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APLICACIONES
BIOLGICAS
ANA CRISTINA DEL ANGEL RIVERA
DAVID MARTNEZ REA
MARCO ANTONIO MENDOZA VILLA

1463793
1569668
1490861

Thymosin 4 coated nanofiber

scaffolds for the
repair of damaged cardiac tissue

Materiales

Clulas Progenitoras

Thymosin 4

Dichloromethane; DCM

N-dimethylformamide; DMF

Poly(-caprolactone); PCL

Solucin PCL/DMF/DCM

PCL 1.5g

Solucin DCM:DMF (1:4)

Electrohilado

1.5 ml solucin de
PCL/DMF/DCM

0.5 mL/h

12 kV

3h

105 mm

630 rpm

Caracterizacin Microscpica

Se encontr que los nanoscaffolds tienen una estructura lineal.

El bulto de fibras mide aprox. 2m de ancho y se constituye de 4-8

fibras (400100nm)

Caracterizacin FTIR

Revestimiento de Nanofibras

Cultivo Celular

Se incubaron a 36.5C y
3% CO2

Se implantaron 1x106
clulas/mL

Propagacin de Clulas

10

Nanotubos de carbono:
funcionalizacin y aplicaciones
biolgicas

Introduccin

11

Los nanotubos de carbono (NTCs) son altropos del carbono,

como el diamante, el grafito o los fulerenos, fueron descubiertos
accidentalmente por S. Iijima.

Existen diferentes tipos de NTCs ,estos pueden ser

nanotubos de carbono de pared sencilla (SWCNTs) y
nanotubos de carbono de pared mltiple (MWCNTs).

12

Estos nanomateriales presentan

buenas propiedades fsicas como
son su densidad, resistencia y
conductividad trmica.
Algunas aplicaciones para los
NTCs es su uso como biosensores,
como transportadores de frmacos
y
agentes
con
propiedades
antibacterianas.

Funcionalizacin qumica de NTCs

13

La funcionalizacin se define como la modificacin de

propiedades por la adsorcin de tomos o molculas en las
paredes exteriores de los nanotubos de carbono.
Se pueden obtener cambios en las propiedades fsicas de la
superficie de estas nanopartculas, como lo son la solubilidad
y dispersin, las cuales son importantes en las propiedades
biolgicas de los NTCs, ya que les permite tener una mejor
interaccin con molculas biolgicas.

14
Por medio de la oxidacin qumica de SWCNTs se pueden
agregar
diversos
grupos
funcionales
como
cidos
carboxlicos, aminas y amidas.
Los SWCNTs se pueden oxidar al reaccionar con una mezcla de
cido ntrico y cido sulfrico con lo cual se introducen grupos
carboxlicos en sus extremos. Mediante la qumica del grupo
carboxlico y en muchos casos su activacin a cloruros de acilo,
permite el acoplamiento de molculas por medio de unin covalente.

Hay dos tipos de funcionalizaciones:

15

las covalentes en la cuales se introducen grupos funcionales

creando enlace a los NTC, ejemplo de ello es la funcionalizacin
con cidos carboxlicos y aminas.
Las funcionalizaciones no covalentes se basan en la adsorcin
de molculas como surfactantes, compuestos aromticos y
polmeros como poliacrilamida, poliestireno, entre otros, que no
alteran las propiedades de los NTCs.

Aplicaciones biolgicas de los

NTCs

16

Los NTCs son nanomateriales que muestran una diversidad

de aplicaciones potenciales que incluyen:
La terapia fototrmica
Imagen fotoacstica
Administracin de frmacos
Otras aplicaciones biomdicas.

17
Se han desarrollado filtros que tienen como propsito la inactivacin de
microorganismos.
La estructura de stos filtros esta compuesta por SWCNTs-MWCNTs y
otros solo de MWCNTs. De acuerdo a los resultados, se demuestra la
inactivacin de ciertas bacterias como E. coli y Staphylococcus
epidermis, en donde los mejores resultados lo muestra el filtro con
mezcla de ambos NTCs.
Se ha desarrollado un filtro electroqumico a base de MWCNTs, en el
cual se aplica una corriente de 2 a 3 volts por 30 segundos, removiendo
e inactivando tanto virus como bacterias.

18
Una molcula que se ha unido covalentemente a MWCNTs y
SWCNTs es la porfirina formando un nanocompuesto con
actividad antibacteriana en contra de S. aureus, el estudio
bacteriolgico se desarroll sobre placas de agar con el
nanocompuesto, en las cuales se coloc la bacteria, se
incubaron las placas a 37 C y se contaron las colonias despus
de la incubacin.

Biosensores biolgicos a base de

NTCs

19

Una de las aplicaciones de mayor importancia en el mbito de

los nanomateriales dentro del rea de la medicina y
biotecnologa es la creacin de biosensores para la deteccin
de diferentes metabolitos.
Los NTCs debido a las propiedades elctricas que presentan y
a su tamao nanomtrico se consideran los biosensores
ideales.

20

A travs de interacciones supramoleculares y unin de tipo

covalente de las biomolculas en los NTCs, se han logrado
inmovilizar ADN, protenas y enzimas. Se han desarrollado
biosensores electroqumicos basados en combinar enzimas que
ayudan al diagnstico clnico; las enzimas son inmovilizadas por
NTCs y retienen su actividad de biocatlisis

Aplicaciones farmacuticas

21

Las caractersticas fisicoqumicas de los NTCs como su tamao

nanomtrico, composicin qumica, superficie de funcionalizacin y
dispersin ayudan a la administracin y transporte de frmacos.
Los NTCs tienen el potencial de llevar los frmacos en el organismo
ya que son ms pequeos que las clulas sanguneas. Algunos de los
mtodos desarrollados ha sido el unir molculas como el ADN,
pptidos y protenas dentro y fuera de los NTCs. Esto le da la
capacidad de detectar y destruir clulas individuales que pueden ser
cancerosas o infectadas por virus.

Los MWCNTs en un principio fueron funcionalizados con cido

polictrico (PCA) para aumentar su naturaleza hidroflica y
funcionalidad con grupos carboxlicos. Despus el paclitaxel
(PTX) un agente anticancergeno, es unido va covalente en los
sitios carboxilo del PCA, obteniendo el sistema MWCNTs-PCAPTX con un 38% en peso de contenido de frmaco. El PTX
puede ser fcilmente liberado del sistema a un pH de 6.8 y
5.0, lo cual es compatible con la liberacin en clulas y tejidos
de tipo tumoral.

22

Los SWCNTs muestran particulares propiedades electrnicas, lo que se

observa en sus seales en el infrarrojo, fluorescencia, fotoacstica y
espectroscopia Raman, lo cual resulta en una deteccin no invasiva y de
alta sensibilidad. As los SWCNTs se han estudiando como agentes de
imagen para la evaluacin y localizacin de tumores tanto in vivo como
in vitro

23
Algunos frmacos a base de protenas necesitan ser administrados
va intravenosa ya que por va oral el pH del estmago no es
favorable. Este problema, ha servido de base en investigaciones
donde los NTCs transportan este tipo de frmacos dentro de las
clulas.

Algunos estudios platean que los SWCNTs presentan mayor

toxicidad en mamferos mientras que los MWCNTs muestran un
bajo nivel de toxicidad.

24
En algunos reportes se indica que muchos NTCs pueden
entrar a las clulas humanas y acumularse en el
citoplasma y causar muerte celular, penetrar en
estructuras de tejidos, migrar y causar lesiones en reas
remotas,
induciendo
inflamacin,
granulomas
epiteliales, y fibrosis intersticial o pleural en los
pulmones de roedores.
El dimetro de los NTCs es un parmetro importante para ser
considerado en su toxicologa. Los MWCNTs con menor dimetro
(9.4 a 70nm) resultaron ser ms txicos tanto in vivo como in
vitro.

Conclusiones

25

Los nanotubos de carbono son nanomateriales con excelentes

propiedades
que
pueden
ser
modificadas
mediante
la
funcionalizacin qumica.
Los NTC son nanomateriales que pueden resultar txicos para el ser
humano ya que debido a su tamao se pueden alojar en pulmones y
se necesitan ms estudios en esta rea ya que los que hasta ahora
han resultado muy eficientes son el transporte de frmacos.
Adems, la estructura del grafito de los SWCNTs pueden ser
degradados, lo que abre la posibilidad de que los nanomateriales
puedan biodegradarse cuando son introducidos en los diferentes
sistemas biolgicos.

26

Development of method for

evaluating cell hardness and
correlation between bacterial
spore hardness and durability
Koichi Nakanishi1*, Akinori Kogure2, Takenao
Fujii3, Ryohei Kokawa3 and Keiji Deuchi1

Resumen

27

En base a la medicin de su mdulo de Young, medido por medio

de deformaciones producidas con un cantilver de AFM, se
determina la dureza mecnica de las siguientes bacterias, en
forma
de
espora
y
clula
vegetativa:
Geobacillus
stearothermophilus, Bacillus coagulans, Bacillus subtilis, Bacillus
licheniformis, Bacillus megaterium. Se correlaciona esta dureza
con el nivel de resistencia de las bacterias a la radiacin
ultravioleta y al calor.

Introduccin

28

La propiedad de dureza
es particularmente informativa de las
caractersticas de una clula, y mucho se puede saber acerca de la
clula por medio de la determinacin de este parmetro.
Se cree que la dureza de la clula est relacionada con la resistencia de
las esporas y clulas bacterianas al calor y UV. En los mbitos de la
alimentacin y la fabricacin de productos farmacuticos, los mtodos
actuales para la determinacin de resistencia al calor y a los rayos UV
requieren recuentos de clulas considerablemente altos que implican
realizar cultivos. Esto puede tardar desde unos pocos das a 2 semanas
o ms en completarse. Hay una necesidad de un mtodo no-cultivo que
pueda producir resultados rpidamente.

29

El cantilver que se utiliza en un AFM es un tipo de resorte.

Hemos desarrollado un mtodo que utiliza la sonda cantilver
de un AFM para determinar la dureza de una clula, un
organelo, o de otras muestras microscpicas. El estrs fsico
inducido por el contacto de la sonda con la muestra se utiliza
para determinar el mdulo de Young como un parmetro de
dureza.

Definicin de dureza y posiciones de

medicin.

30

Si la dureza se expresa como la cantidad de trabajo hecha para

una deformacin dada, la cantidad de trabajo corresponde a un
movimiento complejo tridimensional que sera difcil de medir con
precisin. Sin embargo, los factores de error se reducen si
limitamos este movimiento a la direccin vertical a lo largo del eje
z, de esta manera, la clula puede ser considerada como un
cuerpo elstico lineal.

31

Principle for measuring cell and spore hardness using the

cantilever of the AFM.

32

Representative measurement positions for G. stearothermophilusspore and

determined Youngs modulus.

33

La determinacin del mdulo de Young cada 40 nm a lo largo de los

ejes x y y muestra que se obtienen los valores ms
representativos para el mdulo de Young en el punto de mayor
altura a lo largo del eje z. Las mediciones realizadas en puntos
distintos de la altura mxima es probable que incluyan
distribuciones de estrs fsico adicionales a los del eje z y no reflejar
con precisin el mdulo de Young a lo largo de este. Adems, si las
mediciones se realizan cerca del borde de la muestra, es ms
probable que la medicin del mdulo de Young refleje la dureza de
sustrato ms que la dureza de la muestra.

34

Correlation between hardness (Youngs

measurements of heat and UV resistance.

modulus)

and

indirect

, Geobacillus stearothermophilus; , Bacillus coagulans; , Bacillus

subtilis; , Bacillus licheniformis; , Bacillus megaterium.

Conclusiones

35

Se desarrollaron mtodos para medir directamente las propiedades

fsicas de una sola clula usando las esporas bacterianas y un AFM.
La dureza de una sola clula se describe en trminos de su mdulo
de Young. Usando esta tcnica, la dureza de las clulas bacterianas
se pudo medir por primera vez. Se utiliz esta tcnica para medir la
dureza de esporas individuales de cepas de bacterias formadoras de
esporas y observ una alta correlacin entre la dureza de las esporas
y resistencia al calor ya los rayos UV, que son medidas
convencionales de la durabilidad fsica. La presente tcnica se
permite la medicin rpida de la durabilidad de las esporas y ser
una herramienta de gran alcance para la aclaracin de sus
mecanismos.