UNIVERSIDAD SAN MARTIN DE PORRES

Filial Norte

INFORME DE PROYECTO

Actividad inhibitoria del extracto etanolico de los frutos de

Schinus molle , (molle), frente a Streptococcus B-hemoltico y
Pseudomonas aeruginosa
1. Personal investigador
1.1 Alumnos
Marchena Tirado,
Martn Mendoza Lingan, Wesley
Moncada Saavedra, Fabricio
Monje Rojas, Anibal
Oblitas Vsquez, Nataly
Pisfil Chafloque, Ana
Prez Ortiz, Ronald Pisfil
Surez Peche, Marie
Vargas Tineo, Luz

1.2 Docente
Microblgo. Siaden, Max
2. Carrera Profesional
Medicina Humana

1. REALIDAD PROBLEMTICA
Uno de los temas que ms preocupa a la comunidad cientfica en medicina
humana es la constante emergencia de cepas bacterianas refractarias a uno o
ms antibacterianos, lo que constituye, actualmente, un problema creciente de
salud pblica a nivel mundial (OMS, 2001).
La presencia de estos patgenos relacionados con enfermedades prevalentes,
como son la enfermedad diarreica aguda, las infecciones respiratorias agudas
y las infecciones intrahospitalarias, le dan el carcter de problema prioritario.

2. OBJETIVOS
Recoleccin e Identificacin de frutos de Schinus molle.
Obtener el extracto etanolico de los frutos de Schinus molle.
Aislar Streptococcus B-hemoltico y Pseudomonas aeruginosa a
partir de muestras clnicas.
Determinar la susceptibilidad de las cepas de Streptococcus Bhemoltico y Pseudomonas aeruginosa a los antibiticos.
Determinar la susceptibilidad de las cepas de Staphylococcus aureus
y Pseudomonas aeruginosa al extracto etanolico de los frutos
Schinus molle.

3. JUSTIFICACIN DEL PROBLEMA

El Per cuenta con una gran variedad de especies botnicas, muchas de
ellas se han venido usando empricamente en el tratamiento de
infecciones a lo largo del tiempo, adems se ha reportado que plantas
como el molle, presentan actividad antimicrobiana, frente a algunas
bacterias patgenas.
Se realizar este proyecto dada la elevada frecuencia de
infecciones del tracto respiratorio por Streptococcus B-hemoltico

Pseudomonas aeruginosa y adquisicin de resistencia de los mismos a

los tratamientos antibiticos, lo cual conlleva a evaluar nuevos productos
con accin inhibitoria, los cuales pueden ser obtenidos a partir de
plantas de uso tradicional como el Schinus molle. Se evaluar en este

proyecto la actividad antibitica del extracto etanlico de frutos de

Schinus molle frente a Streptococcus B-hemoltico

y Pseudomonas

aeruginosa aisladas de muestras clnicas y resistentes a ciertos

antibiticos.
4. PROBLEMA CIENTFICO
Cul es la actividad inhibitoria del extracto etanolico de los frutos de
Schinus molle , (molle), frente a Streptococcus B -hemoltico

Pseudomonas aeruginosa?
5. HIPTESIS
El extracto etanolico de Schinus molle (molle)
inhibitoria

tendr

actividad

frente a Streptococcus B hemoltico y Pseudomonas

aeruginosa.

6. MATERIALES
a. Materiales
i. Material biolgico
El material biolgico estar conformado por frutos de Schinus molle,
y cultivos puros

de Pseudomonas aeruginosa y Streptococcus B-

hemoltico.

Material de laboratorio

Frascos de vidrio
Probetas
Matraces de vidrio
Papel filtro
Asa bacteriolgica
Placas Petri
Tubos de ensayo
Viales estriles
Lminas portaobjeto
Mechero
Baguetas
Pinzas

ii. Medios de cultivo

Agar Sangre.
Agar cetrimide..
Agar Mueller - Hinton.
iii. Reactivos, colorantes y otros
Colorantes para tincin GRAM.
Agua destilada estril
7. MTODOS
i. Identificacin de Schinus molle
Se recolectar frutos de molle.
ii. Obtencin del Extracto Etanlico (segn Harrison en
Arrascue y Zuta, 1996)
a) Se disecar los frutos de Schinus molle molle a temperatura
ambiente por 4 das y luego en estufa a 37C por 24 horas.
Posteriormente este material seco se triturar en un molino,
hasta obtener un polvo fino (pulverizado de las hojas)
b) Se macerar 50 gr. de fruto molido hojas previamente
desecados y pulverizados en 150 ml de alcohol etlico de 96
por 24 horas a temperatura ambiente.
c) Pasadas las 24 horas de maceracin se realizar la primera
extraccin, filtrando sobre un tocuyo fino estril. El residuo se
volver a macerar en otros 150 ml de alcohol etlico de 96 por
24 horas, posteriormente se filtrar y se macerar con otros
150 ml de alcohol de 96 por 24 horas. El residuo obtenido se
descartar.
d) Se reunir los filtrados y se evaporar en una estufa de 5060C hasta concentrarlo.
e) El extracto concentrado

se

pondr

en

refrigeracin,

protegindolo de luz solar directa, hasta la utilizacin.

iii. Aislamiento e Identificacin de las especies bacterianas.
Las

cepas

bacterianas

Streptococcus

B-hemolitico

Pseudomonas aeruginosa, se aislaron a partir de muestras

clnicas,

secrecin

farngea

exudado

de

herida

respectivamente.
.
iv. Preparacin y Estandarizacin del Inoculo Bacteriano
(DIFCO, 1987)
Las

cepas

bacterianas

previa

identificacin,

fueron

estandarizadas por turbidometra al tubo N 0,5 del nefelmetro

de Mac Farland (1,5x108 bacterias/ml.), de tal manera que se
trabajar con una biomasa estndar en todos los ensayos, lo
que es considerado importante pues in vitro la actividad de los
agentes

antimicrobianos

disminuye

en

medida

que

se

incrementa la biomasa lo cual no permitira un verdadero

anlisis de la actividad bacteriana del extracto etanlico del
molle.

v. Prueba de Susceptibilidad Bacteriana a los antibiticos.

(Manual INS, 2002)
La susceptibilidad de las cepas bacterianas los antibiticos se
determinar teniendo como referencia el mtodo de difusin en
Disco de Kirby - Bauer.
Las

cepas

bacterianas

previa

estandarizacin

(1,5x10 8

bacterias/ml.), sern enfrentadas a los diferentes antibiticos,

se usarn discos comerciales tiles para las pruebas de
susceptibilidad rutinarias en los hospitales.
vi. Preparacin de los Discos de Sensibilidad con extracto de
molle.
Utilizando papel filtro se obtendrn discos de 5 mm de dimetro
con ayuda de un perforador, los cuales se esterilizarn.
Despus de esterilizarse, se sumergir en el extracto etanlico
por espacio de 5 minutos; quedando as embebido para el
enfrentamiento con los microorganismos.

vii. Prueba de Susceptibilidad Bacteriana al extracto de molle.

(Koneman, 1987)
La susceptibilidad de las cepas bacterianas al extracto
etanlico de molle se determinar teniendo como referencia el
mtodo de difusin en Disco de Kirby - Bauer.
En cada una de las placas estriles conteniendo Agar Mller Hinton se sembrar uniformemente con ayuda de un hisopo
estril embebido con un cultivo joven de la cepa previamente
estandarizada, se dejar secar el inoculo durante 5 minutos,
para despus colocar los discos embebidos con el extracto
etanlico de molle y un disco control embebido con agua
destilada estril.
Despus de 10 a 15 minutos se invertirn las placas para ser
incubadas a 37C por 24 horas. Trascurrido el tiempo se
medirn los halos de inhibicin formados alrededor del disco,
con una regla milimetrada, se realizar 3 repeticiones con cada
una de las 2 cepas bacterianas en estudio.

8. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

OMS | Organizacin Mundial de la Salud [Internet]. [citado 11 de

septiembre de 2014]. Recuperado a partir de: http://www.who.int/es/

Cepas bacterianas refractarias a uno o ms antibacterianos [Internet].

[citado 11 de septiembre de 2014]. Recuperado a partir de:
http://search.who.int/search?
q=cepas+bacterianas+refractarias+a+uno+o+m
%C3%A1s+antibacterianos&ie=utf8&site=default_collection&client=_es_
r&proxystylesheet=_es_r&output=xml_no_dtd&oe=utf8

Saccsaquispe, R. y J. Velazquez. 2002. Manual de procedimientos para

la prueba de sensibilidad antimicrobiana por el mtodo de disco difusin.

Instituto Nacional de Salud, serie de Normas Tcnicas N30. Lima
Per.

Home - Portal Instituto Nacional de Salud [Internet]. [citado 11 de

septiembre
de
2014].
Recuperado
a
partir
de:
http://www.ins.gob.pe/portal