Qumica Analtica

Unidad 4. Mtodos espectrofotomtricos

4.1. Espectrofotometra

BUENAS PRCTICAS DE USO DEL ESPECTROFOTMETRO

Las partes generales que integran un espectrofotmetro son:

a) Fuente luminosa
b) Monocromador
c) Cubetas, celdas o tubos para contener la muestra
d) Detector
e) Medidor
Existen diferentes tipos de fuentes de radiacin, siendo las ms comunes para los trabajos en las regiones
visibles e infrarroja cercana, las lmparas incandescentes de tungsteno o tungstenyoduro. Las fuentes de
gases luminosos son las que se utilizan para proporcionar emisiones ultravioleta, por ejemplo las lmparas de
hidrgeno o deuterio.
El monocromador es el sistema que nos permite seleccionar la longitud de onda con la cual deseamos
trabajar.
De los sistemas detectores y amplificadores, el mejor se conoce con el nombre de fototubo multiplicador de
electrones o fotomultiplicador, posee una extrema sensibilidad y gran rapidez de respuesta.

Componentes de un espectrofotmetro

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4.1. Espectrofotometra

De manera general, el funcionamiento de un espectrofotmetro se puede resumir de la siguiente manera:

La luz generada por la lmpara pasa a travs del monocromador, que dispersa el haz, dando entonces todos
los colores de la regin visible, del violeta al rojo. La radiacin incide sobre una superficie que tiene una
rendija que se ajusta de tal manera que slo pasa la lnea o banda de emisin deseada. La rendija al ajustarse
para seleccionar una determinada longitud de onda, bloquea el paso de toda la radiacin, excepto la banda
seleccionada.
La muestra absorbe una porcin de la luz, el resto se transmite a travs de la propia muestra e incide en el
detector fotosensible, en donde se transforma en una seal elctrica muy dbil que se manda al amplificador
o fotomultiplicador, el cual aumenta considerablemente la intensidad de la seal del detector, llegando as al
medidor que nos indica la cantidad de luz transmitida o absorbida.
Procedimiento para la operacin bsica del espectrofotmetro
1. Efectuar la calibracin del espectrofotmetro, cada vez que se realiza el anlisis de un grupo de
muestras.
2. Encender el aparato por lo menos 10 minutos antes de su uso.
3. Seleccionar la longitud de onda.
4. Ajustar a
5. Ajustar a

de transmitancia, teniendo vaco el compartimento para la muestra y la tapa cerrada.

de transmitancia y 0 de absorbancia con el blanco (disolvente utilizado en la muestra).

6. Retirar el blanco e insertar la muestra, leer el porciento de transmitancia o la absorbancia.

7. Mantener cerrada la tapa del portamuestras durante el proceso de medicin, para asegurar una lectura
adecuada.
8. Evitar reutilizar las cubetas desechables.
9. Utilizar nicamente cubetas de cuarzo, para efectuar anlisis por debajo de los 310

10. Evitar el uso de cubetas plsticas, si se utilizan solventes orgnicos.

11. Utilizar cristalera de boro silicato de alta calidad para preparar los estndares. Evitar el uso de
cristalera de sodio xido de sodio siempre que sea posible, debido a que el contacto prolongado con
los estndares puede permearla y, en consecuencia, producir resultados errneos.
12. Limpiar cuidadosamente las cubetas de vidrio despus de utilizarlas. Desechar aquellas que presenten
rayones en la superficie pulida.
13. Utilizar en lo posible reactivos de alta calidad. Reactivos de baja calidad pueden causar contaminacin
incluso en concentraciones muy bajas. Los diluyentes utilizados agua o solventes debern estar libres
de impurezas.

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4.1. Espectrofotometra

14. Verificar que las muestras o estndares no se han desgasificado dentro de las cubetas. Este fenmeno
produce burbujas sobre la superficie interna de las cubetas y errores en las lecturas.
15. Tener en cuenta, cuando se pretenda utilizar nuevos procedimientos, que no todas las sustancias
cumplen con la ley de Beer. Efectuar pruebas de linealidad sobre el rango de concentraciones a
ser utilizadas. Se recomienda preparar un grupo de soluciones fuertes conocidas y verificar los
resultados. Los fenmenos que afectan la ley de Beer son los siguientes:
a) Las altas concentraciones por asociacin molecular de especies inicas.
b) Variaciones en la hidratacin a bajas concentraciones producen cambios en la naturaleza de los iones
complejos.
Referencias
Aguilar Ayala, I smael; et al. 2003. Manual de aparatos. Metodologa cientfica I. FES Cuautitln-UNAM.
Mxico.
Organizacin Panamericana de la Salud. (2005). Manual de mantenimiento para equipo de laboratorio.
Washington DC, consultado el 02 de junio de 2011, en:
http://www.paho.org/spanish/ad/ths/ev/lab_manual-mantenimiento.pdf

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