Pruebas cualitativas

Reaccin de Molisch
(da positiva con todos los glcidos, sean o
no reductores)
Fundamento:
Todos los glcidos por accin del cido
sulfrico concentrado se deshidratan
formando compuestos furfricos (las
pentosas dan furfural y las hexosas dan
hidroximetilfurfural). Estos furfurales
reaccionan positivamente con el reactivo de
Molish (solucin alcohlica de alfa-naftol)
dando un producto coloreado.

Reaccin de Benedict
Una de las reacciones ms comunes en la identificacin de
carbohidratos es la reaccin de Benedict. Esta reaccin es
especfica para azcares con grupo reductores libres (C=O). Todos
los monosacridos poseen un grupo reductor libre. Los disacridos
maltosa y lactosa tienen grupos reductores libres, pero la sacarosa
no los posee, ya que se pierden los grupos reductores de sus
componentes cuando sta es formada.
Esta prueba se basa en la capacidad del carbohidrato de
reducir el Cu2+ en un medio alcalino a Cu+. Este Cu+ se oxida y
precipita en forma de Cu2O, lo que proporciona la coloracin
positiva de la reaccin.
La coloracin producida va desde verde, amarillo, anaranjado o
rojizo, dependiendo de la concentracin de xido de cobre y
sta a su vez de la cantidad de cobre reducido.

Reaccin de Fehling
(da positiva con todos los glcidos reductores)
Fundamento:
El catin cprico (Cu++) del reactivo de Fehling reacciona con
los glcidos reductores pasando a xido cuproso, que es un
precipitado de color rojo ladrillo. Esta es una reaccin que
resulta positiva slo si el glcido es reductor. Los glcidos
reductores se manifiestan en medio alcalino, pero el Cu++ en
ese medio tiende a precipitar espontneamente como xido
cprico (que en esa forma no reacciona), de manera que es
necesaria la presencia de tartrato doble de sodio y potasio en
el reactivo para "secuestrar" al catin Cu++, a fin de evitar la
formacin del xido cprico, y permitir que reaccione con los
glcidos reductores

Reaccin del Lugol

(da positiva con los polisacridos)
Fundamento:
El color que dan los polisacridos con el lugol
(solucin de I2 y de IK) se debe a que el I2 ocupa
espacios vacos en las hlices de la cadena de
unidades de glucosa, formando un compuesto de
inclusin que altera las propiedades fsicas del
polisacrido, especialmente la absorcin lumnica.
Esta unin del I2 a la cadena es reversible, y por
calentamiento desaparece el color, que al enfriarse
reaparece. El lugol da con el almidn color azul y
con el glucgeno color rojo caoba.

Reaccin de Seliwanof
(da positiva con cetosas y negativa con aldosas)
Fundamento:
Los glcidos que se clasifican como cetosas tienen
en el carbono 2 una funcin cetona, en presencia de
un cido fuerte producen rpidamente derivados
furfricos que reaccionan con un difenol llamado
resorcina. La sacarosa (un disacrido formado por
glucosa y fructosa) y la inulina (un polisacrido de la
fructosa) dan positiva la reaccin, ya que el HCI del
reactivo provoca en caliente la hidrlisis del
compuesto liberando fructosa (responsable de la
reaccin positiva).

Reaccin de Bial
(da positiva con pentosas)
Fundamento:
Esta reaccin permita reconocer
pentosas (glcidos de 5 carbonos) y
sustancias que las contengan. Se basa
en la formacin de un compuesto
furfrico que se condensa con el
orcinol del reactivo.

Prueba de Barfoed
Sirve para distinguir monosacridos reductores de disacridos
reductores, basndose en la velocidad de reaccin; en los
monosacridos la formacin del oxido cuproso es mas rpido
que en los disacridos.
La reaccin consiste en utilizar acetato cprico y cido actico en
solucin cida con lo que los monosacridos son capaces de
reducir al cobre de manera ms rpida y en condiciones menos
drsticas.
Por supuesto que al tener la solucin un pH cido resulta necesario
controlar rigurosamente el tiempo de reaccin, pues si ste se
prolongara se producira la hidrlisis cida del enlace glucosdico
con la consiguiente liberacin del carbono anomrico y la aparicin
de nuevos grupos reductores que falsearan el resultado.

Reaccin de Hbl

Investigacin de dobles ligaduras

Los cidos grasos pueden ser saturados o no
saturados. Los no saturados se caracterizan por
tener en su molcula uno o ms dobles enlaces.
Como consecuencia de ello pueden adicionar oxgeno,
hidrgeno, cloro, bromo, yodo; utilizndose la
cantidad de sustancia fijada para determinar su
grado de insaturacin. El cido graso insaturado que
se halla con mayor frecuencia es el cido oleico, cuya
frmula es C18H34O2 con doble enlace en C9.
Fundamento:
El reactivo de Hbl est formado por yodo en alcohol
(con bicloruro de mercurio como catalizador). El yodo
se fija sobre la cadena carbonada de los cidos
grasos etilnicos a razn de dos tomos por cada
doble ligadura, por lo tanto el reactivo se decolora al
perder yodo (mientras el cido graso lo gana).

Reaccin de Salkowsky

(caracterizacin de colesterol)

En un tubo de ensayo, medir 2 ml de

la solucin clorofrmica de colesterol
de la experiencia anterior, inclinar el
tubo y deslizar por su pared interna
un volumen igual de cido sulfrico
concentrado, cuidando que los
lquidos no se mezclen.
Observar la formacin de un anillo
coloreado en la internase.

Reaccin de LiebermanBurchard
(caracterizacin de colesterol)
En un tubo de ensayo colocar 2
ml de solucin clorofrmica de
colesterol, aadir 10 gotas de
anhdrido actico, y luego 3
gotas de cido sulfrico
concentrado

Prueba de Fusin

Para investigar fsforo

Se utiliza Molibdato de amonio.
La positividad de esta reaccin indica la
presencia de fsforo inorgnico. Las
sustancias orgnicas dan la reaccin
positiva, siempre que se haga una
hidrlisis previa.
La reaccin positiva se manifiesta por la
reaccin de un precipitado amarillo de
fosfomolibdato de amonio.

Reaccin de la Ninhidrina

(caracteriza a todos los aminocidos)

Fundamento:

Todas las aminas primarias (y por lo tanto

tambin los alfa-aminocidos) reaccionan con
la ninhidrina en presencia de calor dando dixido
de carbono, amoniaco y un aldehdo que contiene
un tomo de carbono menos que el compuesto
original
El amoniaco reacciona con otra molcula de
ninhidrina formando un compuesto azul
violceo denominado prpura de Ruhemmans.

Reaccin de tiogrupos

caracterizacin de aminocidos azufrados)

Fundamento:
Esta reaccin dar positiva con aquellos aminocidos
que presenten azufre en su estructura, como son la
cistina, la cistena y la metionina. La reaccin consiste
en someter la muestra a una hidrlisis alcalina con
hidrxido de sodio, segn la siguiente ecuacin:
R-SH + 2 NaOH R-OH + Na2S + H2O

De esta manera el sulfuro de sodio se encuentra libre

para reaccionar con el acetato de plomo del reactivo de
Courtone:
Na2S + (CH3-COO)2Pb 2 CH3-COONa + PbS
(precipitado)

Reaccin de Hopkins-Cole

(caracterizacin del aminocido triptfano)

Fundamento:
El grupo indol del aminocido triptfano se
condensa con el cido glioxlico del
reactivo, formando compuestos
coloreados. El agregado de una pequea
cantidad de cido sulfrico concentrado
puro, aumenta la sensibilidad de la
reaccin

Reaccin xantoproteica

(caracterizacin de aminocidos
aromticos)
Fundamento:
Se produce la nitracin del anillo
bencnico presente en los aminocidos
tirosina, fenilalanina y triptofano,
obtenindose nitrocompuestos de color
amarillo, que se vuelven anaranjados en
medio fuertemente alcalino (formacin del
cido picrmico o trinitrofenol)

Reaccin de Millon

(caracterizacin del aminocido

tirosina)

Fundamento:
Los compuestos mercricos en
medio fuertemente ntrico (reactivo
de Millon) se condensan con el grupo
fenlico del aminocido tirosina,
formando complejos de color rojizo.

Reaccin de Sakaguchi

(caracterizacin del aminocido

arginina)

Fundamento:
El grupo guanidino del aminocido
arginina se condensa con el alfanaftol del reactivo, y luego forma un
complejo coloreado con el
hipoclorito de sodio.

Reaccin del Biuret

(caracterizacin de tripptidos en adelante)

Fundamento:
Los pptidos y protenas producen una
reaccin coloreada muy usada para la
valoracin de los mismos, llamada
reaccin del Biuret. Las protenas por sus
uniones peptdicas reaccionan con los
iones cpricos del reactivo en medio
alcalino formando un complejo de color
violeta. Se necesitan 2 ms uniones
peptdicas para que se forme el complejo
coloreado.