Cuestin1Tema10

Sehanobtenido2preparacionesdemembranasderivadasdelamembranaplasmticadelos
eritrocitosysehanpuestoendisolucinconuntampn:
(1) Vesculasalderecho(AD),dondelacaraexoplsmicaestmirandohaciaeltampn
(equivalente a la orientacin de la cara exoplsmica de lla membrana intacta del
eritrocito).
(2) Vesculasalrevs(AR),dondelacaraexoplsmicadelamembranaplasmticamira
haciaelinteriordelavescula.

Alderecho(AD)

AlRevs(AR)

a) AnnexinA5esunaprotenaqueunefosfatidilserina(PS),unodeloslpidospresentes
entodaslasmembranascelulares.SemezclaAnnexinA5marcadafluorescentemente
con cada preparacin de vesculas. Las vesculas se lavan para retirar el exceso de
Annexin A5 y entonces se observan al microscopio de fluorescencia. La presencia de
Annexin A5 se detecta como fluorescencia verde, como se muestra arriba. Qu se
puedededucirdeestosdatos?
b) SehapreparadounanticuerpomonoclonalcontralaBanda3,unaprotenaintegral
de la membrana de eritrocitos. El anticuerpo reconoce un eptopo en la parte C
terminal de la Banda 3. La incubacin de las preparaciones de vesculas con el
anticuerpo, seguido de la incubacin con un anticuerpo secundario marcado con un
fluorforogeneraunosdatossimilaresalafotografaquesemuestraarriba.Quse
puedededucirdelaestructuradelaBanda3conestosresultadosexperimentales?
c) Las dos preparaciones vesiculares se dejan sin tratar () o son incubadas con la
proteasa Tripsina (+). Las vesculas se lavan, las membranas se solubilizan y las
protenas se analizan por electroforesis en gel de SDS seguido de Western blot
utilizando un anticuerpo contra la Glycoforina A, una protena de la membrana del
eritrocito.Seobtieneelsiguienteresultado:

ADARADAR
Tripsina:++

Con estos datos de Western blot qu se puede deducir de la estructura de la

GlycoforinaA?