35 x 35 cm2 para 800 1000 larvas por 3
litros de agua. Del mismo modo se puede calcular el agua que debe colocarse en
las bandejas de cra. Ejemplo: Para una bandeja de un rea 121.5 cm2 (13.5 cm x
9.0 cm ) , entonces si para 500 larvas de Aedes aegypti la bandeja seleccionada
tiene un rea de 625 cm2 , la Regla de Tres se planteara de la siguiente manera:
500 larvas ______________625 cm2
X larvas ______________121.5 cm2

500 larvas x 121.5 cm2

X larvas=--------------------------------------625 cm 2
Se cancelan los cm2 y la ecuacin queda:
500 larvas x 121.5
X = ------------------------------------------625
60750
X = ------------------------------------------ =
625

97.2 larvas

X = 97 larvas

19

Es decir en una bandeja cuya rea sea

121.5

cm

, se podrn colocar 97

larvas.
El clculo del espacio vital se debe realizar en el estadio I, y debe tenerse en
cuenta el cuidado que hay que tener en esta etapa para la manipulacin de las
larvas, por la poca Quitina que poseen. De tal modo, se deben utilizar goteros de
boca ancha para el conteo de las mismas en un microscopio estereoscpico.
Gadelha e Toda (1985) plantean que el ciclo larval dura de 5-7 das para esta
especie, en dependencia de las condiciones del medio (temperatura, alimento,
espacio vital). Soekiman et al (1986) por su parte reportan una media de 7.62
0.64 das para las especies Aedes aegypti y Aedes albopictus,

a una temperatura

entre 28 y 29 0C. En nuestras condiciones se obtuvo como resultado para Aedes

aegypti 6.16 das y 7.51 para Aedes mediovittatus a una temperatura de 26

(Moreno S, 1999).
Alimentacin del periodo larval, nutrientes y dosis.
Numerosas son las dietas utilizadas para alimentar las larvas de mosquitos: las
de origen natural y artificial; entre estas ltimas podemos mencionar: Levaduras,
alimentos para perros (galletas), migas de pan, harina

de sangre disecada e

hgado de ternero. (CICVECETV 1982). Entre las naturales, las ms utilizadas son:
Bacterias, protozoos de excretas de conejillos

de indias, hierba de csped

etctera. ( Fleming, 1986, CICVECETV, 1982 y OPS, 1983 ).

Otros investigadores, como Clements (1963), sealan la importancia de fuentes
proteicas para la produccin de huevos de mosquitos.

20

Existe una gran variedad de dietas, elaboradas con numerosos ingredientes de

diferente naturaleza (Asahna, 1964;

Gahan, 1966; Baerg, 1971; Reisen y

Mahmood, 1980). No obstante, la mayora de las dietas tiene un alto contenido

de protenas y

carbohidratos,

y una baja proporcin

de grasas; adems de

contener levaduras, vitaminas del complejo B y minerales.

Consoli e De Oliveira, 1994 plantean que durante el perodo larvario cada larva
debe consumir en total de 3 - 6 mg de alimento y
del mosquito es

sumamente importante,

concidern que este perodo

debido a que en esta etapa ellos

almacenan protenas y glicgeno, que son fundamentales para el desarrollo de

los estadios de pupa y adulto. Adems indican que para que ocurra la produccin
normal de huevos, la dieta debe contener por lo menos

los 10 aminocidos

esenciales siguientes: Arginina, Histidina, Isoleucina, Leucina, Lisina, Metionina,

Fenilanina, Treonina, Triptfano y Valina.
En cuanto a las necesidades de carbohidratos, los mismos autores sealan que
su ausencia retarda el desarrollo larvario.
Del mismo modo, sin la presencia de lpidos en la dieta, las larvas no logran
sobrepasar los estadios finales, y el Colesterol,

la Cefalina y la Lecitina son

especialmente importantes.
De acuerdo con nuestras experiencias prcticas, en Aedes aegypti ,
coincidencia

con Fleming (1986), y Avila et al ( 1993) para Anopheles,

alimento se agrega en

exceso, se

desarrolla una pelcula de

superficie del agua de cra , la cual puede impedir la

en
si el

grasa en la

respiracin y

causa la

muerte de las larvas.

21

Las larvas tambin necesitan vitaminas, y el orden de las esenciales,es Biotina,

Colina, cido Nicotnico, cido Pantotnico, Riboflavina, Piridoxina y Tiamina.
El cido flico es importante en la pupacin ( Lea and De Long, 1958).
Los alimentos se esterilizan para evitar contaminaciones con microorganismos
patgenos a las larvas como son hongos y bacterias, esta ltima

del gnero

Bacillus.
Preparacin del alimento.
Para la alimentacin de las larvas, se debe conocer la fisiologa de las distintas
especies, as como sus hbitos, lo que

determinar la

forma en que se les

deben proporcionar las partculas de alimentos; por ejemplo: Para las especies
Aedes aegypti y Culex quinquefasciatus se humedece el alimento con agua, con
el propsito de que las partculas vayan al fondo de la bandeja de cra; este
procedimiento no se aplica para el gnero Anopheles,

debido a que obtiene el

alimento en la superficie por la ausencia de sifn, entonces las partculas secas y

pulverizadas se esparcen en la superficie del agua de cra.
Pasos a seguir en la preparacin del alimento.
1- El alimento ya pasado por un tamiz 1 mm 2 ( para eliminar partculas gruesas)
se esteriliza , en autoclave 121 0 C a 2 atmsfera 15 20 min.
2- Se calcula la cantidad de alimento en dependencia del estadio, nmero de
individuos por bandeja y dosis ( esquema 1,2,3; Pg. 24 y 25 )
3- Saturar la cantidad

calculada con agua declorinada o potable, durante

alrededor de 5 minutos.

22

4- Para la especie que estamos analizando Aedes aegypti , se debe pasar el

alimento saturado por otro tamiz,

de orificio ms pequeo (0.5 mm 2) y el

resultado de este paso se coloca en la bandeja de cra.

5- En el caso de Culex quinquefasciatus,

se aplicaran los tres primeros pasos

mencionados anteriormente.
En nuestro Insectario,

se han obtenido buenos resultados con alimento

concentrado de harina de pescado. A continuacin se relacionan los aportes

nutritivos del mismo:
Aportes nutritivos de la harina de pescado.
Principios nutritivos Valores
M.S %
92.00
P.B %
60.00
G.B %
12.00
F:B %
1.00
E.M Kcal / g
3.24
Ca %
4.00
P%
2.20
Ca/ P
1.81/ 1.81
NaCl %
2.50
Metionina %
0.50
Lisina %
1.73
Arginina %
1.61
Triptofano %
0.31
Cistina %
0.30
Treonina %
1.06
Tirosina %
0.55
Leucina %
1.86
Metionina + Lisina %
2.23
El 8 % restante que falta es agua (92.00 % M.S) para llegar al 100%
Fuente: (CENPALAB) Centro Nacional para la Produccin de Animales de
Laboratorio. Forte C, 2001.
23

Dosificacin del alimento

Han sido propuestos diferentes esquemas de cantidades de alimento para el
periodo larvario (Esquema 1,2,3) .(Ref Pg. 25 y 26). En nuestro laboratorio se
ha trabajado con el esquema 3 para la especie Aedes aegypti,
resultados; para Culex

con buenos

quinquefasciatus se sigue el mismo esquema, pero se

duplica el alimento a partir del segundo estadio.

Dosis de alimentos segn el periodo larval de los culcidos.

Esquema 1.
Perodo (da )
Cantidad de alimento/ larva (mg)
0
0.2
1
0.3
2
0.4
3-7
0.6
Fuente ( Morlan y col, 1963 ) . Para Aedes aegypti y otras especies.

Esquema 2.
Perodo(da)
Cantidad ( mg )
Cantidad de larvas
1
100
150- 160
2
0
3
100
igual
4
100
igual
5
100
igual
Fuente: Van Handel (1986) utilizada para la cra de Aedes aegypti

24

Esquema 3
Perodo
Da de eclosin
1
2
3
4
5
6
7
Fuente: Consoli e De Oliveira (1994)

Cantidad ( mg )
0.2
0.2
0.3
0.4 mas 0.45 de levadura seca /1000
larvas
0.6
0.6
0.6
0.6

Perodo pupal.
Prez Vigueras, 1956, establece valores de 2 das para el desarrollo pupal de
Aedes aegypti y Aedes mediovittatus. Otros autores plantean
aegypti vara de 1-3 das, a una temperatura de 27.8 32.2

que para Aedes

0

Galdelha e

Toda , 1985.
El perodo de pupa no requiere alimentacin, slo se describe como un periodo
de reposo en el cual la pupa se mantiene respirando y con movimientos en forma
de saltos (Gadelha e Toda, 1985).
Soekiman et al (1986) comparan esta etapa

para Aedes aegypti y

Aedes

albopictus, y obtienen un valor mayor para la primera especie: 1.63 0.07 y

1.45 0.08 das respectivamente.

25

Mortalidad de larvas y pupas.

Segn Moreno S, 1999, a una temperatura de 26 0 C, la mortalidad de las larvas
fue baja y pudiera estar asociada a la muda, tanto la cercana a la pupacin como
la de pupa a adulto.
Es importante recalcar que las larvas no sobreviven a temperaturas mantenidas
inferiores a 10 0 C ni superiores a 44

C ( Gadelha e Toda, 1985)

Fase de adulto.
Para la cra de mosquitos adultos,

se

requieren

de la utilizan jaulas de

diferentes medidas; dentro de las ms utilizadas est la de Volumen 30.5 cm3

para una poblacin de

aproximadamente 500 ejemplares,

en CICVECETV(

1982); Consoli e De Oliveira(1994) y Naksathit and Scout (1998) recomiendan

medidas de un pie cbico (30 cm3).
La poblacin de mosquitos debe ajustarse a la medida de la jaula; por ejemplo
para una de 30.5 cm3 , la poblacin total debe ser de 500, con una proporcin de
250 machos para 250 hembras, lo que asegura una adecuada reproduccin( con
un mantenimiento optimo para la colonia ), y buena produccin de huevos, a
fin de perpetuar la especie. Ponencias en
mayores densidades

CICVECETV (1982), plantean que

provocan mortalidad y menores,

una fertilizacin

inadecuada de las hembras.

La tela metlica que cubre a la jaula, debe estar insertada en un esqueleto que
puede ser de hierro galvanizado o madera. Uno de los lados de la misma, debe

26

tener una manga de 20 cm. de dimetro y 30 cm. de largo, por donde se realiza
el manejo interno. Segn se muestra en la Foto 6.

Foto 6. Jaula para adultos de mosquitos Aedes aegypti .

Para que emerjan los adultos, se coloca dentro de la jaula un recipiente que
contiene las pupas, y se cubre con un cono de 16 cm. de dimetro por 19 cm de
largo, elaborado de cartn o zinc y

perforado con un orificio de una pulgada de

dimetro en su pice, esto permitir que los adultos salgan fuera del cono una
vez que emerjan las pupas, y no puedan volver a l, adems previene que los
mosquitos caigan al agua y que las hembras grvidas pongan huevos en estos
recipientes.

Este

mismo

efecto

se

puede

lograr

denominados Breeding (Catlogo BioQuip, 2003). Al

otro recipiente,

utilizando

recipientes

mismo tiempo se coloca

con agua, que en dependencia de la especie, debe estar ms o

menos limpia, para recoger la ovipuesta de las hembras grvidas. Para el caso de

27

Ae aegypti, que oviponen en superficies slidas y hmedas, se coloca un papel

como el descrito en la fase de huevo (Pg. 17 y 18).
Naksathit and Scout (1998) sealan que, como fuente de energa y parte de la
alimentacin, se pueden usar soluciones azucaradas al 10 %,

las cuales

contienen Glucosa y Sacarosa, las concentraciones de las soluciones dependern

de la demanda de la especie de mosquito a colonizar.
Fleming (1986)

por su parte sugiere soluciones azucaradas al

5 - 15 % e

incluye miel de abeja a la misma concentracin, puestas en mechas o torundas

elaboradas de algodn y gasa, que deben ser cambiadas dos veces a la semana y
pueden ser recuperadas, excepto para adultos de Aedes aegypti, debido a que las
hembras grvidas ponen huevos en las mismas, y constituiran una fuente de
contaminacin si se utilizaran en otras jaulas.
Avila et al (1993), en su Metodologa para la

cra de Anopheles nueztovari,

proponen el uso de miel al 50 % con la que ellos obtuvieron elevados valores de

longevidad,

debido a que la miel contiene: Glucosa, Fructuosa, Sacarosa

Carbohidratos de alto valor nutritivo, los cuales se utilizan para la conversin

rpida en energa y como elemento precursor de la sntesis de cidos grasos,
Glucgeno y sustancias indispensables para la supervivencia de los culcidos
(Nayar and Sauerman, 1975 b).
Hematofagia.
El

conocimiento de los hbitos de alimentacin de los insectos, es muy

importante

para definir qu hospedero utilizar;

es decir, si son zooflicos o

antropoflicos. Los primeros son especficos de otros animales, entre los que se
encuentran las aves y mamferos.

28

Los mosquitos de los gneros Aedes y Anopheles, prefieren a los mamferos, por
lo que se pueden utilizar: Curieles, ratones y conejos de piel de capa oscura,
estos ltimos solamente para Anopheles y para ambos en caso en que peligre la
especie, el husped puede ser el hombre. (Actividades del Insectario. Laboratorio
Investigaciones Ciudad de Guatemala, 1997.
El gnero Culex es ornitoflico, o sea prefiere las aves especficamente las de
corral, que pueden ser pollitos de pocos das o hasta de 1 Kg de peso, co
dornices la mas utilizada en nuestro laboratorio fue la especie Coturnix coturnix
japonica (Prez y Prez F, 1994, y otras. La foto 7, muestra animales utilizados
para estos fines. A: Curiel y B Ave. (Ref Pg. 30).

A: Curiel.

29

B. Ave de corral
Foto 7. Animales utilizados para la hematfagia. A: Curiel, B: Ave corral, cepo
que la contiene.
Adems se debe conocer la periodicidad en la actividad del mosquito, que en el
caso de Aedes es diurna, mientras que para Anopheles y Culex es nocturna. En
Anopheles se observan varios picos, al amanecer y en el crepsculo.
Segn Briegel (1985, 1990), el aminocido esencial Isoleucina es fundamental
para la reproduccin de los mosquitos. La sangre humana contiene cantidades
ms bajas de este aminocido que la de otros animales , sin embargo es la de
ms nutrientes en general. La sangre de roedores y aves tiene comparativamente
mayores niveles de Isoleucina que la del hombre.
Cuando Aedes aegypti se alimenta de hospederos que tienen mayor Isoleucina en
sangre que el hombre, para completar la vitalognesis puede requerir nutrientes

30

en la alimentacin y la movilizacin de la reserva materna; sin embargo, con los

nutrientes que aporta la sangre humana dichas reservas no se necesitan para
completar el desarrollo de los huevos, ya que una parte de los nutrientes
ingeridos puede ser empleada en acumular reservas como para la vitalognesis (
Briegel,1985 ).
Day et al (1994), en experimentos sobre fecundidad de Aedes aegypti,

usaron

sangre de pollo ( en vez de sangre humana ) para alimentar a los mosquitos, a la

cual atribuyeron

el reducido tiempo de supervivencia de estos, debido a

la

composicin ligeramente alta de Isoleucina, y baja en nutrientes.

Nayar y Sauerman (1975 a) encontraron mayor fecundidad en mosquitos
alimentados con azcar y sangre que

en estos,

alimentados solamente con

sangre. En nuestras condiciones, se alimentan tambin con azcar.

Despus que emergen los adultos, y antes de alimentar a las hembras,

con el

objetivo de lograr cada ciclo gonadotrfico (proceso fisiolgico que consiste en la

digestin del alimento, el desarrollo de los ovarios por un periodo de 72 horas y
la consiguiente puesta de los huevos) se debe garantizar el contacto entre
hembras y machos, al menos por un periodo de 48 horas, para que se efecte la
fecundacin. Esto se debe cumplir tanto para una poblacin nueva como para
cualquier ciclo gonadotrfico de la vida de las hembras. Ponencias del CICVECETV
(1982).
De acuerdo con nuestras experiencias,

cuando las hembras dejan de poner

huevos dos das consecutivos, es el momento en que se debe repetir otra

hematofagia.

31

La alimentacin siempre debe realizarse con animales muy tranquilos, lo que se

logra con anestsicos o con cepos (aditamentos que los inmovilizan) que se
pueden producir de forma artesanal, como se hace en nuestro laboratorio, lo cual
se expone en la Foto 7 , B: Ave de corral ( Ref Pg 30).
En el caso de mamferos,
veterinario

(Carrillo

et

se pueden

emplear anestsicos generales de uso

al

CICVECETV

1981;

(1982),

administrados

intraperitonialmente. Se debe tener un nmero suficiente de animales,

que

permita rotarlos de manera que los mismos sean inyectados y utilizados para la
alimentacin, una vez cada dos o tres semanas.
Los animales se rasuran en la regin abdominal cuando se colocan en la zona
externa cncava de la jaula,y dorsalmente si se colocan dentro de ella en un
cepo de inmovilizacin. El animal se mantiene 15 min, o hora
para que se efectu la hematofagia

en una jaula

y despus puede pasar a otra. Para Aedes

aegypti se asegura la alimentacin repitindose a las 24 horas.

En el caso de las aves, se despluman en la regin que va desde el cuello hasta la
regios dorsal y en las alas. Los animales se depositan en cepos rectangulares para
su inmovilizacin y se debe colocar externamente en la zona cncava de la jaula(
La parte desplumada se ubicara en la misma forma que la rasurada para los
mamferos)o dentro de la misma, de modo que se asegure bien que no se salga
el ave del cepo.
Se debe tener en cuenta que las aves son insectvoras

por lo que cuando se

encienda la luz, para colocarlas o retirarlas, se debe realizar de forma rpida, para
evitar que se alimenten de los mosquitos adultos que estn volando alrededor de
ellas.

32

Culex quinquefasciatus. Say,1823

Este mosquito se caracteriza por depositar sus huevos directamente en agua, y
tiene forma de balsa. De acuerdo con su bioecologa, los recipientes de ovipuesta
deben ser de color oscuro, atrayentes para las hembras ( Jobling, 1935), y el
agua contenido en ellos debe ser poluda y coexistirn huevos, larvas y pupas (
Consoli e Espinola, 1973; Bruno and Laurence 1979). Como se muestra en la
foto 8.

Foto 8.

Diferentes estadios inmaduros ( larvas y pupas ) de Culex

quinquefasciatus.
Los huevos se transfieren a bandejas donde se desarrollan las larvas. La eclosion
se produce de 24 -30 Horas mas tarde . El agua a utilizar debe ser declorinada, a
temperatura de 26 27

C. Es importante tener en cuenta el espacio vital

33

Al cual se hizo referencia en el captulo que trata de la fase larval o inmadura

para la especie (Ref Pg 19, 1er prrafo y Pg 20, 2do

respectivamente)

nmero de balsas (huevos) a eclosionar (una contiene de 100-150 larvas).

La alimentacin para el periodo larval es similar a la descrita ( Ref Pg. 22, 4to
prrafo y los primeros tres prrafos de Pg. 23 ) para Aedes aegypti, con la
diferencia de que, como se dijo all, se duplica la cantidad despus del primer
da de eclosin. En la etapa de adulto, se mantienen las fuentes energticas en
base a las soluciones azucaradas, y a la sangre prefirindose aves de corral y
otras como la codorniz (Cotournix cotournix japonica ). La hematofagia se debe
realizar nocturna, como se describi en la Pg. 30, 1er prrafo. Segn Consoli e
De Oliveira (1994), algunos autores recomiendan que para mejores resultados, se
debe retirar la solucin azucarada 24 horas antes de la hematofagia.

Medidas de seguridad biolgica para la cra de culcidos.

En este acpite se establece una serie de indicaciones o medidas encaminadas a
evitar la fuga de los mosquitos fuera de las instalaciones de cra.
A pesar de que para todas las especies de culcidos se deben tomar medidas de
seguridad biolgica, stas deben de ser extremas en aquellas especies que
constituyen vectores de importancia medico epidemiolgica.
A continuacin se mencionan algunas medidas generales:

El responsable del insectario debe supervisar el manejo correcto de la cepa

por parte de los especialistas o los investigadores responsables; en caso
de detectar escapes de adultos o bandejas con pupas, debe notificarlo de

34

inmediato al responsable de la cra, y de persistir el incumplimiento, se

tomarn medidas ms severa.

Se deben utilizar capturadores manuales o trampas adecuadas para la

captura de los insectos, cuando se escapen.

Se deben mantener cerradas las puertas para evitar el escape hacia el

exterior.

Se deben utilizar materiales de proteccin adecuados al riesgo de la

especie que se est colonizando.

Fase inmadura.
Para la cra de Aedes aegypti, se debe seguir una serie de indicaciones que
tengan en cuenta el hecho de que constituye este un vector de enfermedades
del hombre y los animales:

Los huevos identificados, se almacenan a

locales con prohibicin de
departamento. Estos

locales

temperatura ambiente, en

acceso para el personal ajeno al

deben

tener seguridad fsica, es decir,

puertas habilitadas con cerraduras y llaves.

Despus de que las tiras de huevos se someten a eclosin,

y antes de

eliminarlas al medio exterior, deben ser destruidas por varios mtodos:

Incineracin, Autoclavear 20 min. y ebullicin a 100

C por 15 20

min.

Las larvas o pupas de cualquier estadio se deben resumir por un tamiz

de orificios muy finos y el lquido debe colectarse en una bandeja, para
35

filtrarse al

terminar la operacin. Este contenido se destruir a

temperaturas de - 20 a 29 0 C; en autoclave 20 min o por ebullicin, a

100

C por 15 20 min, como se muestra algunos de estos pasos en

la Foto 9.

Foto 9. Eliminacin de larvas o pupas y el liquido de cra con tamiz.

Los tragantes de los fregaderos en las instalaciones donde se cra esta

especie, deben estar protegidos por una malla fina, para evitar su salida
a las aguas residuales.

Todo material biolgico que proceda de esta especie, debe ser

manipulado desde el inicio hasta el final por el mismo investigador, con el
objetivo de que se le d continuidad a cada fase del mosquito y que se
cumplan las medidas previstas para su eliminacin.

En cada laboratorio donde se trabaje con esta especie, deber habilitarse

un registro en el que aparezcan los datos relativos a: El investigador

36

principal que trabaja con la misma, la fecha de comienzo y el objetivo

del trabajo, as como la cepa.

Al finalizar la actividad, las bandejas donde se cran las larvas se deben

examinar bien y limpiar con agua potable, con el propsito de hacer una
limpieza mecnica y de detectar larvas que hayan quedado,

para su

consecuente destruccin.
Fase Adulta

Los

adultos

de

esta

especie,

se

mantendrn

en

instalaciones

hermticamente cerradas, y si no, al menos que posean varias puertas,

como barreras fsicas, antes de la que se comunica con el pasillo interno
del insectario.

Las jaulas donde se cran, deben tener doble malla y una manga pequea
lateral, para disminuir el riesgo de escape de los insectos, como medida de
seguridad.

Cuando se vaya a realizar cualquier actividad en el interior de la jaula,

primero se deben hacer algunos movimientos con la manga, para que los
mosquitos se alejen de la entrada.

Antes de sacar de la jaula los recipientes de ovipuesta, se deben golpear

sobre el piso para que los mosquitos que reposan en ellos los abandonen.

Una vez concluida la alimentacin, y antes de retirar los animales, se debe

golpear el cepo sobre el piso de la jaula, para evitar que se escapen

las

hembras alimentadas.
37

Al finalizar cada actividad con esta fase, se deben capturar los mosquitos
que hayan escapado de la jaula.

Otros materiales en contacto con el material biolgico como son torundas

empleadas en soluciones de azcar, deben procesarse para desechar al
exterior. Utilizando mtodos

fsicos como: autoclave 20 min o por

ebullicin a 100 0 C , de 15- 20 min. Se expone en la foto 10.

Foto 10. Tratamiento para desechar torundas con azcar utilizados en la fase
adulta de culcidos.

38

Mtodo de cra y mantenimiento de Triatoma flavida (Hemiptera:

Reduviidae) Neiva, 1911 en el laboratorio.

Los triatomneos son insectos chupadores de sangre, que estn

ampliamente

distribuidos en Amrica Latina vectores de Tripanosoma cruzi, agente causal de la

enfermedad de Chagas. Aunque en nuestro pas no existe esta enfermedad, se
han reportado 4 especies: Triatoma flavida (Neiva, 1911), T. bruneri (Usinger,
1944), T. rubrofasciata (De Geer, 1773) y Bolbodera scabrosa (Valdes, 1910).
Por tal motivo,

se hace necesaria su cra en condiciones de insectario, para

estudiar:
La biologa, la morfologa y la gentica de los mismos. En este manual se enfoca
particularmente la cra de T. flavida, por ser la nica que ha sido obtenida en
condiciones de insectario.
Lent y Wygodzinsky (1979) reportaron un mtodo para la cra masiva de
triatomneos, mediante el cual, y con un simple equipamiento, se obtienen
resultados satisfactorios, pero como sealan Da Silva et al (1997), cada especie
presenta diferentes comportamientos y adaptaciones cuando se somete a
condiciones artificiales y, solamente estudios especficos pueden esclarecer la
dinmica biolgica de cada una, necesaria para conocer detalles que podran
utilizarse para optimizar la cra de los mismos.
Los ejemplares colectados se colocan en recipientes de vidrio, metal o plstico,
preferiblemente grandes para que no exista competencia por el espacio, y se
tapan con una malla

de tela, metal o plstico, de huecos lo suficientemente

pequeos como para prevenir que los huevos y las pequeas ninfas se escapen.
Dentro debe colocarse un papel de filtro doblado en forma de abanico, con el
objetivo de que provea un refugio para los triatomas y, al mismo tiempo, absorba

39

la humedad generada por los mismos. Cada recipiente de cra se identifica con el
lugar de origen, la fecha de colecta y el nombre del colector.
Como estos insectos son hematfagos obligados en todos sus estadios, y se
alimentan con pollos, ratones y roedores, cuando se traigan individuos salvajes al
laboratorio, es importante hacerles un anlisis de las heces, para determinar si
estn infestados con Trypanosoma cruzi, y si esto sucede, es conveniente basar
su alimentacin en aves, cuya sangre es refractaria al parsito; es de esta forma
que se evita la contaminacin del hospedero.
Dentro de la variedad de mtodos de alimentacin para estos insectos, nosotros
utilizamos la tcnica de introducir al husped, colocado en un cepo, dentro del
recipiente de cra o dentro de otro recipiente habilitado para esto, debidamente
tapado para evitar el escape de los triatomineos.

En el caso de utilizar otro

recipiente que no sea el de la cra, se introduce igualmente papel de filtro

doblado para el refugio de los triatomas despus de la alimentacin y tambin
con el objetivo de absorber el exceso de humedad provocado por las heces y
orina del hospedero. En el caso de que la alimentacin se efecte dentro del
recipiente de cra, al terminar la misma, se debe de proceder a la limpieza de
este.
Segn Jimnez (1981), el tiempo de ingesta de sangre para T. flavida oscila, en
condiciones de laboratorio, entre 5 y 30 minutos, sobre aves o roedores, por lo
que 1 hora ser suficiente para la replecin total de esta especie. Al completar la
alimentacin, el insecto no vuelve a tomar ms hasta pasados 5-7 das como
mnimo y hasta dos meses y medio como mximo, en adultos. Los ejemplares
adultos deben ser alimentados todas las semanas o cada 15 das, en dependencia
si se quiere acelerar o retardar el ciclo de vida. Como se muestra en la Foto 11
( Ref Pg. 41).
40

Foto 11. Alimentacin de Triatoma flavida, utilizando curiel.

Esto fue demostrado por Mac Ewen and Lehane (1993) para ninfas de quinto
estadio de T. infestans: las alimentadas con ms frecuencia, tuvieron un
desarrollo ms acelerado. Igualmente, Cabello et al (1988) demostraron que para
adultos de Rhodnius neivai, el periodo de desarrollo fue ms corto en los
alimentados semanalmente que en los alimentados quincenalmente.
Como los triatomneos son ovovivparos, los huevos puestos se colectan
diariamente, y se colocan en recipientes independientes identificados con la fecha
de colecta, los cuales pueden ser del tipo mencionado en la pg. 39, ltimo
prrafo, o pequeos frascos, en dependencia de los propsitos de la cra. Cada
recipiente adems se identifica como la F1, o sea la primera generacin bajo
condiciones controladas. La eclosin ocurre a los 28.70.3 das en los meses de
verano (a 30C) y en invierno (24C) a los 21.0 0.4 das, segn Jimnez

41

(1981). Cabello y Lizano (2001) por otra parte, obtuvieron un perodo medio de
incubacin de 27.2 3.3 das, a una temperatura de 28 2C, para la misma
especie.
Las ninfas de primer estadio se alimentan diariamente hasta que ocurra la primera
ingestin de sangre, a partir de la cual pasa a ser semanal o quincenal. En el caso
de T. flavida, segn Jimnez (1981), la larva recin eclosionada no toma
alimentos hasta pasados 4-5 das de su nacimiento, y puede sobrevivir por
perodos de hasta 36 das sin ingesta de sangre, mientras la humedad relativa sea
de 85%.
Jimnez (1981) realiza observaciones sobre la biologa de T. flavida en
condiciones de laboratorio a temperatura ambiente (entre 25 y 32C) y a una
humedad relativa de 85%, asimismo Cabello y Lizano (2001), obtienen
condiciones ptimas para la cra de T. flavida a una temperatura de 28 2C y a
80 10% de humedad relativa.
Una vez que se quieran eliminar los ejemplares que ya no sean tiles, se pueden
colocar a bajas temperaturas (por debajo de 0C) o en un recipiente tapado con
algodn embebido con cloroformo.

42

METODO DE CRIA Y MANTENIMIENTO DE Blattella germanica (L.) 1767

(DICTYOPTERA: BLATTELLIDAE).
Desde que Heal (1948) report un mtodo estandarizado para la cra masiva de
cucarachas, pocos cambios se han realizado en este sentido. Los ejemplares
colectados se colocan en recipientes lo suficientemente amplios como para que
no

exista

competencia

por

el

espacio;

dichos

recipientes

deben

ser

preferiblemente circulares y de cristal. En el borde interior superior de cada uno

se aplicar una capa fina de vaselina semislida, con el objetivo de evitar que se
escapen. Cada recipiente se identificar debidamente con: nombre de la especie,
lugar de origen, fecha de colecta y nombre del colector, como se expone en la
Foto 12.

Foto 12 . Recipiente de mantenimiento de Blattella germnica.

43

Las cucarachas, al igual que otros insectos, requieren comida seca y una fuente
de agua separada, por lo que en el interior del recipiente se coloca una placa
petri con algodn embebido en agua, el cual debe humedecerse diariamente (el
agua se suministra ad libitum) y otra que contiene el alimento. Para Blattella
germanica, conocida vulgarmente como la cucarachita alemana, el alimento ms
utilizado en el laboratorio es el pienso para ratn pulverizado y seco, con 20.45
% de protenas, ya que para esta especie, el alimento debe tener entre 20-24 %
de protenas (Mc Cay, 1938), pues por encima de este rango, disminuye su
longevidad (Haydak, 1953) y por debajo, disminuye su reproduccin y se retarda
su perodo de desarrollo (Aguilera et al, 1998). El alimento debe pulverizarse o
granularse, porque cuando se alimentan con pellets completos el desarrollo ninfal
es ms lento, lo que impone una barrera mecnica para la alimentacin (Cooper
and Schal, 1992). Esta es una labor extremadamente intensa, sobre todo cuando
se necesitan cras masivas, por lo que los autores como Wileyto and

Boush

(1983) disearon un mtodo de cra basado en el uso de viales que reciben agua
continuamente desde un reservorio suministrador automtico.
En cada recipiente se deben colocar papeles doblados en forma de acorden o
abanico (para aumentar el rea de superficie de contacto y proporcionarles
refugio). B. germanica se debe mantener en un ambiente a

29 2C, una

humedad relativa mayor del 70% y un foto perodo de 12:12 (L:O), ya que sus 3
requerimientos ecolgicos fundamentales son: los ambientes clidos, hmedos y
oscuros.
B. germanica es una especie ovovivpara, por lo que una vez fecundadas las
hembras, stas portan las ootecas que contienen los embriones hasta el momento
de su eclosin, la cual ocurre luego de 15 das aproximadamente, bajo las

44

condiciones descritas anteriormente. Las ninfas que nacen, se separan en otro

recipiente de igual tipo, que se identifica como la F1, o sea, la primera generacin
de esa cepa nacida bajo condiciones controladas, y as, sucesivamente, se
procede con las prximas generaciones si se requiere.
La dieta puede afectar la habilidad reproductiva de los bltidos (Roth and Willis,
1954), al igual que su crecimiento y desarrollo (Hamilton et al, 1988 y 1990;
Cooper and

Schal, 1992 y Aguilera et al, 1998). La cucaracha alemana es

altamente sensible a la privacin de alimentos y a las limitaciones de nutrientes

especficos, en particular de las protenas (Roth and Stay, 1962 y Kunkel, 1981).
Entre las dietas ms utilizadas de forma rutinaria en muchos laboratorios de
investigacin, para mantener colonias de esta especie, est el alimento de
laboratorio (pienso) para perro, conejo y ratn; el ltimo es recomendado por
varios autores como el ms apropiado para B. germanica (Cooper and Schal,
1992; Koehler and

Castner, 1994 y Aguilera et al, 1998), seguido por el de

conejo y por ltimo el de perro (Koehler et al, 1994). Las hembras de esta
especie que han sido alimentadas con pienso de ratn, y bajo las condiciones
ambientales descritas al inicio, son capaces de ovipositar hasta 5 ootecas durante
su vida, y el nmero de ninfas nacidas de cada una puede estar entre 15 y 37
(Aguilera et al, 1998).
Los recipientes donde se mantienen las colonias de esta especie, deben limpiarse
al menos una vez al mes, ya que no se deben mantener muchos insectos muertos
en el fondo de los mismos.
Una vez que se quieran eliminar los ejemplares que ya no sean tiles, se pueden
colocar a bajas temperaturas (por debajo de 0C) o sumergirlos en agua con
detergente por 5-10 minutos.
45

Este mtodo de cra puede utilizarse con otras especies de cucarachas

domiciliarias de hbitos semejantes, como por ejemplo: Periplaneta americana,
Periplaneta australasiae, Supella longipalpa, etctera. A las Panchloras, se les
debe suministrar alimento natural basado en hojas, ramas, frutos, etc

colocarlas en recipientes de cra muy amplios.

MTODO DE CRA Y MANTENIMIENTO DE Musca domestica Linnaeus
1758.
Musca domestica es un insecto que posee metamorfosis completa es decir pasa a
travs de su vida por las fases de: Huevo, 4 estados larvales, pupa y finalmente
el adulto. Pertenecen al orden Dptera. Su cuerpo se divide en: cabeza, trax y
abdomen. En la cabeza, se encuentran: Las piezas bucales para chupar; los ojos,
los cuales son compuestos,
importantes,

y las antenas receptoras, entre las partes mas

en el trax se ubican dos pares de alas y tres de patas y en el

abdomen, el sistema reproductivo.

Durante su vida adulta, necesita de agua y de alimento preferiblemente lquido,
para que pueda ser solubilizado fcilmente por las secreciones salivales y del
buche. Puede regurgitar

lquidos del buche produciendo manchas claras , las

ms oscuras suelen ser heces.

Puede volar un radio de 10 km. en 24 horas.
Su longevidad est en dependencia de la disponibilidad de comida y los factores
ambientales, ya que a altas temperaturas acelera sus procesos pero acorta su
vida, mientras que a bajas se prolonga su longevidad. (OPS, 1964)

46

Los huevos son blancos y pequeos algo difciles de ver a simple vista, miden
aproximadamente 1mm de longitud. Cada hembra puede llegar a poner grupos
de 75 a 150 huevos, los que son colocados lejos de la luz directa. En menos de
24 horas la larva rompe el huevo y penetra en el medio de cra usando dos
ganchos que tiene en la boca para rasgar y

aflojar la materia alimenticia, para

regular la temperatura del medio se trasladan a diferentes niveles del mismo

donde oscilen entre 30 y 35 C. Las larvas comienzan a mudar hasta que llegan a
4to estadio, pasado este tiempo comienzan a emigrar a un medio seco para
pupar. Cuando se encuentra lista se contrae hasta formar una vaina o pupario en
la cual se encierra y no toma alimento. En este perodo se mantiene durante 4
5 das si existen temperaturas bajas o 3 das si son altas . Cuando se rompe el
pupario

ya est lista la mosca para salir, comienza a caminar hasta que las alas

se sequen y abran

y su cuerpo endurezca, esto requiere de 1 hora en

condiciones de verano y con temperaturas bajas hasta 15 horas. El apareamiento

puede ocurrir en cualquier momento despus que ocurra esta actividad. Pasado el
perodo de copula, la mosca hembra toma algn tipo de alimento que le permita
madurar los huevos, para despus de 2 3 das ovipositar y comenzar el ciclo
nuevamente (OPS, 1964).
Desde los comienzos de este siglo, la especie Musca domstica Linnaeus 1758 es
considerada un vector mecnico de importantes grmenes responsables de
infecciones entricas tales como: disentera amebiana, shigellosis, salmonellosis,
clera,

infecciones

helmnticas,

Contemplando tambin

infecciones

las molestias

virales

ricketsiales,

etc.

que provocan durante el trabajo y el

descanso en las comunidades con altas densidades de las mismas (Greenberg

1973 y Keiding 1986). Sus vas de transmisin son por las piezas bucales, pelos
del cuerpo, heces, vmitos y almohadillas de las patas.

47

En nuestro laboratorio es necesaria la cra masiva de adultos, principalmente

hembras para realizar pruebas biolgicas con nuevos insecticidas de resistencia
a plaguicidas ya utilizados.
En estudios realizados por Tang et al (1984 ) y (1988) se ensayaron diferentes
mtodo de cra para larvas con el fin de determinar cual era el mejor en cuanto a
rendimiento, costo y fortaleza de los adultos obtenidos para la realizacin de
pruebas de laboratorio ya que la Musca domstica es utilizada ampliamente en
investigaciones genticas por ser el insecto que ha mostrado mayor habilidad en
desarrollar resistencia a los insecticidas (Keiding 1976).
En el grupo de Control qumico , del Departamento Control de Vectores IPK,
realizo un estudio para comparar un medio (I) recomendado por la OMS en 1974
y los otros dos ensayados por primera vez.
Los medios fueron esterilizados en beakers de 2000 ml durante 30 minutos, a
media atmsfera y 110 grados centgrados. Se utilizaron pupas del pie de cra del
laboratorio las cuales fueron distribuidas equitativamente en jaulas de 30 cm

,con armazn y base de madera cubierta con tela de malla de 38 GG ( dimetro

de orificio, 0.1mm ) para evitar contaminacin con otros dpteros. Cuando
emergieron los adultos estos copularon y la puesta de huevos se recogi 3 das
despus. Los huevos fueron extrados con agujas enmangadas (Agujas para uso
entomolgico), se tomaron 100 huevos

por cada frasco que se utiliz

con

medio. Se hicieron 16 rplicas por cada medio ensayado en total.

A continuacin, en la siguiente Tabla 1 se muestran los medios utilizados en el
estudio descrito anteriormente.(Ref Pg 49 ) El medio I fue recomendado.

48

Tabla 1. Medios ensayados para cra de Musca domestica.

MEDIO I
Componentes
Salvado de

MEDIO II

Cantidad

Componentes

Cantidad

Componentes

100 g

Harina de

50 g

Harina de

trigo
Harina de

MEDIO III

pescado

Cantidad
25 g

pescado

30 g

Levadura de pan

50 g

Levadura de pan

50 g

4g

Agar

5g

Agar

5g

10 g

Agua hasta

500 ml

Agua hasta

gramneas
Levadura de
pan
Harina de soya

completar
Extracto de

7.5 g

Acido propinico

500 ml

completar
2.5 ml

Acido propinico 2.5 ml

malta
Aceite de

7.5 g

higado de
bacalao
Agua

400 ml

Acido

2.5 ml

propinico

49

Tabla 2. Tiempo de duracin de cada estadio por medio ensayado.

Fase

MEDIO I

MEDIO II

MEDIO III

Huevo

<1

<1

<1

Larva

5 -13 das

4 - 9.5 das

5 -11 das

Pupa

4.1 - 5.8 das

2 - 6.5 das

4.5 - 5.8 das

En este estudio se obtuvo que los resultados del medio 2 fueron superiores a los
obtenidos en los otros medios.
En la actualidad, en nuestro laboratorio utilizamos un mtodo de cra de ms
fcil manipulacin y ms econmico, el que relacionamos a continuacin:
MEDIO ACTUAL:
Salvado de trigo

500 g

Leche en polvo

40 g

Agua (Potable)

500 ml aproximadamente

Se mezcla el salvado de trigo con los 40 gramos de leche en polvo, y luego se

adiciona el agua,

poco a poco, hasta que quede humedecido, pero no

empapado.
Para recoger las puestas de huevos, se prepara una cantidad ms pequea de
este medio ( se mantiene la proporcin ) y se coloca en las jaulas que contienen
adultos. Al otro da, se prepara la cantidad establecida anteriormente para cada
jaula que se va ha sembrar, se colocan dentro las puestas de huevos y se tapan
con tela y una liga. Despus, las larvas transitan por los cuatro estadios larvales
hasta cuando vayan a pupar, entonces emigran hacia el borde del recipiente de
cra, humedeciendo la tela con que se tap el recipiente. Ya entonces se puede
verter el medio para una bandeja de esmalte o plstico, la cual se le coloca una

50

debajo ms grande con aserrn, para que las larvas tengan un lugar oscuro y
seco para pupar. Como aparece en las Fotos, 13 y 14 ( Ref. Pg 52).

Foto 13. Bandeja con medio contenida en la de aserrn

Cuando

todas las larvas han pasado al aserrn, se elimina la bandeja que

contena el medio, y la que contiene el aserrn con las larvas y las pupas, se
deja secar por espacio de un da a temperatura ambiente. Se muestra en la Foto
14 ( Ref en Pg. 52).

51

Foto 14. Larvas y pupas que migraron del medio al aserrn.

Pasadas 24 horas, se tamizan

para eliminar el aserrn y que quede solamente

las pupas. Terminado el proceso de tamizacin, las pupas se colocan en un

recipiente y se introducen dentro de una jaula. Cuando emergen los adultos, se
les coloca una solucin azucarada al 5 % en recipientes que contienen algodn
o gasa, para que las moscas adultas puedan tomar el alimento sin ahogarse (la
proporcin de solucin se debe ajustar para que el algodn quede embebido en
dicha solucin, nunca seco o inundado) y un vaso con 40 g de leche en polvo y
se dejan transcurrir alrededor de 3 das antes de colocarles medio para la puesta
de huevos.
Las jaulas deben ser debidamente rotuladas para evitar contaminacin de una
cepa con otra.

52

Para eliminar todo el material biolgico ( bandeja con medio , leche en polvo
usada por los insectos,

los algodones

que contuvieron el agua azucarada ,

medio sobrante y pupas vacas ), se depositan en bolsas de nylon para eliminar

para la basura ,

cuyas bocas se

cierran

bien

con un nudo fuerte

y se

incineran ; si no se cuenta con incinerador se dejan por espacio de 2 das

para que los gases producidos por la fermentacin provoquen la muerte de las
larvas que puedan haber quedado vivas y de los adultos que puedan haber
emergido de pupas atrasadas. En caso de los adultos que se vayan a desechar,
pueden eliminarse tambin

a bajas temperaturas, es decir

por

congelacin

durante 1 hora.

53

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58

AGRADECIMIENTOS
A todos los compaeros del Departamento Control de Vectores del IPK y en
especial a la Lic Maria Magdalena Rodrguez Coto y el Dr. Ren Gato de Armas
por sus valiosos aportes en el diseo del documento.

59