AISLAMIENTO DE POLIOVIRUS

I. INTRODUCCIN
Es una enfermedad vrica aguda, a menudo identificada por la parlisis flcida aguda,
pero con una amplia diversidad de presentaciones clnicas. El agente infeccioso es el
Poliovirus (gnero Enterovirus) de los tipos 1, 2 y 3. El tipo 1 causa ms a menudo las
epidemias y el 2 y 3 producen muchos de los casos relacionados con la vacuna. El
diagnstico se establece mediante el aislamiento e identificacin del agente etiolgico. El
reservorio se encuentra en los humanos y la forma de transmisin se produce por
contagio de persona a persona por va fecal-oral. El perodo de transmisibilidad puede
mantenerse durante todo el tiempo de excrecin.
El perodo de incubacin es de 6 a 20 das en los casos paralticos, con un rango de 3 a
35 das. La infeccin por poliovirus da lugar a una inmunidad especfica de tipo de larga
duracin. La utilizacin de vacunas antipolio oral ha permitido en todo el mundo crear una
situacin de inmunidad colectiva que ha ido eliminando paulatinamante la circulacin del
virus salvaje. La vacunacin con vacuna tipo Sabin oral (VPO) frente a la poliomielitis se
inici en el Estado Espaol en 1964 y las altas coberturas de vacunacin en estos aos
han conseguido una paulatina reduccin de casos. Desde 1989 no se han notificado
casos de poliomielitis salvaje. Esta enfermedad est en vas de erradicacin y no se han
registrado casos de poliomielitis por el virus salvaje en el Pas Vasco desde mediados de
1986. En 1997 se instaur un programa de vigilancia de parlisis flcidas agudas al objeto
de cumplir los requisitos de la OMS para obtener el certificado de erradicacin de la
poliomielitis.
Los poliovirus se pueden aislar en cultivos de clulas de rion de mono (VERO) o
fibroblastos a partir de muestras farngeas durante los primeros das de la enfermedad y
de las heces durante 30 dias de inicio de la enfermedad. Tambin se pueden utilizar para
aislamiento las lneas WI-38 (rion embrionado humano) y RD (rabdomiosarcoma
humano). En tales cultivos celulares, la presencia del virus se manifiesta la aparicin de
placas lticas dentro de las 24 a 48 horas.



II. OBJETIVOS:

Aprender a tomar la muestra a una persona que muestra sntomas de tener una
infeccin viral.
Aprender el tratamiento que debe seguir una muestra de un paciente, el cual se
sospecha que tiene una imfeccion viral.

III. MATERIALES Y MTODOS:

3.1. MATERIALES

Heces
PBS IX o Hanks IX con antibiticos
Solucin salina fisiolgica
Caldo triptosa fosfato
Frascos de vidrio con boca ancha de 50 ml.
Cloroformo
Perlas de vidrio de 4 mm de dimetro
Tubos de vidrio de tapa rosca de 10x150 mm.
Tubos ultracentrfuga de plstico con tapa rosca
Pipetas de 5 y 10 ml.
Baguetas de vidrio.
Balanza
Centrifuga
Refigeradora

3.2. PROCEDIMIENTO:
3.2.1. Toma de muestra en heces:
Se colecta aproximadamente 2 gramos de heces en un frasco estril de boca
ancha.
Se guarda a -20C hasta el momento de su procedimiento.

3.2.2. Tratamiento de la muestra:
Se vierte 15 ml de PBS IX o Thanks IX con antibiticos a un frasco de boca
ancha que contiene las perlas de vidrio.
Se agrega aproximadamente 1 gramo de heces con ayuda de una bagueta de
vidrio.
Se coloca el frasco en el vibrador durante 10 minutos.
Se transfiere el contenido de un tubo de ultracentrfuga (excepto las perlas de
vidrio).
Se centrifuga a 7000 o 10000 rpm durante 10 min.
Se separa el sobrenadante y se distribuye en volmenes iguales en dos tubos de
vidrio con tapa rosca de 10 a 150 nm.
A cada uno de los tubos conteniendo el sobrenadante, se agrega igual volumen
de cloroformo y se agita manualmente durante 2 a 3 min.
Luego se coloca los tubos en refrigeracin a -5C durante 15 horas.
Se centrifuga los tubos a 2000 rpm durante 30 a 40 minutos.
Se separa el sobrenadante y distribuirlo en viales debidamente rotulados.

IV. COMENTARIOS

Solo se llego hasta colocar en vial, ya que no se llego a sembrar en el
cultivo celular.
El motivo por el cual se pone el frasco con las perlas en el vibrador, es para
romper las clulas en fragamentos, para q asi el virus pueda ser liberado.
En la etapa de toma de muestra se agrega cloroformo, para eliminar todo
tipo de bacterias que se encuentran en el medio.

V. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS:

Manual de laboratorio de virologa universidad nacional de Trujillo.
Dr. Luis Esteban Mujica, diagnostico y tratamiento de la poliomilitis, Medicina
1957, Madrid. Editorial paz montalvo, dedicado y firmado por el autor, 1 edicin.