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Manual Enfermedades Chagas
Manual Enfermedades Chagas
MINISTERIO DE SALUD
INSTITUTO NACIONAL DE SALUD
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE
LABORATORIO PARA EL DIAGNSTICO
DE LA TRYPANOSOMIOSIS AMERICANA
(ENFERMEDAD DE CHAGAS)
Lima, 2005
MINISTERIO DE SALUD
INSTITUTO NACIONAL DE SALUD
Ministerio de Salud
ELABORACIN:
Biloga Silvia Vega Chirinos
Doctor Csar Nquira Velarde
Laboratorio de Leishmaniosis y Chagas
Centro Nacional de Salud Pblica-INS
1. edicin, 1999
ISBN 9972 857 26 3 (O.C.)
ISBN 9972 857 30 1 (N26) (2da. ed.)
ISSN 1607 4904
Hecho el Depsito Legal N 1501132002-5854
Ministerio de Salud, 2006
Av. Salaverry cuadra 8 s/n, Jess Mara, Lima, Per
Telfono: (511) 431-0410
Instituto Nacional de Salud, 2006
Cpac Yupanqui 1400, Jess Mara, Lima, Per
Telfono: (511) 471-9920 Fax: (511) 471-0179
Correo electrnico: postmaster@ins.gob.pe
Pgina Web: www.ins.gob.pe
Publicacin aprobada con R.J. N 164 2006 JOPD/INS
Portada: Observacin microscpica de formas mviles del Trypanosoma cruzi.
Aspectos de identificacin y diagnstico de la enfermedad de Chagas.
Se autoriza su reproduccin total o parcial siempre y cuando se cite la fuente.
CONTENIDO
Resolucin jefatural ................................................................................. 5
Presentacin ............................................................................................. 7
Introduccin ............................................................................................... 9
CAPTULO I
Trypanosoma cruzi ................................................................................... 11
CAPTULO II
Diagnstico de laboratorio ....................................................................... 21
CAPTULO III
Obtencin de la muestra sangunea ....................................................... 29
CAPTULO IV
Examen de la sangre: en fresco, gota gruesa, frotis .............................. 33
CAPTULO V
Tcnicas de concentracin: microconcentracin, concentracin
de Strout .................................................................................................... 37
CAPTULO VI
Hemocultivo .............................................................................................. 41
CAPTULO VII
Xenodiagnstico ....................................................................................... 47
CAPTULO VIII
Hemaglutinacin indirecta (HAI) .............................................................. 51
CAPTULO IX
ELISA ......................................................................................................... 57
CAPTULO X
Inmunofluorescencia indirecta (IFI) ......................................................... 63
CAPTULO XI
Control de calidad .................................................................................... 69
CAPTULO XII
Bioseguridad ............................................................................................. 73
Referencias bibliogrficas ...................................................................... 77
Anexo 1: Preparacin de reactivos y medios de cultivo ......................... 79
Anexo 2: Aislamiento y mantenimiento del Trypanosoma
cruzi en el laboratorio ............................................................................... 87
Anexo 3: Preparacin de antgenos ........................................................ 89
Anexo 4: Conservacin y envo de muestras
Examen de laboratorio solicitado segn tipo de muestra ..................... 93
Anexo 5: Solicitud para el diagnstico de laboratorio de
la enfermedad de Chagas
Anexo 6: Solicitud de control del diagnstico de laboratorio
de la enfermedad de Chagas
Anexo 7: Registro de muestras para investigacin y monitoreo
de casos de enfermedad de Chagas
Anexo 8: Protocolo para la deteccin de anticuerpos anti
Trypanosoma cruzi por ELISA
Anexo 9: Protocolo para la deteccin de anticuerpos anti
Trypanosoma cruzi por inmunofluorescencia indirecta (IFI)
MANUAL
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL DE
PRESENTACIN
El comit de redaccin
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL DE
INTRODUCCIN
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL
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I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL DE
CAPTULO I
Trypanosoma cruzi
Trypanosoma cruzi agente causante de la enfermedad de Chagas, es un
protozoario flagelado que durante su ciclo de vida, utiliza dos hospederos:
insectos de la familia Reduvidae, que hacen las veces de vector, y mamferos, incluyendo al ser humano, como reservorio.
El parsito presenta tres formas evolutivas (figura 1):
a) Trypomastigote: Es la forma infectante para los mamferos y el insecto
vector. Se caracteriza por ser de aspecto fusiforme, mide 20 micras,
presenta ncleo central y cinetoplasto subterminal del cual emerge
una membrana ondulante que recorre el parsito en toda su longitud y
cuyo borde libre lleva un flagelo que emerge por el extremo anterior. Se
le encuentra en la sangre de mamferos y en las heces del vector. No
se divide.
b) Amastigote: Es la forma intracelular del parsito, se aloja principalmente en los tejidos del msculo cardaco y del sistema neurovegetativo
del tubo digestivo. Es de forma redondeada, mide de dos a cuatro
micras, posee ncleo y cinetoplasto. Se dividen y forman seudoquistes
conocidos como "nidos de amastigotes".
c)
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I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL
AMASTIGOTE
(INTRACELULAR EN
EL MAMFERO)
TRYPOMASTIGOTE
(EN SANGRE CIRCULANTE DEL
MAMFERO Y HECES DEL INSECTO)
EPIMASTIGOTE
(EN PARTE ANTERIOR DEL
TUBO DIGESTIVO DEL INSECTO
Y EN CULTIVOS)
Figura 1
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I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL DE
Figura 2
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MANUAL DE
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MANUAL DE
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I NSTITUTO N ACIONAL
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S ALUD
MANUAL
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I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL DE
Forma crnica
Se hace evidente despus de meses o aos de ocurrido el ingreso del
parsito. Las manifestaciones ms frecuentes son de naturaleza cardaca
(insuficiencia cardaca), nerviosa y digestiva (megaesfago, megacolon).
En estas formas son escasos los trypomastigotes en sangre y amastigotes
en tejidos.
Forma indeterminada o de portador
Se trata de personas aparentemente sanas, en las que la inoculacin del
parsito y los sntomas de las formas agudas o crnicas no son reconocidos por el portador del parsito. La situacin del portador se evidencia,
generalmente, cuando la persona desea donar sangre y el tamizaje demuestra serologa positiva para Trypanosoma cruzi. Un portador puede
ser asintomtico toda la vida o presentar manifestaciones clnicas aun
despus de muchos aos de haberse infectado. En esta forma, son muy
escasos los trypomastigotes en sangre y amastigotes en tejidos.
Forma congnita
Corresponde a nios que nacen infectados por pasaje del parsito a travs de la placenta de la madre. Se trata de nios prematuros que presentan generalmente hepatoesplenomegalia con gran cantidad de
trypomastigotes en sangre y amastigotes en tejidos.
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I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL DE
CAPTULO II
DIAGNSTICO DE LABORATORIO
Para realizar el diagnstico del laboratorio, existen distintos procedimientos
tcnicos. Los directos o parasitolgicos, que se basan en la demostracin de
la presencia del parsito en sangre circulante y excepcionalmente en biopsias
y los inmunolgicos, que detectan la presencia de anticuerpos antiTrypanosoma cruzi (figura 8).
2.1. TCNICAS PARASITOLGICAS PARA LA DEMOSTRACIN DIRECTA DE
LA PRESENCIA DEL PARSITO
Gota fresca.
Gota gruesa-frotis.
Concentracin de Strout.
Microconcentracin.
Hemocultivo.
Xenodiagnstico.
PCR.
Biopsia.
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I NSTITUTO N ACIONAL
DE
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MANUAL
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I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL DE
ANTECEDENTE EPIDEMIOLGICO
-
TRANSMISIN VECTORIAL
TRANSFUSIN SANGUNEA
TRANSMISIN CONGNITA
TRANSPLANTE DE RGANOS
NO
INFECCIN POCO
PROBABLE
ASINTOMTICO
( PORTADOR)
SINTOMTICO
SOSPECHA
FORMA AGUDA :
BSQUEDA DE TRYPANOSOMAS EN
SANGRE
MTODOS PARASITOLGICOS :
EXAMEN EN FRESCO, GOTA GRUESA
CONCENTRACIN DE STROUT
MICROCONCENTRACIN
HEMOCULTIVO ,
XENODIAGNSTICO, PCR
FORMA CRNICA:
DETECCIN DE ANTICUERPOS EN
SUERO
NEGATIVO
MTODOS SEROLGICOS:
HEMAGLUTINACIN INDIRECTA
INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA
ENSAYO INMUNOENZIMTICO
ELISA
OTROS
NEGATIVO
DIAGNSTICO
IMPROBABLE
XENODIAGNSTICO
PCR
NEGATIVO
SEGUIMIENTO
CLNICO
POSITIVO
POSITIVO
DIAGNSTICO
CONFIRMADO
Figura 8
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I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL
TCNICAS DE
DIAGNSTICO
CRNICA PORTADOR
CONGNITA
GOTA FRESCA
GOTA GRUESA
++
++
MICROCONCENTRACIN
+++
+++
CONCENTRACIN
DE STROUT
+++
+++
HEMOCULTIVO
+++
+/-
+++
XENODIAGNSTICO
+++
+++
PCR
++++
++
++++
PRUEBAS SEROLGICAS
(HAI, ELISA, IFI)
- Al inicio
+++ Despus de 20 das
+++
IgG +: Ac de la madre
IgM +: Ac del recin nacido
hasta los seis meses
+/+
Ac
: No til
Utilidad relativa
Util
: Anticuerpos
:
:
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I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL DE
COMPONENTE PARASITOLGICO
MICROCONCENTRACIN , CONCENTRACIN DE STROUT,
HEMOCULTIVO
HAI, ELISA, IFI , INMUNOBLOT
CARACTERIZACIN BIOLGICA Y MOLECULAR DE T. cruzi
DESARROLO DE TCNICAS BIOMOLECULARES: PCR
CAPACITACIN
RESULTADOS
INFORMACIN Y MUESTRAS
COMPONENTE ENTOMOLGICO
XENODIAGNSTICO
CONFIRMACIN TAXONMICA DE LOS VECTORES
INVESTIGACIN DE INFECCIN NATURAL DE TRIATOMINOS
SUSCEPTIBILIDAD DE LOS TRIATOMINOS A LOS INSECTICIDAS
TCNICAS ALTERNATIVAS DE CONTROL VECTORIAL
ESTUDIOS MORFOMTRICOS Y DE VARIABILIDAD GENTICA
CONTROL DE CALIDAD
DE
ENVIO
DE
ENVIO
COMPONENTE ENTOMOLGICO
IDENTIFICACIN TAXONMICA, INVESTIGACIN DE INFECCIN
NATURAL DEL TRIATOMINO
DETERMINACIN DE LA DENSIDAD POBLACIONAL DEL VECTOR E
NDICE TRIPANO - TRIATMINICO
CAPACITACIN
CONTROL DE CALIDAD
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I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
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I NSTITUTO N ACIONAL
+y+
REPORTA
REACTIVO
Figura 11. Las muestras con resultado indeterminado, se vuelve a examinar. Si persiste el resultado se solicita y se examina una
nueva muestra.
REPORTA
REACTIVO
Resultado
REPORTA
REACTIVO
OTRA PRUEBA
(HAI o IB)
+y-
Discordante
Resultados
Enva muestra
REPORTA
NO
REACTIVO
-y-
Resultado
IFI
Resultado
ELISA e IFI
ELISA
(Tamizaje)
REPORTA
NO
REACTIVO
LABORATORIO REFERENCIA
NACIONAL
LABORATORIO REFERENCIA
REGIONAL
- : No reactivo
+: Reactivo
+ y +: Reactivo en ELISA y reactivo en IFI
+ y -: Reactivo en ELISA y no reactivo en IFI
Enva muestra
SEPARA EL
SUERO O
PLASMA
REGISTRA
INFORMACIN
OBTIENE
MUESTRA
SANGRE
LABORATORIO
LOCAL
MANUAL
DE PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO PARA EL DIAGNSTICO DE LA TRYPANOSOMIOSIS AMERICANA
DE
S ALUD
MANUAL DE
LABORATORIO
REFERENCIA REGIONAL
LABORATORIO
REFERENCIA NACIONAL
DIAGNSTICO
SEROLGICO
OBTENCIN DE MUESTRA
DE SANGRE
(Persona con sospecha
clnica o epidemiolgica)
BIOLGICA Y
MOLECULAR DE
TRYPANOSOMAS
HEMOCULTIVO
GOTA GRUESA
MICROCONCENTRACIN
CONCENTRACIN STROUT
NO
SE CONFIRMA
EL CASO
Resultado
Resultado
Una prueba +
CASO
CONFIRMADO
Enva muestra
de sangre (5mL)
+
Enva cultivo
AISLAMIENTO
DEL PARSITO
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I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL
GESTANTE
CHAGSICA
RECIN NACIDO
Basal de Ac IgG
ELISA e IFI
Titulacin de suero
+
DIAGNSTICO
CONFIRMADO
(Tratamiento)
Control serolgico a
los 3, 6 y 9 meses
ELISA e IFI
Titulacin de suero
IgG < Basal
Resultado
NO CONFIRMA
EL CASO
Figura 13. Se considera gestante chagsica cuando presenta serologa reactiva en dos tcnicas
de principios diferente o cuando es positiva a alguna de las tcnicas que demuestren la presencia
del parsito.
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I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL DE
CAPTULO III
d) Rotular el tubo donde se colectar la muestra con los siguientes datos: nombre, cdigo y la fecha de obtencin de la muestra.
3.1. OBTENCIN DE SANGRE CAPILAR
3.1.1. Materiales
Guantes.
Algodn.
Alcohol.
Laminillas cubreobjetos.
Plastilina.
Leja al 3-5%.
Plumn indeleble.
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I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL
3.1.2. Procedimiento
a) Sostener la mano izquierda del paciente con la palma hacia abajo y
seleccionar el dedo medio, hacer que el paciente extienda y flexione
los dems (en nios pequeos usar el dedo pulgar del pie o taln).
b) Limpiar el dedo con una torunda de algodn ligeramente humedecida en
alcohol para desinfectar, retirar la suciedad y la grasa de la yema del dedo.
c)
Pinchar directamente la yema del dedo con una lanceta estril. Hacerlo con un movimiento rpido.
d) Desechar la primera gota de sangre, limpiando el dedo con una torunda seca de algodn.
e) Colectar gotas de sangre para la gota gruesa, frotis y examen en fresco en lminas portaobjetos.
f)
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I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL DE
3.2.1. Materiales
3.2.2. Procedimiento
a) Solicitar al paciente que se siente y coloque el brazo sobre la mesa de
trabajo, con la palma de la mano hacia arriba.
b) Colocar la ligadura dos dedos por encima de la flexin del codo, ajustarla lo suficiente para aminorar la corriente sangunea y dilatar las venas,
sin apretarla tanto, de modo que reduzca el paso de sangre por las
arterias.
c)
Pedir al paciente que abra y cierre la mano varias veces, para favorecer
la dilatacin de las venas.
d) Con el dedo ndice de la mano izquierda palpe la vena en la que introducir la aguja.
e) Desinfectar la zona de la piel donde se realizar la puncin con un
pedazo de algodn embebido en alcohol.
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I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL
f)
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I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL DE
CAPTULO IV
Guantes.
Lanceta estril.
Algodn.
Alcohol corriente.
Laminillas cubreobjetos.
4.1.2. Procedimiento
a) Rotular tres lminas portaobjetos.
b) Obtener la muestra de sangre capilar en lmina, segn 3.1.
c)
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I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL
Probeta 10 mL.
Varilla de coloracin.
4.2.2.2. Procedimiento
a) Colocar las lminas sobre la varilla de coloracin.
b) Preparar el volumen necesario de solucin Giemsa diluida, aproximadamente 2 mL por lmina.
34
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL DE
Figura 14. La coloracin Giemsa, facilita la identificacin del parsito en base a sus
caractersticas morfolgicas tintoriales.
4.3. FROTIS
El frotis es el extendido de una gota de sangre en una lmina portaobjetos
seguida de la fijacin de la muestra y posterior tincin con Giemsa (Figura 15).
4.3.1. Procedimiento
Obtener la muestra de acuerdo con lo descrito en el tem 3.1.
a) Colocar una gota de sangre en el extremo de la superficie de una
lmina portaobjetos limpia.
b) Acercar a la muestra el borde de otra lmina portaobjetos,
posesionndola de tal manera que formen un ngulo de 45 y dejar
que la muestra se distribuya en el borde de la lmina.
c)
Conservando el ngulo de 45, deslizar la lmina auxiliar sobre la superficie de la lmina con la muestra. El extendido de sangre o frotis
debe ser una pelcula fina.
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I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL
Figura 15. Trypomastigote de Trypanosoma cruzi en preparaciones de frotis y gota gruesa de sangre circulante. Se
observa el cinetoplasto posterior al ncleo central, la membrana ondulante y el flagelo.
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I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL DE
CAPTULO V
TCNICAS DE CONCENTRACIN
5.1. MICROCONCENTRACIN
La tcnica consiste en concentrar los parsitos de una muestra de sangre
colectada en tubos capilares heparinizados por centrifugacin. Los elementos de la sangre se separan por gradiente de densidad, concentrndose los glbulos rojos en la parte inferior del capilar, sobre ella se ubica
un anillo blanquecino de 1 mm de altura conformado por los glbulos
blancos y en la parte superior lquida transparente constituida por el plasma. Los tripanosomas presentes en la muestra se ubicarn entre los glbulos blancos y el plasma.
Microcentrfuga o centrfuga.
Lminas portaobjetos.
Laminillas cubreobjetos.
5.1.2. Procedimiento
a) Obtener la sangre en los capilares heparinizados segn tem 3.1.2.
b) Centrifugar la muestra durante un minuto a 5000 rpm.
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I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL
c)
5.1.3. Lectura
Observar directamente en el microscopio la zona del plasma aproximadamente a 10 mm de los glbulos blancos. Focalizar inicialmente con el
objetivo de 10X de aumento y luego buscar las formas trypomastigotes
mviles del parsito con el objetivo de 40X (Figura 17).
5.1.4. Resultado
Positivo: Se observan formas flageladas mviles de trypomastigotes de
Trypanosoma cruzi.
Negativo: No se observan formas de trypomastigotes de Trypanosoma cruzi.
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I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL DE
Microscopio.
Centrfuga.
Tubos de centrfuga.
Lminas portaobjetos.
Laminillas cubreobjetos.
Asas microbiolgicas.
5.2.2. Procedimiento
a) Extraer 5-10 mL de sangre venosa en un tubo sin anticoagulante, segn tem 3.3.
b) Dejar a temperatura ambiente hasta que se coagule.
c)
Separar el suero.
d) Centrifugar este suero a 160g (800 rpm) durante dos minutos para
descartar los glbulos rojos.
e) Centrifugar nuevamente el sobrenadante a 300-600 g (2000-2500 rpm),
durante diez minutos.
f)
39
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL
5.2.3. Lectura
Observar en el microscopio la presencia de trypomastigotes mviles de
Trypanosoma cruzi, con objetivos de 10X 40X de aumento.
Es aconsejable observar cuidadosamente varias preparaciones en busca
de formas mviles del parsito.
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I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL DE
CAPTULO VI
HEMOCULTIVO
Estufa 28 30C.
Centrfuga.
Microscopio ptico 10x, 40x, 100x de aumento y ocular 10x.
Cabina de flujo laminar o cubculo.
Balanza.
Refrigerador.
Micropipeta 5 50 uL, 50 1000 uL.
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I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL
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I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL DE
HEMOCULTIVO
SANGRE
OBTENCIN DE
MUESTRA
CONCENTRACIN POR
CENTRIFUGACIN
5 MIL rpm x 15minutos
CULTIVO
28 C
LECTURA
7 DA
EN FRESCO
Observacin al microscopio
10 x 40 x
Formas mviles del parsito
15 DA
COLORACIN GIEMSA
Formas tpicas, con citoplasma,
azul claro, ncleo y cinetoplasto
de color azul violeta
SUBCULTIVO
CADA 15 DIAS
28 C
LECTURA FINAL
60 DA
EN FRESCO
Observacin al microscopio
10 x 40 x
Formas mviles del parsito
COLORACIN GIEMSA
Formas tpicas, con citoplasma,
azul claro, ncleo y cinetoplasto
de color azul violeta
43
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL
6.5. LECTURA
a) El movimiento caracterstico de los epimastigotes (figuras 20 y 21) permite detectarlos con facilidad, sin embargo, es necesario colorearlos
para confirmar su morfologa.
b) Realizar un extendido con el asa de siembra, luego fijar con metanol
durante tres minutos y colorear con Giemsa.
c) Observar en el microscopio la forma tpica, el ncleo de color azul violeta y el cinetoplasto ms denso y oscuro. Se les visualiza aislados o
agrupados a manera de rosetas.
d) Si no se observan formas mviles continuar la incubacin a 28 C y
repetir la lectura a los siete das.
e) Cada 15 das repicar 0,5 mL de los cultivos negativos en medio fresco.
(resiembra a ciegas).
f) El tiempo que se requiere para demostrar la positividad del cultivo,
depende de la densidad parasitaria de la muestra sembrada y de la
adaptabilidad del parsito al medio. Generalmente esto ocurre despus de uno a dos meses.
g) Antes de realizar la lectura final, centrifugar el sobrenadante del cultivo
y observar en el sedimento, la presencia o ausencia del parsito.
44
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL DE
6.6. RESULTADO
Cultivo positivo: Se observa la presencia de epimastigotes de Trypanosoma
cruzi.
Cultivo negativo: No se observa la presencia de epimastigotes de
Trypanosoma. cruzi.
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I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL
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I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL DE
CAPTULO VII
XENODIAGNSTICO
Es una tcnica que permite la multiplicacin del parsito in vivo y consiste
en hacer picar a la persona sospechosa de infeccin por el vector libre de
infeccin, de preferencia la especie de triatomino de mayor importancia en
la regin.
Es aplicable tanto en la forma clnica aguda como en la crnica portador.
7.1. Equipos
Microscopio con objetivo de 20X de aumento.
7.3. Materiales
-
Tul.
Bandas elsticas.
Sujetadores de tela.
Lminas portaobjetos.
Laminillas cubreobjetos.
47
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL
7.4. Procedimiento
a) Colocar en cada caja de cinco a diez ninfas de triatominos del III y IV
estadio, los que deben estar en ayuno por lo menos 15 das.
b) Cubrir la caja con tul, asegurndolo con una banda elstica.
c)
Alimentarlos cada 15 das, sujetando las cajas con las ninfas sobre la
piel desnuda de un ave (pollo, paloma u otro).
48
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL DE
7.5. Lectura
Examinar la muestra en el microscopio (objetivo de 20X de aumento), buscando formas mviles: epimastigotes o trypomastigotes metacclicas del
parsito que son identificadas por el movimiento ondulante caracterstico
(Figura 24).
Figura 24.
49
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL
7.6. Resultado
Xenodiagnstico positivo: Se observan formas trypomastigotes o
epimastigotes de Trypanosoma cruzi.
Xenodiagnstico negativo: No se observan tripanosomas o epimastigotes.
De ser la prueba positiva, se puede realizar el aislamiento del parsito
sembrando la muestra en medios de cultivo o inoculando experimentalmente en ratones (anexo 2) para posteriores estudios de caracterizacin e
identificacin.
50
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL DE
CAPTULO VIII
Micropipeta de 5 a 50 L.
Micropipeta multicanal de 5 a 50 .
Sangre de carnero.
51
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL
Descartar el sobrenadante.
Descartar el sobrenadante.
52
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL DE
d) Eliminar el sobrenadante.
e) Lavar el sedimento con 10 mL de solucin diluyente.
f)
g) Descartar el sobrenadante.
h) Resuspender el sedimento en 5 mL de solucin diluyente.
HEMAGLUTINACIN INDIRECTA
TANIZACIN
CIDO
TNICO
HEMATES
TANADOS
HEMATES
SENSIBILIZACIN
+
HEMATES
TANADOS
ANTGENO DE
T. cruzi
HEMATES
SENSIBILIZADOS
DESAROLLO DE LA PRUEBA
+
HEMATES
SENSIBILIZADOS
ANTICUERPOS
ESPECFICOS
HEMAGLUTINACIN
Figura 25
53
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL
d) Agregar a cada pozo de la fila A, 25 uL del suero a evaluar, homogeneizar aspirando y expeliendo varias veces con la pipeta.
e) Luego realizar diluciones sucesivas al doble. Con la ayuda de una
micropipeta multicanal tomar 50 uL de la dilucin de cada suero por
evaluar y verterlo en los pozos de la fila siguiente, homogeneizar y repetir
igual con la siguiente fila.
f)
54
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL DE
8.9. RESULTADO
Reactiva:
HEMAGLUTINACIN INDIRECTA
Figura 26
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I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL
HEMAGLUTINACIN INDIRECTA
Tamizaje de sueros en la dilucin de valor diagnstico 1/4
En esta placa los pozos D4, G12 y H12 corresponden a sueros reactivos (positivos)
Figura 27
56
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL DE
CAPTULO IX
ELISA
La tcnica ELISA emplea antgenos solubles de Tripanosoma cruzi, adheridos a soportes inertes (placa de microtitulacin) y antiglobulinas humanas conjugadas con enzimas, como detectores de la reaccin antgenoanticuerpo (Figura 28).
Es un mtodo de gran sensibilidad, pero cuya especialidad est sujeta a la
calidad de los antgenos y reactivos empleados por lo que exigen una
rigurosa estandarizacin.
Los kits comerciales contienen las placas con antgeno y reactivos.
La reaccin suele hacerse positiva despus de 20 das de infeccin.
9.1. EQUIPOS E INSTRUMENTOS
Estufa de incubacin 37 C.
Reloj.
Balanza de precisin.
Refrigeradora.
Lector ELISA.
Lavador de placas ELISA.
Micropipeta de 0,5 a 10 L y 10 a 100 L.
Micropipeta multicanal de 50-200 L.
Potencimetro.
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I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL
ELISA
MTODO INDIRECTO PARA LA DETECCIN Y MEDICIN DE ANTICUERPOS
ANTI Trypanosoma cruzi
Figura 28
58
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL DE
59
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL
60
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL DE
Figura 29
61
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL
62
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL DE
CAPTULO X
10.1. EQUIPO
Estufa graduada a 37 C.
Balanza de presicin.
Potencimetro.
Reloj.
Refrigerador.
Secadora o ventilador.
Pizetas.
Cmara hmeda.
63
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL
INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA
PRIMERA ETAPA
+
ANTGENO DE
TRYPANOSOMA
ANTICUERPO
COMPLEJO Ag-Ac
ANTIGLOBULINA
MARCADA CON
FLUORESCEINA
COMPLEJO Ag-Ac
MARCADO
SEGUNDA ETAPA
COMPLEJO Ag-Ac
Figura 30
64
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL DE
10.3. PROCEDIMIENTO
Elaborar el protocolo de trabajo en el fomato del anexo 9, asignar un casillero para cada suero por evaluar y anotar en l su cdigo.
65
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL
10.4. LECTURA
La lectura se realiza en microscopio para fluorescencia, con objetivo de
20X.
Primero revisar los controles, en el control positivo debe observarse la
superficie y el flagelo de los parsitos de un color verde manzana fluorescente. (Figura 31) y en el control negativo al igual que en el blanco de
reactivos, debe observarse el parsito de color rojizo opaco, sin fluorescencia.
Si los controles responden como tales, la corrida es vlida y se continua
con la lectura de las muestras examinadas
De acuerdo con la intensidad o ausencia de fluorescencia que muestran
los trypanosomas se registran las lecturas como:
REACTIVO (+). Cuando la superficie o los bordes de los parsitos fluorescen
francamente de un color verde manzana.
NO REACTIVO (-). Si los parsitos se observan opacos entre rojizos y marrones oscuros
INDETERMINADO (I), se observa una dbil fluorescencia no homognea en
los parsitos.
66
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL DE
SUERO
1
1/32
S6
1/64
1/128
1/256
1/512
1/
1024
S6
CN
CI
CP
10
11
12
67
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL
Efectuar el procedimiento de la tcnica IFI evaluando cada suero en diluciones seriadas al doble a partir de 1/32
Se considera el ttulo a la mayor dilucin que presente franca fluorescencia
en la superficie del parsito.
68
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL DE
CAPITULO XI
CONTROL DE CALIDAD
La evaluacin de la calidad del diagnstico de laboratorio o proceso de
aplicacin de medidas de control de calidad interno y externo, permiten
determinar la fiabilidad de los resultados que emite el laboratorio.
CONTROL DE CALIDAD INTERNO
El objetivo del control de calidad interno es asegurar que los procesos se
ejecutan correctamente, desde que la muestra ingresa al laboratorio hasta
la emisin de los resultados y que los equipos e instrumentos usados
tengan ptimo desempeo.
Una de las actividades del control de calidad interno en el diagnstico
serolgico de la enfermedad de Chagas, consiste en la inclusin de un
Suero Control Interno (CI), en el trabajo diario, adems de los habituales
controles positivos y negativos.
El CI es un suero caracterizado como reactivo dbil a la deteccin de
anticuerpos (IgG), anti Trypanosoma cruzi, con ttulo conocido y cercano al
valor de corte, es especfico para cada tcnica o kit y debe ser tratado al
igual que las dems muestras por examinar. Permite monitorizar la calidad del procedimiento ya que su resultado refleja objetivamente las variaciones ocurridas en cada ensayo y facilita la toma de decisin oportuna
para corregir fallas o errores.
Las lecturas diarias de absorbancia del CI se anotan en la grfica de Levey
Jennings y se analizan e interpretan de acuerdo con las reglas de Shewart (9).
(Figura 32).
Cuando la lectura de absorbancia del suero control interno cae fuera de los
lmites permitidos (+/- 2 desviaciones estandar), se debe repetir el ensayo
y si se reitera el resultado se proceder al anlisis para detectar las posibles causas de error.
Recomendaciones generales
69
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL
DO/VC
+ 3 ds
+ 2 ds
0,3
- 2 ds
- 3 ds
Ensayos
1
12
16
20
Emplear equipos e instrumentos en ptimas condiciones, con mantenimiento y calibracin (balanza, potencimetro, lector ELISA, lavador de
placas, microscopio para inmunofluorescencia, micropipetas).
70
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL DE
Analizar la validez del ensayo considerando los parmetros establecidos en el kit y el resultado del control interno.
71
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL
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I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL DE
CAPTULO XII
BIOSEGURIDAD
Las medidas de bioseguridad son indispensables para proteger la salud
y seguridad del personal que trabaja en laboratorios donde se manipulan
productos biolgicos.
Sangre, suero sanguneo, biopsias y material fecal de triatominos, son
productos biolgicos que se procesan en las pruebas de diagnstico
parasitolgico e inmunolgico de la enfermedad de Chagas.
Los laboratorios que procesan las muestras mencionadas, son de nivel
de bioseguridad 2, es decir, se trata de laboratorios que cuentan con cmaras de bioseguridad y otros dispositivos para la proteccin personal.
12.1. DEL PERSONAL DE LABORATORIO
Toda persona que manipula sangre o sus derivados, debe estar vacunada
contra el virus de la hepatitis B.
Al momento de extraer la sangre:
73
I NSTITUTO N ACIONAL
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S ALUD
MANUAL
Cabina clase II: Son de flujo laminar vertical, similar a la anterior, pero
con aire filtrado por HEPA circulando.
74
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL DE
La persona accidentada debe lavarse la zona afectada con jabn, alcohol o desinfectante.
75
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL
d) Si la muestra es negativa para VIH, este examen debe repetirse mensualmente hasta el sexto mes. La continuidad negativa de la muestra
indica que el trabajador no se ha contaminado.
12.5. DESINFECCIN, LIMPIEZA Y ESTERILIZACIN
12.5.1. Desinfeccin
a) Los procedimientos para eliminar elementos causantes de infecciones virales, bacterianas, micticas y parasitarias, dependern de la
naturaleza del agente presente en el material de vidrio u otro.
b) Los ms comunes son: agentes qumicos en estado lquido (mezcla
sulfocrmica, leja, etc.) y los agentes fsicos como el calor, hervido,
autoclave, irradiacin ultravioleta, etc.
12.5.2 Lavado
Despus de la eliminacin de los agentes infecciosos (desinfeccin), el
material de vidrio sucio debe ser lavado, recomendndose el uso de
detergentes.
12.5.3.a Autoclave (vapor saturado a presin)
Permite controlar la temperatura (121 C) y la presin (15 atmsferas). Se
usa para soluciones, material de goma, plstico, vidrio o metal. Material de
vidrio con medio de cultivo. Se puede emplear tambin una olla a presin
provista de una rejilla.
12.5.3.b Horno (calor seco)
Suele ser elctrico y permite el control de la temperatura (180-200 C) Por
este sistema no puede esterilizarse papel, material plstico, de goma,
etc.).
12.5.3.c Agentes fsicos
Para reactivos biolgicos degradables por calor seco o hmedo, se emplean membranas de filtracin (0,22 m).
76
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL DE
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
1.
Atias A, Neghme A. (1979). Parasitologa clnica. Primera edicin editorial Inter. Mdica. Buenos Aires. p. 216-227.
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3.
4.
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8.
9.
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77
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL
11.
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Ponce C, et al. (2005). Validation of a rapid and reliable test for diagnosis of Chagas disease by dectection of Trypanopsoma cruzi specific antibodies in blood of donors and patients in Central America.
Journal of Clinical Microbiology. 43 (10); 5065-68.
14.
15.
16.
Solari A, Lorca M. (1998). Tecnologas aplicadas al diagnstico e investigacin de enfermedades parasitarias. Network for research and
training in parasitic diseases in the southern cone of Latinoamrica
SIDA/SAREC. Santiago de Chile. p. 50.
17.
18.
19.
Zaman V. (1997). Atlas color de parasitologa clnica. Segunda edicin. Editorial Mdica Panamericana, Buenos Aires. p. 82.
20.
78
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL DE
ANEXO 1
79
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL
2. CULTIVO
2.1. Solucin de estreptomicina: (500 mg/mL)
Diluir 5 gr de sulfato de estreptomicina en 10 mL de agua destilada estril.
La concentracin final del antibitico en el medio de cultivo o solucin
salina debe ser 500 g/mL. Ejemplo: Para 100 mL de medio de cultivo
agregar 0,1 mL de la solucin de estreptomicina.
Conejo adulto.
Tijeras.
80
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL DE
2.4.2. Procedimiento
a) Sujetar al conejo en posicin cbito dorsal.
b) Ubicar la zona de puncin (latido cardaco), cortar con una tijera el
pelaje y desinfectar con alcohol yodado el rea elegida.
c)
d) Muy cerca al mechero, para conservar la esterilidad de la sangre, vaciar la sangre a un matraz o baln estril, el cual contiene perlas de
vidrio.
e) Agitar suavemente con movimientos rotatorios para desfibrinar la sangre durante cinco minutos.
81
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL
3. HEMAGLUTINACIN INDIRECTA
3.1. Solucin de Alsever
Glucosa anhidrida ..................................................................... 18,66 g
Cloruro de sodio ........................................................................ 4,18 g
Citrato de sodio .......................................................................... 8,00 g
cido ctrico ................................................................................ 0,55 g
Agua destilada ........................................................................... 1000 mL
Solucin 1:
KH2PO4 ...................................................... 2,04 g
H2O destilada .................... 100 mL
Solucin 2:
NA2HPO4 .................................................. 2,13 g
H2O destilada .................... 100 mL
REACTIVOS
PBS ph 7,2
PBS ph 6,4
Solucin 1
Solucin 2
NaCI
Agua destilada
7 mL
18 mL
2,1 g
250 mL
18,4 mL
6,7 mL
2,1 g
250 mL
82
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL DE
4. ELISA
4.1. Buffer fosfato salino (PBS) pH 7,2
KCI .............................................................................................. 0,2 g
Na2HPO4 anhidro ....................................................................... 1,148 g
Na H2PO4 anhidro ...................................................................... 0,2 g
NaCI ............................................................................................ 8,0 g
Agua destilada ........................................................................... 1000 mL
Conservar a 4 C.
83
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL
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I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL DE
Solucin B
NaHCO3 ..................................................................................................................................................... 4,2 g
Agua destilada c.s.p. ................................................................. 100 mL
Mezclar 0,4 mL de la solucin A con 10 mL de la solucin B.
Verificar o ajustar el pH a 8,5. Utilizar la solucin A si est por debajo de 8,5
y la solucin B si est por encima de este valor.
85
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL
TTULO RECOMENDADO
CONJUGADO
1/50
1/100
1/200
1/400
1/800
CP
1/32
1/32
1/32
1/32
1/32
1/32
CN
1 /32
1/32
1/32
1/32
1/32
1/32
11
12
10
86
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL DE
ANEXO 2
1.1.b. Xenodiagnstico:
1.2. Vectores
Procedimiento:
Desinfectar el insecto positivo a la infeccin por T. cruzi sumergindolo durante un minuto en una solucin alcohlica al 70%.
Cortar la parte terminal del abdomen del insecto con la ayuda de unas
pinzas y tijeras finas desinfectadas retirar el tubo digestivo y colocarlo
sobre una lmina porta objetos.
87
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL
2. MANTENIMIENTO
2.1. En medio de cultivo
Los parsitos aislados se mantienen en cultivo por repiques semanales en nuevos tubos con agar sangre. Es recomendable mantener dos
tubos del mismo cultivo y manipular solamente uno de ellos, esto permitir continuar los cultivos en caso de contaminacin.
2.2. En animales
La
lar
za
en
inoculacin en animales de experimentacin es otra forma de aisy mantener el parsito. Se usa ratones jvenes y el control se realiexaminando peridicamente la parasitemia en una gota de sangre,
fresco, obtenida por corte en la porcin terminal de la cola.
2.3. Criopreservacin
Es la conservacin de los parsitos a -80 C, este procedimiento mantiene las caractersticas nativas del parsito. Se realiza colocando una
suspensin de parsitos procedentes de cultivo en medios de conservacin con glicerol a diferentes concentraciones.
88
I NSTITUTO N ACIONAL
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S ALUD
MANUAL DE
ANEXO 3
PREPARACIN DE ANTGENOS
1. ANTGENO PARA LA INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA
Las lminas empleadas para la prueba de inmunofluorescencia indirecta,
se preparan con epimastigotes de Trypanosoma cruzi obtenidos en medio
de cultivo y tratados con formol.
Se emplean cultivos de cuatro das (fase exponencial del crecimiento). Los
parsitos deben estar aislados para fijarse en las lminas, evitar las rosetas.
5 mL de cultivo de epimastigotes.
Acetona.
Centrfuga.
Cmara de Newbauer
89
I NSTITUTO N ACIONAL
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S ALUD
MANUAL
En un frasco couplin que contiene acetona fra, sumergir las lminas para
fijar el parsito. Mantenerlo en refrigeracin (4 C) durante diez minutos.
90
I NSTITUTO N ACIONAL
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S ALUD
MANUAL DE
1.4. RECOMENDACIONES
Emplear lminas limpias, libres de grasa, para facilitar la fijacin uniforme de la suspensin de parsitos a la lmina y para evitar los artefactos que dificultan la lectura.
En un frasco couplin o frasco con tapa, que contiene alcohol acetona V:V, sumergir las lminas IFI nuevas, durante 1 a 24 horas. Secarlas con una gasa limpia y conservarlas envueltas con
papel hasta el momento de su uso.
50 mL de cultivo de epimastigotes.
Gasa.
Centrfuga.
Congeladora -20 C.
Bao Mara.
91
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL
2.2. PROCEDIMIENTO
a) Filtrar el cultivo a travs de una capa de gasa o lana de vidrio.
b) Centrifugar el cultivo a 4000 rpm durante 10 minutos.
c)
j)
k)
92
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
MANUAL DE
ANEXO 4
Procedimiento:
a) Colocar las muestras en una bolsa plstica, luego acondicionarlos en
un contenedor secundario (recipiente de cartn grueso o plstico, rodeado con hielo seco o cubos de hielo).
b) El recipiente secundario debe ser colocado en una caja de tecnoport
(poliestireno) u otro material que conserve las temperauras bajas. Incluir la ficha de solicitud de examen en bolsa plstica sellada.
c)
URGENTE
MATERIAL BIOLGICO PERECIBLE
DESTINO: INSTITUTO NACIONAL DE SALUD
DIRECCIN: CALLE CPAC YUPANQUI 1400
JESS MARA - LIMA 11
TELEFONOS: 471-9920 / 471-2529
ATENCIN: LABORATORIO DE LEISHMANIOSIS Y CHAGAS
93
I NSTITUTO N ACIONAL
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S ALUD
MANUAL
Anotar en lugar visible la temperatura de conservacin de la muestra, refrigeracin (4-8 C) o congelacin (0 - 20 C). Colocar una flecha indicando la
posicin en la que debe mantenerse la caja.
La va de transporte debe ser la ms rpida posible.
En caso de contar con contenedores prefabricados, seguir las instrucciones que indica el envase.
MUESTRA
EXAMEN DE
LABORATORIO
TIPO
OBTENCIN
DE SANGRE
CANTIDAD
GOTA GRUESA
Sangre
capilar
En lminas
2 Lminas
MICROCONCENTRACIN
Sangre
capilar
En capilares
con EDTA
4 - 6 tubos
capilares
CONCENTRACIN
STOUT Y
HEMOCULTIVO
Sangre
venosa
En tubo
5 mL
vacutainer
sin
anticoagulante
ELISA
IFI
HAI
IB
Suero o
En tubo
plasma
1 - 2 mL
vacutainer
sanguneo sin
anticoagulante
CARACTERSTICAS
Homognea
Evitar las
burbujas
de aire
en el
capilar
CONSERVACIN
PROCESAMIENTO
TRANSPORTE
Temperatura
ambiente
Inmediato
Temperatura
ambiente
Temperatura
ambiente
y en posicin
vertical
Antes de las
cuatro horas
Con refrigerante
Inmediato o
antes de
siete das
Con refrigerante
Refrigeracin
Esteril
No hemolizado
No contaminado
94
(4 - 8 C )
Hasta 5 das:
Refrigeracin
4-8 C
Mediato
Mayor de 5 das:
Congelacin
-20 a - 80 C
Con refrigerante
I NSTITUTO N ACIONAL
DE
S ALUD
Anexo 5
Solicitud para diagnstico de laboratorio de la enfermedad de Chagas
Establecimiento de salud
Banco de sangre
No
Fecha
I. DATOS PERSONALES
_____/_____/_____
Da
Apellidos y
Nombres
Ao
Mes
Edad
Sexo
Aos
Fem Masc
Meses
Direccin
Calle y N
Distrito
Localidad
Provincia
Departamento
II. ANTECEDENTES
Diagnstico clnico
Sintomtico
Aspectos epidemiolgicos
Asintomtico
Presencia de chirimachas en su
vivienda
Signo de Romaa
Agudo
Dnde
No
No
Quin
No
No
No
No
Chagoma de inoculacin
Fiebre
Cdigo de vivienda
Manifestaciones cardiacas
Insuficiencia cardiaca
Crnico
Hubo
Cundo
No
Disfagia
Estreimiento
Recibi transfusin sangunea
Megaesfago
Congnito
Megacolon
Aumento de ganglios
(Leishmaniosis )
Prematuro
Gestante
Hepato-esplenomegalia
Donde se realiz el dx .
Fecha
Parasitemia positiva
Abs.
Serologa reactiva
Valor de
corte
ELISA:
OTRA:
Complet el
tratamiento
Recibi medicamento
No
No
Diagnstico
Examen parasitolgico
Fecha obt .
muestra
Examen serolgico
Fecha recep.
muestra
Fecha obt.
muestra
Resultado
ELISA
Microconcentracin
HAI
Concent. Strout
Hemocultivo
IFI
Fecha recep.
muestra
Resultado Abs.
IB
Xenodiagnstico
Nombres y apellidos
Firma
V. de C
Ttulo
DATOS PERSONALES
En el casillero direccin, anotar el lugar de residencia habitual
II.
ANTECEDENTES
Diagnstico clnico
Sintomtico: marcar con X si hay alguna sintomatologa compatible con la enfermedad. En caso
de infecciones agudas o crnicas, identificar con una X el casillero correspondiente a los
sntomas presentes.
Asintomtico o indeterminado: marcar con una X cuando no hay sintomatologa pero hay
antecedentes epidemiolgicos que hacen sospechar de la infeccin.
Aspectos epidemiolgicos
Llenar o marcar con una X los casilleros correspondientes. Precisar en lo posible las fechas de los
datos solicitados.
reas endmicas: Arequipa, Moquegua, Tacna, Ica, Cajamarca, Amazonas y San Martn.
Resultados anteriores de laboratorio y tratamiento recibido
Marcar el casillero que corresponda. Anotar la fecha, el nombre del establecimiento que realiz el
diagnstico, la tcnica y nombre del kit usado, en caso de ELISA absorbancia (Abs) de la muestra
y el valor de corte (Vc) correspondiente.
Anexo 6
Solicitud de control del diagnstico de laboratorio
de la trypanosomiosis americana
DIRECCIN REGIONAL DE SALUD
ESTABLECIMIENTO DE SALUD
RESPONSABLE DEL DIAGNSTICO
ACTIVIDAD EN CONTROL
Vigilancia
serolgica
Diagnstico
de laboratorio
Proyecto de
investigacin
Otro
PERIODO
N.
Cdigo
Laboratorio
Nombres y Apellidos
N Muestras
Reactivas/Positivas
Observaciones
NOTA: Enviar todas las lminas o sueros positivos y 10% de los negativos examinados en el trimestre (lminas coloreadas con Giemsa de
exmenes de sangre por gota gruesa, concentracin). Adjuntar el presente formato con la informacin solicitada empleando una hoja para
cada actividad y el formato de solicitud de diagnstico de las muestras positivas o reactivas
.
Lugar y fecha
Firma
N.
(*) D
CD
M
NOMBRES Y APELLIDOS
GG
:
CONC. :
CULT. :
ANEXO 7
SOLICITA
(*)
Gota gruesa
Concentracin
Cultivo
GG
HAL
ELISA
IFI
:
:
:
OBSERVACIONES
Hemaglutinacin indirecta
Ensayo inmunoenzimtico
Inmunofluorescencia indirecta
EXAMEN DE LABORATORIO
CONC. CULT. HAI ELISA IFI
Diagnstico
Confirmacin diagnstico
Monitoreo o seguimiento de caso
FECHA
:
:
:
ANEXO 8
Fecha
Valor de corte
11
10
A
1
B
1
C
1
D
1
E
1
F
1
G
1
12
Lote N
Da
Mes
Ao
CONJUGADO
Fecha de
vencimiento
Ttulo
CONTROLES
Cdigo N
Suero control negativo a T.cruzi
CN
CN
CN
CP
CP
CI
Blanco de reactivos
VALIDACION DE LA CORRIDA
Valor de corte
Lectura (Abs)
No
(Vc):
OBSERVACIONES
Firma
Responsable del control interno
Fecha
Da
Mes
Ao
ANEXO 9
DETECCIN DE ANTICUERPOS ANTI Trypanosoma cruzi POR IFI
Ejecutor del ensayo
1
Fecha
3
10
3
11
4
12
5
10
11
12
6
7
OBSERVACIONES
10
11
12
ANTIGENO IFI
Fecha de
vencimiento
Lote N
Da
Mes
Ao
CONJUGADO
Lote N
Ttulo
CONTROLES
Cdigo N
Ttulo
CP
1/
CN
1/
CI
1/
Blanco de reactivos
Sin suero
Lectura
LECTURA E INTERPRETACIN
S
Validez de la corrida
Leyenda de lecturas:
Leyenda de resultados:
Fluorece francamente
Reactivo
No fluorece
No reactivo
NR
Fluorece dbilmente
+/-
Indeterminado
No
OBSERVACIONES
Firma
Responsable del control interno
Fecha
Da
Mes
Ao
CEPREDIM
SE TERMIN DE IMPRIMIR
POR ENCARGO DEL INS
EN EL MES DE ABRIL DE 2006,
EN LOS TALLERES GRFICOS DEL