Introduccin a la Biologa Celular y Molecular

IBCM: turno tarde

Repaso de Soluciones Qumicas

(Cortesa del turno maana)

INTRODUCCIN
Cuando una solucin es de uso corriente en un laboratorio, se suele
preparar una solucin madre o stock, que se encuentra en una
concentracin mayor de la que se utiliza. A partir de sta, se realiza una
dilucin para preparar la solucin a la concentracin de uso.
* Se dice que una solucin es N X (N por) cuando esta concentrada N
veces respecto de la de uso corriente.
Ej.: PBS 5X es una solucin stock de PBS 5 veces ms concentrada que el
PBS de uso normal ( 1X). Puede prepararse PBS 1X haciendo una dilucin
1/5 de la solucin stock (para 500 ml: 100 ml PBS stock + 400 ml H 2O
bidestilada.)
* A veces es necesario diluir mucho una solucin concentrada (Ej.: 1/10 4 ,
1/106). En estos casos se suelen hacer diluciones sucesivas o diluciones
seriadas para disminuir los errores de medicin al pipetear volmenes
muy pequeos.
Ej.: Preparar 1 ml de una solucin de un anticuerpo que contenga 0.1 g/ml,
a partir de una solucin stock de 1 mg/ml. Debera realizarse una dilucin
1/10000 (1/104) es decir pipetear 0.1 l stock + 999.9 l buffer de dilucin.
Conviene entonces hacer diluciones sucesivas que, con menor error de
pipeteo, permitan alcanzar la concentracin buscada. Ej. 4 diluciones
sucesivas: 1/10 . 1/10 . 1/10 . 1/10 = 1/10000.
Tener en cuenta: Las soluciones diluidas se expresan a menudo en
"mili...", "micro...", "nano...", "pico...", "fento..." . Ej: 10 M, 1 pg/ml, etc.
Recordar:
1 mmol = 10-3 moles (aplicable a otras unidades: gramo, etc.)
1 mol = 10-6 moles
1 nmol = 10-9 moles
1 pmol = 10-12 moles
1 fmol = 10-15 moles
Formas de expresar concentraciones
La masa de sustancia que corresponde a un mol de molculas de esa
sustancia es lo que conocemos como masa molar o peso molecular PM y se
expresa en gramos. Ej.: la masa molar del oxgeno O 2 es de 32 g/mol y del
agua 18 g/mol.
Pero OJO! no confundir con la masa molecular relativa Mr, que aunque
coincide numricamente con M no lleva unidades de masa, sino que,
justamente es relativa y nos dice cuantas veces ms pesada es una
molcula de una sustancia respecto de la unidad de masa atmica (u.m.a.),
de 1 Dalton (Da), que corresponde al tomo hidrgeno.
As, la Mr del agua es 18 u.m.a. o 18 Da, o bien, 18 veces ms pesada que
un tomo de hidrgeno.

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Unidades de concentracin
% m/m: Por ciento masa en masa, g de soluto por cada 100 g de solucin
(SN) (soluto + solvente).
% m/v: Porciento masa en volumen, g de soluto por cada 100 cm 3 o 100
ml de SN.
% v/v: Porciento volumen en volumen, ml de soluto por cada 100 ml de
SN.
M: Molaridad, N de moles de soluto por cada 1 litro o 1000 cm 3 de SN.
m: Molalidad, N de moles de soluto por cada 1 Kg de solvente.
N: Normalidad, N de equivalentes de un cido o de una base por cada 1
litro de SN.
De acuerdo a lo que vimos antes:
Una solucin 2 M de HCl es lo mismo que una solucin 2 N, mientras que
una solucin 4 M de cido sulfrico ser lo mismo que una solucin 8 N para
este cido.
OBJETIVOS

Familiarizarse con las unidades mas utilizadas en biologa molecular y ser

capaces de intercambiar gilmente las distintas unidades.
Familiarizarse con el material de uso corriente en el laboratorio, la
preparacin de soluciones y el empleo de diluciones a partir de
soluciones concentradas.

DESARROLLO DEL TP
Se partir de una solucin stock de colorante (por ejemplo: azul de toluidina
o azul de metileno) de concentracin conocida.
a) Desaparicin del color:
Cada grupo recibir 1 ml de solucin stock y, realizando diluciones seriadas,
deber determinar la dilucin a la cual desaparece el color y la
concentracin del colorante (en mg/ml) en dicha dilucin.
b) Dilucin incgnita:
A cada grupo se le entregar 1 ml de una dilucin incgnita. Deber
averiguar a qu dilucin corresponde, por comparacin con una curva de
diluciones conocidas preparadas a partir de la solucin stock.
Importante: Repasar las diferentes formas de expresar la
concentracin de una solucin y cmo interconvertirlas (molaridad,
normalidad, % p/v, % p/p).
Problemas de Diluciones
1) Cuantos l representan los siguientes volmenes?
a.
0,05 l
b.
0,234 ml
c.
2,5 x10 4ml

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d.
98,5000 l
2) Exprese cada uno de los siguientes valores de concentracin en
g/ml, ng/ml, ng/ul, ug/ul:
a.
234,20 mg/ml
b.
48,56 mg/l
c.
6,243 x106 g/ml
d.
8,2 x10-8 pg/ml
3) Si se toman 50 ml de una solucin NaCl 0,4M y se llevan a un
volumen final de 1l Cul es la concentracin final?
4) Qu volumen de HCl 6M debe usarse para preparar 500 ml de una
solucin de HCl 5 mM?
5) Cul sera la concentracin final de una solucin preparada al diluir
45,0 ml de KOH 4,2 M en un volumen final de 300 ml?
6) Si se cuenta con una solucin 2,2 M de NaCl, Cuntas diluciones
seriadas 1/10 deben realizarse para llegar a una solucin de
concentracin 22 M? Indique que volmenes utilizara si las diluciones
se realizan en eppendorfs con Vfinal=1,5ml.
7) Su jefe le entrega 10ml de un cultivo de E. coli (bacterias) con 8.4 x
107 clulas/ml y le pide que prepare una 100 ml de una suspensin que
contenga menos de 100 clulas/ml, qu diluciones debe realizar para
llegar al resultado deseado si en cada tubo el V final=100ml?
8) Usted posee un eppendorf con 1 ml de una solucin 4.3 x 10 4 clulas
y debe producir una solucin que contenga 43 cel/ml. Qu diluciones
seriadas hara si en los tubos slo puede llegar a un Vfinal=1ml y tuviese
que pasar de cada solucin a la siguiente no menos de 5 l?
9) Usted posee una sustancia coloreada y desea realizar una curva de
calibracin con al menos 4 puntos para el rango de concentraciones 0,1
mM a 0,2 M. Si ud. posee una solucin 2,5 M y sabe que la 490 = 50 M1cm-1
a. Indique qu diluciones seriadas hara para obtener esos puntos.
b. Cul ser la Absorbancia a 490nm de cada uno de los puntos que ud.
eligi?
10) Las -lactamasas son una familia de protenas generadas por algunos
microorganismos, que les confieren resistencia a los antibiticos lactmicos. Una de ellas en particular tiene un peso molecular (MW) de
29374 g/mol y 280=24750 M-1cm-1. Al medir absorbancia en una
cubeta estndar (1 cm de camino ptico) a 280nm se obtiene un valor de
0,500.
a. Calcule la concentracin en g/ml de la solucin de protenas.
Ayuda: Para resolver este problema deben recordarse los conceptos de
ecuacin de la ecuacin de Lambert-Beer y que la longitud de onda a la
que se miden las protenas es 280 nm
b. Si cuenta con 1 ml de esta solucin, Cmo preparara 500 l de una
solucin 400 g/ml?
c. Qu valor de absorbancia presentar dicha solucin?

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