Objetivo

Mtodos de
esterilizacin y
desinfeccin

Curso: Mtodos en
Fitopatologa
24 de abril de 2012
Ing. Agr. MSc. Vivienne Gepp

Definiciones

Que el estudiante se
familiarice con los
procesos de
desinfeccin y
esterilizacin
comnmente utilizados
en un Laboratorio de
Fitopatologa.

Definiciones

Esterilizacin = proceso mediante el cual

se matan o eliminan todas las formas de
vida microbiana.
estril o no estril.

Asepsia

= exclusin continuada de
microorganismos contaminantes.

Desinfeccin = eliminar microorganismos

patgenos total o parcialmente
niveles de desinfeccin.

Muerte de una poblacin microbiana

Antisptico
= sustancia que impide del crecimiento de
microorganismos, aplicado a superficies
corporales

Mtodos de esterilizacin

% sobrevivientes

FISICOS:
Calor
seco
hmedo

Radiaciones

MECNICOS
Filtracin

QUIMICOS
Gaseosos
No

gaseosos

tiempo

Mtodos fsicos de
esterilizacin
1.

Calor seco
1. Fuego directo
2. Hornos

Calor seco

Fuego directo

Esterilizacin directa en la llama

Para objetos de metal

Segn el metal: anzas directamente al
fuego,
pinzas, bistures, agujas pasar por etanol
96 y flamear
dem portaobjetos, cubres.

Esterilizacin directa en la llama

Esterilizacin directa en la llama

Ansas

Calor seco - Horno

Calor seco

Acta oxidando y desnaturalizando las

protenas.
Solo para materiales resistentes al calor y
no inflamables.
Se utiliza para:

vidrios
instrumentos quirrgicos
objetos metlicos
aceites, vaselinas y polvos

Calor seco

T C

Calor seco

(usar temp. menor en este caso)

horas

Temperaturas:
180

C ---------- 30 - 60 min.
170 C ---------- 60 - 120 min

Recipientes de metal o envolver en papel

Precauciones: vidrio debe estar seco

No usar para esterilizar vidrio graduado

Dejar que vuelva a temp. ambiente antes

de abrir

Calor hmedo

Mtodos fsicos de
esterilizacin

Pasteurizacin: T < 100C

Salmonella

Ebullicin y Tindalizacin: T = 100C

mayora

1.

Calor seco

2.

Calor hmedo

de formas vegetativas de hongos,

bacterias y virus lipdicos

Tindalizacin: T = 100C x 3 veces

estril
Autoclavado: T > 100C

Calor hmedo

Autoclave

Con presin: autoclave, olla presin

Para sustancias estables al calor
tener

en cuenta combinaciones reactivos a

temp altas

Temperatura presin tiempo

Temp.

100

110

Tiempo 20 h 2,5 h

115

121 125

130

51
15 6,4 2,4
min. min. min. min.

Autoclave

Autoclave
Presin
(lb/in.)

Calor hmedo - Autoclave

cmo optimizar eficacia?

eliminar

aire,
contenidos similares,
no apretados, dejar espacios verticales,

100%

66%

50%

33%

0%

109

100

94

90

72

10

115

109

105

100

100

15

121

115

112

109

100

25

130

126

124

121

115

30

135

130

128

126

121

Autoclave
1.
2.
3.
4.
5.
6.

Precauciones:
tapas

sueltas,
recipientes con hasta 1/3 de volumen,
vuelta a presin normal lenta.

Temperatura interna (C) segn % aire

eliminado

7.
8.
9.
10.

Poner agua (si es necesario)

Colocar medios, etc.
Cerrar bien tapa
Abrir vlvula de desagote
Encender fuente de calor
Desagotar aire
Cerrar vlvula
Vigilar presin, computar tiempo cuando llega a 15 lb
Luego de 15 20 min. apagar fuego y dejar enfriar
Abrir vlvula luego de >20 min.

Controles de esterilizacin

Controles fsicos

Existen tres tipos:

Controlan parmetros como:

Temperatura

Fsicos

Presin

Qumicos

Tiempo

Biolgicos

Controles qumicos

Cinta de papel adhesivo indicador de

temperatura

Controles biolgicos

Esporas de Bacillus estearothermophilus que se

exponen a ciclo de esterilizacin
Ms

seguro.

Por qu raramente se usan en Laboratorios de

Fitopatologa?

Radiaciones

Mtodos fsicos de
esterilizacin
2.

Calor seco
Calor hmedo

3.

Radiaciones

1.

UV-A : 315-400 nm
UV-B : 280-315 nm
UV-C : 100-218 nm

Gamma

Radiaciones UV

Radiaciones UV

Mecanismo de accin: se atribuye a absorcin

por ADN uniones covalentes entre residuos
de pirimidina pertenecientes a la misma cadena
distorsiones del DNA apareamiento de
bases inhibicin de la sntesis de ADN
inhibicin del crecimiento y la respiracin.
Igualmente efectivas para Gram(+) y Gram (-).
Uso principal: esterilizar el aire y superficies
no penetran en slidos y pobremente en
lquidos.

Esterilizacin por filtrado

Mtodos mecnicos
de esterilizacin

Elimina microorganismos >virus

Ventaja: no modifica composicin
Para: cantidades pequeas
Para: vitaminas, hormonas,
antibiticos, etc.

Filtracin

Filtracin

Filtracin

Requiere bomba de vaco

De diferentes materiales:
vidrio:

re-usables, se lavan con cidos

Lenta y costosa.
Se usa slo para sustancias termolbiles,
que no se pueden esterilizar en autoclave.

fibras

de amianto y celulosa: 1 uso, sitios

de adsorcin

membranas

de steres de celulosa:
1 uso, poros de 0,22 m

CAMPANAS DE FLUJO LAMINAR

CAMPANAS DE FLUJO LAMINAR

CAMPANAS DE FLUJO LAMINAR

Mtodos qumicos
de esterilizacin
1.
2.

Nivel de desinfectantes

De alto nivel:
Oxido

Clorados,

Esterilizacin qumica

Ventajas: no requiere altas temp ni aparatos

costosos

Desventajas: mayor tiempo, sustancias

inflamables y muy txicos y alto costo

Oxido de etileno: muy efectivo pero mutagnico,

inflamable en contacto con aire, hierve a 10,8C
Formaldehdo (formol): gases altamente
irritantes, txicos y carcinognicos.

de etileno, formaldehido, etc.

De mediano nivel:
iodados, alcoholes, fenlicos, etc.

De bajo nivel:
Compuestos

mercuriales

Esterilizacin
Desinfeccin

de amonio cuaternario,

Desinfectantes de mediano nivel

Desinfectantes de mediano nivel

Agentes oxidantes:
Clorados

se

inactiva con materia orgnica

inactiva con luz
se inactiva con algunos detergentes
renovarse mensualmente los preparados
se

Alcoholes desnaturalizan proteinas

Alcohol etlico rectificado 95% - deshidrata
rpidamente y no penetra
Alcohol etlico 70% - ms efectivo

Inactivado

por materia orgnica

tensin superficial
Se evapora sin dejar residuos
Disminuye

Iodados

Desinfeccin de tejido vegetal

Desinfeccin
superficial
1.
2.

De superficies inertes
De material vegetal

Desinfeccin superficial

Desinfeccin

Tcnicas comunes en Fitopatologa:

Lavado previo en agua corriente

Seleccin de tcnica(s) segn:

detergente?

cepillo?

Agua corriente 2 o ms horas

Alcohol 70%
Hipoclorito de sodio:

1%

Cloro activo, 2 %, 0,35% etc.

tejido: grosor, consistencia

hongo a aislar: ej. Oomycetes,

Rhizoctonia

dnde pensamos que est el patgeno

minutos
enjuague

posterior

Biliografa

Vignoli, R. Esterilizacin y
desinfeccin.21p.

http://www.higiene.edu.uy/cefa/Libro2002/Cap%
2027.pdf
Laboratorio de Microbiologa. Mtodos de
Esterilizacin.
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/faculta
d_farmacia/catedraMicro/10_M%C3%A9todos_
de_esterilizaci%C3%B3n.pdf