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Genetica en Las Adicciones
Genetica en Las Adicciones
Coordinadores de la Jornada:
Jos Carlos Prez de los Cobos
Silvia Mendieta Caviedes
J. Carlos Valderrama Zurrian
Edita: Sociedad Espaola de Toxicomanas
ISBN: 84-611-1370-5
Imprime: Martin Impresores, S.L.
Depsito legal:
Financiado por
INDICE
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El primer borrador del genoma humano fue publicado hace cinco aos, en febrero de
2001. Segn este proyecto singular, los seres humanos contamos aproximadamente con
30000 genes, 50% de los cuales se expresan en el cerebro. Estos datos constituyen unos
de los exponentes principales del enorme desarrollo experimentado por la gentica en los
ltimos aos. Tal desarrollo permite que la gentica mdica se encamine en el momento
actual a la tarea de identicar el componente hereditario de nuestra predisposicin a
padecer enfermedades.
Nos encontramos en uno de esos momentos clave del avance cientco en el que la
descripcin de un nuevo mbito de nuestro medio interno inaugura una larga lista de
nuevas lneas de investigacin de tipo siolgico o teraputico. Si la descripcin del genoma
humano es ya una realidad, ahora se espera conocer mejor cmo funciona este complejo
entramado molecular. Tal esfuerzo nos permitir seguramente describir el proteoma y
ampliar de forma espectacular nuestro arsenal teraputico.
Una situacin como la que se describe es muy probable que produzca muchos cambios
en nuestra manera de entender las enfermedades. Existen motivos para pensar que estos
cambios afectarn muy especialmente a nuestro entendimiento de las adicciones. En estos
trastornos la interaccin entre la herencia y el ambiente tiene una importancia singular.
Si se identicasen los factores genticos implicados en la etiologa de las adicciones,
los clnicos debern acometer una ardua labor de puesta al da. Ante la pltora de nuevos
trminos, nuevas tcnicas y nuevas alternativas teraputicas que se utilizan o ensayan
en los estudios de investigacin slo cabe ponerse en marcha para el momento en que
ya est disponible la aplicacin prctica. La cuestin es que el mencionado momento
ya lo estamos viviendo: un chip para determinar el perl metabolizador de los pacientes
respecto a diferentes citocromos ya ha sido comercializado en EEUU para ser utilizado por
los psiquiatras.
En este momento crucial, la Sociedad Espaola de Toxicomanas (SET) ha convocado
una reunin de expertos que coinciden en resaltar los siguientes aspectos claves respecto
a la gentica de los trastornos adictivos:
1. El progreso en la prevencin y el tratamiento de las adicciones pasa por una mejor
comprensin de la etiologa de estos trastornos.
Hasta ahora las intervenciones teraputicas se haban basado en el control y manejo
ms adecuado de los factores ambientales, como si estos fueran los nicos agentes causales
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que inician y mantienen los trastornos adictivos. Sin embargo, la experiencia clnica
muestra que ste es un abordaje parcial del problema. Sabemos que no todas las personas
se exponen por igual al riesgo de desarrollar una adiccin. Dicho de otro modo, existen
muchas diferencias individuales en cuanto a la frecuencia con que las personas prueban
por primera vez sustancias psicoactivas. Adems, una vez que estas son probadas no todas
las personas tienden con la misma intensidad o frecuencia a volver a consumirlas. Por
ltimo, cuando el hbito est ya instaurado tambin existen muchas diferencias respecto
a la capacidad para reducir signicativamente o detener conmpletamente el consumo. En
todas estas facetas del proceso adictivo es muy probable que numerosos factores genticos
estn involucrados de forma signicativa.
2. Las adicciones son debidas en parte a factores genticos.
Los estudios de epidemiologa gentica (agregacin de enfermedades en familias,
concordancia de gemelos homocigticos frente a dicigticos y estudios de adopcin)
muestran que en la etiologa de las adicciones existe un componente gentico muy
importante (heredabilidad: 0,30-0,50), aunque no tan elevado como en otros trastornos
mentales tales como la esquizofrenia o el trastorno bipolar (heredabilidad 0,50-0,80).
Las cifras de heredabilidad referidas nos indican que la presencia de los factores genticos
de vulnerabilidad incrementa el riesgo de sufrir adicciones, aunque no determinan su
aparicin. As, es factible que un portador de tales factores genticos nunca desarrolle una
adiccin y que, por el contrario, sufra tal trastorno una persona que carezca de los mismos.
3. Una amplia variedad de genes estn implicados en la aparicin y persistencia de las
diferentes formas de adiccin.
Los resultados de los estudios de asociacin y ligamiento muestran que las adicciones
estn sujetas a herencia polignica (multifactorial y compleja). Seguramente, varios
factores genticos especcos (para cada sustancia) e inespeccos (entre los que destacan
los relacionados con el sistema dopaminrgico) contribuyen a la aparicin de las diferentes
variedades de adiccin. En consecuencia, las adicciones estaran relacionadas con la
coincidencia en una misma persona de un conjunto de polimorsmos genticos sin que la
presencia aislada de uno de estos polimorsmos tenga un papel suciente para determinar
la aparicin del trastorno.
En el proceso de la adiccin a una sustancia estn implicados ms de un sistema
neurobiolgico. Entre estos sistemas destacan los dependientes de los siguientes
neurotransmisores: dopamina, GABA, glutamato, endocannabinoides, endornas, y
serotonina. Diferentes lneas de investigacin, sobre todo en animales, han mostrado que
estos sistemas funcionales interaccionan entre s, lo que sirve de base siopatolgica a
los numerosos procesos neuro y psicobiolgicos (tolerancia, abstinencia, refuerzo, sesgo
atencional, aprendizaje, motivacin, etc) que integran una adiccin.
El caso de la dependencia de opioides puede servir para ilustrar este fenmeno. Es
posible que en la dependencia de estas sustancias, determinados polimorsmos del receptor
mu opioide constituyan un factor de riesgo para el trastorno. La cuestin es que ciertas
variaciones genticas en los receptores canabinnoides, dopaminrgicos o gabargicos,
tambin pueden ser un factor de riesgo para el desarrollo de la dependencia de herona.
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complicaciones es compleja
Las adicciones son fenmenos complejos caracterizados por un extenso deterioro en
muchas reas del funcionamiento personal. Las personas con adicciones frecuentemente
sufren trastornos mentales comrbidos tanto de estado (eje I del DSM-IV) como de rasgo
(eje II). Adems, tambin son muy frecuentes las complicaciones fsicas (eje III) lo que
supone un nuevo foco de comorbilidad. Las patologas presentes en los ejes I, II y III
suponen un notable incremento de la variabilidad clnica y tambin estn sujetas a factores
de vulnerabilidad gentica. Este conjunto de hechos, junto con las dicultades todava
existentes para formular entidades diagnsticas vlidas en el campo de las adicciones,
plantea serias dicultades a la hora de seleccionar los fenotipos ms adecuados para la
investigacin.
Por otra parte, la adiccin y los trastornos y enfermedades que la acompaan
interaccionan con el ambiente conformando un juego de factores de riesgo y de proteccin
cuyo funcionamiento puede resultar muy difcil de conocer. Sobre todo porque el signo de estos
factores puede cambiar con la edad del sujeto. Adems, el signicado del trmino ambiente
en el caso de las adicciones es mucho ms complejo que en el resto de trastornos mentales.
5. Las adicciones son el resultado de la interaccin entre la herencia y el ambiente
A las dicultades inherentes al estudio de las bases genticas de cualquier trastorno
mental hay que aadir en el caso que nos ocupa un elemento peculiar: la entrada de
una sustancia biolgicamente activa en nuestro organismo que puede inducir cambios
neuroadaptativos y alteraciones patolgicas. Como puede observarse, en el caso de
las adicciones el ambiente ejerce un efecto biolgico directo sin la mediacin de los
mecanismos de procesamiento de la informacin.
Los mecanismos de procesamiento de la informacin tambin son muy importantes en
nuestro caso, como lo demuestran nuestros conocimientos sobre el juego patolgico. Si se
acepta que este trastorno es una forma de adiccin sin sustancia deberemos admitir que
no es necesaria la entrada de una sustancia en nuestro organismo, para que se desarrolle
una conducta compulsiva dirigida a una meta. Y tambin deberemos aceptar que esta
conducta no modelada por el efecto biolgico de una sustancia est sujeta a factores de
vulnerabilidad gentica.
La cuestin es que en la dependencia de sustancias los mecanismos de procesamiento
de la informacin convergen con otros que estn inducidos por la accin biolgica de la
sustancia consumida. Cuando sta entra en nuestro organismo produce cambios en la
expresin gnica ms o menos duraderos que repercuten signicativamente en el desarrollo
de la adiccin. El resultado es una compleja interaccin gen-ambiente (G x E) que estamos
muy lejos de entender. Tal interaccin supone la existencia de una diferente sensibilidad
a los factores ambientales que est moderada o mediada por factores genticos. Una
parte importante de los esfuerzos en la futura investigacin sobre adicciones habrn de
orientarse hacia la comprensin de esta interaccin.
6. En el estudio de la gentica de las adicciones existe una amplia variedad de estrategias
vlidas de investigacin.
Los estudios en animales permiten crear situaciones experimentales nicas, como
la posibilidad de observar el efecto de una sustancia en un animal que carece de un
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PRESENTACIN
Jornadas sobre Gentica de las Adicciones de la SET
D. Jose Oorbe de Torre
Subdirector General de la Delegacin del Gobierno
para el Plan Nacional sobre Drogodependencias
Buenos das:
Tengo el placer de inaugurar estas Jornadas de la Sociedad Espaola de Toxicomana
cuyo contenido va a versar sobre Gentica de las adicciones, un tema de notable inters
en el campo de las drogodependencias.
Como todos sabemos, los trastornos adictivos son un fenmeno extraordinariamente
complejo, en cuya etiologa intervienen mltiples factores de diversa ndole, cuyo estudio
desde diferentes pticas y disciplinas resulta imprescindible para llevar a cabo una adecuada poltica en torno a este problema.
Uno de estos factores es la gentica. Como la propia Organizacin Mundial de la Salud
seala, hay muchos factores individuales, culturales, biolgicos, sociales y ambientales
que convergen para aumentar o reducir las posibilidades de que un determinado individuo
consuma una sustancia psicoactiva y en qu medida... Adems de los factores sociales y
culturales, hay diferencias en la dotacin gentica que explican una considerable proporcin de la variacin individual en el consumo y la dependencia de las sustancias psicoactivas. Por ello, el conocimiento de estos genes y su interaccin con los factores ambientales
que inuyen en la dependencia constituyen un aspecto clave en el tratamiento de las drogodependencias.
Actualmente, se estn desarrollando investigaciones en relacin con diversos aspectos
de esta cuestin. Desde esta Delegacin del Gobierno para el Plan Nacional sobre Drogas
hemos nanciado algunos proyectos de investigacin que ahondan en este tema. Tambin
estamos interesados, y prueba de ello es la nanciacin de estas Jornadas, en que los
resultados de estas investigaciones, as como el estado actual de lo que la ciencia tiene
que decir sobre estos temas, se transera y difunda a los profesionales que trabajan en
este campo, de forma que puedan actualizar sus conocimientos y aplicarlos en su prctica
cotidiana.
Creo que la celebracin de estas Jornadas pueden suponer un fecundo intercambio de
experiencias, conocimientos y reexiones entre cientcos, profesionales e instituciones
que desarrollan su trabajo en la gentica de las adicciones y que, a su vez, nos aporte informacin y sugerencias que permitan mejorar nuestra actuacin como responsables de la
ejecucin de la poltica de drogodependencias en Espaa.
Muchas gracias,
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CONFERENCIA
Aspectos genticos en el juego patolgico
ngela Ibez
Servicio de Psiquiatra. Unidad de Ludopata
Hospital Ramn y Cajal
Universidad de Alcal. Madrid
INTRODUCCIN
Para que una investigacin gentica tenga sentido es preciso realizarla sobre una
entidad diagnstica vlida, que tenga unas bases neurobiolgicas sucientes, y que haya
evidencias de que hay un componente hereditario en el trastorno.
En este sentido, nos debemos plantear la siguiente pregunta: la ludopata es realmente
una entidad diagnstica vlida?. El juego patolgico es un trastorno que es tan antiguo
casi como la propia historia de la Humanidad, ya que nos podemos remontar a siglos atrs
y encontramos descripciones de ludpatas en civilizaciones antiguas. Sin embargo, hasta
nales del siglo XIX no empez el inters por el estudio de este trastorno, y como entidad
patolgica no se empieza a considerar hasta hace pocos aos. Antes se pensaba que era
un vicio, una costumbre insana, pero su reconocimiento como trastorno mental tuvo que
esperar hasta el ao 1980, cuando la Asociacin Psiquitrica Americana (APA) lo incluy
en su clasicacin de los trastornos mentales DSM-III, incluyndolo dentro del grupo de
trastornos de control de los impulsos no clasicados en otros apartados.
La Organizacin Mundial de la Salud (OMS) por su parte no reconoci este trastorno
hasta 1992, cuando public su CIE-10, mientras que en la CIE-9 publicada en 1979 no lo
contemplaba. Para la OMS el trastorno consiste en la presencia de frecuentes y reiterados
episodios de juegos de apuestas, los cuales dominan la vida del enfermo en perjuicio de los
valores y obligaciones sociales, laborales, materiales y familiares del mismo. La denicin que
hace la CIE-10 de la ludopata, se asemeja mucho conceptualmente al resto de las adicciones.
En los estudios epidemiolgicos realizados en distintos pases, se han encontrado cifras
similares de prevalencia. Tambin se ha observado que cuando se legalizan los juegos
de azar, la prevalencia de la ludopata aumenta, de manera que las diferencias en la
prevalencia dependen fundamentalmente de la accesibilidad que tiene la poblacin general
a los juegos de azar. De esta manera la prevalencia del trastorno se sita entre el 0,5 y el
2,5 % de la poblacin adulta. Esta cifra de prevalencia aumenta en poblaciones de jvenes
y adolescentes que son sujetos ms vulnerables, y tambin si se estudian poblaciones que
tienen ms riesgo de padecer este problema como son los sujetos con adicciones.
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Bases neurobiolgicas
En la ludopata se han establecido varios modelos tericos para explicar la etiopatogenia
del trastorno. Uno de ellos considera el juego patolgico como un trastorno del control de
los impulsos, teniendo en cuenta su ubicacin nosolgica y la relacin que tiene con otros
trastornos del mismo grupo. En relacin con los trastornos de control de impulsos una
de las hiptesis ms rmes es la implicacin de la serotonina, al haberse encontrado en
numerosas investigaciones datos que apuntan a la posible existencia de una hipofuncin
serotonrgica en este tipo de trastornos. Esta aproximacin representa desde luego una
forma simplista de contemplar el problema, porque el cerebro es un rgano muy complejo y
no parece razonable que haya una sola causa que pueda explicar este tipo de trastornos.
Otro de los modelos tericos involucra al nivel de arousal y la bsqueda de sensaciones
como rasgo de personalidad en el desarrollo de la ludopata, lo que se ha puesto en relacin
con la posible implicacin de la adrenalina. Un tercer modelo que de alguna manera nos ha
trado a estar aqu presentes en estas jornadas es el modelo de adiccin sin sustancia. Los
distintos modelos tampoco son excluyentes entre s, ya que en las adicciones tambin hay
un trastorno del control de los impulsos asociado, por lo que la divisin por modelos tericos
tambin son constructos simplistas que sin embargo nos ayudan para poder organizar la
informacin que tenemos y poder investigar. En nuestra opinin, el modelo de adiccin
sin sustancia es probablemente el que ms nos ayuda a comprender la etiopatogenia
del juego patolgico. Tambin se han barajado otros modelos, como los que consideran
la ludopata dentro del espectro del trastorno obsesivo-compulsivo, y la consideracin del
juego patolgico en el espectro de los trastornos afectivos.
Siguiendo el modelo de la ludopata como trastorno del control de los impulsos y
sobre la hiptesis serotonrgica, se han realizado distintas investigaciones para estudiar
cmo est el sistema serotonrgico, mediante pruebas de estimulacin, determinacin de
los niveles de la serotonina y sus metabolitos en el lquido cefalorraqudeo, -el principal
metabolito que es el cido 5-hidroxindolactico (5-HIAA)-, estudiar la MAO plaquetaria la
MAO es una enzima encargada de la metabolizacin de la serotonina-, tambin los niveles
de triptfano en plasma -el triptfano es el aminocido precursor de la serotonina-.
En cuanto a pruebas de estimulacin que se han realizado en el juego y que apoyan la
hiptesis serotonrgica, se han realizado con clomipramina intravenosa (i.v.), -clomipromina
es un antidepresivo tricclico, y mediante la administracin i.v. se evitara el primer paso
heptico, por lo que tiene un efecto ms serotonrgico. Esta investigacin fue la base de
una Tesis Doctoral que realiz en nuestra unidad, la Dra. Moreno, y lo que ella encontr
es que haba una respuesta aplanada de prolactina, es decir que tras la administracin de
clomipromina i.v. que es un estimulante serotonrgico, al contrario que los controles en
los que se observa un pico de prolactina, los jugadores tienen una respuesta aplanada, lo
que se interpreta como consecuencia de una hipofuncin del sistema serotonrgico. Otros
autores americanos utilizan como estimulante serotonrgico la metil-cloro-fenilpiperacina
(m-CPP), observando en jugadores la presencia de una sensacin como de euforia o de
bienestar (high) y un aumento de prolactina. No se trata de resultados discordantes, ya
que la clomipramina actuara como estimulante a nivel presinptico y el m-CPP actuara a
nivel postsinptico. En este sentido la interpretacin de los autores en ambos casos apunta
hacia la existencia de una hipofuncin serotonrgica.
En cuanto a los niveles de 5-HIAA en lquido cefalorraqudeo, se han realizado varios
estudios. En unos no se encuentran diferencias; en otro estudio con un nmero muy
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limitado de pacientes, los autores encuentran una disminucin del metabolito en lquido
cefalorraqudeo.
Las investigaciones sobre la MAO plaquetaria han sido objeto tambin de Tesis
Doctorales realizadas en nuestra unidad por el Dr. Jose Luis Carrasco y el Dr. Carlos Blanco.
Ambos encontraron que la actividad de la MAO-B plaquetaria estaba disminuida en los
jugadores patolgicos, interpretndose los resultados en el sentido de la existencia de una
hipofuncin serotonrgica.
El estudio de los niveles del triptfano plasmtico fue objeto de otra Tesis Doctoral en
nuestra Unidad, la de la Dra. Rita Prieto. En el triptfano total no se hallaron diferencias entre
jugadores y controles. Sin embargo, en el triptfano libre, que es el que realmente pasa la
barrera hematoenceflica, s que se encontraron diferencias entre jugadores y controles,
de manera que haba una disminucin del triptfano libre en los jugadores respecto de los
controles, apoyando la hiptesis de la hipofuncin serotonrgica en la ludopata.
En cuanto a la teora del arousal y la bsqueda de sensaciones, que apoyara la
implicacin de la noradrenalina en el juego patolgico, algunos autores han intentado
investigar como est el sistema noradrenrgico mediante la determinacin de los niveles
de noradrenalina o su metabolito o bien mediante pruebas de estimulacin, en este caso
con clonidina, y valorando la respuesta de la hormona de crecimiento. En resumen se
ha encontrado un aumento del metabolito de la noradrenalina en lquido cefalorraqudeo
y plasma, un aumento de la noradrenalina en orina y en lquido cefalorraqudeo y un
aumento de la hormona de crecimiento en respuesta a la clonidina, apuntando hacia la
existencia de una posible disfuncin del sistema noradrenrgico.
Siguiendo el modelo de adiccin sin sustancia, que implicara fundamentalmente
al sistema dopaminrgico, algunos autores han estudiado como estn los niveles de
dopamina y sus metabolitos en plasma, orina y lquido cefalorraqudeo y no han encontrado
diferencias. En cambio en otro de los estudios, se encontr una disminucin de la dopamina
y un aumento de sus metabolitos en lquido cefalorraqudeo. Sin embargo, en relacin con
las adicciones y la va dopaminrgica del refuerzo, la dopamina representa slo uno de
los componentes, ya que esta va recibe aferencias de neuronas gabargicas y neuronas
opiodorgicas, entre otras, ambas con un efecto inhibidor. En este sentido, se estudiaron
los niveles de GABA en lquido cefalorraqudeo y no se encontraron diferencias en jugadores
patolgicos comparado con controles. En cuanto al sistema opiode, cabe sealar que un
hallazgo casual en el trascurso de una investigacin fue la observacin clnica de que los
ludpatas tenan mayor tolerancia al dolor, lo que les llev a pensar que podan tener
afectadas las endornas. En un estudio posterior no se encontraron diferencias en los
niveles de beta-endornas en jugadores comparado con controles.
Sin embargo, el hecho de que no se haya encontrado ningn dato consistente en
relacin con la implicacin de la dopamina, el GABA, o el sistema opiode, no quiere decir
que no est implicado el sistema dopaminrgico en la etiopatogenia de la ludopata, ya que
por ejemplo podra haber, a modo de hiptesis, alguna alteracin funcional o estructural en
los receptores dopaminrgicos que conllevara una disfuncin en el sistema.
Componente hereditario
Los datos que apuntan hacia un componente hereditario en el juego patolgico proceden
por un lado de estudios clnicos. La comorbilidad con otros trastornos relacionados es muy
alta, y es conocido que cuando hay un componente gentico importante en un trastorno, se
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observa a menudo una agregacin familiar no solamente del trastorno en s, sino tambin
de los trastornos relacionados. Otros datos proceden de estudios de epidemiologa gentica
en el juego patolgico.
En cuanto a la agregacin familiar del trastorno, en diferentes estudios clnicos se
estima que alrededor de un 20% de los familiares de primer grado de los jugadores
patolgicos tendran tambin ese diagnstico. Si comparamos este porcentaje con la
prevalencia del trastorno en poblacin general, que segn hemos visto anteriormente los
datos epidemiolgicos sugieren que est entre el 0,5 y el 2 %, observamos que realmente
el porcentaje es muy alto. Sin embargo, el hecho de que un familiar de primer grado tenga
el trastorno tambin, no quiere decir que sea gentico, porque entran en juego todos los
factores ambientales que pueden tener un papel decisivo. De esta manera si una persona
se cra en un ambiente donde es propicio el juego y ve jugar a sus progenitores, o hay un
ambiente de juego en casa, sera un factor de riesgo para poder desarrollar la ludopata.
En un estudio muy interesante de Gambino y colaboradores, los autores observaron
que la probabilidad de ser jugador patolgico cuando alguno de los padres lo eran, se
multiplicaba por 3 en los sujetos del estudio. Si los abuelos tambin lo eran adems de los
padres, la posibilidad de que el sujeto fuera jugador se multiplicaba por 12.
Para poder esclarecer ms el posible componente gentico en un trastorno hay que
recurrir a estudios epidemiolgicos ms complejos como los realizados sobre muestras de
gemelos y de adoptados. En el juego patolgico hay referencias de un estudio realizado
sobre una muestra numerosa de gemelos, con 3359 pares de gemelos monocigticos y
dicigticos, procedente del registro de los veteranos del Vietnam, por lo que est compuesta
nicamente por varones. En este estudio se encontr que los factores familiares explicaban
hasta el 62% del diagnstico del juego patolgico.
Otro estudio ms modesto, pero que tiene la ventaja de que incluye varones y mujeres,
es el realizado por Winters & Rich. Estudiaron 92 pares de sujetos monocigticos y dicigticos
varones y 63 pares tambin de ambos tipos de gemelos pero mujeres. En este estudio se
encontraron diferencias de gnero, de manera que en varones hallaron una heredabilidad en
los juegos, pero slo en aqullos ms activos, en los que implican una mayor participacin
del sujeto de forma activa (casinos y mquinas fundamentalmente) respecto a los juegos
menos activos (cartas y bingo). En cambio en las mujeres no encontraron diferencias en
ningn tipo de juego.
Gentica molecular en la ludopata
En primer lugar cabe sealar que en el juego patolgico lo que se han realizado en
este campo son estudios genticos de asociacin con marcadores polimrcos de ADN de
genes candidatos. En este sentido cabe preguntarse cules son los genes candidatos que
se pueden estudiar en la ludopata. En realidad, a la vista de los conocimientos actuales
cualquier gen de los sistemas serotonrgico, domaninrgico, noradrenrgico y otros
potencialmente involucrados en la etiopatogenia de la ludopata puede ser un gen candidato.
Un aspecto importante es poder elegir, dentro de los genes candidatos, polimorsmos
funcionales que tengan algn sentido, es decir que el producto resultante de la sntesis
de ese gen que estudiamos sea diferente estructural o funcionalmente segn la dotacin
allica del polimorsmo que se estudia, de manera que nos facilite la interpretacin de los
resultados.
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capacidad para recaptar serotonina en un cultivo de broblastos; es decir, que hay menos
nmero de transportador de serotonina sintetizado y adems el que hay, funciona peor.
Por esta razn, en las distintas investigaciones sobre este polimorsmo, se agrupan los
sujetos en funcin e su genotipo, denominando grupo S a los que tienen en su genotipo
al menos uno de los alelos cortos, que originara la opcin hipofuncionante, y grupo L
a los que tienen ambos alelos largos. En la investigacin en controles y jugadores, no
se encontraron diferencias signicativas en el grupo total. Sin embargo, al analizar por
gnero, las correspondientes correcciones por comparaciones mltiples, se encontr que
en varones la frecuencia del alelo corto era mayor comparado con el alelo largo, aunque
no llegaba a alcanzar la signicacin estadstica (p=0,07). En cambio en las mujeres no
haba diferencias. Al agrupar por grupos, que realmente era lo que nos estaba hablando de
la funcionalidad, porque como hemos comentado el grupo S rene a los que tienen una
menor capacidad funcional, en este caso se encontr que los jugadores varones tena con
mayor frecuencia el grupo S, o sea que funcionaba peor su transportador de serotonina,
comparado con los controles, siendo las diferencias signicativas. En las mujeres tampoco
se encontraron diferencias al analizar por grupos.
Otro polimorsmo funcional del que disponemos de resultados est en el gen de la
enzima monoamino-oxidasa A, localizado en la regin promotora del gen, y consiste en
la repeticin en tndem de 30 pares de bases. Se han descrito varios alelos, si bien en
ms del 95% de la poblacin se encuentran los alelos con 3 y 4 copias. El alelo con 3
copias, conere una menor capacidad funcional al producto de la sntesis, tanto en que
se transcribe menos (de 2 a 10 veces menos la posibilidad de trascripcin) y adems la
enzima que se sintetiza tiene una menor actividad en el cultivo de broblastos, y en otro
tipo de estudios para comprobar la funcionalidad como son los ensayos con luciferasa. Al
analizar este polimorsmo en nuestro estudio, el alelo 3 (menos funcionante) estaba ms
representado en la distribucin general en jugadores comparado con los controles, si bien
las diferencias no llegaban a ser signicativas (p=0.09). Al analizar por gnero encontramos
diferencias signicativas en los varones, de manera que el alelo 3 era ms frecuente en el
caso de los ludpatas comparado con los controles, y el nivel de signicacin estadstica
aumentaba al considerar solamente el subgrupo de jugadores ms graves. El alelo 3 se
observ menos representado en el grupo de varones controles (30%) comparado con los
ludpatas varones (55%) y con el subgrupo de varones ms graves (68%).
Reuniendo los resultados anteriores observamos que los varones ludpatas tenan
con mayor frecuencia el genotipo menos funcional del polimorsmo del transportador de
serotonina por un lado, y tambin tenan con ms frecuencia respecto a las mujeres, un
polimorsmo menos funcional de la monoaminoxidasa A. Por este motivo intentamos
aplicar la metodologa del estudio por haplotipos, para estudiar conjuntamente ambos
resultados. Asignamos el haplotipo cero, a los sujetos que tenan los dos polimorsmos
ms favorables, o sea los que eran ms funcionantes. En el caso del transportador de
serotonina, eran aqullos que tuvieran los dos alelos largos; en el caso de la monoaminooxidasa A, en los varones, como el gen est en el cromosoma X, eran aqullos que
tuvieran slamente 4 copias, mientras que en las mujeres, que tienen una dotacin doble
de cromosoma X tenemos que considerar los ms funcionantes aqullas que tenan al
menos uno de los alelos con 4 copias (4/4, o bien 4/3). El haplotipo 1 reuna los casos en
los que uno de los polimorsmos estudiados, ya sea el de la monoamino-oxidasa A o el
del trasportador de la serotonina, fuera menos funcional. En el haplotipo 2 se recogan los
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casos en los que en ambos polimorsmos, la dotacin gentica fuera la menos funcionante.
De esta manera el haplotipo 2 representaba la opcin menos favorable. En el anlisis por
haplotipos encontramos que el haplotipo 2 estaba signicativamente ms representado
en jugadores (42%) respecto a controles (20%), con una p<0.05. Al analizar por gnero,
en mujeres no encontramos diferencias, mientras que en los varones las diferencias se
incrementaban, aumentando el nivel de signicacin (p<0.01).
En resumen y a modo de conclusin cabe sealar que en nuestra opinin el juego
patolgico es una entidad diagnstica que es real en la clnica, es vlida para la investigacin,
tanto biolgica como gentica, que hay datos que sugieren, -con independencia de otros
factores como los ambientales que son indudablemente muy importantes-, que hay una
predisposicin por lo menos en algunos individuos a desarrollar este trastorno. Algunos
hallazgos sugieren que hay una hipofuncin serotonrgica y tambin una disfuncin
dopaminrgica en este trastorno. Por otra parte los datos actuales sobre estudios genticos
sugieren que hay factores genticos que pueden conferir una susceptibilidad individual para
el desarrollo de este trastorno, y que esa base gentica est basada, al menos en parte, o
en algunos individuos, en alelos especcos hipofuncionantes de los genes responsables de
la sntesis de la enzima MAO-A, del receptor de dopamina DRD4, y del transportador de la
serotonina, si bien estos hallazgos deben ser replicados en muestras ms amplias, en otras
poblaciones y en estudios preferiblemente de colaboracin internacional. En cualquier caso
es preciso recordar que los ludpatas no constituyen un grupo homogneo, y aunque
tienen caractersticas comunes, es posible que en algunos casos el factor gentico pueda
ser importante y en otros no. Se tratara entonces de un modelo de herencia polignica y
multifactorial, donde el papel de la interaccin genes-ambiente tiene un valor primordial.
En este sentido, y como ocurre con las adicciones en general, aunque un sujeto puede estar
genticamente muy predispuesto, si no se cruza nunca con una mquina tragaperras en su
vida (o con algn otro juego con alta capacidad adictiva), no desarrollar el trastorno.
Por ltimo cabe tambin mencionar la importancia que pueden tener las diferencias
encontradas en la investigacin neurobiolgica y en la gentica en funcin del gnero.
De esta manera parece que se podra contribuir de diferente forma segn el gnero en el
desarrollo de un mismo fenotipo o un fenotipo que parece semejante cuando vemos en
la clnica a los pacientes. Estas diferencias son cobran especial relevancia porque pueden
tener una inuencia en el abordaje teraputico del trastorno.
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ASPECTOS GENTICOS
EN EL JUEGO PATOLGICO
ngela Ibez
Servicio de Psiquiatra. Unidad de Ludopata
Hospital Ramn y Cajal
Universidad de Alcal. Madrid
Gentica de las Adicciones. SET. Madrid, 10 de mayo de 2006
Introduccin
Bases neurobiolgicas
Componente hereditario
La gentica molecular en la ludopata
Conclusiones
INTRODUCCIN
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INTRODUCCIN
INTRODUCCIN
Preocupacin por el
juego
Progresin (tolerancia)
Actos ilegales
Fracaso en el control
Complicaciones diversas
Sntomas de abstinencia
El juego como escape
(familiares, laborales,)
Apuros econmicos
INTRODUCCIN
Bases Neurobiolgicas
-22-
BASES NEUROBIOLGICAS
Modelos tericos
JP como un tr. en control de impulsos 5-HT
Arousal y bsqueda de sensaciones NE
Modelo de adiccin sin sustancia DA
BASES NEUROBIOLGICAS
Pruebas de estimulacin
5-HIAA en LCR
MAO plaquetaria
Triptfano en plasma
BASES NEUROBIOLGICAS
Pruebas de estimulacin
10
9
8
7
6
5
4
3
2
1
0
-3 0
B asal
30
60
L u d p a ta s (n = 8 )
90
120
C o n tro le s (n = 1 2 )
-23-
BASES NEUROBIOLGICAS
MAO plaquetaria
p actividad MAO-B
(Carrasco et al., 1994; Blanco et al., 1996)
9
8
7
6
5
4
3
2
1
0
2
8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 40
Ludpatas n=27
Controles n=27
BASES NEUROBIOLGICAS
RATIO
TRIPTOFANO
TRIPTFANO
RATIO
LIBRE
JUGADORES
(Media Des. Est.) 44,94 9,75
0,011 0,004
0,013 0,005
CONTROLES
(Media Des. Est. )47,68 11,55
VALOR p
0,256
0,724
0,039
0,034
BASES NEUROBIOLGICAS
-24-
BASES NEUROBIOLGICAS
Neuronas
gabargicas
+
+
Va
- -
DA
Neuronas
opiodorgicas
BASES NEUROBIOLGICAS
9 GABA
No diferencias en LCR (Roy et al., 1989)
9 Sistema opiode
Mayor tolerancia al dolor (Pratt et al., 1982)
No diferencias beta-endorfinas (Blaszczynski et al.,1986)
IMPLICACIN RECEPTORES
DOPAMINRGICOS
Componente hereditario
-25-
COMPONENTE HEREDITARIO
COMPONENTE HEREDITARIO
COMPONENTE HEREDITARIO
Estudios en gemelos
3359 pares de MZ y DZ varones
Factores familiares explican 62% de diagnstico JP
(Eisen et al., 1998)
La gentica molecular en la
ludopata
-26-
Sujetos no emparentados
Se comparan las frecuencias y distribuciones
allicas de marcadores genticos polimrficos
Ventaja: permiten detectar genes que contribuyen a
la enfermedad con un efecto menor o de
susceptibilidad
LA GENTICA MOLECULAR EN LA LUDOPATA
?
Sistema serotonrgico
Sistema noradrenrgico
Sistema dopaminrgico
-27-
N.R.
L.C.
Genes
5-HT
Genes
Noradrenrgicos
Genes
GABArgicos
AVT: Genes
dopaminrgicos
Lbulo prefrontal
Genes
glutamato
-atencin
- impulsividad
Localizacin
Triptfano hidroxilasa
11p
MAO-A
Xp11.4-p11.3
Transportador de 5-HT
17q12
Receptores: 5-HT-1A
5q11.2
6q13
1p34.4-P36.3
6q14-q15
3p13-p14.1
13q14-q21
2q36.3-q37.1
Xq24
11q23.1-q23.2
5q31-33
7q36
2q11-q13
1p35-p36
10q23.3-24.3
5-HT-1B
5-HT-1D
5-HT-1E
5-HT-1F
5-HT-2A
5-HT-2B
5-HT-2C
5-HT-3
5-HT-4
5-HT-5A
5-HT-5B
5-HT-6
5-HT-7
Localizacin
Tirosina hidroxilasa
11p15.5
Dopamina E hidroxilasa
9q34.3
Receptores: DRD1
5q.35.1
DRD2
11q22-q23
DRD3
3q13.3
DRD4
11p15.5
DRD5
4p16.1
MAO-A
Xp11.4-p11.3
MAO-B
Xp11.4-p11.3
COMT
22q11.21
Transportador dopamina
5p15.3
Resumen de hallazgos
DRD2 Taq
DRD4 exon III
Alelo A1
(Comings et al., 1995)
Alelo 7 hipofuncionante en mujeres
5-HTTLPR
(promotor)
Tirosina
hidroxilasa intron I
MAO-A intron I
MAO-A promotor
No asociacin
(Ibez et al., 1999)
Alelo C4 en varones
Alelo hipofuncionante en varones
(Ibez et al., 2000)
MAO-B intron II
No asociacin
-28-
Estudio de asociacin
68 JP (DSM-IV y CIE-10) (47 varones y 21 mujeres)
Unidad de Ludopata Hospital Ramn y Cajal
Extracelular
Polimorfismo funcional en
exon III
VNTR (unidad de 48 bp)
Alelos con 2-4 repeticiones
afinidad 3-4 veces mayor por
clozapina que alelos con 7
repeticiones
Citoplasma
-29-
Ludpatas
Alelo DRD4
Controles
JP
(2)
21
19
(3)
5
0
(4)
85
82
Controles
(5)
0
5
(6)
1
0
(7)
24
30
F2 = 11.82
p = 0.037
Genotipo
El alelo de 7 repeticiones
estaba presente en el
genotipo de:
0,4
0,286
0,35
0,3
0,25
0,2
0,15
47,6% de mujeres JP
14,3% de mujeres
controles
0,071
0,1
0,05
0
Controles
Jugadoras
Cromosoma 17
VII
XII
XIV
Polimorfismo en
regin promotora
Alelo s (short)
(5HTTLPR)
Alelo l (long)
Insercin/deleccin de 44 bp
Grupo S (s/s or s/l): Capacidad funcional 3 veces menor que genotipo l/l
Menor expresin del gen
Menor recaptacin de serotonina en cultivo de fibroblastos
(Heils et al.,1996 )
-30-
Polimorfismo 5-HTTLPR
Grupos (%)
Alelos (%)
s
Controles n=68)
40.4
59.6
JP (n=68)
45.6
54.4
TOTAL
60.3%
39.7%
0.3
73.5%
26.5%
55.3%
44.7%
0.07
80.8%
19.2%
71.4%
28.6%
0.2
57.1%
42.9%
0.1
POR SEXO
Varones
Controles (47)
JP (47)
37.2
62.8
50.0
50.0
0.008
Mujeres
Controles (21)
47.6
52.4
JP (21)
35.7
64.3
0.3
100%
80%
60%
40%
20%
0%
ss / sl
ll
VARONES
Control (47)
JP (47)
JP ms graves (31)
Cromosoma X
MAO-A
Alelos 3 y 4 en >97%
Xp
11.23 - 11.4
MAO-B
Xq
-31-
55,10%
67,40%
44,90%
50%
32,60%
40%
30%
20%
10%
0%
Alelo 3
Alelo 4
JP (n=68)
Controles (n=68)
F2 = 2.864; df = 1,
p = 0.091
67,70%
68,10%
55,30%
44,70%
31,90%
32,30%
Alelo 3
Alelo 4
VARONES
Controles (47)
JP (47)
JP ms graves (31)
VARONES
Haplotipo 0
Haplotipo 1
Haplotipo 2
5-HTTLPR MAOAuVNTR
5-HTTLPR MAOAuVNTR
5-HTTLPR MAOAuVNTR
VARONES
l/l
4-copias
MUJERES
l/l
4/4; 4/3
s/s
s/l
l/l
4-copias
4-copias
3-copias
s/s
s/l
3-copias
3-copias
s/s
s/l
l/l
4/4; 4/3
4/4; 4/3
3/3
s/s
s/l
3/3
3/3
-32-
57,40%
60%
42,60%
44,10%
50%
40%
22,10%
30%
Controles
JP
20,60%
13,20%
20%
10%
0%
Haplotipo 0
Haplotipo 1
Haplotipo 2
Conclusiones
CONCLUSIONES
CONCLUSIONES
-33-
Conceptos de gentica para clnicos que trabajan en el rea de los trastornos mentales.
Francisco Martnez Castellano
Unidad de Gentica y Diagnstico Prenatal.
Hospital Universitario La Fe. Valencia.
recesiva (entre otras cosas, en realidad), lo habitual es encontrar que las enfermedades
recesivas afectan en una familia tan slo afectan a los miembros de una misma fratra, es
decir, slo se repite entre grupos de hermanos. Muchas veces, aunque no necesariamente,
puede haber consanguinidad y tambin afecta por igual a varones y mujeres. Un tercer
patrn, es la aparicin de un rasgo exclusivamente en varones que estn relacionados
-37-
ligada al X. Afecta tanto a varones como mujeres, pero los varones lo transmiten
exclusivamente a sus hijas, a todas sus hijas. Lo que diferencia este tipo de herencia de
la autosmica dominante es la transmisin paterna: slo a las hijas en la herencia ligada
al X (ya que a los hijos varones les transmite el cromosoma Y) o bien a hijos e hijas con
una probabilidad del 50% en la autosmico-dominante. Cuando vemos una transmisin de
varn a varn, automticamente se excluye una herencia ligada al cromosoma X.
Por desgracia, hay una multitud de factores que, digamos, modican estos patrones
relativamente sencillos, y que pueden inducir a engao. En primer lugar est la
expresividad variable, dado que muchos rasgos hereditarios tienen distintos grados
de expresin, ms leve o ms grave, y que pueden conllevar distintas manifestaciones de
un mismo defecto bsico. Por otra parte, est la penetrancia incompleta, que ocurre
cuando un individuo no tiene el fenotipo esperado por su genotipo. Tambin puede afectar
al patrn de herencia el grado de inactivacin del cromosoma X, la heterogeneidad
gentica, la existencia de fenocopias esto es, la aparicin por un factor ambiental de un
fenotipo habitualmente debido a una causa gentica. Otros factores que pueden ocurrir
son la interaccin gnica o la impronta gnica. La impronta gentica es ni ms ni menos
que el hecho de maniestarse un rasgo o no depende de si lo heredamos del padre o de
la madre. Es decir, la misma secuencia de ADN puede llevar una marca que diferencie si
el origen es paterno o materno, y esa marca puede hacer que un gen se exprese o no
se exprese. Un ejemplo lo tenemos en algunas mutaciones causantes del sndrome de
Beckwith-Wiedeman, que tan slo causan el sndrome cuando se heredan en el cromosoma
materno, pero no cuando se heredan en el cromosoma paterno.
Otros factores pueden ser una herencia dominante ligada al X con letalidad en varones,
por la que una mujer que presenta un rasgo o una enfermedad aparentemente slo lo
transmite a la mitad de sus hijas (ya que los varones con una mutacin as no nalizan el
desarrollo embrionario). Tambin se debe tener en cuenta que cuando el rasgo es frecuente,
o hay consanguinidad, las mutaciones recesivas ligadas al X tambin pueden manifestarse
en mujeres. Y por ltimo, en un caso espordico de una enfermedad herditaria, sin
antecedentes en la familia, cabra pensar en cualquier tipo de herencia, pero en muchas
ocasiones se trata de una mutacin con herencia dominante que ha surgido de novo, por
lo que ser el primer caso en la familia portador de ese defecto.
Existe toda una serie de rasgos que dependen bsicamente de un solo gen. Cmo se
llega a identicar esos genes? Cmo llegamos a averiguar cual es el gen responsable de
esta enfermedad o de este carcter? Bsicamente hay distintas estrategias, y de hecho
en muchas ocasiones lo que se hace es ir combinando distintas aproximaciones en funcin
de cada caso particular. En primer lugar est la clonacin posicional, que se basa en
la informacin disponible de dnde se localiza el gen. Para ello, ha resultado bastante
fructfera la caracterizacin de los puntos de rupturas cromosmicas en pacientes con la
enfermedad en cuestin que muestran en su cariotipo alguna translocacin cromosmica
que presumiblemente han alterado el gen que causa la enfermedad. De este tipo son
tambin los estudios de ligamento gentico. Por otra parte est la estrategia del candidato
funcional, es decir, no se tiene ni idea de dnde se localiza el gen pero se puede suponer
-38-
qu funcin realiza, por la que se deduce el tipo de gen que podra estar implicado en la
enfermedad o rasgo que se est estudiando. Aqu se trata de rastrear mutaciones que se
correlacionen con el fenotipo de inters. Algo muy similar sera la bsqueda o el rastreo de
mutaciones en genes implicados en enfermedades relacionadas, que en no pocas ocasiones
pueden dar lugar a distintas variantes en el fenotipo.
En la diapositiva 8, hay un esquema de una clonacin posicional por translocacin
-39-
-40-
nuestro grupo, que cuando se alcanza un valor signicativo reciben un cdigo internacional
MRX. La conclusin es que adems de los 24 genes distintos que pueden ocasionar la
misma patologa, sabemos que tiene que haber bastantes ms, localizados a lo largo
de todo el cromosoma X. De hecho se estima que en este cromosoma, que slo tiene
unos 900 genes distintos, puede haber hasta 100 genes distintos cuya mutacin puede
causar este tipo de patologa. Esto es heterogeneidad gentica: distintos genes ocasionan
la misma patologa.
En una familia con una localizacin bastante bastante pequea, y solapada con la de
otras tres familias se trat de identicar un nuevo gen implicado en este tipo de trastornos.
Hoy en da se conocen los genes contenidos en cada regin del genoma, lo que facilita los
estudios para tratar de identicar qu genes causan una enfermedad, una vez que sta
se ha localizado en un intervalo del genoma, mediante la bsqueda de mutaciones en los
genes contenidos en dicho intervalo.
Un ejemplo especialmente didctico, es los estudios en una familia con el sndrome
de Lenz, un retraso psicomotor grave con microftalmia y toda una serie de rasgos clnicos
que son los que nos permiten armar que se trata de esta enfermedad, y que presentaban
dos varones primos entre s. Esta enfermedad del sndrome de Lenz es afortunadamente
muy poco prevalente, se han descrito muy pocos casos en todo el mundo en la literatura
cientca y sin embargo, tambin tiene heterogeneidad gentica.
En principio, solo haba descritas dos familias en las que se haban hecho estudios
genticos, y en cada una de ellas se daba una localizacin distinta. Una, cerca del extremo
del brazo largo, otra, en medio del brazo corto. La segunda de ellas de hecho tiene una
mutacin candidata en un gen concreto. Pues bien, en la familia que hemos estudiado,
hemos encontrado que en principio se asocia de forma parcialmente solapada con el
segundo de estos locus. Con un pequeo problema, un to de los pacientes que presenta
exactamente el haplotipo a riesgo. Una posible localizacin de la mutacin en el resto del
cromosoma X se pudo excluir con total signicatividad, por tanto caban tres posibilidades.
1) La existencia de un mosaicismo germinal en la abuela. La primera generacin de hecho
no se puede estudiar, pero por los haplotipos podemos deducir de donde proviene cada
cual, ya que las mujeres comparten entre s el cromosoma X del padre. Se pudo deducir
as que el haplotipo a riesgo proviene de la abuela. 2) Que la mutacin tuviera penetrancia
incompleta. Es decir, que siendo un varn portador de la mutacin, no lo manifestara como
tal sndrome por el motivo que fuera. 3) Que en realidad la enfermedad que estamos
estudiando no est en el cromosoma X, sino que se trataba de otro tipo de herencia. De
hecho, se asumieron las dos primeras hiptesis para continuar los estudios.
Un mosaico es cuando distintas clulas de un mismo individuo presentan distintas
variantes. En este caso tendra que ser necesariamente una mutacin que hubiera surgido
durante el desarrollo embrionario, de tal forma que entre toda la poblacin de clulas
germinales, en la poblacin de ovocitos, algunos portaban la mutacin, pero otros ovocitos
con el mismo cromosoma X, no la portara, lo que justicara que hubiese mujeres
portadoras de la mutacin mientras que un hermano, teniendo el mismo cromosoma X,
fuera sano. Finalmente se demostr que sta era la hiptesis correcta porque despus de
rastrear toda una serie de genes encontramos una mutacin en el gen PQBP1, consistente
en una pequea delecin de dos bases (AG) presente en los pacientes pero no en el to
sano. Este gen se sabe implicado en una serie de formas sindrmicas de retraso mental,
-41-
-42-
-43-
Conceptos bsicos de la
investigacin en gentica de
los trastornos mentales
Francisco Martnez
Unidad de Gentica
Hospital Universitario La Fe
Conceptos bsicos
Gen: Unidad hereditaria que controla cada carcter en los seres
vivos.
Alelo: Cada una de las variantes que puede tener un gen
Locus: El lugar que ocupa un gen o una secuencia en el genoma.
Ej: marcadores polimrficos (DXS1214, D17S1536)
Homocigoto: Individuo con el mismo tipo de alelo en cada
cromosoma homlogo (AA)
Heterocigoto: Individuo con distinto tipo de alelo en cada
cromosoma homlogo (Aa)
Dominancia: Un carcter es dominante si se manifiesta en el
heterocigoto
Recesividad: Es recesivo si no se manifiesta en el heterocigoto
Codominancia: El heterocigoto tiene un fenotipo intermedio entre
los homocigotos. Grupo ABO: A=B>0
AD
XD
XR
Expresin variable
Anticipacin
Penetrancia incompleta
Lyonizacin
Heterogeneidad gnica
Fenocopias
Interaccin gnica/Epistasia
Impronta gnica
-44-
Cromosmicas
15%
10-13%
X frgil
2-2,5% varones
RMLX sindrmico
5-7%
RMLX inespecfico
5-10%
Monognicas Autosmicas
5-8%(?)
Sndromes de microdelecin
3-5%
S. Prader-Willi
15q11-q13
Cri du Chat
5p15
S. Angelman
15q11-q13
WARG
11p13
CATCH 22
22q11
Miller-Diecker
17p13
Williams
7q11
Smith-Magenis
17p11
Wolf-Hirshhorn
4p16
Rubistein-Taybi
16p13
-45-
Estudios de ligamiento
Empleo de secuencias microsatlite como marcadores genticos
de elevada informatividad, para analizar la segregacin de alelos en
una familia
Alelo 1 = (CA) 16 = 120 pb
CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA
GT GT GT GT GT GT GT GT GT GT GT GT GT GT GT GT
CA CA CA CACA CA CA CA CA CA
GT GT GT GTGT GT GT GT GT GT
10
III
11
10
14
12
22
25
IV
cM
00
06
16
19
27
39
50
56
75
D X S1060
D X S8051
D X S987
D X S7592
D X S1226
D X S1214
D X S1068
D X S993
D X S991
85
92
98
D X S986
D X S990
D X S1106
3 1
1 3
1
1
3
1 1
3 1
1 3
1
1
3
1
3
1
1 1
3 1
1 3
1 2
3 2
1 2
2
2
2
1
3
1
110
112
D X S8055
D X S1220
2 2
2 3
2
2
2 2
2 3
2
3
2
2
2 2
2 3
2 1
2 1
1
1
2
2
116
D X S6805
1 1
1 1
1 1
1 2
122
122
126
133
D X S8067
D X S1001
D X S425
D X S1047
2 1
1 3
2 3
1 1
2
1
2
1
2
1
2
3
1
3
3
1
1
3
3
1
1
2
1
1
2
1
2
3
2
1
2
1
3
2
2
2
2
1
2
1
2
1
2
3
144
145
D X S1205
D X S1227
3 3
1 1
3
1
1 3
3 1
3
1
1
3
1 3
3 1
3 2
1 2
3
1
3
1
159
167
168
177
179
D X S8043
FM R 1
D X S8091
D X S52
D X S1073
2
3
1
4
1
2
3
1
4
1
2
3
1
4
2
1
3
2
3
1
1
1
1
2
1
1
1
1
2
1
1
3
2
3
1
1
3
2
3
1
1
3
2
3
1
1
3
2
1
1
4
2
1
1
2
4
1
2 3
2 3
3 3
1 1
1
3
2
3
1
1
1
1
2
4
1
3
3
3
2
2
3
2
2
2
1
1
2
2
1
1
2
4
1
3
3
3
2
2
3
2
2
2
1
1
2
1
3
2
1
1
4
2
2
3
1
3
2
1
1
4
2
2
3
1
3
2
3
1
2
1
1
2
4
1
3
3
3
1
3
3
1
1
3
2
3
1
1
3
2
1
1
4
3
3
3
2
2
2
3
3
3
3
3
1
2
2
2
3
3
3
3
3
1
1
1
1
2
4
1
2
2
3
2
2
2
1
3
-46-
MRX82 : conclusiones
MRX82 se localiza en Xq24-q25
El intervalo abarca 12,4 Mb
(~74 genes distintos)
No contiene ningn gen RMLX
conocido
Existe un gen candidato
(GRIA3) interrumpido en una
translocacin (X;12) asociada a
RM y trastorno bipolar
22.1
IL1RAPL (34)
21
13
2
NLGN4
STK9
RSK2 (19)
24
37
59
12
21.3
21.2
21.1
OPHN1 (60)
DLG3
73
10 11
15
56
18
14
20
22 26
74 78
39
TM4SF2 (58)
ZNF41
ZNF81 (45)
FTJS1 (9)
PQBP-1 (55)
JARID1C
FGD1
49
22.2
44 50 51
11.4
11.3
11.23
11.22
11.21
11.1
11
12
31
7 8
65
81
17
52
69
77
13
40
XNP
21.1
21.2
21.3
FACL4 (63, 68)
PAK3 (30, 47)
22.1
22.2
22.3
23
AGTR2
24
35
23
27
53
42
57
80
70
71 75
82
25
D PIX (46)
MECP2 (16,79)
FMR2 (FRAXE)
GDI1 (41, 48)
SLC6A8
26
27
3
25
28
64
72
28
-47-
Octubre 2005
Localizaciones RMLX-inespecfico
MRX82
DXS1060-DXS207
DXS6805-DXS1047
28
MECP2
FMR2
GDI1
SLC6A8
26
D PIX
MRX24
27
25
FACL4
PAK3
AGTR2
24
22.1
22.2
22.3
23
21.3
21.1
21.2
XNP
OPHN1
13
FGD1
21.3
21.2
21.1
TM4SF2
IL1RAPL
22.1
11.4
11.3
11.23
11.22
11.21
11.1
11
12
RSK2
ARX
22.3
22.2
MRX73
DXS8019-DXS6807
fELX17
DXS86-DXS105
pter-DXS365
fELX18
DXS143-DXS989
DXS990-DXS1001
fELX20
DXS1224-DXS274
fELX52
DXS1224-DXS274
II
Retraso psicomotor grave
Microftalmia
III
Microcefalia
Talla baja
Coloboma de coroides/retina
Diplegia espstica
Malformaciones esquelticas: camptodactilia, aracnodactilia
Malformaciones renales: rin hipoplsico y mal posicionado
Dismorfias craniofaciales: orejas grandes evertidas, raz nasal
elevada, micrognatia, filtrum largo.
1
MAA1
-48-
II
III
cM
3.
Secuencia normal
Mutacin 3898_3899delAG
(III.1 y III.8)
Heterozigotas
(II.2 y II.7)
II
III
-49-
W D
MUTACIN
A
(Euro-consorcio RMLX)
(Euro-consorcio RMLX)
(Gronskov et al, 2004)
-50-
RM de causa multifactorial:
Factores de susceptibilidad en el cromosoma X?
Multifactoriales
(culturofamiliar)
Monognicas
Reordenamientos cromosmicos
Tcnicas de deteccin
Citogentica convencional con
bandas G: Lmite de resolucin 5 Mb.
CGH-array
Cohibridacin de la
muestra problema
(marcada con Cy3)
y muestra normal
(Cy5)
Arrays de genotipado
-51-
Epigentica
Importancia de la estructura de la
cromatina sobre la expresin
gnica y su regulacin
Impronta gnica
Expresin diferencial de determinados genes
segn se localicen en el cromosoma de origen
materno y paterno.
Slo se ha descrito en unas pocas regiones:
Gen
SNURF-SNPN
UBE3A
PEG1/MEST
LIT1
IGF2
Alelo reprimido
Enfermedad
materno
S. Prader-Willi
paterno
S. Angelman
materno
S. Silver-Rusell
paterno
S. Beckwith-Wiedemann
materno
S. Beckwith-Wiedemann
WT1
paterno
Nefroblastoma
-52-
-53-
-55-
segn distintos autores, con lo cual es importante estudiar este componente gentico. Si la
variabilidad fuera prxima a cero, no tendra sentido analizar este tipo de factores.
Riesgo relativo
Heredabilidad
Trastorno bipolar
7-10
0,60-0,70
Depresin mayor
2-3
0,28-0,40
Pnico
3-8
0,50-0,60
50-100
0,90
Autismo
Esquizofrenia
8-10
0,80-0,84
Abuso de drogas
4-8
0,30-0,50
Trastorno de ansiedad
4-6
0,30-0,40
-56-
realmente una variante comn, con una frecuencia en las distintas poblaciones del 1020%, lo que demuestra que, al menos en determinados casos, la hiptesis de enfermedad
comn-variante comn es correcta.
Otro aspecto importante en los estudios de asociacin es el clculo de la Odds ratio
(OR), el riesgo conferido por la variante, que se calcula como:
siendo a el nmero de casos que presentan la variante, b el nmero de controles que
presentan la variante, c el nmero de casos que no presentan la variante, y d el nmero
OR=
a
c
b
d
ad
bc
primeros alelos que se encontraron por este motivo, pues causa un riesgo relativo bastante
grande. Generalmente se encuentran riesgos menores de 2 y su interpretacin sera la
siguiente: por ejemplo, la prevalencia de la esquizofrenia en poblacin en general es del
1%, si hablamos de un alelo de susceptibilidad con un OR de 1,5, tendramos que los
individuos que presentan ese alelo tienen una posibilidad del 50% mayor, o sea tendran una
posibilidad del 1,5% de padecer esquizofrenia. Simplemente incrementara un poco el riesgo.
Diseo de estudios de asociacin: seleccin de genes candidato y de marcadores
moleculares
El diseo de los estudios de asociacin es algo que ha venido cambiando
substancialmente, gracias al proyecto Genoma Humano y proyectos relacionados.
Clsicamente, lo que se analizaba era un polimorsmo candidato, algn cambio conocido
-57-
que pudiera tener repercusin en algn gen candidato (como algn cambio aminoacdico
o alguna variante de longitud en la regin promotora que pudiera alterar los niveles de
expresin), y se buscaban diferencias de las frecuencias de estas variantes en casos y
controles. Actualmente, la hiptesis de partida es ms ambiciosa, no est limitada por el
nmero de polimorsmos conocido, de forma que se analizan genes candidato basndose
en criterios de funcionalidad, tales como datos de expresin, modelos siopatolgicos de la
enfermedad, interacciones proteicas con otras protenas relacionadas con la enfermedad,
rutas metablicas, etc. stos seran genes candidato funcionales. En vez de utilizar un
nico polimorsmo, se suelen utilizar mltiples polimorsmos a lo largo del gen.
La otra opcin es el anlisis de genes candidato posicionales a partir de anlisis de
ligamiento en familias. Como se vea en la ponencia anterior, estos anlisis detectan una
regin grande, que puede contener varias decenas de genes, de forma que los estudios
de asociacin en poblaciones nos permiten renar estas regiones, empleando mltiples
polimorsmos a lo largo de la regin, para llegar a identicar el gen causal. A medida que
la hiptesis inicial para escoger genes candidato va siendo menos estricta, se tiende hacia
los anlisis de todo el genoma, que ya son abordables tecnolgicamente, gracias a los
conocimientos de la estructura del genoma y de las tecnologas de genotipacin. En este
caso, no se establece ninguna hiptesis a priori sobre qu genes pueden ser candidatos,
sino que se analiza todo el genoma buscando algn gen asociado.
Como veamos tambin en la ponencia anterior, en los anlisis de ligamiento los
marcadores clsicos que se utilizan son microsatlites, que simplemente son repeticiones
de secuencias cortas. Pueden ser marcadores muy polimrcos, muy variables, existiendo
mltiples alelos que varan en el nmero de repeticiones. Sin embargo, los estudios de
asociacin se centran principalmente en polimorsmos de un nico nucletido (SNPs,
del ingls single nucleotide polymorphism). Generalmente, slo existen dos alelos. Sin
embargo, la principal ventaja que tienen los SNPs frente a los microsatlites, y por eso
se utilizan en los estudios de asociacin, es que son muy abundantes. Se calcula que hay
un SNP cada 300 pares de bases de forma que es posible delimitar muy bien la regin
de estudio, la regin que est asociada. Por otro lado, tienen la ventaja de que son muy
fcilmente analizables a gran escala con tcnicas robotizadas.
La abundancia de SNPs ya descritos en el genoma humano es enorme. Hay ms de
diez millones de SNPs en la base de datos de SNPs del NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.
gov/SNP/), de los cuales cinco millones estn validados, es decir, se excluye que se trate
de errores de secuenciacin o de posibles SNPs slo identicados mediante mtodos
computacionales. Este nmero es suciente para realizar estudios de asociacin a lo largo
de todo el genoma.
Adems de estos marcadores, es interesante el uso de haplotipos. Los datos que
obtenemos cuando se realiza genotipacin de SNPs son genotipos, datos de las dos posiciones
que puede tener un individuo en ese SNP, pero no se sabe su ordenacin en los cromosomas,
su haplotipo. Los haplotipos en principio pueden dar informacin adicional con respecto a
la utilizacin de SNPs en estudios de asociacin, porque son ms polimrcos, pueden
existir ms variantes allicas. Por tanto, es interesante tambin realizar anlisis empleando
haplotipos como marcadores, aunque tambin hay que tener claro que los haplotipos se
ineren a partir de datos genotpicos de la poblacin mediante una serie de algoritmos
que, aunque son bastante ables, pueden representar un posible factor de ruido a tener
en cuenta. Se puede introducir algn pequeo sesgo, algn pequeo error en la estima,
-58-
-59-
ejemplo, un bloque haplotpico es una regin del genoma en que el valor de D entre SNPs
consecutivos es mayor que 0,7), o la regla de los cuatro gametos (por ejemplo, un bloque
haplotpico es una regin del genoma en que slo aparecen 3 de los 4 posibles haplotipos
entre dos SNPs consecutivos).
En los bloques haplotpicos, la informacin obtenida genotipando diferentes SNPs es
muy redundante, de forma que con genotipar unos pocos SNPs de entre los que forman
parte del bloque es posible distinguir qu haplotipos comunes de la regin son portados
por cada individuo. La seleccin de los SNPs ms apropiados para este n, llamados
taggerSNPs o tagSNPs, permiten, por tanto, ahorrar mucho esfuerzo en la genotipacin
de las muestras. As, en el ejemplo de la Figura 1, se presenta un bloque haplotpico,
constituido por 10 SNPs, identicado por el programa informtico Haploview (Barret et al,
2005, Bioinformatics 21:263-265) en el gen DISC1 a partir de los datos de muestras de
origen europeo generados por el proyecto HapMap Internacional (descrito a continuacin).
De los mltiples haplotipos que podran existir al combinar los 10 SNPs , slo hay 3 a
frecuencias superiores al 1%. La genotipacin de dos de los 10 SNPs (indicados con
un tringulo en la parte superior) permite distinguir los distintos haplotipos del bloque,
ahorrando la genotipacin de 8 SNPs.
Figura 1. Ejemplo de bloque haplotpico en el gen DISC1
Cada columna representa la variante del SNP presente en cada haplotipo
(representados en cada la). Los valores numricos indican la frecuencia
de cada haplotipo. Los tringulos identican los tagSNPs.
C G G A G G AT C C . 5 7 5
TA A G C A G AT T . 3 0 8
TA A A C G AT C C . 0 8 3
-60-
los generados por HapMap, se genotipara en nuestras muestras slo un SNP de cada
subconjunto. El algoritmo Tagger, incluido dentro del programa informtico Haploview,
permite realizar esta seleccin fcilmente a partir de los datos de HapMap.
Problemas metodolgicos de los estudios de asociacin
Los estudios de asociacin presentan un serio problema: una parte importante de las
supuestas asociaciones iniciales no son reproducidas en estudios posteriores encaminados
a conrmar la asociacin en muestras independientes. As, una revisin de supuestas
asociaciones revela que de 166 estudios, 97 fueron observados de nuevo, aunque slo 6
fueron reproducidos en el 75% de los estudios (Hirschhorn et al, 2002, Genet Med 4:45-61).
Sin embargo, debemos tener presente que la variabilidad en la signicacin estadstica de
los estudios de replicacin no es controvertida, sino que es un hecho esperado del contraste
de hiptesis en muestras nitas. Eso s, gran parte de las causas de la irreproducibilidad se
debe a errores de diseo, por lo que pueden ser subsanables. As, los errores de tipo I (falsos
positivos), pueden deberse bsicamente al azar o a la estraticacin (o subestructura)
poblacional. El efecto del azar se ve agravado por el problema del sesgo en la publicacin,
al existir una tendencia a publicar resultados positivos; y por la realizacin de mltiples
comparaciones, muchas veces con subgrupos ad-hoc al no encontrar asociacin en la
muestra total. La estraticacin poblacional (existencia de subgrupos poblacionales de
distinta procedencia dentro de nuestra muestra) puede generar falsos positivos cuando
existe diferente prevalencia del trastorno de estudio entre las poblaciones y diferentes
frecuencias allicas entre las poblaciones. Por tanto, debe intentarse un emparejamiento
de casos y controles lo ms perfecto posible en relacin con el origen geogrco. Otras
soluciones son la deteccin y correccin de la estraticacin (generalmente mediante el
muestreo de marcadores neutros), as como el uso de diseos alternativos al caso-control,
como pruebas basadas en familias (como la prueba de desequilibrio de la transmisin
o TDT, de sus siglas en ingls). Finalmente, errores de genotipacin sesgados tambin
podran generar falsas asociaciones.
Los errores de tipo II (falsos negativos) pueden estar generados, bsicamente, por
la baja potencia de la prueba estadstica o una clasicacin incorrecta del fenotipo. La
baja potencia estadstica se debe al uso de un tamao muestral insuciente, por lo que es
interesante realizar un clculo de la potencia de la prueba estadstica a priori, as como tener
presente que el efecto estimado del alelo asociado en el estudio inicial es, generalmente una
sobreestima del efecto real. La clasicacin incorrecta del fenotipo puede darse debido a la
existencia de heterogeneidad del carcter, o de fenocopias (fenotipos sin base gentica).
Por tanto, es importante recurrir a un diagnstico estandarizado. Tambin se ha propuesto
el uso de fenotipos intermedios (o endofenotipos), que seran caracteres asociados con la
enfermedad y presentes en familiares no afectados a mayor frecuencia que en la poblacin
general, como, por ejemplo, dcits cognitivos en esquizofrenia. Adems, es de esperar que
este tipo de caracteres estn condicionados por un nmero menor de factores genticos y
ambientales, por lo que su identicacin ser ms fcil.
Finalmente, la ausencia de reproducibilidad de una asociacin puede ser debida a
diferencias reales entre poblaciones, tales como heterogeneidad allica o gnica (existencia
de distintos alelos/genes de susceptibilidad en las distintas poblaciones), diferencias en
riesgo gentico (debido a interaccin con factores genticos y/o ambientales especcos de
determinadas poblaciones), o diferencias en el patrn de DL (en el caso de mapeo por DL).
Estas diferencias son debidas a la historia evolutiva de las distintas poblaciones (seleccin,
-61-
deriva, migracin...). Debemos tener presente que la especie humana ha sufrido grandes
cambios ambientales en un periodo evolutivo reciente (expansin desde su origen en
frica, invencin de la agricultura, vida sedentaria...). La seleccin adaptativa es el factor
que ms drsticamente puede generar diferencias reales entre poblaciones en un corto
periodo de tiempo.
Como conclusin, podemos armar que muchos de los problemas asociados a la
ausencia de replicacin de asociaciones son debidos a problemas de diseo. Para que una
asociacin sea able debera: replicarse en poblaciones independientes, basarse en tamaos
muestrales grandes, presentar valores de signicacin bajos, presentar asociaciones que
tengan sentido biolgicamente, y detectar alelos funcionalmente distintos (mediante
ensayos bioqumicos, animales transgnicos...).
El Centro Nacional de Genotipado
Es interesante destacar que la comunidad cientca espaola dispone desde nales de
2003 del Centro Nacional de Genotipado (CeGen, www.cegen.org), una de las plataformas
tecnolgicas auspiciadas por la Fundacin Genoma Espaa, cuyo objetivo es el de
proporcionar los elementos de conocimiento y la infraestructura necesaria para realizar
proyectos de genotipado de SNPs a gran escala a grupos de investigacin en institutos,
universidades, hospitales y empresas con la nalidad de conseguir competitividad a nivel
internacional. El CeGen est organizado siguiendo una estructura nodal, con tres sedes
geogrcamente separadas (nodos de Barcelona, Centre de Regulaci Genmica; Madrid,
Centro Nacional de Investigaciones Oncolgicas; y Santiago de Compostela, Universidade
de Santiago de Compostela) y una Estructura Central de coordinacin, dirigida por el Dr.
Jaume Bertranpetit, y con sede en Barcelona, en la Universitat Pompeu Fabra. El nodo de
Santiago de Compostela, dirigido por el Dr. ngel Carracedo, cuenta con las plataformas
MassArray de Sequenom y SNPlex de Applied Biosystems, lo que le da una gran exibilidad
en cuanto al volumen de genotipacin de los distintos proyectos.
Como reexin nal, la bsqueda de los factores genticos de susceptibilidad a
enfermedades comunes es el objetivo de una disciplina nueva y en auge, la Medicina
Genmica. La identicacin de estos factores conducir a incrementar el conocimiento de los
mecanismos de enfermedad, permitiendo la identicacin de nuevas dianas farmacolgicas
(farmacogenmica) y una medicina personalizada, tanto a nivel de diagnstico como de
tratamiento (farmacogentica).
-62-
Dr Javier Costas
Centro Nacional de Genotipado
Grupo de Medicina Xenmica
Universidade de Santiago de Compostela
Penetrancia
incompleta
Factores
genticos de
riesgo
Factores
ambientales
de riesgo
Factores
genticos de
proteccin
Factores
ambientales
de proteccin
Base gentica?
9 Estudios de agregacin en familias
9 Estudios de concordancia en gemelos
(monozigticos vs dizogticos)
9 Estudios de adopcin
oHeredabilidad proporcin de la varianza atribuible a
factores genticos
-63-
Heredabilidad
Transtorno bipolar
Patologa
7-10
060-070
Depresin mayor
2-3
028-040
Pnico
3-8
050-060
Autismo
50-100
090
Esquizofrenia
8-10
080-084
Abuso de drogas
4-8
030-050
Transtorno de ansiedad
4-6
030-040
Recombinacin
Estudios de
asociacin
en poblaciones
Muestreo simple
Frecuencia en la poblacin
Estudios de asociacin
Hiptesis enfermedad comn/variante comn
El riesgo gentico a padecer enfermedades comunes podra ser
generalmente debido a alelos de predisposicin que segregasen a
frecuencias relativamente elevadas en la poblacin (Lander,
Science 1996)
Hiptesis alternativa: enfermedad comn/variante rara
9 Ej: ApoE4 y Alzheimer, frec |10-20%
-64-
Diseo caso-control
9Muestreo de dos grupos de individuos: individuos afectos no emparentados y
controles sanos no emparentados
9Prueba estadstica estndar (F2 de Pearson, regresin logstica) para contratar
la hiptesis nula de igual frecuencia de alelos (o genotipos) en casos y controles
A1
A2
a
c
b
d
OR
ad
bc
IC 95% = exp(lnORr196SE)
1 1 1 1 2
SE
a b c d
Genes candidato
Funcionales
9Cambio
aminoacdico
Anlisis de todo el
genoma
-Estudios de expresin
-Modelo fisiopatolgico
-Interacciones proteicas
-Rutas metablicas
9VNTR en
promotor
9200.000-1x106
marcadores (SNPs)
Posicionales
Anlisis de ligamiento
Estudios de asociacin
Marcadores moleculares
Estudios de asociacin
Anlisis de ligamiento
9Muy variables
dbSNP
SNPs H. sapiens
12000000
10000000
8000000
6000000
Validados
4000000
2000000
05
05
05
/1
0
/2
0
/0 02
1/
20
/0 03
4/
05 200
3
/0
7/
05 200
3
/1
0/
05 200
3
/0
1/
05 200
4
/0
4/
05 200
4
/0
7/
05 200
4
/1
0/
05 200
4
/0
1/
05 200
5
/0
4/
05 200
5
/0
7/
20
05
-65-
Haplotipos
Genotipo AA(C/T)ACT...CGC(C/T)CAA...CAC(A/T)TG...
Cromosoma 1 AACACT...CGCTCAA...CACTTG...
Cromosoma 2 AATACT...CGCCCAA...CACATG...
Haplotipo 1 CTT
Haplotipo 2 TCA
9Informacin adicional, posibilidad de encontran asociacin
aunque no se detecte con SNPs individuales
9Problema: inferencia de haplotipos a partir de datos genotpicos
(software: PHASE, Haploview, Arlequin...)
Seleccin de SNPs
Mtodo directo: SNPs funcionales (causales)
T
-66-
Seleccin de SNPs
Mtodo directo: SNPs funcionales (causales)
T
LD
A
Desequilibrio de ligamiento: D vs r2
Frecuencias haplotpicas
r2
0,21
B=0,70
0,09
0,18
C=0,90
0,03
0,05
Frec
A=0,30
T=0,30
Origen del LD
Flint-Garcia SA, Thornsberry JM, Buckler ES 4th. Annu Rev Plant Biol. 2003;54:357-74.
9Ausencia de recombinacin
9Misma historia mutacional
-67-
Origen del LD
Flint-Garcia SA, Thornsberry JM, Buckler ES 4th. Annu Rev Plant Biol. 2003;54:357-74.
9Ausencia de recombinacin
9Mutacin en diferentes linajes
Mtodo indirecto
Mtodo directo
Bloques haplotpicos
9 Regiones del genoma humano con baja diversidad
haplotpica y alto LD
9 Definicin:
Diversidad haplotpica
LD
Prueba de los 4 gametos ( recombinacin)
ACCT
GCCT
ACCT
GCCT
GCCC
-68-
Bloques haplotpicos: LD
Software: Haploview
Bloques haplotpicos
Haplotipos > 1%
Bloque: 10 SNPs
9Si hay recombinacin: 2N = 1024 haplotipos
9Sin recombinacin: N +1 = 11 haplotipos
Software: Haploview
-69-
1 tagSNP/LD bin
Causas de la irreproducibilidad
Errores de tipo I (falsos positivos)
Azar
9 Sesgo en la publicacin
9 Mltiples comparaciones, subgrupos ad-hoc
Estratificacin poblacional
9 Diferente prevalencia entre poblaciones y diferentes
frecuencias allicas entre poblaciones
9 Emparejamiento de casos y controles, pruebas basadas en
familias (TDT), deteccin y correccin de la estratificacin
(muestreo de marcadores neutros)
Errores de genotipacin
-70-
Causas de la irreproducibilidad
Errores de tipo I (falsos positivos)
Azar
9 Sesgo en la publicacin
9 Mltiples comparaciones, subgrupos ad-hoc
Estratificacin poblacional
9Diferente prevalencia entre
poblaciones
9Diferentes frecuencias allicas
entre poblaciones
Causas de la irreproducibilidad
Errores de tipo I (falsos positivos)
Azar
9 Sesgo en la publicacin
9 Mltiples comparaciones, subgrupos ad-hoc
Estratificacin poblacional
9 Diferente prevalencia entre poblaciones y diferentes
frecuencias allicas entre poblaciones
9 Emparejamiento de casos y controles, pruebas basadas en
familias (TDT), deteccin y correccin de la estratificacin
(muestreo de marcadores neutros)
Errores de genotipacin
Causas de la irreproducibilidad
Errores de tipo II (falsos negativos)
Baja potencia de la prueba estadstica
9 Tamao muestral insuficiente o clculo de la potencia de la
prueba estadstica a priori
9 Non tener en cuenta que el efecto estimado del alelo en el
estudio inicial es, generalmente una sobreestima del efecto real
Causas de la irreproducibilidad
Diferencias reales entre poblaciones
Heterogeneidad allica o gnica
Diferencias en riesgo gentico
Diferencias en el patrn de LD
9 Debidas a la historia evolutiva de las distintas
poblaciones (seleccin, deriva, migracin...)
9 La seleccin adaptativa es el factor que ms
drsticamente puede generar diferencias reales entre
poblaciones en un corto periodo de tiempo
9 Grandes cambios ambientales en un periodo evolutivo
reciente
-71-
Causas de la irreproducibilidad
Conclusiones
9 Muchos de los problemas asociados a la no replicacin de
asociaciones son debidos a problemas de diseo
9 Para que una asociacin sea fiable debera:
Genotipacin de SNPs
Tecnologa MassArray de Sequenom
Medicina genmica
Incrementar conocimiento de los
mecanismos de la enfermedad compleja
Medicina personalizada
Diagnstico
Tratamiento
-72-
-75-
-76-
Otro paso clave es comprobar que la calidad del material obtenido es ptima para este
tipo de experimentos, mediante la inspeccin con tcnicas de electrofresis en geles de
agarosa.
Como ya he explicado anteriormente, una vez que el RNA se ha extrado se siguen
los mtodos de sntesis, marcaje e hibridacin en los chips utilizando las estaciones de
hibridacin y lavado, y mediante el escner, se obtiene los datos de expresin para ser
analizados con las herramientas bioinformticas.
A partir de los chips se obtiene una gran cantidad de datos de expresin que ha de
estudiarse con el objetivo de obtener conclusiones biolgicas. Como ya he comentado
anteriormente, es muy importante la utilizacin de herramientas bioinformticas porque
la cantidad de datos que se obtienen es enorme. Como ejemplo, los resultados que se
pueden obtener en un estudio de comparacin entre sujetos alcohlicos y no alcohlicos.
Podemos obtener los perles de expresin sujetos alcohlicos y no-alcohlicos. Tambin
nos permitira en algunos casos poder discernir si una muestra viene de un grupo de
sujetos alcohlicos o de un grupo de sujetos no-alcohlicos.
Otro ejemplo de un anlisis de expresin sera la obtencin de un listado de genes
implicados en los procesos que estamos estudiando. La obtencin de informacin
biolgica a partir de cientos de genes se hace prcticamente imposible. Las herramientas
bioinformticas tambin nos permiten a partir de estos resultados realizar estudios de
grupos funcionales que nos faciliten el trabajo y la obtencin de conclusiones biolgicas,
mediante la deteccin del enriquecimiento signicativo de alguno de estos grupos. Como
podemos ver aqu en este grco en el que hemos agrupado los genes en grupos como por
ejemplo genes de unin a ADN, o genes de metabolismo.
De cualquier manera, no es oro todo lo que reluce y como se ve reejado en este
artculo los experimentos con microarrays tienen tambin problemas como pueden ser la
heterogeneidad de las muestras, un problema importantsimo en estudios en humano, o la
integridad del RNA mensajero. Tambin son importantes los falsos positivos que ya se han
comentado tambin esta maana debidos a la cantidad de comparaciones que se hacen,
entre 30.000 y 50.000. Pero ste no es el caso de todos los experimentos que se hacen
con microarrays porque, por ejemplo, en este estudio comparativo en el que se comparan
clulas obtenidas de melanomas vemos como, si las muestras estn bien tipicadas,
generalmente la variabilidad de las muestras no es tan grande como la variabilidad que
podamos encontrar en estudios, por ejemplo, del sistema nervioso central en pacientes
diagnosticados con Alzheimer. Adems como se puede apreciar, la magnitud del cambio en
expresin es mucho ms notable en muestras de cncer. Hoy por hoy, los avances en las
tecnologas de experimentacin nos estn permitiendo reducir esa variabilidad como es el
caso de la extraccin de clulas nicas a partir de tcnicas de microdiseccin por lser, en
la que podemos obtener clulas individuales y obtener as un grupo homogneo de clulas
en las que estudiar nuestro modelo patolgico; hoy por hoy se pueden hacer chips a partir
de una nica clula.
El siguiente paso que se indica en la revisin de Bunney y colaboradores sera una
vez obtenidos los resultados de los arrays comprobar si existe una co-expresin entre
los genes que nos indique que esos genes verdaderamente estn funcionando a la vez
y creando una situacin patolgica. Tambin, en algunos casos, nos permitira inferir la
funcin de algunos genes desconocidos, mediante un proceso que se ha denominado
culpabilidad por asociacin. Les muestro aqu otro ejemplo bastante completo en el que
-77-
exploratoria, y por tanto todos los resultados han de ser validados. Una de las tcnicas ms
utilizadas para la validacin de resultados a nivel de RNA sera la PCR cuantitativa. Y aqu
les muestro unos resultados del grupo del Profesor Meana en cerebro humano post-morten
en el que aun apreciando tambin esa variabilidad que les he comentado entre distintos
pacientes, se sigue viendo una tendencia general de estos genes a estar diferencialmente
expresados entre el grupo experimental y el control.
Para presentarles algunos resultados de los estudios que existen en la actualidad en
cerebro humano, podemos ver que para el abuso de cocana, por ejemplo, se han reconocido
protenas especcas de Glia y de formacin de mielina como pueda ser la protena
bsica de mielina, y en estudios de abuso de alcohol, aparte del ejemplo que ya les he
mostrado anteriormente, se han encontrado por ejemplo genes codicadores de protenas
mitocondriales como citocromos, enzimas implicadas en metabolismos energticos y genes
implicados en formacin de mielina, como la lipoprotena D.
Qu ocurre con las dianas clsicas tan estudiadas mediante tcnicas neuroqumicas
clsicas, como puedan ser receptores y transportadores de monaminas , receptores opioides,
acetilcolina? Pues que muchos experimentos no pueden reproducir estos resultados y
en muchos casos estos genes se nos escapan. Una de las posibles razones es que sean
falsos negativos, debido a que el nmero de muestras que estamos analizando no sea los
sucientemente grande, y por tanto estamos perdiendo informacin. Puede ser tambin
pque la expresin a nivel de Sistema Nervioso Central es tan baja en algunos casos que
estamos llegando a los lmites de deteccin de la tecnologa.
Posteriormente, tenemos que comprobar que efectivamente un cambio en la expresin
de un gen supone un cambio funcional a nivel protico. Otro de los anlisis a nivel
genmico, y que ya ha sido comentado por algunos ponentes a lo largo de esta maana, es
el estudio de sitios calientes en cromosomas y SNPs, que indiquen una vulnerabilidad a la
enfermedad, como es el caso en el que encuentran varios SNP que indicaran vulnerabilidad
a la adiccin.
Como ya he comentado, las validaciones son un paso muy importante en estos
experimentos y una validacin a nivel de protena se realizara mediante tcnicas de
Western blot o tcnicas de immunohistoqumica que conrmara que nuestra diferencia
en expresin gnica efectivamente supone un cambio en la expresin de protena y su
actividad funcional. Como les muestro en este ejemplo de abuso de cocana, un ejemplo
muy completo, a partir de los resultados con microarrays hacen una validacin con tcnicas
de PCR y vemos que existe correlacin en algunos resultados y no en otros, y posteriormente
hacen una validacin de protenas utilizando tcnicas de immunohistoqumica.
En muchas ocasiones es muy difcil obtener muestras humanas para el estudio de estas
patologas, y entonces los modelos animales se hacen muy importantes. En el estudio de
abuso de sustancias, los estudios en modelos animales de las adicciones son ms numerosos
que en cerebro humano post-mortem, y los resultados nos pueden dar una idea de qu es
lo que sucede en el cerebro humano. Existen varios tipos de modelos animales, modelos
que a su vez permiten validar los resultados obtenidos en cerebro humano. As les muestro
-78-
-79-
Aportaciones de la
genmica y la protemica
al estudio de los
trastornos adictivos
Madrid, 2006
Genoma
Secuencia
SNP
Transcriptoma
Genmica funcional
Proteoma
Protemica
Substance
dependence
&
Organ Damage
Substance
&
Environment
-80-
1,28 cm
11 Pm
HIBRIDACIN: ES LA CLAVE
Luz
Lser
PROTOCOLO GENECHIP
AAAA
Poli(A)+
Total RNA
Scanning
cRNA
cDNA
Hibridacin
cRNA Fragmentado
Etapas en el proceso de
bsqueda de genes
candidatos de
vulnerabilidad para
enfermedades psiquitricas
mediante la utilizacin de la
tecnologa DNA-chip
(Bunney et al, Am J Psychiatry 2003; 160: 657-666)
-81-
28S RNA
18S RNA
6.- Preparacin
de arrays y
muestras
7.- Incubacin;
obtencin de
datos
cRNA
-82-
-83-
Sa
m
ple
03
Sa
m
ple
04
Sa
m
ple
06
Sa
m
ple
39
Sa
m
ple
41
Sa
m
ple
43
Sa
m
ple
46
Sa
m
ple
51
Sa
m
ple
53
Sa
m
ple
59
Sa
m
ple
62
Sa
m
ple
12
Sa
m
ple
09
Sa
m
ple
32
Sa
m
ple
34
Sa
m
ple
36
Sa
m
ple
45
Sa
m
ple
49
Sa
m
ple
56
Sa
m
ple
54
0.1
gDE2-2
10
59
53
ple
m
ple
m
Sa
Sa
43
51
46
ple
ple
m
ple
m
Sa
Sa
Sa
41
39
06
ple
m
ple
m
ple
Sa
Sa
03
04
m
ple
m
ple
Sa
Sa
-84-
Sa
49
54
36
56
ple
m
ple
m
Sa
Sa
ple
m
34
45
m
ple
m
ple
Sa
Sa
Sa
09
32
ple
ple
m
12
ple
m
m
ple
Sa
Sa
Sa
Sa
Sa
m
ple
62
0.1
-85-
-86-
in vitro
in vivo
estudios de poblacin
Genoma
Secuencia
SNP
Transcriptoma
Genmica funcional
Proteoma
Protemica
Gel 2D
Proteoma de cerebro humano
Protenas
Protenas
cidas y
alto MW
Bsicas y
alto MW
Protenas
Protenas
cidas y
bajo MW
Bsicas y
bajo MW
-87-
Protein
Protein identification
Trypsin
Digestion
Escisin de manchas
Mass Spectrometry
Search in databases
-88-
En primer lugar quisiera dar las gracias a la organizacin por habernos invitado a
participar y presentar nuestros resultados, en esta jornada cuyo programa nos pareci
muy atractivo desde el principio.
La esquizofrenia es una enfermedad compleja a todos los niveles. En primer lugar es
complicada para el paciente que en un momento vital y temprano de su vida empieza a sufrir
una serie de sntomas que le van a dicultar una vida normal. Tambin es compleja y dura
para los familiares que sufren los sntomas de la enfermedad en sus seres queridos da a
da. A nivel clnico, los psiquiatras aqu presentes pueden conrmar, como los sntomas que
sufre un mismo paciente a lo largo de su vida son, en muchos casos, de curso episdico y
con gran variabilidad en la manifestacin de los sntomas a lo largo de la vida del paciente
y entre pacientes con el mismo diagnstico.
Bleuler, hace ms de 50 aos en sus primeras deniciones de la esquizofrenia ya
intuy su heterogeneidad y complejidad en la siguiente frase: Llamo a la demencia precoz
esquizofrenia. Uso la palabra en singular aunque es aparente que el grupo incluye diversos
trastornos... sin embargo, no hemos sido capaces de encontrar ninguna lnea natural de
divisin en su clnica... la subdivisin del subgrupo de esquizofrenias es una tarea para
el futuro. Con esta frase nos pas el testigo a las generaciones futuras dedicadas a la
investigacin de la esquizofrenia desde diferentes disciplinas y probablemente nos di la
pauta para conseguir algunos resultados en la comprensin del trastorno.
Desde un punto de vista epidemiolgico la esquizofrenia no es una enfermedad
excepcional en las poblaciones humanas, sino un fenmeno descrito en todas las culturas
y sociedades, con prevalencias no inferiores al 1%. La enfermedad afecta a hombres y
mujeres jvenes, quienes raramente se casan o tienen descendencia, sin embargo,
pese a la baja fertilidad de los enfermos, la prevalencia del trastorno parece haberse
mantenido estable a lo largo de los aos. Este dato unido a la evidencia de que entre la
poblacin general es posible detectar un amplio rango (entre 4 y 17%) de experiencias
psicticas, debera hacernos pensar que los factores genticos relacionados con el riesgo
para desarrollar esquizofrenia podran estar presentes en las poblaciones humanas
con relativa frecuencia. Esto qu quiere decir? Esto quiere decir que el fenotipo de la
-89-
enfermedad no podra explicarse por una o pocas variantes de riesgo, sino por varias
variantes que coneren riesgos pequeos, y que en ltima instancia el ambiente acabara
explicando, al menos en parte, la aparicin del trastorno. En este sentido, los estudios
epidemiolgicos han corroborado la existencia de diferentes factores de riesgo de origen
ambiental implicados en la etiologa del trastorno. stos podramos dividirlos en dos grupos:
factores que predisponen a la enfermedad y factores que precipitan la enfermedad. Entre
los primeros se situaran aquellos que acontecen durante el neurodesarrollo como podran
ser infecciones de origen vrico (gripe, respiratorios, del Sistema Nervioso Central, etc...),
sufrir complicaciones obsttricas y perinatales, presentar anomalas dermatoglcas y
anomalas fsicas menores y alteraciones cerebrales. En el segundo bloque de factores de
riesgo ambiental se encontraran pertenecer a algunos grupos de inmigrantes, vivir en una
gran ciudad, sufrir acontecimientos vitales estresantes y por ltimo el uso del cannabis. En
cualquier caso los riesgos que coneren estos factores son pequeos (inferiores a 5) y en
el caso del cannabis, estudios recientes han demostrado que el riesgo se puede duplicar
si el consumo tiene lugar durante la adolescencia. En cualquier caso, de todos los factores
descritos hasta el momento, el que conere mayor riesgo para esquizofrenia (RR=10)
sera tener un familiar de primer grado afectado por la enfermedad, evidencindose la
importancia de los factores genticos en la etiologa de la esquizofrenia.
Los estudios familiares, de gemelos y adopcin llevados a cabo desde la Epidemiologa
Gentica ponen de maniesto que el riesgo para padecer la enfermedad est en funcin del
nmero de genes que compartimos con una persona que est afectada de esquizofrenia. El
hecho que este riesgo no aumente proporcionalmente al nmero de genes compartido con
un enfermo, es decir, no se ajuste a una recta sino a una funcin exponencial, aboga una
vez ms por la existencia de mltiples genes de efecto menor implicados en la enfermedad.
Esto implica que mientras una persona de la poblacin general (sin antecedentes de
enfermedad psiquitrica) tiene un riesgo aproximado del 1% de tener un brote psictico,
otra persona con un familiar de segundo grado afectado (con el que comparte el 25% de
sus genes) tiene un riesgo del 3% y de la misma manera los familiares de primer grado que
comparten el 50% de sus genes con el paciente tienen un riesgo del 10%.
Tambin cabe destacar que los gemelos monozigticos, que comparten el 100% de
sus genes, presentan concordancias situadas alrededor del 50%; este resultado nos
debera hacer pensar en la importancia de los factores ambientales en la etiologa de la
enfermedad. De qu manera los factores ambientales (prenatales o postnatales) van a
inuir en la expresin diferencial de los genes de riesgo es una cuestin de estudio de gran
inters y que constituye una nueva estrategia de investigacin aplicada a las enfermedades
complejas. Su objetivo es intentar tener en cuenta tanto la correlacin como la interaccin
entre determinadas variantes genticas de riesgo y algunos factores ambientales.
La interaccin gen-ambiente (GxE) hace referencia a nuestra sensibilidad genticamente
mediada a determinados factores ambientales. Esto implicara que determinados genotipos
(genotipos de riesgo) aumentan ms la probabilidad de sufrir el trastorno comparado con
otros (genotipos de no-riesgo) ante una misma exposicin a un factor de riesgo ambiental.
De acuerdo con este modelo los individuos dieren en su sensibilidad a factores ambientales
adversos, de manera que los individuos genticamente vulnerables poseen ms riesgo de
sufrir la enfermedad cuando se exponen en la misma dosis a un determinado factor de
riesgo ambiental.
-90-
-91-
-92-
en algn momento de su vida. A todos ellos se les midieron los niveles de esquizotipia (por
medio de la escala CAPE y estas puntuaciones se utilizaron como medida de vulnerabilidad),
se les pas una batera neurocognitiva (memoria verbal y visual, atencin) y presencia de
sntomas psicticos (mediante el CAPE). De manera breve el diseo fue el siguiente, en
una sesin inicial se explic a los participantes el estudio y se les pidi su consentimiento
informado, se les tom una muestra de saliva que se utiliz para la extraccin de ADN
y genotipado del polimorsmo Val158Met de la COMT. Se les pasaron las escalas de
esquizotipia y se les hizo un pequeo entrenamiento para los tests neurocognitivos que
iban a llevar a cabo en las sesiones siguientes. En una primera sesin se les hizo fumar un
cigarrilo ( con placebo o delta-9-THC, principal componente psicoactivo del cannabis) y se
les pidi que ejecutaran los tests neurocognitivos comentados anteriormente y se les midi
la presencia de sntomas psicticos. En una segunda sesin una semana ms tarde, los
participantes volvan a fumar un cigarrillo (si en la primera sesin haban fumado placebo
en sta delta-9-THC o al revs) y volvan a realizar las mismas pruebas que la semana
anterior (tests neurocognitivos y sntomas psicticos).
Los resultados en referencia a la presencia de sntomas psicticos pusieron de maniesto
que ninguno de los factores estudiados (vulnerabilidad, consumo de cannabis y genotipo de
la COMT) de manera independiente jugaba un papel en la aparicin de sntomas psicticos
en la muestra analizada. Sin embargo, se observ una interaccin entre los tres factores
de manera que los individuos con alta predisposicin para psicosis, con el genotipo Val/Val,
cuando fumaban cannabis presentaban con mayor frecuencia sntomas psicticos.
De manera similar se estudi la relacin entre estas tres variables y la ejecucin de los
tests neurocognitivos. En esta ocasin se vio que el consumo de cannabis estaba directamente
relacionado con peores puntuaciones en todos los tests neurocognitivos realizados (excepto
atencin selectiva). Este efecto se vio que era mucho ms importante en los individuos
con el genotipo Val/Val, observndose una interaccin positiva entre estos dos factores.
En este caso no se observ una interaccin clara con la predisposicin para psicosis.
Estos resultados que os he presentado, nos hacen pensar que tanto el cannabis como
el gen del COMT interactan participando de alguna manera en una desregulacin del
sistema dopaminrgico que en ltima instancia puede estar implicado en la aparicin de
los sntomas de la enfermedad y los dcits neurocognitivos asociados.
A la luz de los diferentes resultados que he ido presentando a lo largo de esta charla,
tan solo sealar, a modo de conclusin, que muy probablemente una parte importante de
los esfuerzos en la futura investigacin en enfermedad mental habrn de orientarse hacia la
comprensin de la interaccin entre el ambiente (entendido en su acepcin ms amplia) y
los factores de riesgo gentico, as como al uso de fenotipos homogneos y biolgicamente
distinguibles. Tal vez este entendimiento pueda conducir al descubrimiento de la verdadera
base neurobiolgica de los fenmenos que tienen lugar en el cerebro de los pacientes y de
la poblacin sana y as permitir el avance en la investigacin.
Antes de nalizar querra dar las gracias a nuestro grupo de Barcelona y el grupo de
Maastricht con el que colaboramos desde hace ya algunos aos.
-93-
Cannabis y esquizofrenia:
un modelo para la comprensin de la interaccin
genes-ambiente (GxE)
Araceli Rosa
U
UNIVERSITATDE
BARCELONA
-94-
GENES
10
9reduction
in brain
Influenza,
respiratory,
CNS,size
rubella
virus
-glial
population
Enlarg.
cerebral ventricles
hippocampus
Immigrant
populations
Urbanicity PF cortex
dorso-lateral
Life events
dorsal thalamus
Use of cannabis
ENVIRONMENTAL FACTORS
Arseneault et al 2004
60
50
40
~ 48 %
30
20
~ 10 %
10
~3 %
0
MZ twins
100% genes
~1 %
Gral population
1st degree
2nd degree
50% genes
Genotype +
Genotype -
-95-
Vulnerability
Vulnerable: Susceptible de ser herido o vulnerado, de recibir un dao o
Family History
perjuicio,
o de ser afectado, conmovido, convencido oPsychometric
vencido por algoliability
que se
Schizotypy
expresa.
FH+
Neurocognitive deficits
G x E
GxE
GxE
(Gene-environment interaction)
Disease Phenotype
Schizophrenia
Schizophrenia
2.437 participants
4 year follow-up
18.3 3.3
21.8 3.4
Risk of psychotic
symptoms
NO - Psychosis
predisposition
15%
21%
26%
Psychosis
predisposition
IL-1B
expressed in brain
HTR2A
NRG1
L1CAM
BDNF
NOTCH4
Todo lo que
ocurreNTRK1
en el cerebro
DRD4
SYN3es biologa y todo lo que
ocurreMAOA
RELN
en RGS4
la mente ocurre
a travs del
COMT
SLC6A4 DRD2
cerebro.
SLC6A3
Dysbindin
Joseph le Doux, 1999
DAAO
DRD3
PRODH GRM3
DISC1
Brain Functions
G72/G30
Genes
COMT
-96-
Val158Met (G1221A)
Functional polymorphism:
GUG (Val)
GUG (Val)
AUG (Met)
GUG (Val)
AUG (Met)
AUG (Met)
COMT
COMT
High activity
homozygote
COMT
Intermediate activity
heterozygous
Low activity
homozygote
General Population
.................................................................
25
18,311,7
20
13,2 9,5
15
10,6 6,3
F=5.5; P=0.007
F=6; P=0.003
F=4.4; P=0.02
10
5
0
Val/Val
Val/Met
Met/Met
24( 27.6 %)
47 (54%)
6(18.4%)
COMT Genotype
11
13
15
18
21
26
n=803
(1972-1973)
Vulnerability
COMT
CANNABIS
Psychotic symptoms
Neurocognitive deficits
Schizophrenia Phenotype
-97-
Assessment:
- Psychometric psychosis liability: 40 item CAPE
- Cognitive assessment: - Verbal and visual memory (VVLT)
- Sustained and selective attention (CPT/ Stroop)
1st session
2nd session
1 week
PLACEBO OR -9THC
PLACEBO OR -9THC
Psychometric
Psychosis
Liability
Cognitive Assessment
Cognitive Assessment
(40-item CAPE)
Psychotic symptoms
(CAPE-state)
Psychotic symptoms
(CAPE-state)
Low predisposition
CANNABIS (THC)
+
Psychotic symptoms
-98-
*Val/Val
=-2.6, 95% CI=-4.6; -0.6, P=0.01; =-0.7, 95% CI=-1.3; -0.1, P=0.01
Val/Val
VISUAL MEMORY: Delayed recognition *
Cannabis
(-9THC)
Selective attention
Stroop interference score: = 0.06, 95% CI= -0.02; 0.13, P=0.16
Subjects with the Val/Val genotype (compared to Val/Met or Met/Met subjects)
were significantly more sensitive to the effect of THC on some functions ( *Val/Val).
The conditionality on psychometric psychosis liability was less evident than for the
psychotic symptoms.
Candidate genes
Inherited
Genes
(PSYCHOTIC SYMPTOMS)
S C H I ZO P H R E N I A
Environmental factors
CONCLUSIONS:
Facultat deBiologia
Dept.Biologia Animal
Unitat dAntropologia
U
UNIVERSITATDEBARCELONA
-99-
Sin embargo, el estar en contacto con la droga no lleva de forma automtica al desarrollo
del proceso adictivo. Existen factores que condicionan dicho desarrollo tras la exposicin
inicial a la droga como son:
-
la vulnerabilidad individual
el ambiente
-103-
determinados procesos adictivos. Entre ellos, podramos citar los receptores opioides, los
receptores de dopamina, serotonina y tambin polimorsmos en el receptor cannabinoide
CB1 y en la enzima de degradacin de los cannabinoides FAAH.
As, la variante A118G de receptor mu-opioide se ha asociado con la adiccin de opiodies.
En el caso del receptor cannabinoide CB1, la variante de este receptor conocida como
haplotipo TAG aparece con una frecuencia signicativamente mayor en politoxicmanos en
diferentes grupos de poblacin.
En el proceso adictivo, uno de los fenmenos mas relevantes est relacionado con
los efectos reforzantes inducidos por las drogas. De hecho, es condicin necesaria que
las drogas ejerzan algn tipo de efecto placentero para que se desarrolle y consolide el
proceso adictivo. Diferentes equipos han estudiado los distintos sistemas neuroqumicos
que modulan los efectos reforzantes de las drogas de abuso. Entre ellos destaca el sistema
dopaminrgico. Este sistema tiene funciones importantes en refuerzo, control motor y
cognicin. Las distintas drogas de abuso, de forma independiente de su particular mecanismo
de accin estimulan la descarga de las neuronas dopaminrgicas en el sistema meso-corticolmbico. Los cuerpos neuronales de las neuronas dopaminrgica se ubican preferentemente
en el mesencfalo, en el rea tegmental ventral y desde esta zona proyectan a reas
lmbicas como el ncleo accumbens y al crtex prefrontal. Esta va es estimulada por las
drogas de abuso. Adems es modulada por otros sistemas de neurotransmisin, como son
el glutamatrgico originado en el cortex prefrontal y que proyectan al ncleo accumbens
y al rea tegmental ventral, o proyecciones gabargicas, opioides y cannabinoides. As,
conocemos cuales son las localizaciones preferenciales donde las distintas drogas de abuso
pueden modular este complejo sistema que media los efectos de recompensa.
Si bien el inicio del proceso adictivo, parece tener su sustrato neurobiolgico en el
sistema lmbico y se relaciona con los efectos reforzantes de las drogas, la consolidacin
de este proceso involucra otros procesos y otros sustratos anatmicos. El proceso adictivo
es actualmente considerado como un trastorno tipo obsesivo compulsivo y por tanto,
existe una alteracin en los procesos de toma de decisiones, desarrollo de estrategias que
involucran reas corticales. Estudios de neuroimagen, muestra la implicacin de reas
lmbicas durante el inicio del proceso adictivo. Sin embargo, tras la instauracin de la
adiccin aparece una disminucin en el metabolismo de la glucosa en zonas del cortex
prefrontal, en concreto en la corteza orbitofrontal, relacionada con el proceso de toma de
decisiones.
En nuestro laboratorio, hemos abordado la participacin de diversos sistemas
de neurotransmisin en las propiedades adictivas de ciertas drogas de abuso. Hoy les
presentar algunos de los resultados que hemos obtenidos tras la manipulacin gentica
del sistema opioide y del sistema cannabinoide.
Con respecto a la manipulacin del sistema opioide, hemos investigado los efectos de
distintas drogas de abuso en animales decientes en diferentes componentes del sistema
opioide (receptores o pptidos opioides). En uno de los primeros estudios que realiz
nuestro equipo mostramos que los receptores opioides mu son necesarios para que se
maniesten los efectos de recompensa de frmacos opiodes como la morna. Estudios
posteriores de nuestro mismo grupo han demostrado que el receptor mu-opioide es tambin
necesario para la expresin de los efectos de recompensa de otras drogas de abuso con
distinto mecanismo de accin, como es el caso de la nicotina. Adems, hemos observado
que los animales decientes en el gen de la pre-proencefalina (un pptido opioide que se
-104-
-105-
receptor. Las reas lmbicas van a ser el sustrato neurobiolgico de las primeras fases de
la adiccin, el refuerzo primario, para la morna y para otras drogas prototpicas (alcohol,
cannabinoides, y la nicotina). En el caso de los psicoestimulantes el receptor mu-opioide, no
parece participar de forma esencial en los efectos reforzantes primarios de estas drogas.
En la segunda parte de la presentacin, me centrar en la participacin del sistema
endocannabinoide y en particular de los receptores cannabinoides CB1 en los efectos adictivos
de las drogas de abuso. El sistema endocannabinoide es un sistema capaz de modular la
adiccin de una manera general. Y en este caso, todos los resultados que les mostrar
pertenecen a estudios realizados en un animal que carece del receptor cannabinoide CB1.
La estimulacin de este receptor es el responsable de los efectos psicotrpicos de los
cannabinoides. En los primeros estudios realizados con el animal mutante deciente en
los receptores CB1, mostramos por primera vez, la ausencia de refuerzo primario para
la morna en el modelo de preferencia de plaza en el animal carente de los receptores
CB1. En el modelo de autoadministracin aguda, observamos una disminucin de los
efectos reforzantes de la morna en el animal que carece de este receptor CB1. Nuestros
estudios muestran que la presencia de los receptores CB1 es imprescindible para que se
maniesten los efectos reforzantes de la morna. Adems, el desarrollo de la dependencia
fsica, fue evaluado observando el sndrome de abstinencia de morna. Nuestros estudios
demostraron que la dependencia est signicativamente atenuada al eliminar el receptor
CB1. La escala global de abstinencia nos muestra una disminucin signicativa de los
efectos de la abstinencia en los animales CB1 knockout.
Evaluamos en estos animales CB1 knockout los efectos de la nicotina en el modelo
de preferencia de plaza y observamos que la nicotina no muestra efectos de recompensa
en el animal CB1 knockout, de forma similar a lo observado en el animal mu knockout.
Sin embargo, los psicoestimulantes no parecen requerir del receptor cannabinoide CB1
para que se manieste el refuerzo primario asociado a su administracin. Este efecto lo
observamos con la cocana y con el MDMA.
Otros trabajos farmacolgicos mostraron resultados contradictorios con nuestros
estudios y demostraban que el receptor cannabinoide CB1 ejerce una funcin importante
en algunos de los fenmenos adictivos, (por ejemplo en los fenmenos de recada). De
hecho, la administracin de un agonista cannabinoide, facilita la recada al consumo de
cocana en un modelo de autoadministracin en ratas. Para profundizar en estos resultados,
evaluamos modelos ms complejos. Si el refuerzo agudo estaba preservado, qu ocurra
a nivel neuroqumico en el ncleo accumbens? La utilizacin del modelo de microdilisis
in vivo nos permiti observar que la cocana es capaz de incrementar los niveles de
dopamina en el ncleo accumbens de los animales CB1 knockout y al mismo tiempo,
observamos una respuesta reforzante en un modelo comportamental. Sin embargo, los
estudios de autoadministracin encontramos diferencias entre el animal wild-type y el
animal CB1 knockout. As, el animal CB1 knockout no muestra una autoadministracin de
cocana. Estas diferencias se van a pronunciar si exigimos una respuesta ms importante
al ratn para que obtenga la dosis correspondiente de cocana. Es decir, no muestra una
motivacin por la droga.
La evolucin de la autoadministracin de cocaina en distintos das muestra tambin
diferencias muy evidentes entre los animales wild-type y los CB1 knockout. En esta
diapositiva mostramos patrones de respuesta. En los animales normales el patrn de
respuesta pues es continuo, mientras que en los animales CB1 knockout, las respuestas
-106-
-107-
Sustrato neurobiolgico en la
adiccin de drogas
Olga Valverde
Laboratorio de Neurofarmacologa
Departamento de Ciencias Experimentales y de la
Salud
Universitat Pompeu Fabra
La adiccin como trastorno psiquitrico
Uso
- Uso compulsivo
- Recidivas tras la abstinencia
- Prdida del control
- Consumo de la droga a pesar de las
consecuencias negativas
Abuso
Adiccin
- Vulnerabilidad
- Ambiente
- Droga y va de administracin
- Estrs
- Aprendizaje
- Exposicin temprana
a drogas o txicos
-Trastornos psicolgicos
y psiquitricos
- Polimorfismos
- Trastornos neurolgico
- Trastornos psiquitrico
-108-
CB1
Adiccin y polimorfismos en e
Nestler, 2001
-109-
Nucleus
CB1
Accumbens
N
Glu
Cannabinoids
From PCtx
GABA Nicotine
Dopamine
Ethanol
Psychostimulants
Ventral
Opioids
Cannabinoids
Ethanol
Nicotine
Opioid
N
CB1
Tegmental
Adaptaciones en el sistema dopaminrgico en la adiccin
Refuerzo
(Sist lmbico)
Uso
Adiccin
TOC
(A. Corticales)
Sistema cannabinoide:
Sistema opioide:
- Receptores opioides:
mu
delta
kappa
Otros sistemas:
- Pptidos opioides:
proencefalina
prodinorfina
- Dopaminergico: RD2
- Adenosina A2A
- Factor de transcripcin CREB
-110-
MOR -/-
DOR -/-
KOR -/-
(1)
(2)
(1)
(2)
(3)
(4)
(5)
(3)
(4)
(5)
3.125
WIN (Pg/kg/inf)
Active hole
30
Inactive hole
20
10
Drug intake
(ug/kg)/session)
Number of infusions
12.5
40
0
1
9 10 11 12 13 14 15
Number of sessions
Knockout
B
mice
Dose-response
200
6.25
12.5
150
100
50
0
3.125
25
Dose (ug/kg/inf)
Numnber of infusions
12.5
6.25
40
30
20
3.125
10
WIN (Pg/kg/inf)
-111-
Sistema opioide:
- Receptores opioides:
mu
delta
kappa
- Pptidos opioides:
proencefalina
prodinorfina
Sistema cannabinoide:
- Receptores cannabinoide CB1
Otros sistemas:
- Dopaminergico: RD2
- Adenosina A2A
- Factor de transcripcin CREB
CPP
Efectos de la nicotina
250
200
Score
150
100
50
0
-50
cocaina
MDMA
-112-
W
KO
Number of nose-pokes
30
25
Active hole
20
Inactive hol
15
10
5
0
Wild-type
Knockout
Wild-type
FR1
Knockout
FR3
Bloqueo de la adquisicin de
una conducta de autoadministracin de cocana en
el animal CB1 KO
WT:FR
KO:FR
KO:FR
KO PR18
WT PR40
KO
WT
MDMA
(mg/infusion)
15
10
0.06
5
0
N of nose-poke /2 h
10
Acquisition of MDMA
self-administration in
CB1 knockout mice
(FR1)
30
25
20
15
10
0.125
5
0
1
10
11
16
14
12
10
8
6
4
0.25
WT active
KO
-113-
ti
MDMA
(mg/infusion)
15
10
0.06
5
0
1
10
N of nose-poke /2 h
30
25
25
20
20
15
15
10
10
0.125
5
0
0
1
10
WT
11
KO
16
14
12
10
8
6
4
0.25
WT active
KO
ti
Los receptores CB1 son requeridos para que exista motivacin por la droga.
Prefrontal Cortex
Hippocampus
Basolateral
Amygdala
CONCLUSIONES...
i.
ii.
iii.
iv.
v.
-114-
Laboratori de Neurofarmacologia
Rafael Maldonado
Guadalupe Soria
Clara Tourio
Victoria Mendizbal
Patricia Robledo
Miquel Martn
Anna Casta
Raquel Martn
Fernando Berrendero
Lola Galeote
Jose M. Trigo
Patricia Murtra
Andrea Bura
Andrs Ozaita
Ester Aso
Flavia Barbano
Bases neuroqumicas de los efectos reforzantes inducidos por las drogas de abuso
Sistemas neuroqumicos:
- dopaminrgico : refuerzo, control motor, cognicin.
- opioides : nocicepcin, emocin
- endocannabinoides, GABA, Glu, NA, 5HT, NPY...
-115-
Sustrato neurobiolgico en la
adiccin de drogas
Olga Valverde
Laboratorio de Neurofarmacologa
Departamento de Ciencias Experimentales y de la
Salud
Universitat Pompeu Fabra
Sustrato neurobiolgico en la
adiccin de drogas
Olga Valverde
Laboratorio de Neurofarmacologa
Departamento de Ciencias Experimentales y de la
Salud
Universitat Pompeu Fabra
Sustrato neurobiolgico en la
adiccin de drogas
Olga Valverde
Laboratorio de Neurofarmacologa
Departamento de Ciencias Experimentales y de la
Salud
Universitat Pompeu Fabra
-116-
-117-
-118-
-119-
con la drogadiccin, pues se habla de que ese tipo de genes estaran asociados tambin
con otros que tienen que ver con la bsqueda de sensaciones, con otros que tengan que
ver con la atraccin por el riesgo, con otros que determinen un aspecto complejo de
la personalidad y que llamamos impulsividad, con conductas desadaptadas como por
ejemplo la conducta antisocial o con distintos grados de susceptibilidad y stress.
Y tambin, cada vez ms se habla que en humanos, pues parece que pueden estar
implicados una serie de transmisores como la Dopamina, la Serotonina, los opioides.
Exactamente igual que como poco a poco va demostrando la investigacin preclnica con
animales. Bien, hecho este planteamiento, pues evidentemente no podemos olvidar que
por encima de todo, lo que llamamos drogadiccin, es un fenotipo, es decir , la expresin
del resultado de la accin de un genotipo y de un ambiente, y de la interaccin del genotipo
y del ambiente, es decir que son estos tres factores que estn muy, muy claramente
imbricados, y es francamente muy difcil de separar. En la charla de esta maana, y en las
que vienen a continuacin, ustedes habrn visto que se intenta aislar efectos genticos
individuales que tengan que ver con el consumo de una droga en particular, pero no
podemos olvidar vuelvo a repetir, que la inuencia del ambiente es extraordinaria, que esa
extraordinaria interaccin de esas dos simultneamente, de manera que hay realmente
una autntica unin entre todos ellos, y que es muy difcil de separar.
Para que vean, digamos la importancia del ambiente en este sentido, les traigo datos
aqu del grupo Brake, que ya son bastante ilustrativos a mi juicio. Miren, en este caso, se
hicieron estudios con monos: Los monos evidentemente tenan la misma dotacin gentica,
eran homogneos genticamente y los animales estuvieron alojados individualmente y de
manera agrupada. Cuando estaban alojados individualmente y se midi el cuerpo estriado
por neuroimagen, los niveles del receptor D2 de Dopamina, pues tenan los niveles que ven
ustedes. Cuando por el contrario estos animales se agruparon- ya saben ustedes que se
establecen relaciones de dominancia, y en los animales dominantes aumentaron los niveles
receptores de D2, comparados con los del subordinado. Lo que es ms interesante en este
caso, es que cuando se dej que los animales se auto-administraran droga, es este caso
cocana, eran los animales subordinados los que se auto-administraban mucha ms.
Este tipo de datos eran interesantes en relacin con lo que estamos estudiando, de la
importancia del ambiente psicosocial, en primer lugar, porque nos dicen que en situaciones
sociales los niveles de receptores pueden cambiar, y como llevamos viendo es posible que
un aumento en el nmero de receptores concretamente de subtipo de D2, sea un factor
protector.
Por tanto, hay que tener en cuenta este tipo de datos cuando en humanos hacemos
estudios que tratan de determinar la importancia o la aportacin de uno o un grupo de
genes a un problema concreto de adiccin y tenemos que fundamentalmente basarnos
en estudios con animales para tratar de deslindar estos factores de los cuales estamos
hablando; los genticos, los ambientales, e incluso la interaccin entre los dos que es
francamente difcil de separar.
Y para ello, empleando una estrategia que corresponde al mbito de estudio de la
gentica de la conducta, pues habitualmente empleamos animales homocigotos, como
nos ha explicado muy bien la Dra. Valverde anteriormente, y lo que solemos hacer es
modicar en este caso, las variables ambientales. Nosotros llevamos un tiempo trabajando
con dos cepas de ratas que de manera espontnea, tienen distinta preferencia por las
drogas y se comportan de distinto modo tambin, en situaciones de estrs. Empleamos
-120-
-121-
de explicarme, o sea dejamos a los animales que durante 5 minutos no tengan acceso a
la posibilidad de conseguir ningn reforzador y cuando pasen esos 5 minutos las primeras
respuestas que ejecuten los animales van a ser reforzados con una bolita de comida. Y
comparando esas dos razas, cranme que este tipo de datos se verican, vimos que la
ecacia del aprendizaje del animal Fischer, es muchsimo mayor que en el animal Lewis, o
sea este tipo de datos se pueden tratar matemticamente y se puede establecer lo que se
llama una pendiente en la curva de respuestas y en general, en el animal Lewis da 1,67
respuestas por minuto ms que el animal Fischer, para conseguir los mismos refuerzos,
quiero decirles , el animal Lewis trabajaba por as decirlo mucho ms para conseguir al
nal, la misma cantidad de reforzamiento, y en ese sentido se puede decir que el animal
Lewis no ejecuta una conducta que sea adaptada. Es decir, no una conducta que tenga una
buena relacin esfuerzo, por as decirlo, consecucin de resultados.
Cuando vemos registros acumulativos, parecidos a los que nos ha enseado antes la
Dra. Valverde, vemos que en el caso de los animales Lewis, hay un mantenimiento constante
de esas respuestas, de esas presiones de palanca para obtener bolitas de comida, pero es
claramente diferente lo que ocurre en los animales Fischer. Y por tanto, ese tipo de datos
nos sugera, que haba repito conductas desadaptadas en estos animales, y que de algn
modo pareca que exista un tipo de conducta que podemos llamarla compulsiva, de modo
que ante la presencia de un posible reforzador, los animales no dejaban de presionar y no
tenan una estrategia ,repito, de ms eciencia, de ms entre comillas inteligencia por asi
decirlo, para optimizar el refuerzo. Por lo tanto decidimos hacer experimentos de conducta
impulsiva en animales, que se hacen tambin simuladamente en humanos, y que consisten
bsicamente en que de dos palancas que hay en la caja de condicionamiento operante, en
la palanca de la izquierda, se le da al animal un refuerzo inmediato si presiona esa palanca,
que consiste insisto en una bolita de comida, la magnitud la podemos llamar pequea,
pero si presiona la palanca de la derecha va a obtener un refuerzo mucho mayor, que son
5 bolitas de comida, con la condicin de que el animal espere, esperara en un primer caso
0 segundos, despus 10 segundos, 20, 40 y as sucesivamente. Repito, el animal va a
obtener una bolita de comida si presiona la palanca de la izquierda de manera inmediata, la
bolita de comida suma una magnitud pequea, y va a obtener 5, si presiona la palanca de
la derecha, pero en ese caso la condicin es que tiene que esperar. De algn modo tratamos
de medir lo que llamamos conducta impulsiva en estos animales y miren los resultados
indican claramente, que los animales Lewis son muy impulsivos, muy, muy impulsivos
comparados con los Fischer. Adems hicimos estudios de si este tipo de comportamiento
basal con comida poda estar inuido por la administracin de distintas dosis de morna, les
dimos a los animales, cuatro dosis distintas de morna, no haba diferencias en lo que hace
referencia al comportamiento basal previo que acabamos de describir, y dejamos adems
que los animales se auto-administraran estas 4 dosis de morna, y vean ustedes lo que
ocurre en los animales Lewis, para estos animales no importa mucho la dosis de morna
que le des, desarrollan un comportamiento muy parecido, por el contrario, si hay diferencia
en el caso de los animales Fischer, fjense la curva dosis-respuesta de los animales Lewis
es prcticamente plana, se auto-administran igual cualquier dosis que le des, mientras que
en el caso de los Fischer, es la dosis de 0,5 la que muestra mayor ecacia reforzante para
estos animales. Este tipo de resultados en los animales Lewis especialmente nos indic,
que aparte de que haya factores de comportamiento como la conducta impulsiva, estudiada
en animales de este modo, para nosotros parece claro que seguramente son tambin
-122-
esenciales las deciencias en el sistema opioide que puedan tener estos animales, en lo
que estos animales muestran con mayor vulnerabilidad, mayor preferencia por la morna
en los estudios de auto-administracin, o sea que habra factores, vamos a llamarlos as,
endgenos, que estaran relacionados seguramente con los niveles de opioides que hay en
el sistema nervioso de estos animales, y tambin unos factores, entre comillas, si ustedes
quieren de personalidad de la rata, que tendran ms que ver con esa conducta impulsiva
que estamos diciendo.
Bueno, en ese sentido, quisiramos sacar unas conclusiones: la mayor susceptibilidad
que tiene esta animal para los efectos reforzantes positivos de la morna, tienen que ver;
con diferencias en los elementos reguladores de la transmisin opiodrgica y tambin con
una mayor conducta impulsiva. Hemos seguido investigando en esta lnea y preguntndonos
En aquellos sujetos ms vulnerables, o sea los animales Lewis, el consumo de droga,
concretamente morna, producira adems adaptaciones neuroespeccas? Y en este
sentido, en colaboracin con el Dr. Javier de Felipe del Consejo Superior de Investigaciones
Cientcas, hemos hecho una serie de estudios midiendo los cambios neuromorfolgicos
en las clulas piramidales de la corteza. Por hacerles un pequeo resumen a ustedes
para que vean como son este tipo de neuronas, son neuronas que suelen tener un rbol
dendrtico basal muy grande. Las neuronas de la corteza piramidal, en todos los mamferos
son extraordinariamente importantes puesto que integran el 80% de toda la informacin
que llega a nuestro sistema nervioso. Estas neuronas abundan en la corteza frontal, en la
corteza rbito-frontal y otras como la cingulada y nos pareci interesante hacer este tipo
de estudios en estos animales.
Para ellos el grupo de Javier de Felipe inyect amarillo lucifer que es un colorante que
se puede inyectar directamente en las neuronas, es un procedimiento muy demandante
puesto que los animales nada ms acabar la auto-administracin tienen que ser inyectados,
ven ah lo que se marca con el cursor es una pipeta, una punta de una pipeta y lo que est
marcado con la echa en negro, son neuronas. Todas esa cositas blanquitas que ustedes
ven, son neuronas. Haba que hacer inyecciones durante 36 horas seguidas y el hecho es
que un porcentaje alto de neuronas incorporan el colorante y cuando lo incorporan as se
ve la neurona.
Con programas estadsticos adecuados, este tipo de neuronas se pueden estudiar,
o sea el rbol dendrtico, se puede ir marcando por distintas fases. Se puede averiguar
la longitud de cada una de las dendritas, se puede saber si hay ms o menos espinas
dendrticas en cada una de ellas, ya saben que es en las esquinas donde se cree que se
unen cada uno de los botones sinpticos, de neuronas que proyectan sobre las piramidales
etc. Y haciendo este tipo de estudios nosotros comparamos distintos parmetros como por
ejemplo el rea basal de las dendritas, la longitud del rbol dendrtico basal, el nmero
total de espinas, etc. Y los datos son muchos, hay muchas tablas, muchas imgenes y
yo no quiero pues abrumarles a ustedes con todo este tipo de datos y les he trado aqu
resumidos pues realmente lo ms interesante de la comparacin entre esas dos razas,
despus repito de que se hayan auto-administrado morna. O sea el experimento era
que los animales se auto-administraban morna e inmediatamente despus se haca este
estudio de neuromorfologa con estos animales. Entonces fjense, se producen una serie de
cambios neuromorfolgicos en los animales Lewis que no se producen en los Fischer. Repito
que los Fischer son los ms resistentes por as decirlo, y entre ellos los ms relevantes son;
que hay un aumento de la longitud de las dendritas en la corteza prelmbica y tambin un
-123-
incremento del nmero de espinas en esa rea de la corteza cerebral, siempre hablando de
las clulas piramidales. Hay una disminucin del nmero de ramas del rbol dendrtico en
la corteza frontal y tambin hay un aumento del nmero de espinas en la corteza motora
y lo que es ms relevante en los animales Fischer que se han auto-administrado morna
ninguno de estos cambios se produce. Parece entonces que en los sujetos ms vulnerables
es donde se originan esas neuroadaptaciones especcas, y por tanto para concluir un
poquito pues desde nuestro punto de vista, parece que factores genticos asociados a
ciertos rasgos comportamentales, pueden inducir neuroadaptaciones especcas que por
el contrario, van a generar drogodependencia, o sea si este tipo de datos nosotros los
generalizramos a humanos de algn modo tratamos de decir que puede que en algunas
personas haya ciertos genes o grupos de genes que de alguna manera induzcan una
susceptibilidad especial a la drogadiccin.
En ese tipo de personas puede haber adems asociado con esos genes, o sea que
se hayan transmitido juntos, incluso a lo mejor genes digamos ligados con esos. Se han
podido transmitir digamos rasgos comportamentales como algunos que hemos citado, por
ejemplo el de bsqueda de sensaciones, o el de impulsividad o el de aprecio por conductas
de riesgos, y a eso sujetos los ha hecho ms vulnerables a los efectos adictivos de las
drogas. Esos sujetos se han hecho consumidores crnicos de esas drogas. En ellos se han
producido neuroadaptaciones y adems se ha generado ya ese cambio, ese punto que
decamos en el Sistema Nervioso Central, que induce lo que llamamos drogodependencia y
que hace que el sujeto sea, pues un sujeto dependiente toda su vida, en el sentido de que
aunque deje de consumir la sustancia ser siempre un exadicto. Nosotros no sabemos si
en humanos puede ocurrir igual, pero desde luego estos datos con estos animales apuntan
en esta direccin. Y puesto que esto es una mes de debate y reexin, luego no se si habr
debate y habr reexin, pero yo quera de alguna manera exponerles que a mi me parece
interesante que debatamos sobre este tipo de cuestiones en el sentido de que si esto es as
quiz la poltica cientca que deben de tomar los distintos pases respecto a las drogas, sea
ms de indagar en este tipo de factores, vamos a llamarlos genticos y comportamentales,
con el objeto de alguna manera de identicar poblaciones vulnerables y tratar de centrar
por as decirlo, la mayor carga de recursos en esas personas. Si les parece interesante
este tipo de reexiones pues lo comentamos luego. Por ltimo, simplemente quera dar
las gracias a todas las personas que aqu tienen ustedes, que me ayudan a hacer estas
investigaciones y dar las gracias al Plan Nacional sobre Drogas y al Ministerio de Educacin
y Ciencia por la nanciacin que nos da y que nos permite continuar en esta lnea. Muchas
gracias a todos ustedes por su atencin.
-124-
GENTICA DE LA SUSCEPTIBILIDAD
INDIVIDUAL A LA DROGADICCIN
Departamento de Psicobiologa
UNED
INTRODUCCIN
INTRODUCCIN (cont.)
65% LO CONSUMEN.
16% LO CONSUMEN.
-125-
INTRODUCCIN (cont.)
60% TABACO.
19 % HERONA.
8% ALUCINGENOS
PUNTO CRTICO
EN LA
TRANSICIN
DROGAS
INICIO
USO
ABUSO
DEPENDENCIA
NEUROADAPTACIONES CEREBRALES
INTRODUCCIN (cont.)
INTRODUCCIN (cont.)
FACTORES GENTICOS
DIFERENTES
PROPIEDADES
REFORZANTES
DE LAS DROGAS
MINIMIZAR
FACTORES
PROTECTORES
ALTERACIN DE LA
FARMACOLOGA Y/O
FARMACOCINTICA
DE LAS DROGAS
INFLUIR SOBRE
RASGOS DE
PERSONALIDAD
(BSQUEDA DE
NUEVAS
SENSACIONES)
-126-
AUMENTAR LA
TOXICIDAD DE
LAS DROGAS
INTRODUCCIN (cont.)
FACTORES GENTICOS
INICIO
CONSUMO
EXCESIVO
-127-
DEPENDENCIA
V lk
-128-
t l 2003
-129-
-130-
Secado
Incubacin
Incubacin
Lavado
LEWIS
BASAL LEVELS
Fischer 344
Day 3
Day 7
Lewis
Fischer 344
Day 0
Lewis
-131-
Day 15
BASAL LEVELS
Fischer
Niveles basales
Lewis
Day 3
LEWIS
FISCHER 344
Day 0
344
-132-
Day 7
Day 15
PROCEDIMIENTO PARA
CONDUCTA IMPULSIVA
EL
ESTUDIO
OPERANTE
DE
LA
ELECCIN DE UN REFORZADOR
TIEMPOS DE DEMORA:
CURVA DOSIS-RESPUESTA
DOSIS DE MORFINA:
AUTOADMINISTRACIN INTRAVENOSA
-133-
Algunas conclusiones
La mayor susceptibilidad de la cepa Lewis a los efectos
reforzantes positivos de los opiceos puede estar asociada
a:
-diferencias en elementos reguladores de la transmisin
opioidrgica
- una mayor conducta impulsiva
En aquellos sujetos ms vulnerables el consumo de drogas
produce adems neuroadaptaciones especficas?
-134-
Inyeccin
Lucifer Yellow
70
50
30
10
control
morphine
35
30
25
20
15
10
5
0
morphine
control
-135-
40
35
30
25
20
15
10
5
0
control
morphine
FACTORES GENTICOS
asociados con
Neuroadaptaciones
especficas
CIERTOS RASGOS
COMPORTAMENTALES
Drogodependencia
AGRADECIMIENTOS
Jose Antonio Crespo Fernndez
Rosa Ferrado Chamorro
Carmen Garca Lecumberri
Alejandro Higuera Matas
Sonsoles Martn Jimnez
Miguel Miguns Vzquez
Pilar Snchez Cardoso
Isabel Torres Carbonell
Financiadas por: Plan Nacional sobre Drogas
2004-2007 y MEC ( SAF2004-08148)
-136-
Buenas tardes. Muchas gracias a la Sociedad por haberme invitado, gracias a Gabriel
Rubio por su presentacin y a todos los presentes
Voy a hablar de los aspectos genticos relacionados con la co-morbilidad en adicciones.
La amplsima co-morbilidad, sobre todo para algunos trastornos, es un tema de todos
conocido. Los siguientes casos de comorbilidad quizs sean los ms representativos tanto
por su cuanta, por la cantidad numrica de las proporciones de co-morbilidad, como por
la importancia clnica de cada una de estas situaciones. Es muy conocida la co-morbilidad
de esquizofrenia y adicciones. Tambin desde hace unos aos se ha hecho mucho hincapi
en el alto porcentaje de antecedentes de trastorno hipercintico en las adicciones, que
sera una importante condicin de vulnerabilidad al desarrollo de las mismas y que adems
determinan caractersticas muy especiales en las adicciones. Sobre todo en el alcoholismo
podemos ver claramente un patrn clnico caracterizado por grandes consumos, grandes
embriagueces, importantes trastornos de conducta relacionados con la presencia de este
trastorno. Se trata de un caso de especial inters para la investigacin de los factores
biolgicos subyacentes a ambos tipos de trastorno. Y por ltimo, el trastorno antisocial de
personalidad, y ms especcamente la psicopata como carcter nuclear de los trastornos
antisociales.
Hablar de gentica en el caso del alcoholismo, es hablar obligatoriamente de todos
los datos existentes acerca de la implicacin del polimorsmo TaqI-A, relacionado con
el receptor D2, aunque ya se comentar con qu peculiaridades. Se ha encontrado una
elevada prevalencia del alelo denominado TaqI-A1, o simplemente alelo A1 para este
polimorsmo en pacientes alcohlicos, tal como lo describi primeramente Blum en 1990,
y posteriormente por autores como Noble y commings.
Posteriormente se suscit una importante polmica, dado que otros grupos no
encontraban esta asociacin. Se demostr que era especialmente diferenciar bien las
muestras, de forma que se encontraba ms claramente asociado cuando las muestras de
alcohlicos estaban representadas sobre todo por pacientes ms graves, y los controles
estaban bien estudiados para descartar otras condiciones aditivas que pudieran de alguna
forma contaminar las asociaciones.
-139-
-140-
Los portadores del alelo C, tienen, por tanto, mayor nmero de receptores, y sobre todo,
van a producir un mayor nmero de receptores en una situacin de exceso de dopamina,
porque hay una regulacin al alza del receptor D2 en presencia de aumento de dopamina.
Este fenmeno va a ser clave en el caso de la esquizofrenia, donde sabemos que existe
tanto un aumento de dopamina como un aumento de receptores D2, y por lo tanto, los
individuos que portan este alelo presentaran una situacin compatible con este supuesto.
Cuando se habla de este polimorsmo, es frecuente hablar del alelo T como la variante,
porque primeramente se deni el alelo C. Sin embargo, el alelo C, el que est relacionado
con una mayor cantidad de receptores, es la forma ms de aparicin ms reciente, la que
ha aparecido ms tardamente en la evolucin. Por tanto, el alelo T es realmente el alelo
salvaje, y es el que tienen en exclusiva los primates ms estrechamente relacionados con
el hombre.
Por otro lado, el alelo A1 , que hasta ahora estbamos considerando como un marcador
de lo que ocurra en el receptor D2, sabemos en la actualidad que forma parte de otro
gen, de un gen adyacente que se lee en sentido contrario, el gen denominado ANKK1,
que codicara una protena con actividad quinasa que todava no ha sido plenamente
caracterizada. En esta protena, la presencia del alelo A1 s que provocara un cambio
funcional, porque dara lugar a un cambio de un aminocido por otro. Es decir, no es un
mero marcador el alelo A1, sino que puede tener un impacto importante que todava no es
bien conocido. De hecho, en nuestro equipo hemos encontrado que el alelo A1 y el alelo
C-957, aunque se encuentran asociados de forma similar en alguna condicin como el
alcoholismo y la psicopata, lo cual puede tener que ver con su proximidad, se van a asociar
por otra parte con rasgos fenotpicos totalmente distintos lo cual nos indica que no estamos
viendo simplemente una contaminacin por cercana. Hemos comprobado que el alelo A1
se asocia con alteraciones en las pruebas neuro-psicolgicas, sobre todo las relacionadas
con la impulsividad; se asocia con variaciones en los niveles de 5-hidroxi-indolactico,
el metabolito de la serotonina; y se reasocia tambin con una aumento de la latencia en
la onda P-300. Estas asociaciones no las hemos encontrado con el polimorsmo C-957,
cuando controlamos el efecto combinado de ambos. En cambio, s que hemos encontrado
que el polimorsmo C-957 se asocia con variaciones en los niveles de cido homovanlico,
lo cual estara ms en relacin con su funcin en el sistema dopaminrgico. Por otro lado,
tambin hemos encontrado una asociacin con esquizofrenia, de forma que en poblacin
esquizofrnica espaola encontramos una sobrerrepresentacin del genotipo CC para el
polimorsmo C957T, el genotipo que estara asociado a un mayor nmero de receptores
dopaminrgicos. Este estudio es una replicacin de un estudio realizado en Australia, con
poblacin en principio tambin caucasiana aunque es de suponer que ms heterognea.
Brevemente, expondr algunos datos obtenidos por nuestro equipo acerca de
determinados marcadores genticos en el caso del trastorno hipercintico, condicin que
previamente sealaba como importante factor de vulnerabilidad. En un primer momento,
ya encontramos una asociacin entre un polimorsmo para el gen que codica el receptor
cannabinoide CB1. Encontramos que en los pacientes alcohlicos con antecedente de
trastorno hipercintico durante la infancia, existe una mayor proporcin de esta variante
gentica, la denominada de alelos largos. Este polimorsmo es un microsatlite, que tiene
varias posibilidades y estn divididos en fragmentos largos o cortos. En los alcohlicos
antecedente de trastorno hipercintico, observamos una sobrerrepresentacin de estos
alelos, mientras que en los alcohlicos que no eran hipercinticos de pequeos, la
-141-
proporcin es similar a la que hay en controles. Estos datos parecen indicar, por tanto, que
sera un marcador ms relacionado con el trastorno hipercintico que con el alcoholismo.
Posteriormente hemos podido comprobar una peculiar asociacin con el funcionamiento
adrenrgico en estos pacientes: en los pacientes alcohlicos no hipercinticos, el genotipo
para el gen del receptor CB1 no tiene ninguna asociacin con los niveles del metabolito
de noradrenalina en la orina, el cido vanilmandlico. En cambio, entre los pacientes
hipercinticos, aquellos pacientes que tienen la variante gentica no relacionada con el
trastorno hipercintico, la forma corta, tienen niveles muy bajos de cido mandlico. Esto
es lo que se ha encontrado en general, en muestras de nios hipercinticos. Los pacientes
que portan la forma larga, aun cuando son con ms frecuencia hipercinticos, no tienen
la disminucin de cido vanilmandlico caracterstica de los pacientes hipercinticos . Es
decir habra un grupo de pacientes hipercinticos en los que la causa primaria sera un
trastorno del funcionamiento adrenrgico, como se ha propuesto abundantemente, y por
otro lado habra un grupo de pacientes con clnica de trastorno hipercintico relacionada
con el funcionamiento cannabinoide o posiblemente el dopaminrgico modulado por el
primero, pero que no tienen una alteracin adrenrgica.
En cuanto a las principales conclusiones, indicar en primer lugar que parece claro que las
adiciones presentan una elevada co-morbilidad con otros trastornos que estn relacionados
con el funcionamiento dopaminrgico, y por lo tanto, las alteraciones genticas de este
sistema, y tambin de los sistemas de transmisin que modulan el sistema dopaminrgico,
pueden favorecer que se exprese clnica, tanto en el sentido de la adiccin, como en el
sentido de la clnica psictica, o de personalidad, o en el trastorno hipercintico en la clnica
de la impulsividad. Los polimorsmos relacionados con el gen del receptor dopaminrgico
D2 son los que hasta ahora han demostrado jugar un mayor papel en estas patologas.
Nuestro equipo, adems, ha aportado una serie de datos acerca de la implicacin del
sistema cannabinoide a travs de los polimorsmos para el CB1 y la FAAH.
Por ltimo, no queda ms que resear la importancia del papel realizado en estos
trabajos por el laboratorio de Gentica, dirigido por la Dra. Janet Hoenicka, y por parte de los
Profesores Evelio Huertas de la Facultad de Psicologa, y Jos Antonio Ramos de la Facultad
de Medicina, el Dr. Gabriel Rubio y el resto del equipo clnico del Servicio de Psiquiatra del
Hospital 12 de Octubre, dirigido por el Dr. Jimnez-Arriero bajo la coordinacin general del
Dr. Toms Palomo. Muchas gracias a todos.
-142-
INVESTIGACION GENTICA EN
COMORBILIDAD ADICTIVA
patologa dual
A1 y alcoholismo
Blum K, Noble EP, Sheridan PJ, Montgomery A,
Ritchie T, Jagadeeswaran P, et al.
ALLELIC ASSOCIATION OF HUMAN DOPAMINE
D2 RECEPTOR GENE IN ALCOHOLISM.
JAMA 1990; 263: 2055-2060.
A1 y alcoholismo
Noble EP.
ASSOCIATION OF THE D2 DOPAMINE RECEPTOR A1 ALLELE
WITH ALCOHOLISM: MEDICAL SEVERITY OF ALCOHOLISM
AND TYPE OF CONTROLS.
Biol Psychiatry 1997 41:386393.
Noble EP.
THE D2 DOPAMINE RECEPTOR GENE: A REVIEW OF
ASSOCIATION STUDIES IN ALCOHOLISM AND PHENOTYPES.
Alcohol 1998; 16; 33-45.
-143-
A1 y adicciones
A1 y adicciones
Noble EP, Blum K, Khalsa ME, Ritchie T, Montgomery A, Wood RD, Fitch RJ, Ozkaragoz
T, Sheridan PJ, Anglin MD, Paredes A, Treiman LJ, Sparkes RS.
A1 y otros trastornos de la
impulsividad
-144-
Cromosoma 11
C957T
(AC)n
Repeticiones
G1101A
Ncol
-141C
TaqI-B
TaqI-D
Ser311Cys
Hphl
Hpell
TaqI-A
1
10 kb
Intrones
>250 KB
q22
Exones
Regin
promotora
DRD2
Regin UTR
270 Kb
q23
agccaccacggctggccaagttgtctaaatttccatctcggctcctggcttagaaccacccagagtggccactgacggct
ccttgccctctaggaaggacatgatgccctgctttcggctgcggagggccagttgcaggggtgtgcagctcactccatcctggacgt
ccagctgggcgcctgcctcgaccagcactttgaggatggctgtgttgcccttgagggcggccaggtgggcgggtgtccagccca
ccttgttgcgggcgtggacatttgcgtgatgttctaggaggttgatgacactcag
-145-
-146-
A1 y trastorno antisocial
Ponce G, Jimnez-Arriero MA, Rubio G, Hoenicka J, Ampuero I,
Ramos JA, Palomo T
A1 y psicopata
J. Hoenicka, G. Ponce, I. Ampuero, R. Rodrguez-Jimnez, G. Rubio, M.
Arages, J. A. Ramos, and M. A. Jimnez-Arriero, T. Palomo,.
14
12
10
10
8,4
7,6
7,5
6,5
5,6
5,5
5,8
3,8
2,6
0,7
PCL-R total
PCL-R factor 1
-147-
PCL-R factor 2
Cromosoma 11
C957T
(AC)n
Repeticiones
G1101A
Ncol
-141C
TaqI-B
TaqI-D
Ser311Cys
Hphl
Hpell
TaqI-A
5
10 kb
>250 KB
q22
DRD2
Intrones
Exones
Regin
promotora
Regin UTR
270 Kb
q23
agccaccacggctggccaagttgtctaaatttccatctcggctcctggcttagaaccacccagagtggccactgacggct
ccttgccctctaggaaggacatgatgccctgctttcggctgcggagggccagttgcaggggtgtgcagctcactccatcctggacgt
ccagctgggcgcctgcctcgaccagcactttgaggatggctgtgttgcccttgagggcggccaggtgggcgggtgtccagccca
ccttgttgcgggcgtggacatttgcgtgatgttctaggaggttgatgacactcag
-148-
-149-
Bien, pues muchas gracias por la invitacin inesperada porque yo no soy genetista,
ni soy psiquiatra y aunque a lo largo de mi vida he trabajado en algunos aspectos de la
Gentica de la cirrosis alcohlica, lo que voy a hacer esta tarde es revisar de manera
panormica cmo est el tema de una enfermedad, polignica como veremos, en la que
los factores hereditarios juegan un papel muy importante, tan importante que todava no
lo conocemos muy bien. Es como un mosaico antiguo en el que faltan muchas piezas y no
podemos comprender su signicado completo.
Por lo tanto, mi intervencin va a ser ms informativa que referida a las pequeas y
modestas contribuciones que yo haya podido hacer en este campo, junto a las personas
que conmigo han colaborado, porque es un aspecto en el que se ha publicado muchsimo.
Si quiero llamarles la atencin acerca de que el hecho de tener una cirrosis alcohlica no
depende slo de la voluntad de la persona que bebe, sino de una serie de factores que no
dependen de l, sino de su conguracin gentica y de circunstancias ambientales, de tal
manera que slo uno de cada seis o incluso menos bebedores excesivos, desarrolla cirrosis
alcohlica. Incluso entre aquellas personas que beben cantidades ingentes de alcohol,
del orden de ms de 200 gramos al da, solamente la mitad consiguen desarrollar una
cirrosis. Y aqu hay una relacin parcial dosis/riesgo, es decir el riesgo aumenta conforme
lo hace la dosis. Ello no quita, sin embargo, que la mayor parte de los bebedores, incluso
de los grandes bebedores, no tengan cirrosis y se mueran de otra cosa, y normalmente
padezcan otras complicaciones de su adiccin. Qu hay factores genticos lo demuestra
el hallazgo de que haya una concordancia de cirrosis alcohlica mucho mayor en gemelos
monocigotos que heterocigotos. De cirrosis, no ya solo de alcoholismo, que tambin
sabemos que la hay. Se puede tambin considerar que la cirrosis alcohlica se inscribe en
el contexto de un defecto nutricional, de carencias vitamnicas, del efecto combinado de
otras muchas circunstancias, es una teora interesante que seguramente tiene tambin
cierto fundamento.
Por lo tanto la hepatopata alcohlica avanzada es un ejemplo clarsimo de enfermedad
polignica compleja, muy compleja, extraordinariamente compleja por desgracia, en la que
adems intervienen factores ambientales. El etanol, es un producto ajeno al organismo
-151-
-152-
-153-
campo no demasiado trillado, aunque ya hemos visto que por ejemplo la superoxidodismutasa
y sus mutaciones s pueden guardar relacin, con el riesgo de hepatopata alcohlica.
Me van a permitir que ponga esta diapositiva solo para que vean lo complicado que es
esto. La paso rapidsimamente, pero nicamente que se centren en esta clula central que
es la clula de Kupffer, que es una clula del sistema mononuclear fagoctico que est en
el hgado y que est en el meollo de todos los procesos que conducen a la hepatolesividad
del etanol. No puedo detenerme ms, pero recuerden esta clula tan importante.
Por otra parte la respuesta inmune y los mecanismos de inamacin, claramente estn
relacionados porque la hepatopata alcohlica es bsicamente una enfermedad inamatoria.
Se han estudiado distintas citocinas pro y antiinamatorias, tambin se han hecho estudios
sobre distintos alelos del sistema HLA. Hoy por hoy no tenemos demasiada certeza pero
parece que este R-8, DR-3, puede mantener una relacin de riesgo.
El factor de necrosis tumoral alfa, que es una citocina fundamental en la patologa
heptica de cualquier tipo, siempre que haya un componente inamatorio crnico, est
regulado por un gen que es polimrco, y de los estudios realizados, algunos de los
cuales somos responsables los aqu presentes, han encontrado algunos datos que son
contradictorios.
En relacin con el SNP -238, el estudio pionero y el estudio muy reciente de la Dra.
Pastor encuentran un exceso del alelo TNF-2. Nosotros en un estudio que hicimos hace
unos aos no lo encontramos.
La interleucina 1 tambin es una citocina muy importante en los mecanismos
inamatoriosEs asiento tambin de polimorsmos, tanto ella como su receptor, y hay ya
estudios, aqu hay uno por ejemplo del grupo del profesor Laso, que proporciona alguna
indicacin, sobre todo del gen de la interleucina 1, en el sentido de que hay un mayor
riesgo de cirrosis alcohlica, en cambio el del polimorsmo del receptor no parece que
diera un resultado tan positivo. Y la interleucina 10, que es la otra cara del espejo del
factor de necrosis tumoral alfa, es una citocina anti-inamatoria, tambin es polimrca,
tambin ha sido estudiada. Conozco dos estudios, uno de nuestro grupo y el otro de un
grupo britnico. Los resultados son contradictorios, por lo tanto aqu tenemos que seguir
trabajando.
Hay otros genes, como por ejemplo alguno el gen CD-14, que modula el receptor de la
endotoxina, que es el principal agente estimulante de las clulas de Kupffer, acurdense de
lo que les he dicho antes, que tambin es polimrco y este polimorsmo parece asociarse
a un mayor riesgo de dao heptico por alcohol. Y lo mismo podemos decir del gen CTLA4 , que contribuye a la tolerancia inmune de los antgenos que generan acetaldehdo,
una molcula muy reactiva que ataca a las protenas y las altera en su estructura y las
convierte en neo-antgenos. Tambin sus polimorsmos se han visto relacionados con la
hepatopata alcohlica.
Pero hasta ahora estbamos hablando de inamacin, pero lo que marca la cirrosis
alcohlica es la brosis y la brosis es un proceso complejo, en el cual interviene muy
directamente el factor el TGF- beta. Est estudiado, pero con resultados muy poco
interesantes de momento: Tambin el hgado graso est de moda, la enfermedad grasa
del hgado, tanto alcohlica, como no alcohlica, es un campo de activa investigacin y ya
sabemos que algunas protenas que intervienen en el metabolismo, en la absorcin etc.
de los cidos grasos o de la produccin de triglicridos, son estn sujetas a polimorsmos
-154-
genticos que deben ser estudiados, como el de aquellas otras molculas que tienen una
capacidad intrnsecamente protectora del hgado frente al estrs oxidativo y concretamente
las citoqueratinas. Este es un campo recientsimo, y en n, ya para terminar hay
otros polimorsmo que afectan a los mecanismos de reparacin del ADN, que tambin
estn involucrados en la hepatopata alcohlica, de tal manera que poco a poco vamos
reconstruyendo el mosaico y es de esperar que el mejor conocimiento dela base gentica
de la hepatopata alcohlica nos ayude a disear adecuadamente nuestra actitud individual
frente al consumo de alcohol.
-155-
Hepatopata alcohlica
Factores genticos en su
patogenia
Dr. Jos Mara Ladero
Servicio de A. Digestivo
Hospital Clnico San Carlos
Madrid
La hepatopata alcohlica
avanzada es un claro ejemplo
de enfermedad polignica
compleja con intervencin
relevante de factores
ambientales.
-156-
Aspectos relevantes
Metabolismo del etanol y sus consecuencias
directas.
Defensa antioxidante y neutralizacin de
radicales libres
Mecanismos de inflamacin y necrosis
Modulacin de la respuesta inmune
Fibrognesis heptica
Otros factores
NAD
etanol
NAD
NADH
ADH
CYP2E1
NADP NADPH
Acetaldehdo
NADH
ALDH
X-O
RLO
-157-
Acetato
RLO
Alcoholdeshidrogenasas
Divididas en 5 clases
La clase I tiene tres isoformas: 1,2,3.
Cada gen codifica una cadena proteica
La ADH es un dmero
Los genes ADH2 y ADH3 son polimrficos
Las variantes ms activas son ADH2*2 y
ADH3*1.
Alcoholdeshidrogenasas?
Poco probable: el factor limitante in vivo es la
disponibilidad de NAD, que se consume antes de
que las ADH ms activas se saturen.
Algunos estudios en orientales sealan mayor riesgo
en los portadores de ADH2*2. Otros no.
En caucsicos slo se detecta ADH3*1 y en bajo
porcentaje. Importancia marginal o nula.
Posible relacin con la propensin a alcoholismo,
muy dudosa con la hepatopata alcohlica.
Acetaldehdodeshidrogenasa 2
Polimrfica.
La molcula enzimtica es un tetrmero
La variante inactiva (ALDH2*2) es dominante.
50 % de orientales tienen actividad ALDH2 deficiente
o nula.
Sufren mucho cuando beben
Importante factor disuasorio
Si a pesar de todo beben, tienen mayor riesgo
En caucsicos apenas hay portadores de ALDH2*2.
-158-
CYP2E1
Inducible, no constitutiva
Slo acta con consumos mantenidos y elevados de
alcohol.
Poroso (pierde radicales libres).
Muestra varios SNPs
Sin relacin con el riesgo de alcoholismo.
El alelo Rsa1 raro (c2) podra ser ms activo.
Frecuente en orientales: relacin controvertida
Raro en caucsicos: no hay relacin
Otros polimorfismos: malos candidatos
Xantino-oxidasa
Es un factor secundario en la oxidacin del
acetaldehdo.
Su actividad est relacionada con la intensidad del
dao heptico en bebedores excesivos
Muestra polimorfismo gentico
El genotipo de riesgo sera el deficiente
Es un campo a estudiar
Glutation S-transferasas
Superfamilia enzimtica.
Resultados controvertidos. El genotipo GSTT1-GSTM1
doble nulo puede implicar mayor riesgo (Ladero et al. 2005)
-159-
Fibrognesis
Vasoconstriccin
Endotoxina
ETANOL
CYP2E1
Peroxidacin lipdica
ITO
ADH
CK
TNFa
TGFb
+
Factores QTX
IL-10
TNFa
IL-6
IL-1
++
+
+
COX2
IL-8
HEP
acetaldehdo
adducts
Neoantigenos
bloqueos enzimticos
Sistema HLA
Mltiples estudios detectan mltiples
desequilibrios.
En muchos casos, artefacto estadstico.
En algunos, posible ndice de vecindad
con otro gen involucrado.
Volver sobre l con las nuevas tcnicas.
Haplotipo B8/DR3?).
TNFD
La citocina proinflamatoria clave.
Aumenta en la hepatopata alcohlica
activa
El gen TNF D : regin HLA de clase III.
SNPs en la regin promotora:
238 GoA
308 GoA (el alelo A o TNF2 n TNF D)
-160-
PMN
- 238 Go A
- Grove et al (1997)
- Grove et al (1997)
- Ladero et al (2002)
- Ladero et al (2002)
- Pastor et al (2005)
- Pastor et al (2005)
IL-10
Citocina inmunomoduladora
Antagoniza los efectos de TNFD
Niveles disminuidos en hepatopata
alcohlica.
El gen IL-10 se localiza en 1q32.
Polimrfico en la regin 5flanking del
promotor.
Polimorfismos de IL-10
Marcada asociacin de riesgo con el alelo
627 A
(Grove et al. 2000)
-161-
Fibrognesis heptica
Proceso muy complejo de sntesis, depsito y
degradacin.
Fundamental en la aparicin de cirrosis.
Involucradas mltiples citocinas, prostaglandinas,
factores de crecimiento, metaloproteinasas ...
-162-
Metabolismo lipdico:
Protena intestinal ligadora de cidos
grasos (FABP2).
Polimorfismo A54T.
Alelo 54T :
menor trigliceridemia
Latencia mayor hasta desarrollo de cirrosis
alcohlica.
(Salguero et al. 2005)
Citoqueratinas de tipo II
Protegen al hgado del estrs oxidativo.
Sus genes (K8 y K18) muestran mutaciones.
Las mutaciones son ms frecuentes en
hgados con cirrosis alcohlicas explantados.
(Ku et al., 2005)
Otros polimorfismos
Gen XRCC1 (reparacin del ADN).
Un cambio de aminocido Arg399Gln se asocia
con el riesgo de cirrosis alcohlica.
(Rossit et al. 2002)
-163-
Para terminar, vamos a hablar de los polimorsmos del ADN en alcoholismo. Primero
quiero agradecer al comit organizador de esta reunin el haberme invitado y poder estar
aqu esta tarde. Voy a referirme un poco a los trabajos que se desarrollan en nuestra
unidad, con algn comentario de la literatura.
He puesto una denicin muy amplia de alcoholismo porque el trmino de alcoholismo
incluye un conjunto heterogneo de trastornos, cuyo denominador comn es su relacin
con la ingesta de etanol. De los estudios realizados en los ltimos aos, en familias
de alcohlicos, en gemelos, y en adoptados, se deduce con cierta evidencia que en el
alcoholismo hay un componente gentico, tanto en la susceptibilidad para desarrollar la
enfermedad, como en su expresin clnica.
El abordaje habitual en la bsqueda de factores genticos asociados con el alcoholismo
es el estudio de posibles polimorsmos en genes cuyo producto proteico interviene en la
siopatologa de la enfermedad (la estrategia del gen candidato). En el momento actual los
genes que parecen ser ms relevantes en el mbito del alcoholismo son los que codican
enzimas implicadas en el metabolismo del etanol y aqullos cuyo producto tiene que ver con
las vas cerebrales de la adiccin al alcohol. De los estudios realizados hasta el momento
se deduce que no hay un gen principal causante del alcoholismo, sino que se considera
que en esta enfermedad deben interactuar diversos genes, cada uno de ellos con un efecto
pequeo, pero aditivo, sobre el fenotipo; junto a esto hay que considerar la inuencia
ambiental.
Los estudios que nosotros hemos realizado, los hemos hecho en una muestra de
alcohlicos -todos varones-, reclutados de nuestra Unidad de Alcoholismo que estn
divididos en dos grupos; dependencia y abuso de alcohol, siguiendo los criterios del DSM4. El consumo de alcohol de todos ellos era superior a 120 gramos al da, el tiempo de
consumo superior a 10 aos, y no tenan adiccin a otras drogas excepto al tabaco. Como
controles utilizamos 100 individuos, tambin varones, con un consumo de alcohol menor
de 10 gramos al da y sin antecedentes familiares o personales de alcoholismo; puedo
garantizarles que fue bastante ms difcil conseguir los controles que los pacientes.
Los nicos factores genticos plenamente establecidos en relacin con una
susceptibilidad diferente para el desarrollo de alcoholismo son los polimorsmos de los genes
-165-
-166-
-167-
-169-
ESTUDIOS DE LIGAMIENTO
Cromosomas homlogos
+34T
+34G
32
52
33
Entrecruzamiento cromosmico
+34T
+34G
23
21
36
13
15
33
43
11
66
48
13
66
13
11
36
81
31
63
83
31
66
13
11
36
33
51
36
71
31
13
37
53
31
43
11
66
ESTUDIOS DE ASOCIACIN
Pacientes
Controles
2
2
1
2
2
2
1
1
2
2
1
2
1
2
1
2
1
1
1
2
-170-
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
1
1
2
2
31
51
33
ALCOHLICOS
263
Dependencia
159
Abuso
104
CONTROLES
100
ADH
CYP2E1
ACETALDEHDO
ALDH
ACETATO
H2O + CO2
-171-
POLIMORFISMOS DE GENES
RELACIONADOS
CON EL METABOLISMO DEL ETANOL
ADH
- ADH2*2
Aumento de
acetaldehdo
- ADH3*1
ALDH2
- ALDH2*2
POLIMORFISMOS DE GENES
RELACIONADOS
CON EL METABOLISMO DEL ETANOL
Regin promotora
-1259 G/C
CYP2E1
-1019 C/T
IVS6 +7668 T/A
DEPENDENCIA ALCOHLICA
Neurotransmisores
DOPAMINA
SISTEMA
OPIOIDE
CEREBRO
SEROTONINA
GABA
-172-
GLUTAMATO
OTROS
RECEPTORES DE DOPAMINA
DRD1
3 UTR
DRD2
DRD3
DRD4
TRANSPORTADOR DE DOPAMINA
-173-
TRANSPORTADOR DE SEROTONINA
Ins/del 44 pb
5 UTR
SLC6A4
RECEPTORES DE SEROTONINA
HTR1A
HTR2A
+ 102 T/C
HTR2C
SISTEMA OPIOIDE
Receptor
opioide P
Receptor
opioide G
Receptor
opioide N
+36 G/T
+846 C/T
-174-
RECEPTORES GABAA
GABRB1
GABRB3
GABRA5
GABRB2
GABRA1
IVS12 +45A/G
GABRA6
Pro385Ser
CNR1
+1359 G/A
SIGMAR1
-485 T/A
-241-240 GC/TT
PTK-Fyn
-93 A/G
Controles
48
40 41
31
-175-
TRANSPORTADOR DE GLUTAMATO
NOS NEURONAL
PTOTEINCINASAS A Y C
IL-2
IL-4
IL-6
IL-8
IL-10
IL-12
TNF-D
D
VNTR IL1RN
Porcentaje de
portadores del
Genotipo 1/1
91 95
93
93
96
Alcohlicos
Controles
*
73
Alcohlicos
Porcentaje de
portadores del
Genotipo 1/1
Controles
50
47
52
50 51
32
Sin EHA
Cirrosis heptica
-176-
71
60 60
Controles
63
54
46
INTERLEUCINA 1
IL1A
IL1B
IL1RN
IL1R1
Cromosoma 2
q13-14
-889 C/T
IL1A
5UTR
IL1R1
Alcoholismo
IL1RN*1
+3953 IL1B*1
-889 IL1A
Dependencia
Alcoholismo
IL1R1
Pastor IJ, Laso FJ, Romero A, Gonzlez Sarmiento R.
Interleukin-1 gene cluster polymorphisms and alcoholism
in Spanish men. Alcohol Alcohol, 2005; 40: 181-186
-177-
IL1$
$
IL1R1
Cromosoma 2
IL1%
IL1RN
??
ACH
5-HT
GABA
IL-1
IL-2
IL-6
TNF-D
D
IL1RN
NE
CRH
ACTH
C Song, Neuroscience
1999; 80: 823-836
Crew
Unidad de Alcoholismo. Servicio de Medicina Interna
Hospital Universitario de Salamanca
F. Javier Laso
Isabel J. Pastor
Miguel Marcos
Servicio General de Citometra
Universidad de Salamanca
Alberto Orfao
Julia Almeida
Jos M. Vaquero
Unidad de Medicina Molecular. Departamento de Medicina
Universidad de Salamanca
Rogelio Gonzlez-Sarmiento
pencinas@usal.es
-178-