Protenas y cidos nucleicos.

Introduccin:
Las protenas y los cidos nucleicos son los mayores constituyentes de las
clulas y tejidos. Las protenas son macromolculas complejas altamente
organizadas que se componen de 20 aminocidos comunes vinculados entre s
por enlaces peptdicos. Ellas se encuentran en clulas y tejidos como protenas
simples o conjugadas. Las protenas simples estn compuestas por
aminocidos solamente, por ejemplo: albuminas, globulinas, estructuras
fibrosas y enzimas.

Grupos fenilos:
Estos se pueden demostrar por una modificacin de un test bioqumico bien
conocido, la reaccin de Millon. Un color rojo o rosado se desarrolla en el sitio
de las protenas que contienen tirosina cuando la seccin es tratada con una
mezcla de sulfato de mercurio caliente, cido sulfrico y nitrito de sodio. La
tirosina es el nico aminocido que contiene el grupo hidroxifenil en una forma
que puede ser demostrada histoquimicamente. El mtodo, por lo tanto, puede
considerarse como especfico para la tirosina, pero puesto que la tirosina es un
componente casi invariable de todas las protenas, la reaccin de Millon es un
mtodo adecuado para las protenas en general.

cidos Nucleicos:
Las nucleoprotenas son combinaciones de protenas bsicas (protaminas e
histonas) y cidos nucleicos.
Tcnicas histoqumicas para la demostracin de cidos nucleicos en tejidos est
basado en todos sus constituyentes. DNA y RNA pueden ser localizadas en las
clulas por la afinidad de sus esteres de grupos fosfato negativamente cargado
por casi cualquier colorantes bsico, particularmente la hematoxilina o el verde
metilo y pironina.

Demostracin de cidos nucleicos:

-Fijacin:
En trminos generales, los cidos nucleicos son mejor preservados en fijadores
alcohlicos y cidos, un buen ejemplo de ellos sera el Carnoy que contiene
alcohol y cido actico glacial. La formalina tiene slo una reaccin limitada
con el DNA y RNA, pero para trabajo de rutina brinda resultados aceptables.
Bajas temperaturas de fijacin (4C) en formalina tamponada neutra ha
demostrado que previene la degradacin de DNA por nucleasas celulares, que
es de alguna importancia cuando se llevan a cabo estudios de biologa
molecular.
-Basofilia:
Ambos, DNA y RNA se tien fuertemente con colorantes catinicos.

Una distincin se ha establecido entre el enlace formado por un colorante

catinico simple tales como el rojo neutro y el azul de metileno y cidos
nucleicos, y la tincin nuclear formada por complejos metlicos como es la
hematoxilina.
La hematoxilina que tie el ncleo celular es menos afectada por la
degradacin en cido. Este efecto cido resistente se atribuye al complejo
colorante-metal formando tambin enlaces no electrostticos, interacciones
tales como enlaces hidrofbicos y fuerzas de atraccin de Van der Waals, con
cidos nucleicos. Curiosamente, mientras que los cidos nucleicos exhiben
fuerte basofilia, por lo general no muestran metacromasia con los colorantes
metacromticos estndar, tales como el azul de toluidina o azur A.
-cido Desoxirribonucleico (DNA):
La demostracin tpica de DNA es el ter por la tcnica de Feulgen, que
demostrara el azcar dexosirribosa, o la tcnica de verde metilo-pironina en
que los fosfatos se combinan con el colorante bsico verde metilo en un pH
cido. El DNA puede ser demostrado mediante mtodos de fluorescencia
usando acridine orange, aunque la confiabilidad de este tipo de mtodos es
menor que los mtodos anteriores. Ambos, DNA y RNA pueden ser
demostrados por el mtodo de la galocianina cromoalumbre; el mtodo no
separa los dos cidos y una tcnica adecuada de extraccin debe ser usada. La
tcnica ms sensible para identificacin DNA es la hibridacin in situ.
La reaccin de Feulgen.
Es el mtodo estndar para demostrar desoxirribosa. La hidrolisis cida suave,
emplea HCL 1N a 60C, es usara para romper el enlace purina-desoxirribosa;
los aldehdos expuestos resultantes son entonces demostrados por el reactivo
de Schiffs. La hidrolisis es la parte crtica del mtodo; se obtiene una reaccin
cada vez ms fuerte a medida que el tiempo de hidrlisis se incrementa hasta
que se alcanza el ptimo. Ms all de esto la reaccin se debilita, y si la
hidrolisis contina la hidrolisis la reaccin puede fallar completamente. Una
consideracin importante en la seleccin del tiempo correcto de hidrlisis es el
fijador usado. El fijador Bouin no es adecuado ya que este causa sobre
hidrolisis de los cidos nucleicos durante la fijacin.
-cido ribonucleico (RNA):
El mtodo de eleccin para la demostracin de RNA es la tcnica de verde
metilo-pironina. RNA tambin puede ser demostrado mediante acridine orange
y por la tcnica de galocianina cromoalumbre, junto con DNA, dado
procedimientos adecuados de extraccin.
Verde Metilo-Pironina.
Esto puede demostrar DNA y RNA. El verde metilo es un colorante impuro que
contiene el violeta de metilo. Mediante la eliminacin del metilo con
cloroformo, el verde de metilo puro (cuando se utiliza en un pH ligeramente
cido), parece ser especfico para DNA.

El fundamento de la tcnica es que ambos colorantes son catinicos cuando se

usan combinados: el verde metilo se enlaza preferente y especficamente al
DNA, dejando a la pironina la unin al RNA. La reactividad especfica del verde
metilo es atribuida al alineamiento espacial de los grupos amino (NH 2) del
colorante a los radicales fosfatos en la doble hlice del DNA. Tincin con
pironina, por otra parte, no muestra esta afinidad espacial y cualquier carga
negativa que constituya el tejido ser teida azul. En la prctica, esto significa
que as como el RNA, las mucinas cidas presentes en el epitelio, adems del
cartlago tambin sern teidas.