Prueba de Kastle-Meyer

La prueba de Kastle-Meyer es una prueba forense preliminar, descrita por vez primera en
1903, en la que se usa el indicador qumico fenolftalena. Se fundamenta en la actividad,
similar a una peroxidasa, de la hemoglobina en la sangre, para catalizar la oxidacin de la
fenolftalina (la forma reducida incolora de la fenolftalena) a fenolftalena, que es visible por su
color rosado brillante.
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1 Mtodo

2 Limitaciones

3 Mecanismo

4 Referencias

Mtodo[editar]
Una muestra que se presume contenga sangre es recolectada con una torunda. Se le agrega
una gota de reactivo fenolftalina, y despus de unos segundos, se aplica una gota de perxido
de hidrgeno a la torunda. Si la torunda se vuelve rosada rpidamente, se dice que la prueba
preliminar de sangre es positiva. Si se ha de esperar ms de 30 segundos, resultar en que
muchas torundas se vuelvan rosadas naturalmente, puesto que se oxidarn por su cuenta en
el aire.
Opcionalmente, la torunda puede ser tratada primero con una gota de etanol, con el fin de lisar
las clulas presentes, y ganar sensibilidad y especificidad. Esta prueba no es destructiva de la
muestra, que puede guardarse y ser usada en otras pruebas en el laboratorio; sin embargo,
pocos laboratorios usaran la misma torunda usada en la prueba de Kastle-Meyer en cualquier
otra prueba, optando en su lugar por usar una nueva torunda de la muestra original.

Limitaciones[editar]
Aunque se ha reportado que la prueba de Kastle-Meyer es capaz de detectar diluciones de
sangre hasta de 1:107, hay un nmero de limitaciones importantes para el test. La prueba dar
un resultado falso positivo en la presencia de peroxidasas vegetales, como los encontrados en
la cola de caballo, brcoli, coliflor, etc.1 Adicionalmente, otras especies oxidantes en la
muestra causarn un falso positivo. Oxidantes qumicos como las sales de cobre o
de nquel tambin causarn que el reactivo de Kastle-Meyer se vuelva rosado antes de la
adicin del perxido de hidrgeno, por lo que es de vital importancia agregar el reactivo
primero, esperar unos cuantos segundos, y luego agregar el perxido de hidrgeno.
La prueba de Kastle Meyer tiene la misma reaccin con la sangre humana que con cualquier
otra sangre basada en hemoglobina, as que debe realizarse una prueba confirmatoria, como
la prueba de Ouchterlony para concluir definitivamente de qu especie proviene la sangre.
Las pruebas catalticas de color son muy sensibles, pero no especficas. Un color positivo de
la prueba, solo, no debe ser interpretado como una prueba positiva de la sangre. Sin embargo,

un resultado negativo es generalmente prueba de la ausencia de cantidades detectables de

heme.

Mecanismo[editar]
La fenolftalena usada en esta prueba ha sido modificada de su forma convencional, en que
ha sido reducida por dos electrones, y predisuelta en una solucin alcalina. Esto se consigue
tpicamente hirviendo una solucin alcalina de fenolftalena con polvo de zinc, que reduce la
fenolftalena a fenolftalina. Con la reduccin, el color rosado intenso de la fenolftalena se
desvanece a un color amarillo dbil. Es en esta forma como est presente en los kits de la
prueba de Kastle-Meyer. Con el fin de general el color rosado intenso indicativo de una prueba
positiva, la fenolftalena reducida debe ser oxidada de vuelta a su forma coloreada normal.
En la reaccin relevante, el perxido de hidrgeno reacciona con la hemoglobina en la sangre.
La fenolftalena no participa en este primer proceso. En su reaccin con el perxido de
hidrgeno, el centro hemo de la hemoglobina sufre la reaccin de homlisis del enlace O-O:
HOOH + Fe3+[hemo] Fe4+=O[hemo] + OH + H+
Los productos de esta reaccin son un equivalente tanto de la especie de oxo hierro de
valencia alta, y el radical hidroxilo, cualquier de los cuales es capaz de oxidar la
fenolftalena reducida hacia la forma coloreada. La cantidad de cido producido en esta
reaccin es insignificante en comparacin con la concentracin de la base presente en la
solucin de reactivo de fenolftalina. Adems, esta reaccin de heme con perxido
es cataltica, haciendo de la prueba muy sensible a pequeas cantidades de sangre
presentes en la torunda de prueba.

Referencias[editar]
1.

Volver arriba Cox, M. (1991). A Study of the Sensitivity and Specificity of Four
Presumptive Tests for Blood. J. Foren. Sci. 36(5).

Ana Castello Ponce and Fernando A. Verdu Pascual. Critical Revision of Presumptive
Tests for Bloodstains. Forensic Science Communications. July
1999.http://www.fbi.gov/about-us/lab/forensic-sciencecommunications/fsc/july1999/index.htm/ponce.htm Culliford, B., The Examination and
Typing of Bloodstains in the Crime Laboratory. U.S. Government Printing Office, 1971.
Metropolitan Police Forensic Science Laboratory, Biology Methods Manual. 1978.
Saferstein, R., Forensic Science Handbook. Prentice Hall, Inc., 1982. Kirk, P.L., Crime
Investigation. John Wiley and Son, 1974. Gaensslen, R., Sourcebook in Forensic Serology,
Immunology, and Biochemistry. U.S. Government Printing Office, 1983.