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Se estima que los desechos de camarn constituyen alrededor del 30% en peso del
recurso; en el ao 2005 se produjeron cerca de 700 TM, producto de las actividades de
exportacin de camarn. Por otra parte, el camarn destinado al mercado nacional es fuente
creciente de desechos, debido a cambios en los hbitos de consumo de los pobladores y a la
comercializacin del producto (PROCOMER, 2007). Resulta notable la gran cantidad de
desechos que se generan de la industria camaronera, por lo tanto, es de suma importancia
lograr darle un valor agregado a esta materia prima que no se aprovecha, y que contamina,
de forma evidente, los sectores cercanos a donde se desarrolla esta actividad. De ah la
importancia de incorporar tecnologas limpias para el aprovechamiento de este tipo de
desecho.
Los exoesqueletos de cangrejo, langosta y camarn son considerados como fuentes
importantes de materia prima para la produccin de quitina (Van Ornum, 1992). La quitina
es el compuesto orgnico ms abundante en la naturaleza, despus de la celulosa; est
presente en el exoesqueleto de los artrpodos, los anlidos, los moluscos y los celenterados.
Se encuentra tambin en algunos hongos ascomicetos, zigomicetos, basidiomicetos y
deuteromicetos. Qumicamente se define como un polisacrido formado por monmeros de
N-acetilglucosamina unidos por medio de enlaces 1-4 (Ruiz, 1993).
El proceso de extraccin de quitina a partir de los exoesqueletos de crustceos
involucra dos etapas. La primera consiste en la remocin del material proteico
(principalmente la carne), mediante un proceso que tradicionalmente involucra un
desproteinizado alcalino con hidrxido de sodio, para finalmente sufrir un proceso de
desmineralizado acido, con el objetivo de eliminar principalmente los carbonatos de calcio
y otras sales afines (Madrigal-Carballo, 2003). La digestin enzimtica o fermentacin con
bacterias proteolticas con actividad no quitinoltica tambin ha sido empleada como
tratamiento biotecnolgico para remover parcialmente las protenas de los desechos de
crustceos y de la pluma del calamar. Se ha demostrado que el tratamiento con enzimas
proteolticas facilita la extraccin de carotenoprotenas (Synowiecki, Sikorski y Naczk,
1981; Wu, 1978).
Los procesos de hidrlisis enzimtica presentan indudables ventajas frente a la
tradicional hidrlisis qumica, cida o alcalina. Entre estas, se pueden mencionar la
selectividad (las enzimas son especficas para un tipo determinado de enlace, por lo tanto,
no es frecuente la aparicin de productos de degradacin que pueden llegar a ser txicos),
las condiciones moderadas de temperatura y pH, el no requerir que se aadan sustancias
extraas (evidentemente no es as en los procesos de hidrlisis qumica, ya que la necesaria
neutralizacin posterior eleva considerablemente el contenido en sales) y el poder mantener
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Materiales y mtodos
Obtencin de las materias primas
El rastrojo de pia utilizado fue obtenido de la empresa Collen Street Bakery,
ubicada en la Virgen de Sarapiqu, zona norte del pas, en el mes de febrero del 2006. El
tipo de pia que se cultiva en esta plantacin es la MD2, la cual corresponde a un hbrido
de la especie cabuya lisa desarrollado en Hawaii. Los desechos obtenidos se deshojaron y
se les elimin el tallo. Por su parte, los desechos de biomasa residual provenientes de la
actividad camaronera se recibieron de la planta multipropsito del POLIUNA, ubicada en
el Parque Marino del Pacfico, en la provincia de Puntarenas.
Caracterizacin de las materias primas
El rastrojo de pia fue caracterizado por su contenido de humedad y materia seca,
de acuerdo con los mtodos descritos en AOAC1999:950.45. As mismo se analiz su
contenido de cenizas (AOAC1999:920.153), grasas como material soluble en hexano/etanol
(AOAC1999:960.39) y contenido de nitrgeno proteico por el mtodo Kjeldahl
(AOAC1999: 928.08). La biomasa residual proveniente de la actividad camaronera fue
caracterizada en cuanto a su contenido inicial de protenas. Las protenas en este sustrato
fueron extradas por el mtodo protenas solubles en slidos (Peitersen, 1977) y
cuantificadas por el mtodo de Bradford (1976).
Extraccin de los jugos del rastrojo de la pia
La extraccin de los jugos del rastrojo de la pia se realiz siguiendo el protocolo
establecido en la patente nmero CU 22 515 A1 de la Repblica de Cuba, llamada Proceso
de obtencin de bromelina a partir de tallos de pia (Chvez, 1995). A los desechos de
rastrojo se les procedi a deshojar y eliminar los tallos. Las hojas fueron seleccionadas y
lavadas, en procura de desechar la tierra, insecticidas e insectos que se encontraran entre
sus hojas. A las hojas se les elimin la superficie por ambos lados y luego se cort en trozos
de aproximadamente 1 x 1 cm.
Posteriormente, se moli en una licuadora durante 5 min y se extrajo la enzima
mediante un buffer de extraccin, constituido por sulfuro de sodio (1-3 mmol/L), cido
sulfrico (0,05-0,2 mol/L) y pH 2,5-5. La extraccin se realiz manteniendo una relacin
de 450 g de trozos de rastrojo de pia con 600 mL de buffer, con un pH cercano a 4,5. La
pulpa fra se mantuvo en agitacin en un bao de hielo durante 40 min, luego se filtr y se
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Donde:
Et: Absorbancia de la muestra de enzima
Eb: Absorbancia del blanco
Es: Absorbancia del estndar de tirosina
DF: Factor de dilucin de la enzima en mg
CDU/mg: Es la cantidad de enzima que libera 1g de tirosina, despus de un minuto de
digestin a 37 C, en un sustrato estndar de casena a un pH de 7,0
Evaluacin del proceso de desproteinizado de biomasa de desecho proveniente de la
actividad camaronera
Se prepararon varias disoluciones de bromelina comercial (Sigma Aldrich B4882, 3-7
unidades/mg protena) y extracto proteoltico de desechos de pia, disueltos en un buffer de
fosfatos, y se les determin la actividad enzimtica por el mtodo Anson, modificado por
Depeau, 1976. Cada una de las disoluciones enzimticas preparadas se puso en contacto
con una masa constante de biomasa residual de camarn durante un periodo de 24 h, y se
analiz el proceso de desproteinizado sufrido por los desechos en lapsos de tiempo
similares a los empleados con las muestras de extracto de rastrojo de pia. Se tomaron
muestras del lquido y del slido, para analizar el contenido en L-tirosina para el lquido y
la concentracin de protena en el desecho de camarn. El muestreo se realiz con las
mismas condiciones que se utilizaron en la determinacin de la disolucin de rastrojo de
pia ms apropiada. El pH que se emple fue de 7,0 y la temperatura de 37 a 42 C.
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Resultados y discusin
Los resultados de la caracterizacin del rastrojo de pia se aprecian en la tabla 1.
Tabla 1
Caracterizacin del rastrojo de pia utilizado para desproteinizar desechos de
camarn
Medicin
Cantidad (%)
Humedad
85,8 0,4
Cenizas
3,9 0,1
Protena total
0,84 0,04
Grasas
3,6 0,3
El extracto enzimtico del rastrojo de pia se almacen en botellas de vidrio mbar,
las cuales se mantuvieron en refrigeracin. Los resultados de la caracterizacin del extracto
se aprecian en la tabla 2.
Tabla 2
Caracterizacin del extracto enzimtico proveniente del rastrojo de pia
Prueba/Ensayo
Resultado
pH
3,900,01
7,750,07
Azcares totales
mg/mL
Protena
por
4,85
0,09
Bradford
mg/mL
Actividad enzimtica
48 3 CDU/mg
El extracto enzimtico del rastrojo de pia present un valor para su actividad
enzimtica a pH 7 de 48 CDU/mg. Esto significa que se necesitan 48 unidades de la enzima
presente para producir 1g de tirosina a partir de casena como patrn estndar, en 10 min a
37 C y un pH de 7.0. La evaluacin de la actividad enzimtica se efectu a pH 7, debido a
que este iba a ser el pH que se utilizara en el proceso de descarnado de desechos de
camarn.
Los resultados de la caracterizacin del desecho camarn se presentan en la tabla 3.
Tabla 3
Caracterizacin del desecho de camarn utilizado para su desproteinizacin
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Medicin
Cenizas
Protena
Grasas
Cantidad (%)
42,4 0,6
16,8 0,9
33 2
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genera, como ltimo producto de la degradacin, aminocidos, entre los que se encuentra la
L-tirosina.
Al igual que se evidenci en el anlisis del comportamiento de la protena, el
incremento en la concentracin de L-tirosina es mucho ms alto en la muestra A, que en la
B y C; este comportamiento est relacionado directamente con la concentracin de extracto
de rastrojo de pia que se utilice para la hidrlisis. A diferencia de lo observado en el
comportamiento de la concentracin de protena en el desecho camarn, que en las
primeras horas se produca la mayor disminucin en su concentracin, y luego,
prcticamente continuaba invariable; para el anlisis del comportamiento de la
concentracin de L-tirosina, se mantiene un incremento en su produccin durante todo el
proceso. Esta diferencia se debe a que las enzimas degradan el sustrato sin un orden
establecido y llevan a algunas molculas de protena hasta los aminocidos, o la dejan en
algn estado intermedio, donde posteriormente se retomar su degradacin; por lo tanto, se
generan aminocidos durante todo el tiempo de hidrlisis.
Despus de comprobar que el extracto de rastrojo de pia presenta
caractersticas proteolticas en los desechos de camarn, se compar este efecto con los de
una disolucin de bromelina comercial, en las mismas condiciones de anlisis que se
practicaron para las muestras provenientes del extracto de rastrojo de pia. Se eligi
bromelina comercial, debido a que, segn diversos anlisis, se ha demostrado que es la
enzima proteoltica de mayor importancia presente en las plantas de pia (Murachi, 1964).
Se busc que la disolucin de bromelina presentara una actividad enzimtica cercana a los
50 CDU/mg, de manera que fuera comparable con el extracto de rastrojo de pia.
En la tabla 4 se muestra las distintas disoluciones que se prepararon de
bromelina comercial, para determinar cul es la que presenta una actividad enzimtica
similar a la del extracto de rastrojo de pia.
Tabla 4
Determinacin de la actividad enzimtica para
comercial
Actividad
Muestra
enzimtica
3 CDU/mg
1
28
2
40
3
52
4
65
165
166
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Referencias
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