Coloracin BK

Juego de soluciones para la coloracin de micobacterias segn Ziehl-Neelsen para microscopa

PRINCIPIO
La tincin de Ziehl-Neelsen es una tcnica de tincin diferencial que se
basa en que las paredes celulares de ciertos parsitos y bacterias
contienen cidos grasos (cidos miclicos) de cadena larga (50 a 90
tomos de carbono) que les confieren la propiedad de resistir la
decoloracin con alcohol-cido, despus de la tincin con colorantes
bsicos. Las micobacterias absorben los colorantes slo muy lentamente
debido a la elevada proporcin de ceras y lpidos en la pared celular. Para
acelerar la absorcin del colorante fucsina y as la formacin del complejo
micolatofucsina en la pared celular, se calienta la solucin de fucsina
fenicada aplicada sobre el preparado normalmente hasta formacin de
vapores. Una vez las micobacterias han absorbido el colorante,
difcilmente lo ceden a pesar del tratamiento con solucin decolorante
Alcohol-Acido Clorhdrico. Por esto se denominan Bacilos alcohol cido
resistentes o BAAR y aparecen en el preparado microscpico teidas de
rojo, mientras que todos los microorganismos no resistentes a los cidos
se tien de acuerdo con la contratincin.

MUESTRAS
El material a examinar, como esputos, biopsias por aspiracion con aguja
fina, lquidos de lavados, pus, exudados, pus, material de cultivos lquidos
y slidos. Despus de secar al aire se procede a la fijacin por calor, para
lo que se pasa 3 veces, lentamente, el lado inferior del portaobjetos (la
parte del frotis queda arriba) por la parte superior de la llama de un
mechero Bunsen. Luego se deja enfriar y se tie.
Toda muestra biolgica
potencialmente infecciosa.

FUSCINA FENICADA B.K. Listo para su uso

7.4 g/l
5%
10%
85%

ALCOHOL ACIDO SOLUCION DECOLORANTE B.K.

-Listo para su uso
Acido Clorhidrico R.A.
Alcohol Etlico al 96%

AZUL DE METILENO SOLUCION Segn Loeffler

Listo para su uso
9 g/l
23%
0.01%
67%

Micobacterias alcohol-cido resistentes

Rojos

Otros grmenes o clulas y fondo

Azules

CONTROL DE CALIDAD
Los controles pueden realizarse con bacilos alcohol cido resistentes.
NOTAS SOBRE EL EMPLEO

PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS

La solucin R1 Fuscina Fenicada B.K. y la solucin R3 Azul de

Metileno Solucin segn Loeffler son irritantes en contacto con piel,
ojos y mucosas.

La solucin R2 Alcohol Acido Solucin Decolorante B.K. es

inflamable, por lo tanto se deben tomar los cuidados requeridos para
el manejo de productos inflamables en el laboratorio.

Observe la simbologa en los rtulos de las soluciones.

Las soluciones usadas y las caducadas deben eliminarse como

desechos especiales, debiendo cumplir las regulaciones locales para
el desecho de compuestos peligrosos.

La tcnica descrita anteriormente puede modificarse de acuerdo con las

preferencias del operador para lograr mayor o menor intensidad de coloracin,
lo cual implica variaciones en los tiempos de tincin, decoloracin, lavado,...
Algunas drogas utilizadas en el tratamiento de la tuberculosis, hacen perder la
cido-resistencia de los bacilos, observndose esta caracterstica de las cepas
sensibles a la isoniazida y a la alfa etiltioisonicotinamida (ethionamida).
Asimismo, es importante controlar la fijacin por el calor (dos-tres pasos de un
segundo por llama suave); un exceso del mismo puede dar coloraciones
errneas.
Agua altamente clorada puede debilitar la coloracin de contraste.

BIBLIOGRAFA
1.Gurr,E., Syntethic dyes in Biology, Medicine and Chemistry. Academic Press, London, New York. (1971).
2. Clark, George, Stains and staining (Microscopy), 4th edition, Williams & Wilkins, (1981).

ndice de Smbolos

MATERIALES ADICIONALES REQUERIDOS NO SUMINISTRADOS

Microscopio
Portaobjetos
Cubreobjetos
Cubeta de tincin

como

Un hallazgo positivo significa presencia de bacilos Alcohol cido

resistentes y un hallazgo negativo significa ausencia de bacilos alcohol
cido resistentes. No se puede diferenciar si se trata de micobacterias de
la tuberculosis o de otras micobacterias, tampoco resulta posible verificar
si se trata de bacterias activas o muertas. De encontrarse micobacterias,
deberan realizarse anlisis ulteriores en un laboratorio especial.

CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD

Las soluciones deben almacenarse entre 15C y 30C y protegidos

de la luz. Despus de abierto el contenido almacenado entre 15C y
30C y protegidos de la luz es estable hasta la fec ha de caducidad
indicada en la etiqueta.

Temperaturas inferiores a 15C puede precipitar co lorantes de las

soluciones colorantes.

Los frascos deben mantenerse siempre bien cerrados.

considerada

RESULTADO

20%
80%

Azul de Metileno R.A.

Alcohol Etilico al 96%
Potasio Hidroxido
Agua desmineralizada tipo II

se

PROCEDIMIENTO
1. Secar la preparacin (Placa) a temperatura Ambiente
2. Fijarla por calor.
3. Cubrir la preparacin (Placa) con
FUSCINA FENICADA B.K.
4. Calentar por 5 minutos suavemente (no dejar hervir) hasta obtener
vapores renovando el colorante a medida que se evapore.
5. Lavar con agua corriente. Eliminar el exceso de agua.
6. Decolorar con Alcohol Acido B.K. hasta que la solucin de lavada
salga incolora.
7. Lavar con agua corriente. Eliminar el exceso de agua.
8. Cubrir la preparacin con Azul de Metileno segn Loeffler por un (1)
minuto.
9. Eliminar el exceso y dejar secar al aire.

CONTENIDOS
Fuscina Bsica R.A.
Fenol R.A.
Alcohol al 96%
Agua Desmineralizada tipo II

debe

Frasco lavador
Agua
Mechero
Cronometro y/o timer

Producto para
diagnstico
in-vitro

Referencia o
Cdigo

Pruebas
por Kit

Para usar
consulte las
instrucciones

Precaucin
Consultar las
instrucciones

Fabricante

Nmero de Lote

Fecha de
Caducidad

Fecha de
Fabricacin

Limite de
Temperatura

Riesgo Biolgico

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