ESTUDIO MICROBIOLOGICO, DE TALCOS PARA USO HUMANO Emilia Maria Valenzuela de Silva, Quimica Farmacéutica, Profesora Asistente, Departamento de Farmacia, Universidad Nacional. Luz Helena Nuiiez y Martha Inés Gomez, estudiantes de tesis. RESUMEN, ‘Se desarrollo una técnica para determinarla calidad mi crobiol6gica de los tals para uso humano. Por medio de cesta técnica se evalué el grado de contaminacién de 14 mmuestras de productos de fabricacién nacional. Todas las Imuestras se encontraron dentro de los limites establec- ‘dos en cuanto al numero de microorganismos viables por ‘gramo. De las 14 muestras estudiadas, tres mostraron ‘contaminacién con Staphylococcus aureus. SUMMARY A technique for the microbiological examination of tale powder was developed. Fourteen samples of products ‘made in Colombia were evaluated by means of this techni- ue. All the samples met the requirements relating the number of viable microorganisms. Three samples were contaminated with Staphylococcus aureus. INTRODUCCION El conocimiento cada vez més amplio de la trans- mision de enfermedades a través de los cosméticos hha determinado que un buen mimero de paises con- sidere la necesidad de someter estos productos a ciertos estudios encaminados a evaluar tanto su ca- lidad como su inocuidad. La importancia dei control microbiolégico de los cosméticos radica en dos razones: lo. Seguridad del consumidor desde el punto de vista de su satud. 20. Estabilidad del producto. En [a formulaci6n de los talcos para el cuerpo se utilizan componentes minerales, vegetales y sintéti- cos; éstos son: talco, carbonato de magnesio, car- bonato de calcio, trisilicato de magnesio, 6xido de zine, 6xido de titanio, caolin, tierra de diatomeas, almid6n de maiz, estearato de zinc, estearato de magnesio, preservativos y perfumes. Estos componentes influyen en la calidad del pro- ducto final seguin su origen, tratamiento de purifica- cién, condiciones de almacenamiento y tipo de em- paque. Otro factor que influye en la calidad microbiol6- gica de los talcos es el proceso de fabricacién, en el cual hay que considerar los operarios, la maquina- ria, el agua y el aire. La cantidad de microorganismos en los talcos es relativamente baja por la carencia de agua. Otra causa de la escasa contaminacién que frecuente- ‘mente presentan estos productos es el efecto adver- so que algunos de los componentes de la formula- cién, como los perfumes y el carbonato de magne- sio, ejercen sobre algunos microorganismos. Los siguientes géneros de microorganismos han sido clasificados como peligrosos para la salud del usuario cuando se encuentran presentes en los cos- méticos porque pueden causar infecciones: Pseudo- monas, Proteus, Staphylococcus, Streptococcus, Clostridium, Serratia, Penicillium, Aspergillus, Candida y Monilia (1). Existen algunas normas relacionadas con la con- taminacién microbiana de productos farmacéuticos fo estériles; asi la USP XX dispone que los mi- croorganismos que definitivamente no deben estar presentes en los productos farmacéuticos no estéri- les, ya que son un riesgo potencial para la salud, son Pseudomonas aeruginosa, Salmonellasp. Staphyto- coccus aureus, Escherichia coli (2). La CTFA (Cos- metic Toiletry And Fragance ACT) admite 100- 1000 microorganismos aerobios viables por gramo (3). La FDA (Food and Drug Administration) ad- mite igualmente 100-1000 microorganismos aero- bios viables por gramo (4). Por su parte la TPF (Toi let Preparation Federation) habla de un numero menor 0 igual a 100 microorganismos aerobios via- bles por gramo, libre de Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus y Candida albicans. En cuanto a los efectos adversos producidos por el crecimiento de los microorganismos en los talcos y en cosméticos en general, pueden citarse la deco- loraci6n, la aparicién de malos olores y la deforma- cién del empaque por la producci6n de gas; ademas de lo anterior, la aparicion de hongos puede ser des- concertante para el consumidor. 33El peligro de un cosmético contaminado es mayor cuando la contaminacién no es observable, puesto que puede ser utilizado sobre quemaduras o epite- lios dafiados y causar infecciones. El método mas recomendado para reducir el mi- mero de microorganismos iniciales en los talcos es el empleo de radiaciones gamma (5) En los tltimos afios se han escrito muchos articu- los sobre la contaminacién microbiana de los cos- méticos y sobre los métodos empleados para deter- minarla Los ensayos realizados para determinar el nime- ro de microorganismos por gramo reportan el uso de diluentes a los cuales se les adicionan sustancias que bajan la tensi6n superficial del agua, asi como humectantes. Estos iiltimos son necesarios debido al poder adsorbente de los talcos los cuales pueden retener los microorganismos dando como resulta- dos datos de recuentos que no son confiables, ‘También es necesario inhibir los preservativos y la posible acci6n bactericida de algunos de los com- ponentes de Ja formulacién como el carbonato de magnesia y los perfumes. Entre los diluentes ensayados se encuentran: so- lucidn salina, solucin Ringer, buffer de fosfatos, agua peptonada. Los humectantes mas usados son: Tween 20, 60, 80, citrato de sodio y monoestearato de glicerilo, Un solvente que ha dado buenos resultados es el compuesto por buffer de fosfatos, solucién salina y ‘Tween 80 (3). Segiin otros autores se mejoran los resultados si el solvente para suspender las muestras contiene, ademas de Tween 80, peptona de caseina y lecitina de soya (6, 7, 8). El presente trabajo tuvo como objetivos desarro- lar una técnica adecuada que permita evaluar la ca- lidad microbiolégica de los talcos para el cuerpo y determinar el grado de contaminacién microbiol6- gica presente en aigunos de ellos. PARTE EXPERIMENTAL Muestras analizadas, composici6n y nomenclatu- ra adoptada MucstraNo. Composicién 1.2.34 Taleo, carbonato de magnesio, perfume $6 Taleo, triclorohidrofenileter, perfume 2 Acido brio, coruro de benzalconio, 6xi- do de zine, almidén de matz, talco. 34 9 Talco, almidén de maiz, écido b6rico, 6xi- do de zine, Irgasan DP 300, aceite de euca- Jipto, alcanfor, aceite de maiz, aceite mi- neral 10 Oxido de zine, dcido borico, Irgasan, alcan- for, taleo, almidén de mata. n Talco, undecilinato de zinc, almidén de majz, perfume, triclosan, men(ol, estearato de magnesio. 2 , Oxido de zinc, estearato de magne- sio, slice, carbonato de magnesio, per- fume, B Taleo, perfume. 4 Taleo, éxido de zine, perfume. Inhibicién del preservative 4) Porel método de las diluciones De una muestra de talcos, escogida al azar pero que contenia preservativo, se pesaron 10 gramos en condiciones asépticas, se suspendieron en 90 ml de agua y se diluyeron en solucién salina hasta 10°", De cada dilucién se sembr6 1 ml en agar nutritivo por el método de vertido en caja. Las cajas se incu- baron a 37°C durante 24 horas. Después de este iempo no se observe crecimiento en ninguna de las diluciones, b) Por el empleo de diferentes solventes Como el método de las diluciones no dié buen re- sultado se ensayaron los siguientes solventes, con el objeto de inhibir el preservativo: a) Solucién de buffer de fosfatos pH 7.2 (0.25M). b) Solucién de ‘Tween 80 (2%). ¢) Solucin de peptona al 2% y Tween 80 (5%). Para comprobar la eficacia de estos solventes como inhibidores del preservativo se utilizé un cul- tivo de Staphylococcus aureus con el cual se conta. miné la muestra a ensayar. El crecimiento se evalué en forma cualitativa y se encontraron los mejores resultados con la soluci6n de Tween 80 al 2%, puesto que el nimero de colo- nias fue similar a que se hall6 en el experimento efectuado sin talco y por lo tanto sin preservativo, Eleccién del solvente para suspender Ia muestra Se ensayaron diferentes solventes de los reco- mendados por Ia literatura. El mejor resultado se obtuvo con una solucin de peptona de caseina (2%), lecitina de soya (0.5%) y Tween 80 (2%) ‘Tiempo y temperatura de agitacién Se ensayaron dos temperaturas: 36° y 45°C y dife- rentes tiempos: ia, 1, luz, 2y 12 horas. Las condicio- nes 6ptimas fueron Lia horas a 36 6 45°C. Entre es- tas dos temperaturas no se encontraron diferencias notorias.‘Método de recuento para microorganismos aerobios y anacrobios Se ensayaron los métodos de vertido en placa y el del ntimero més probable. Para bacterias se escogié el del mimero mas probable (NMP) porque debido a labaja contaminacién de los talcos, el crecimiento en las cajas, cuando se utiliza el método de vertido, no ¢s significativo. Para el recuento de hongos se ensay6 el método de vertido en placa en Agar Sa- bouraud, En los diagramas niimeros 1, 2, 3 y 4 se encuen- tran anotados los pasos seguidos en los ensayos rea- lizados. RESULTADOS Los resultados obtenidos en la determinacién del grado de contaminacién microbiana de algunos tal- os para el cuerpo estan consignados en las tablas 1, 2y3. En ninguna de las muestras se encontré Salmone- Ua sp., Escherichia coli, ni Pseudomonas aerugino- sa, En las muestras 1, 9 y 13 se encontré Staphylo- coccus aureus, DIAGRAMA No. 1 METODO PARA RECUENTO DE MICROORGANISMOS AEROBIOS MESOFILOS VIABLES —l ae remains tkeioone = eer ator Ld Scent, | [semgesamom | [ices See BES} [EES —L DIAGRAMA No. 2 IDENTIFICACION DE SALMONELLA SP. Y ESCHERICHIA COLI. Sears eco c= L LT L L Fetes mre] [oacumrn reopen] LL Sacer sae sant = DIAGRAMA No. 3 IDENTIFICACION DE STAPHYLOCOCCUS AUREUS Y PSEUDOMONAS AERUGINOSA L L — M—_ STAPHYLOCOCCUS AUREUS PSEUDOMONAS AERUGINOSA Awrcenapansony Sona: Aaa Cana L L Le ns L Emaode cui e Ermine eins 35DIAGRAMA No. ¢ METODO PARA RECUENTO DE ANAEROBIOS “SULFITO REDUCTORES” L Sa. {st — ee” TABLA No. 1 NUMERO DE MICROORGANISMOS MESOFILOS AEROBIOS POR GRAMO. METODO NMP. Muestra Miczoorg/| TABLA No. 2 NUMERO DE MICROORGANISMOS ANAEROBIOS SULFITO-REDUCTORES, POR GRAMO. METODO NMP. 36 TABLA No.3 RECUENTO DE HONGOS -METODO DEL VERTIDO EN PLACA Tita Hongo] Wasa Hoga DISCUSION DE RESULTADOS 1. Elrecuento de bacterias por el método de verti- do en placa, cuando se analiza Ia calidad micro- biolégica de los talcos cosméticos, presenta dos problemas a saber: a. Noes lo suficientemente sensible b. Puede prestarse a confusiones, conduciendo logicamente a la obtencién de resultados fal- S08, ya que las particulas de talco pueden confundirse, en algunos casos, con colonias de un determinado microorganismo, lo mis- mo que una colonia puede confundirse con ‘una particula; por las dos tazones anotadas anteriormente, es recomendable que cuando se trate de analizar microbioldgicamente muestras que posean una carga microbiana baja como los talcos, se utilice un método que obvie estas dificultades como el método de! miimero més probable, NMP, que se adapta para esta clase de muestras, dando resultados reales. 2. Cuando se desea evaluar la calidad microbiolé- gica de sustancias insolubles en agua, como es el caso de los tacos, es necesarios elaborar una suspensi6n con un diluente apropiado y adicio- nar ademds minimas cantidades de algunas sus- tancias humectantes cdmo el tween 80, lo mismo que otros componentes como la peptona y la le- citina de soya; estas dos diltimas para brindar a los microorganismos posibilidad de regenera- cién. 3. La diluci6n de la muestra sirve para disminuir la actividad del preservativo y resuelve ademas el problema de la adsorci6n de algunos microorga- nismos por las particulas de talcos, mediante una adecuada agitaci6n de la suspensién la cual per- mitiré en primer lugar la liberacién de los mi: croorganismos y ademés la toma de una muestr homogénea adecuada, para un correcto andlisis cuantitativo. Esta es otra de las razones por las cuales el método de! ntimero més probable es més efectivo para el recuento de microorganis- mos en talcos, 4. Para una correcta evaluacién de un talco cosmé- tico se debe hacer la determinaci6n de microor-ganismos sulfito reductores por el método de niimero mds probable, NMP, en condiciones de anaerobiosis estricta. Los taleos cosméticos, como producto termina- do, pueden resultar autopreservados por dos ra- zones primordiales: a. Las condiciones desfavorables como la esca- sa cantidad de agua y nutrientes, la cual limi- ta la proliferacion de microorganismos por las condiciones inhéspitas que encuentran en ellos. b. La actividad antibacteriana que poseen algu- nos de los componentes de su formulacién ‘como son los perfumes y el carbonato de ‘magnesio, la cual se sinergize cuando estos ‘componentes se encuentran asociados 6. De las 14 muestras analizadas para el recuento de acrobios por el método del nimero probable, cinco presentaron una contaminacién menor al Ifmite inferior establecido por la CTFA, la FDA ylaTPF. Las nueve muestras restantes presenta- Ton contaminacién dentro de los limites estable- ccidos, de 100 a 1000 microorganismos viable por gramo, 7. Solo cinco muestras de las 14 analizadas presen- taron contaminacién con hongos. Esta contami- naci6n es muy baja, menor de 30 microorganis- ‘mos por gramo de muestra. 8. En tres muestras de talcos se comprobs la pre- sencia de Staphylococcus aureus; estas muestras len con las normas de la USP y la TPF. icroorganismo proviene posiblemente de operarios portadores. BIBLIOGRAFIA Mc CARTHY T.J., Cosmetics and Toiletries, 95, 23-27, 1980. The United States Pharmcopeia, XX revision, United States Pharmacopeial’ Convention, Mack Printing Co. , 1985. FERREIRA J.M., and FREITAS Y.M., Cos- metics and Toiletries; 91, 19, 1976. F.D.A. Bacteriological Analytical Manual, Chapter XXIII, Microbiological Methods for Cosmetics, Joseph M. Modden, Divisién of Mi- crobiology, Food and Drug Administration, 1979. 5. 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