2015-2 |

co Facultad de Qumica Dep

LABORATORIO DE
BIOLIXIVIACIN

MEJA PACHECO JOS ANTONIO

TREJO ARZATE RODRIGO
MANRIQUE ACOSTA MARIO
ORTIZ ARIAS CHRISTIAN ELIEL

BIOLOXIVIACIN DE CALCOPIRITA EN MEDIO CIDO

(PH=2) MEDIANTE THIOBACILLUS FERROOXIDANS

OBJETIVO
Determinar a travs de diferentes parmetros (pH, potencial, nmero de
bacterias) el proceso de biolixiviacin de un mineral (calcopirita) y
observar la concentracin de Cu y Fe en un medio MKM.
Observar y determinar las etapas de crecimiento bacteriano en el
proceso de biolixiviacin respecto al tiempo de experimentacin.
INTRODUCCIN
La biolixiviacin es un proceso en el cual se emplean microorganismos para
disolver los minerales, liberando un metal de valor presente en un mineral o en
un concentrado, que con mtodos convencionales sera muy difcil de extraer.
La biolixiviacin es el proceso convencional de lixiviacin, catalizado
biolgicamente pero aplicado a los minerales sulfurados, ante la necesidad de
aumentar la cintica de su disolucin. De esta manera la biolixiviacin es un
proceso qumico, mediado por el agua y oxgeno atmosfrico y un proceso
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biolgico, mediado por microorganismos. La biolixiviacin generalmente se

refiere a la tecnologa de biominera aplicada a metales base. Los metales base
son los metales relativamente fciles de oxidar o corroer y en el rea industrial
se refiere a los metales no-ferrosos, que incluye prcticamente a todos los
metales a excepcin del mismo hierro y su aleacin, el acero. A escala
comercial la biolixiviacin es aplicada para la recuperacin de cobre y uranio
por lixiviacin y de oro mediante un pretratamiento de minerales refractarios,
que recibe el nombre de biooxidacin. La tecnologa de biolixiviacin tambin
ha sido probada en laboratorios para sulfuros de cobalto, galio, molibdeno,
nquel, zinc y plomo.
Uno de sus principales exponentes es la bacteria Acidithiobacillus ferrooxidans,
aislada por primera vez desde las aguas de una mina de carbn, cuyo
descubrimiento se dio a conocer en 1947 (Colmer, A.R. y Hinkle, M.E, 1947). As
fue como se encontr la primera bacteria identificada capaz de lixiviar el cobre.
La Acidithiobacillus ferrooxidans, ha sido la bacteria ms estudiada para
biolixiviacin y por consiguiente de la que existe mayor informacin.
El impacto de la biotecnologa para distintos procesos ha conllevado a ciertos
adelantos en todo tipo de industria, en este caso, el impacto sobre la minera
ha sido drstico ya que se ha eliminado el uso de reactivos contaminantes y se
ha aumentado la cintica de reaccin a como se realizaba en los procesos
tpicos de hidrometalurgia, por ser un proceso netamente natural su impacto a
nivel ambiental es muy reducido y la generacin de residuos es baja, no as el
cambio en el pH que genera condiciones de acidez y que en entornos naturales
es perjudicial.
Algunos parmetros importantes a controlar para la experimentacin y para
cualquier proceso de biolixiviacin son el pH, la temperatura, la transferencia
de CO2 y O2 en el sistema y el medio de cultivo, todas las condiciones deben
ser las ptimas para la proliferacin del cultivo y por tanto el crecimiento de las
bacterias, lo cual acelerar la cintica de reaccin y por supuesto la extraccin
del in metlico del mineral; la extraccin tambin est relacionada al tamao
y forma de partcula, la porosidad y la refractaridad. stos son los nuevos retos
que est enfrentando la industria minera en la actualidad.
Crecimiento Bacteriano
El crecimiento bacteriano es la forma en la cual una bacteria se divide en
dos clulas hijas en un proceso llamado fisin binaria, la cual es una forma
de reproduccin
asexual que
se
lleva
a
cabo
en arqueo
bacterias, bacterias, levaduras de fisin, algas unicelulares, tvjs y protozoos.
Consiste en la divisin del ADN, seguidas de la divisin del citoplasma
(citocinesis), dando lugar a dos clulas hijas. Previniendo que no se produzca
ningn caso de mutacin las clulas hijas resultantes sern genticamente
idnticas a la clula original. De este modo tiene lugar la "duplicacin local" de
la poblacin bacteriana. Las dos clulas hijas creadas tras la divisin no
sobreviven necesariamente. Sin embargo, si el nmero de supervivientes
supera la unidad, en promedio, la poblacin bacteriana experimenta

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un crecimiento exponencial. La medicin de una curva del crecimiento

exponencial de las bacterias en un cultivo ha sido tradicionalmente una de las
formas para determinar el crecimiento bacteriano. Los procesos fundamentales
empleados para ello son la enumeracin bacteriana (conteo bacteriano) por
mtodos directos e individuales (microscopa, citometra de flujo), por mtodos
directos y masivos (biomasa), por mtodos indirectos e individuales (conteo de
colonias), o por mtodos indirectos y en bloque (nmero ms
probable, turbidez, absorcin de nutrientes). Los modelos permiten conciliar la
teora con las mediciones.
El crecimiento bacteriano en un cultivo de lotes se pueden modelar suponiendo cuatro fases
diferentes: fase de adaptacin, fase exponencial, fase estacionaria, y fase de declive.

Biolixiviacin de Calcopirita (CuFeS2)

Para lixiviar el sulfuro de cobre es necesario remover los electrones desde el
sulfuro, proceso que ayuda a romper la estructura del sulfuro y a liberar el
cobre contenido. Este proceso corresponde a la disolucin andica del sulfuro y
puede ser representada en este caso para la calcopirita, de acuerdo a la
siguiente reaccin electroqumica:
CuFeS2 Cu+2 + Fe+2 + S0 + 4e
La lixiviacin bacteriana de minerales de sulfuro se basa en el uso combinado
de dos oxidantes, in frrico y oxgeno. La semi-reaccin asociada a la
reduccin del oxgeno es:

O2 + 4H+ + 4e 2H2O
Sin embargo, la velocidad de oxidacin de in ferroso en condiciones abiticas
es muy lenta para ser considerada una alternativa tecnolgica atractiva. Por
otro lado la oxidacin de in ferroso con oxgeno es fuertemente catalizada en
presencia de microorganismos lixiviantes.
DESARROLLO EXPERIMENTAL
Para determinar el crecimiento bacteriano y por consiguiente la biolixiviacin
del mineral, se realizaron 4 pruebas de laboratorio semanales en las cuales se
determinaba el pH, el potencial, el conteo de bacterias y la concentracin de
cobre y hierro, en las soluciones.
En el caso de nuestro equipo se utilizaron minerales concentrados de sulfuros
de cobre (CuFeS2) (calcopirita) con las siguientes leyes:

%C
u
%F
e
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16.9
8
15.3
8

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CONDICIONES

Medio de cultivo: MKM

pH: 2
Temperatura: 25 C
Se prepararon 500ml de medio de cultivo MKM a pH 2 con las siguientes
caractersticas:
Tabla1.- Especificaciones para
preparacin de cultivo MKM
Reactivo
Concentracin g/L
(NH4)2SO4
0.4
MgSO47H2O
0.4
K2HPO3 anhidro 0.04
1. En primera estancia y para asegurar condiciones iniciales homogneas
en todos los experimentos se ajusta el peso de cada una de las muestras
(concentrado de sulfuro de cobre (CuFeS 2) testigo y muestra a pH=2)
con solucin MKM debido a la evaporacin del agua por efecto de la
temperatura.

2.

Para realizar los anlisis qumicos con los cuales se pretende determinar
las variaciones de concentracin en las muestras de concentrado de
sulfuro de cobre (CuFeS2) testigo y con solucin a pH=2, se toma 1ml de
cido sulfrico y 1ml de la solucin lixiviada con bacterias previamente
filtrada y se afora con agua destilada en un matraz de 25ml.
Posteriormente se almacena en un frasco para el posterior anlisis
qumico.

3. Dado que como sub producto de la reaccin qumica de la biolixiviacin

se ve afectado el pH de la solucin y el potencial se analiza el pH y
potencial (mV) directamente.

4. Para determinar directamente el nmero de bacterias se contar al

microscopio con la ayuda de cmaras especiales que albergan un
volumen conocido de lquido. El recuento directo al microscopio es
tedioso, pero es una forma rpida de estimar el nmero de clulas
microbianas. Sin embargo, presenta algunas limitaciones:
No se pueden distinguir las clulas vivas de las clulas muertas.
Las clulas muy pequeas son difciles de contar.

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 La precisin es difcil de lograr

El mtodo no es adecuado para suspensiones celulares de baja densidad, es
decir las soluciones deben contener aproximadamente 107 clulas/mL o ms.
A continuacin se desarrolla, el recuento directo al microscopio utilizando la
cmara Neubauer. En este mtodo la suspensin de la muestra se coloca en la
cavidad cuadriculada de dimensiones conocidas de la cmara, y se tapa con el
cubre objetos. Como se conoce el rea de las cuadrculas y la altura de la
cmara de recuento, el volumen ocupado por la suspensin en cada cuadrcula
queda determinado. Por tanto, para obtener el nmero de bacterias por mililitro
de suspensin, todo lo que se requiere es contar el nmero de
microorganismos en varias cuadriculas, calcular el promedio de recuento por
cuadrcula y multiplicar este promedio por el factor correspondiente.
Se realiza el conteo colocando un portaobjetos sobre la cmara Neubauer y
posteriormente con una pipeta se trata de dejar que el lquido penetre entre la
cmara y el cubreobjetos, por capilaridad se llenar la cmara con la solucin a
lixiviar. Si se presentan burbujas dentro de la cmara se repite el paso 5

Imagen 1. Cmara de Neubauer

5. La muestra es llevada al microscopio para el conteo de bacterias. Existe
una convencin por la cual si las bacterias tocan el lmite superior o el
lmite izquierdo del cuadro, deben contabilizarse, pero no se contabilizan
si tocan el lmite inferior o el lmite derecho. El conteo es llevado a cabo
varias veces para obtener un promedio.

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Imagen 2. Conteo en cmara de Neubauer

RESULTADOS
Grfico 1. Muestra la variacin del pH respecto al tiempo a un pH inicial=2.

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Cambio pH concentrado (pH=2)

concentrado
blanco

Grfico 2.- Muestra la relacin del potencial respecto al tiempo.

Cambio potencial (mV)

blanco
concentrado

Imagen 3.- Muestra la cantidad de bacterias contadas en un campo utilizando

la cmara Neubauer.

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Dimensiones campo o rejilla= 0.05mm*0.2mm=0.0025mm2=1/400

Profundidad=1mm
#bacterias/ml=clulas contadas*f

f =2.5 x 105

Grfico 3.- Muestra la cantidad de bacterias contadas en un campo utilizando la

cmara Neubauer.

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Bacterias/ml

Grfico 4.- Muestra la relacin de concentracin de cobre entre la muestra sin

bacterias (blanco) y con bacterias (concentrado).

Concentracin [Cu]

concentrado
blanco

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Grfico 5.- Muestra la relacin de concentracin de hierro entre la muestra sin

bacterias (blanco) y con bacterias (concentrado).

Concentracin [Fe]

concentrado
blanco

ANLISIS DE RESULTADOS
La fuerza termodinmica conductora para la disolucin de un sulfuro es la
diferencia de potencial entre la semi-reaccin asociada al sulfuro y al oxidante,
E, la cual impulsa la transferencia de electrones desde el sulfuro al oxidante,
en la grfica numero 2 vemos un claro ejemplo de lo antes mencionado donde
la solucin con bacterias tiene un potencial un poco ms elevado, lo cual indica
una cintica mayor para la solucin concentrada.
En el grafico 1 se indica que el pH se mantuvo controlable en un rango de 2-3
tanto para el concentrado como para el blanco con esto se busca no alterar las
condiciones de las bacterias.
Dada la fuerte influencia cataltica de los microorganismos que lixivian en la
oxidacin del in ferroso, la lixiviacin del mineral de sulfuro es conducida por
los electrones liberados del mineral de sulfuro de cobre y estos son aceptados
por el in frrico lo cual resulta en la disolucin del sulfuro y en la formacin
del in ferroso. Simultneamente, con la ayuda de la bacteria el in ferroso
est continuamente transfiriendo electrones al oxgeno disuelto, el cual
regenera el ion frrico y produce agua, de acuerdo a la reaccin global:
1/2O2 + 2Fe+2 + 2H+ 2Fe+3 + H2O
El in frrico acta como un oxidante intermedio el cual es continuamente
consumido y generado. El oxgeno no ataca directamente el sulfuro pero
entrega una fuerza directora termodinmica estacionaria para la disolucin del
sulfuro y acta como el aceptor final de electrones liberados desde el sulfuro.
La reaccin global para el caso de la lixiviacin de la calcopirita:

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O2 + CuFeS2 + 4H+ Cu+2 + Fe+2 + 2S0 + 2H2O

CONTEO DE BACTERIAS
Se puede observar que en los primeros 15 das se tiene la etapa de adaptacin
de las bacterias con un incremento muy pequeo de bacterias, despus se
tiene un crecimiento exponencial los siguientes 5 das teniendo la etapa de
crecimiento, podemos observar un incremento de

2 x 107 bacterias .

Durante los siguientes 20 das hay una etapa de muerte de bacterias pero esto
puede ser debido a que no se tuvo un anlisis durante aproximadamente 20
das (dia20-40) y no se suministr el medio de cultivo necesario para que las
bacterias se reprodujeran.
Despus del da 50 se tiene un decaimiento en la grfica que pertenece a la
etapa de muerte de bacterias.
CONCLUSIONES

Mediante los resultados obtenidos ms claramente de la grfica nmero

2, podemos concluir que a medida que la reaccin de lixiviacin procede
la razn Fe+3/Fe+2 en solucin decae el potencial y EFe+3/Fe+2 cambia a
potenciales ms catdicos. Por otro lado, Cu+2 crece y ECu+2/CuS cambia a
potenciales ms andicos. Consecuentemente la fuerza conductora para
la disolucin de sulfuro, E, decae con el tiempo de lixiviacin. Para que
el proceso de lixiviacin sea mantenido eficientemente es necesario
mantener la fuerza conductora termodinmica en su mximo lo cual es
logrado por las bacterias catalizando la re-oxidacin de in ferroso con
oxgeno.
La concentracin de hierro se muestra muy cercana a cero respecto pasa
el tiempo de experimentacin, esto se debe a que se forma hidrxido de
hierro el cual se queda en el filtrado de la solucin y es por eso que el
fierro en forma de in es muy poca respecto al paso de los das.

REFERENCIAS

https://www.codelcoeduca.cl/procesos_productivos/escolares_biolixiviacio
n.asp
http://www.educarchile.cl/ech/pro/app/detalle?id=204867
I.J. Corrans et. al. Bacterial leaching: an introduction to its application
and theory and a study on its mechanism of operation. Institute of
mining and metallurgy. South Africa. 1972 pp.221-222
D. Preston, Natarajan K. A. Bacterial leaching. Resonance. 2004. Pp 2728

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