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EMBRIOGENESIS SOMATICA
Eder Durango Ballesteros, Maracay 2010
INTRODUCCION
El cultivo de tejidos y la regeneracin de plantas en diferentes especies han tenido
serias dificultades relacionadas con la eficiencia y la repetibilidad. Las clulas pueden
ser inducidas a un estado embriognico por una variedad procedimientos que
generalmente incluyen exposicin de la planta a reguladores de crecimiento, shock de
pH, shock trmico o tratamiento con sustancias qumicas, pero el nmero de clulas
que responden es limitado, esta respuesta est determinada por factores:
Estructurales (Simetra Celular, Polaridad del embrin), Fisiolgicos (Disposicin del
tejido, calidad de la luz) y la composicin y concentracin de los reguladores de
crecimiento en el medio de cultivo, los cuales son determinantes para la formacin y
regeneracin de plantas en los sistemas de cultivo de tejidos. La adicin de
reguladores de crecimiento es la va para inducir respuesta morfogenticas in vitro en
la mayora de los cultivos de tejidos de plantas
Los niveles endgenos de reguladores de crecimientos, es uno de los elementos
cruciales en la determinacin del potencial embriognico de los explantes, dicha
respuesta para inducir Embriognesis Somtica (ES) es muy diversa y dependen de la
especie; es frecuente observar en un mismo explante que clulas genticamente
idnticas, responden diferencialmente a estmulos particulares, originndose varios
cambios en la reprogramacin de las clulas, a clulas embriognicas competentes.
Por esta razn los niveles endgenos de hormonas y su relacin con la competencia
embriognica de los explantes pueden ser la clave para la induccin y expresin de
embriognesis somtica en genotipos recalcitrantes. Las auxinas son consideradas
como las hormonas ms importantes en la regulacin de la ES, esta regulacin ocurre
con el establecimiento de un gradiente de auxina durante la fase de induccin, ambos,
tanto el nivel endgeno, como la aplicacin de cantidades exgenas, son
determinantes en la etapa de expresin e induccin de ES. Se ha observado que el
transporte polar de auxinas es esencial para el establecimiento de una simetra
bilateral durante la embriognesis en embriones somticos y cigticos en
dicotiledneas, esto tambin se ha demostrado para embriones cigticos de
monocotiledneas. Niveles endgenos de ABA tambin perecen ser significativos para
la iniciacin de cultivos embriognicos en algunas monocotiledneas, como inhibidor
de germinaciones precoces cuando se usa como explante embriones cigticos
inmaduros, favoreciendo esto la formacin de callo (Jimnez, 2001, 2005)
NIVELES ENDGENOS DE AUXINAS
Uno de los mayores problemas en la produccin de plantas gimnospermas derivadas
de ES, es el prolongado periodo de proliferacin, adems de los efectos en la
maduracin del embrin y que no todos los cultivos embriognicos iniciados de igual
forma producen el mismo rendimiento. Estas desventajas limitan a algunas conferas
para incluirlas en un programa de mejoramiento. Para mejorar el sistema de
endgena puede ser requerida solo en la primera fase de la ES, induciendo las clulas a
una embriognesis somtica, y esta puede continuar en ausencia de auxina exgena.
Los efectos de diferentes factores en la embriognesis y la regeneracin de plantas de
embriones maduros de genotipos de trigo resultan normalmente en callos, pero la
regeneracin de stos a plantas resulta fallida, por ello Filippov et al, 2005, se
propusieron determinar las condiciones optimas para una efectiva induccin de callos
y regeneracin de plantas a partir de embriones maduros de trigo derivados de callos,
estudiando 6 cultivares de trigo en dos estaciones, Primavera e invierno, aplicando 5
concentraciones (6,8,10,12,14 mg/L) de 3 auxinas(2,4-D; 2,4,5-T y Dicamba),
observaron que las mayores porcentajes el mayor numero de brotes por callo se logra
con concentraciones de 12 mg/L de Dicamba, a los 21 das. Ensayos adicionales
suplementado el medio MS con Dicamba 12 mg/L y AIA, IBA y NAA en concentraciones
de 0,1; 0,5; 1,0 y 5,0 mg/L, se logra un efecto positivo en el porcentaje de callo
embriognico formado, mientras que el nmero de brotes no fue afectado. El mejor
porcentaje de callo embriognico se observ con la adicin de 0,5 mg/L de AIA con
Dicamba; las respuestas diferenciales de especie a las estaciones es significativa,
manifestndose que en invierno todos los cultivares estudiados mostraron una
disminucin en la formacin de callos embriognicos, a diferencia de la primavera
donde se obtuvieron los mejores porcentajes de callos embriognicos.
La embriognesis somtica ha sido usada en muchas especies conferas y frutales,
incluyendo Pino (pinus taeda) y nogal (Junglans regia L.). Las especies conferas como
el pino presentan recalcitrancia para cultivo de tejidos por va embriognesis somtica.
La ES en general incluye 4 estados, induccin, proliferacin, maduracin y
germinacin, la baja eficiencia de los embriones para pasar de estados y conversin a
planta es el mayor problema en muchas especies, incluyendo nogal y plantas
maderables como los pinos. Vales et al, 2006, estudiaron el efecto del cido Abscico
(ABA) en la maduracin de embriones somticos, encontrando que el ABA juega un
papel importante en la maduracin de embriones cigticos y somticos en conferas.
Se ha demostrado que en estados tempranos de la ES la mayora de las conferas
requiere entre 20 a 50 M de ABA exgena, para desarrollar el estado cotiledonal. El
desarrollo de embriones somticos, depende en gran medida de la concentracin
endgena de ABA, el aumento del tiempo de maduracin de los embriones somticos
a 4 meses, increment en rendimiento y la germinacin de los embriones de 22 a 66%.
De igual forma Vadhati et al, 2008, estudiaron el efecto de de la adicin al medio de
maduracin de 6 concentraciones de ABA(0, 0.5, 1, 2, y 3 mg/L) y 3 concentraciones
de sacarosa(3, 4, y 6%), encontrando que el mejor tratamiento para germinacin de
embriones somticos, en el cual se produce brotes y races es cuando se usan
concentraciones de ABA de 2 mg/L, resultando en la conversin del 41% de los
embriones en plantas. La regeneracin disminuye cuando se usan altos niveles de ABA
exgena, producindose solamente brotes apicales y no races. La mejor concentracin
de sacarosa fue la del 4%, incrementando significativamente el nmero de embriones
secundarios. Se ha comprobado que la sacarosa tiene poca influencia en la maduracin
de los embriones. El acido Abscsico es esencial para la acumulacin de sustancias de
reserva y la sincronizacin de la maduracin de embriones somticos.
REFECENCIAS BIBLIOGRAFICAS
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