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MANUAL DE TOMA,
TRANSPORTE Y
CONSERVACIN DE
MUESTRAS
DEL
LABORATORIO DE MICOLOGIA





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R RE ED D D DE E M MI IC CO OL LO OG GI IA A

G GC CB BA A





Elaborado por: M.Carmen Perrone
Fecha: 10 enero 2008
Aprobado por: Integrantes y Coordinador de la RM
Fecha:
Revisado por: S.Cataldi, A.Arechavala y L.Guelfand
Fecha: 27 de enero 2008
Revisin N :
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CONTENIDO

1. OBJETIVOS
2. ALCANCE
3. PERSONAL AFECTADO
4. REFERENCIAS
5. DEFINICIONES
6. RESPONSABILIDADES
7. DESARROLLO:
7.1 FUNDAMENTO DEL MTODO
7.2 MATERIALES
7.3 SECUENCIA OPERATIVA:
7.3.1 Precauciones de Seguridad Biolgica

7.3.2 Toma de muestra

7.3.2.1 Toma de muestra para diagnstico de micosis superficiales
Escamas
Pelos
Uas
7.3.3 Transporte de muestras
7.3.3.1 Transporte de muestras superficiales

7.3.2.2 Toma de muestras respiratorias
Exudado y lavado nasofarngeo
Esputo por expectoracin espontnea (E)
Esputo inducido (EI)
Aspirado traqueal (AT)
Lavado bronquial (LB)
Lavado broncoalveolar (BAL)
Lavado broncoalveolar protegido (BAL-protegido)
MiniBAL (Mini-BAL)
Biopsia transbronquial
Puncin pulmonar percutnea o transtorcica
Lquido pleural (LP)
Biopsia pleural
7.3.3.2 Transporte y conservacin de muestras respiratorias

7.3.2.3 Toma de muestras de lquidos estriles y tejidos
I) Sangre
A) Sistemas Automatizados
B) Lisis-Centrifugacin
II) LCR
III) L. pleural, peritoneal, pericrdico, sinovial y otros lquidos de
puncin
IV) Mdula sea
V) Tejidos
7.3.3.3 Transporte de lquidos de puncin de cavidades estriles y tejidos

7.3.2.4 Toma de muestras genitourinarias
I) Exudado vaginal
II) Exudado vulvar





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III) Surco balanoprepucial
IV) Primer chorro de orina
V) Exudado uretral
VI) Miccin espontnea / Chorro medio de orina
VII) Sonda vesical
VIII) Puncin suprapbica
7.3.3.4 Transporte de muestras genitourinarias

7.3.2.5 Toma de muestras de cavidad oral y otorrinolaringolgicas
I) Cavidad oral
II) Muestras rinosinusales
III) Muestras ticas
IV) Biopsias o piezas quirrgicas
7.3.3.5 Transporte de muestras de cavidad oral y otorrinolaringolgicas

7.3.2.6 Toma de muestras gastrointestinales
I) Cepillado esofgico
II) Biopsia esofgica
7.3.3.6 Transporte de cepillado y biopsia esofgicos

7.3.2.7 Toma de muestras oculares
I) Exudado conjuntival
II) Raspado corneal
III) Fludos y aspirados oculares
IV) Conductos lacrimales
V) Lentes de contacto
7.3.3.7 Transporte de muestras oculares

7.3.2.8 Toma de muestra de catteres
I) Catteres intravasculares
II) Catteres de dilisis peritoneal
7.3.3.8 Transporte de catteres

7.3.2.9 Toma de muestra de material protsico
7.3.3.9 Transporte de material protsico





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1. OBJETIVOS:

Realizar adecuadamente la toma de muestra, su transporte y conservacin
para alcanzar, mediante su procesamiento, el diagnstico micolgico.


2. ALCANCE:

Todas las muestras de examen micolgico, extradas y / o remitidas, de
acuerdo a las indicaciones de este manual (PATT), para confirmar o
descartar el diagnstico clnico presuntivo.


3. PERSONAL AFECTADO:

Bioqumicos y tcnicos del sector Microbiologa, rea Micologa, y
Mdicos y Enfermeros del staff de cada Hospital del GCBA.


4. REFERENCIAS:

Gua prctica de Identificacin y Diagnstico en Micologa Clnica.
Dr. Javier Pemn, Dra. Estrella Martn-Mazuelos y Mara del C. Rubio
Calvo. Revista Iberoamericana de Micologa. 1 edicin. Bilbao, Espaa.
2001.
Manual de Procedimientos para Laboratorios de Micologa Mdica, Prof.
Dr. Ricardo Negroni, Dra. Liliana Guelfand y col. Acta Bioqumica Clnica
Latinoamericana supl. 1, editado por la Federacin Bioqumica de la Pcia.
de Bs. As. Argentina, 1999


5. DEFINICIONES:

PATT: Manual pre-analtico de toma, transporte y conservacin de muestras
MB: Manual de Bioseguridad


6. RESPONSABILIDADES:

Jefe de Seccin Microbiologa, Bioqumico a cargo del rea Micologa


7. DESARROLLO:

7.1 FUNDAMENTO DEL MTODO





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El diagnstico de las micosis comienza con la sospecha clnica, por lo que una
adecuada obtencin de la muestra, a partir de la lesin, y su correcta
manipulacin, para mantener la viabilidad del agente etiolgico y evitar posibles
contaminaciones, son aspectos fundamentales que siempre deben tenerse en
cuenta para la obtencin de un diagnstico micolgico correcto.

7.2 MATERIALES:

Sindesmtomo
Hojas de bistur estriles
Guantes descartables
Portaobjetos
Heladera
Hisopos
Tubos estriles
Frascos estriles de boca ancha descartables
Pinza de depilar

7.3 SECUENCIA OPERATIVA:

7.3.1 Precauciones de Seguridad Biolgica
Consultar el Manual de Bioseguridad (MB)

7.3.2 Toma de muestra
Para optimizar la toma de muestras es necesario
Disponer de un protocolo de toma de muestra escrito, actualizado
peridicamente
Tomar las muestras aspticamente, utilizando contenedores estriles,
remitirlas al laboratorio antes de las 2 horas y sembrarlas lo antes posible
La muestra debe recogerse antes de iniciar el tratamiento y siempre de la
parte activa de la lesin cuando se sospechan dermatoficias.
Los hisopos deben ser evitados siempre que la lesin lo permita. Pero hay
muestras (conducto auditivo, boca, faringe, vagina crvix) que no pueden
ser recogidas de otra manera.
En el caso de heridas, drenajes o lesiones superficiales, debe limpiarse la
zona previamente para evitar contaminaciones.
Las muestras de lesiones cerradas y abscesos suelen ser de gran
rendimiento. Deben ser aspiradas con jeringa y aguja y transferidas a un
tubo o frasco estril, prestando atencin a la presencia de grnulos, si los
hubiere en la muestra.
En situaciones que requieran un estudio epidemiolgico, debe
establecerse la necesidad de toma de muestra ambiental, familiar o en
animales.






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7.3.2.1 Toma de muestra para diagnstico de micosis superficiales

Las micosis superficiales se limitan a la piel, el pelo y las uas. Otros
procesos que afectan a las capas ms superficiales de la piel son producidos
por bacterias como en el eritrasma ( Corynebacterium minutissimum) que se
estudia clsicamente dentro de la Micologa Mdica y requiere habitualmente
un diagnstico diferencial con las micosis superficiales.
Limpieza del rea afectada: Antes de realizar la toma de muestra, la
piel, pelos o uas deben limpiarse con etanol (70%) para eliminar la
flora bacteriana o exudacin.
Recoleccin

Escamas

En las lesiones descamativas, deben recogerse las escamas de las
zonas afectadas, raspando su borde activo con una hoja de bistur o
sindesmtomo estril, ya que dicho borde es el que ms probablemente
contenga elementos fngicos viables. Cuando existen lesiones satlites
(candidiasis), el raspado se realiza de dichas lesiones por ser las ms
jvenes. El material obtenido se recoge entre dos portaobjetos estriles.
El uso de contenedores estriles de plstico puede tener el inconveniente
de que las escamas se adhieran a sus paredes dificultando su
recuperacin. Los dermatofitos en las muestras de piel, pueden
permanecer viables durante meses. En los intertrigos candidisicos, las
lesiones no suelen ser descamativas sino exudativas, en cuyo caso el
material se toma con hisopo estril seco o hmedo. Si el espcimen no
va a ser procesado inmediatamente, se prefiere el empleo de un hisopo
con medio de transporte (Ej. medio de Stuart) ya que las levaduras
pierden rpidamente la viabilidad en los hisopos secos.

Pelos

Dependiendo del tipo de lesin observada, los pelos deben recogerse
mediante diversas tcnicas:

En la piedra blanca o piedra negra: Ambas estn confinadas a la vaina del
pelo, por lo que debe cortarse la porcin suprafolicular de los pelos
afectados.

En las tias del cuero cabelludo o de la barba: es importante tomar
los pelos parasitados arrancndolos con la raz intacta, ya que cortarlos es
menos eficaz. En muchas ocasiones los pelos parasitados se reconocen
porque estn rotos, friables o se desprenden fcilmente con el raspado.






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En las tias microspricas (M. canis): se reconocen por presentar una
placa escamosa blanquecina con escasa o nula inflamacin, que puede
alcanzar varios centmetros de dimetro, y en el cual se observan pelos
rotos a 5-10 mm de la superficie cutnea, estos pelos parasitados son
friables y se arrancan con facilidad al raspar con el bistur.

Kerion de Celso: Son las formas supurativas de tinea capitis, es comn en
los nios. Se presentan como lesiones elevadas, hemisfricas de
consistencia blanda, exhiben muchas pstulas foliculares y al ser
apretadas manan pus por mltiples puntos. El diagnstico se realiza por el
examen microscpico de los cabellos (que se arrancan con gran facilidad).
Los agentes ms frecuentes aislados son: Microsporum canis,
Microsporum gypseum, Trichophyton mentagrophytes var mentagrophytes
y Trichophyton verrucosum.

En las tias tricofticas antropoflicas (T. tonsurans y T. violaceum), forman
pequeas placas escamosas con pelos de poca longitud, en forma de W o
Z, situados en el espesor de la escama o bien rotos al nivel de la superficie
dando un aspecto de puntos negros, casi siempre en ausencia de
inflamacin. Estos puntos negros son los que deben extraerse con la
punta del bistur o mediante pinzas. Sin embargo cuando la infeccin se
debe a especies zooflicas (T. mentagrophytes var. mentagrophytes y T.
verrucosum) se observan placas escamosas de tamao variable, que se
inflaman y se elevan sobre la superficie cutnea, apareciendo numerosas
pstulas foliculares que originan un Kerion. En estos casos cuando las
lesiones son dolorosas en nios puede ser difcil la toma de muestra,
entonces el uso de un hisopo humedecido sobre la zona afectada puede
ser el nico medio incruento de realizar la toma. Con esta tcnica es
posible obtener resultados positivos, pero resultados negativos no
excluyen la infeccin. Los pelos situados en la placa tienen una longitud
variable pudindose extraer con facilidad sin causar dolor al paciente.

En la tia favosa (T. schoenleinii) presenta costras amarillentas, cncavas
y centradas por un pelo, denominadas cazoletas fvicas. Estn formadas
por un conglomerado de hifas que originan una foliculitis y con el tiempo,
alopecia cicatricial por destruccin de la matriz. La muestra de estas
lesiones debe ser tomada con ansa.

Uas

Onicomicosis distal y lateral subungueal: la lesin comienza por el borde
libre de la ua y va extendindose hacia la matriz, la sustancia de la ua
se sustituye por un material amarillento y friable, mientras que la lmina
exterior puede estar infectada o destruida. Esta lesin puede deberse a
dermatofitos, Scopulariosis spp o Scytalidium spp. En estos casos,





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aparecen uas hiperqueratsicas siendo los alicates especiales para
recoger el material subungueal y cortar trozos de la parte proximal de la
ua, ya que aunque sea la menos accesible, es la que menos se
contamina y presenta elementos fngicos ms jvenes y viables.

Onicomicosis proximal subungueal: causada por Candida spp, Fusarium
spp o por recidivas de una tinea unguium tratada. Se observa, de forma
caracterstica en pacientes con SIDA. En estos casos, se debe recoger el
material blanquecino de la porcin ms profunda de la tabla ungueal

Onicomicosis blanca superficial: se manifiesta como una mancha blanca
lechosa en un punto cualquiera de la superficie de la ua que se va
extendiendo progresivamente. Es debida a dermatofitos (T.
mentagrophytes, T. rubrum) u otros hongos miceliares (Acremonium spp.,
Fusarium spp., Aspergillus spp.) Slo en este caso, se raspa la ua en la
superficie afectada.

Onicomicosis distal y lateral con paroniquia crnica: comienza con una
inflamacin del borde periungueal y termina con la afectacin lateral de la
lmina que aparece plisada. Aunque casi siempre est causada por
Candida spp. en ocasiones excepcionales algn hongo no dermatofito
tambin puede ser el responsable. En estos casos, se recoge el material
ungueal ms cercano a la cutcula, raspando con el bistur en la
profundidad del surco periungueal. Con hisopo o ansa estril se obtiene el
pus de la paroniquia acompaante tras incisin con lanceta o compresin
de la porcin lateral del dedo.

Onicomicosis distrfica total: corresponde al estadio final de cualquier
onicomicosis. En estos casos, se debe raspar preferentemente el material
subungueal

7.3.3 Transporte de muestras

7.3.3.1 Transporte de muestras superficiales

Las muestras de pitiriasis versicolor y dermatofitosis deben ser
transportadas entre dos portaobjetos estriles envueltos en papel o en
contenedor seco estril. Se pueden almacenar a temperatura ambiente.

7.3.2.2 Toma de muestras respiratorias

Exudado y lavado nasofarngeo

Mediante hisopo de algodn o catter (K30- K33), aspirar el moco por va
per o retronasal. Hay que tener presente que la muestra obtenida





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pertenece al tracto respiratorio superior, por lo que en caso de ser positiva,
tan slo ser indicadora de colonizacin de las vas areas superiores.

Esputo por expectoracin espontnea (E)

La muestra debe obtenerse tras una expectoracin profunda
preferentemente matinal, mediante tos o fisioterapia respiratoria (se
recomienda el lavado previo de la boca con solucin salina y evitar que la
expectoracin se contamine con secreciones nasales o saliva).

Esputo inducido (EI)

Se obtiene tras hacer inhalar al paciente durante 15-20 min.,
nebulizaciones de 20-30 ml de solucin salina hipertnica estril, obtenidas
mediante un nebulizador ultrasnico. Su valor diagnstico equivale al
esputo por expectoracin espontnea, aunque con experiencia y
meticulosa tcnica de obtencin se puede minimizar la contaminacin
nasobucal. Se recomienda como alternativa el esputo en el caso que no
sea posible una expectoracin espontnea.

Aspirado traqueal (AT)
Se introduce una sonda de aspiracin a travs del tubo endotraqueal o de
la traqueotoma y se succionan las secreciones respiratorias. La instilacin
de una pequea cantidad de solucin salina estril ( 5 ml) puede facilitar
la obtencin de las muestras muy viscosas. Se puede considerar la
alternativa al esputo en el paciente intubado y su valor diagnstico es muy
similar.

Lavado bronquial (LB)

Mediante fibrobroncoscopa se realiza una aspiracin de las secreciones
del rbol bronquial, generalmente tras la instilacin de 5-10 ml de solucin
fisiolgica. No hay que olvidar que la muestra procede del rbol bronquial
superior y no es representativa del territorio alveolar ni bronquiolar. En el
enfermo intubado tiene el mismo valor diagnstico que el aspirado traqueal
y en el no intubado puede estar contaminada por secreciones del tracto
respiratorio superior, siendo su valor diagnstico similar al del esputo. Slo
est indicado cuando el volumen del BAL es insuficiente y existe la
sospecha de una infeccin fngica pulmonar por patgenos primarios.

Lavado broncoalveolar (BAL)

Para la toma de muestra el fibrobroncoscopio debe enclavarse en el rbol
bronquial e instilar 120 ml de solucin fisiolgica que posteriormente ser
recuperada (10 -100 ml). La muestra representa las secreciones presentes





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en aproximadamente un milln de alvolos y sus correspondientes
bronquiolos ( 1% de la superficie pulmonar), se estima que en el lquido
recuperado se encuentran diludas 1 ml de secreciones. El fluido
recuperado se considera la muestra ms adecuada y sensible para el
diagnstico de las infecciones respiratorias causadas por hongos
dimrficos patgenos primarios y para el diagnstico de la neumona por
Pneumocystis. En enfermos inmunodeprimidos, es la tcnica de eleccin
para el diagnstico de presuntas micosis invasoras oportunistas del tracto
respiratorio inferior.

Lavado broncoalveolar protegido (BAL-protegido)

La toma de muestra es igual que para el BAL pero la introduccin del
broncoscopio se hace a travs de la luz de un catter con un globo final,
que previamente se ha introducido e inflado con el fin de proteger la
muestra de una posible contaminacin por flora de las vas altas. Es de
gran valor diagnstico en neumonas bacterianas, especialmente en
pacientes sometidos a ventilacin mecnica, pero en el caso de las
infecciones fngicas tiene un valor equiparable al BAL convencional.

MiniBAL (Mini-BAL)

Se introduce un catter telescopado en el rbol bronquial y se hace
avanzar hasta encontrar resistencia, seguidamente se hace avanzar el
catter interno y se instilan con una jeringa unos 25 ml de suero fisiolgico
estril. El lquido recuperado y la punta del catter interno se emplean para
los estudios microbiolgicos. La tcnica presenta la ventaja de no requerir
el empleo de un fibrobroncoscopio y se plantea como una alternativa a
ste diagnstico de la neumona asociada a ventilacin mecnica. En la
actualidad, no existen experiencias que permitan recomendarla para el
estudio de las infecciones fngicas.

Biopsia transbronquial

A travs de un broncoscopio se introducen unas pinzas que, mediante
visin fluoroscpica, permiten la obtencin del parnquima pulmonar
peribronquial o incluso alveolar. Est indicada para estudios histolgicos.
Aunque el pequeo tamao de las biopsias obtenidas tiene sensibilidad de
la muestra, debe tenerse presente su gran especificidad y valor
diagnstico de seguridad de las micosis invasoras.

Puncin pulmonar percutnea o transtorcica

Empleando agujas ultrafinas y control radiolgico o ecogrfico, se punza la
cavidad torcica y se recoge el exudado de las lesiones pulmonares por





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aspiracin. Aunque es una muestra con alta especificidad, tiene baja
sensibilidad, y la tcnica no est libre de contraindicaciones (neumotrax,
hemorragia), por lo que su empleo se limita al estudio de infiltrados
pulmonares densos de localizacin perifrica, con gran componente
cavitario y / o consolidacin, como puede ser el caso de algunas
neumonas fngicas.

Lquido pleural (LP)
A travs de una puncin transparietal mediante aguja de puncin pleural,
se extraen varios mililitros de lquido pleural. El empiema suele
presentarse como complicacin de una neumona bacteriana o
tuberculosa, pero no debe descartarse la implicancia de un hongo que, en
procesos neumnicos crnicos, puede invadir la cavidad pleural o
introducirse en ella a travs de un neumotrax o una fstula broncopleural.

Biopsia pleural

A travs de una pequea incisin en la pared torcica se introduce un
trocar hasta perforar la hoja parietal de la pleura de donde se toman varias
muestras. Las muestras se emplean para estudio histolgico o para el
diagnstico de una posible paquipleuritis tuberculosa, siendo
habitualmente poco til en Micologa.


7.3.3.2 Transporte y conservacin de muestras respiratorias

Las muestras de esputo, LB y BAL deben enviarse al laboratorio en
frascos estriles, bien cerrados, con tapa a rosca y en un plazo mximo
de 2 horas desde su recogida. Los productos de aspiracin se depositan
en un tubo cnico estril con tapa a rosca. Las secreciones que se
obtienen por cepillado se transportan, en tubos cnicos estriles con tapa
a rosca, diludas en 1 ml de solucin fisiolgica estril. Las piezas de
biopsias deben dividirse en dos partes, uno se introduce en un frasco con
formol al 10% provisto por anatoma patolgica y se enva a ese servicio, y
otro en tubo o frasco estril con 1 ml de suero fisiolgico para el
Laboratorio de Micologa. Si el procesamiento de la muestra va a
demorarse durante varias horas, es preferible conservarla a 4C (heladera)
especialmente en muestras muy contaminadas como el esputo


7.3.2.3 Toma de muestras de lquidos estriles y tejidos

I) Sangre

A) Sistemas Automatizados





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Esta muestra habitualmente estril es muy valiosa en Micologa, no slo
por su rentabilidad diagnstica, sino tambin por la dificultad de obtencin
o imposibilidad de repeticin, lo que obligar a extremar todas las medidas
para obtener el mayor rendimiento de la misma. Actualmente el cultivo de
sangre sigue siendo la mejor tcnica para el diagnstico de candidemia, a
pesar de su escasa sensibilidad global ( 50%). Para ello se recomienda el
uso de sistemas automatizados de monitoreo continuo utilizados para
bacterias, pero si se sospecha una infeccin sistmica por un hongo
dimorfo, la tcnica de lisis-centrifugacin parece ofrecer mayores ventajas.
Sin embargo para la recuperacin de la mayora de los hongos
filamentosos, ninguno de estos dos sistemas ha demostrado su eficacia.
Los sistemas automatizados integran el sistema de deteccin, el incubador
y el mecanismo de agitacin en una sola unidad; cada frasco de
hemocultivo se procesa individualmente. Actualmente en nuestro pas hay
dos sistemas comercializados, que se diferencian por el tipo de metabolito
detectado, en el sistema de deteccin o en el tipo de agitacin:
BacT/Alert (BioMerieux) y BACTEC (Becton-Dickinson). Detectan el
crecimiento microbiano midiendo la produccin de CO
2
por colorimetra o
por fluorescencia respectivamente. Cualquiera de ellos es til para el
aislamiento de levaduras en los frascos de hemocultivo. Para la toma de
muestra utilizar guantes estriles y se comienza con la desinfeccin del
tapn de goma del frasco con alcohol etlico 70% esperando 1 minuto
antes de inocularlo. Despus de localizar el lugar de la venopuncin,
limpiar con un algodn impregnado con alcohol etlico 70%, realizando
movimientos concntricos de adentro hacia fuera. Repetir la operacin con
otro algodn impregnado con yodo-povidona (2%) dejndola actuar
durante 1 minuto. Una vez realizada la desinfeccin no se debe volver a
palpar la vena; si fuera necesario, utilizar nuevos guantes estriles. Extraer
la sangre e inocular los frascos de hemocultivo. Adultos de 5-10 ml (frasco
adulto), nios: de 1-5 ml (frasco peditrico), neonatos de 0.5-1.5 ml (frasco
peditrico). Limpiar los restos de yodo-povidona con alcohol. Los frascos
de hemocultivos MYCO/F LYTIC (Becton-Dickinson) estn diseados
para la recuperacin de patgenos intracelulares. Incorporan al medio de
cultivo un agente ltico (saponina) que induce la ruptura de los leucocitos y
la posterior salida de microorganismos fagocitados que pueden ser
detectados por el sistema automatizado BACTEC9240. Hasta el
momento, ha demostrado su utilidad en infecciones sistmicas por H.
capsulatum.

B) Lisis-Centrifugacin

Utilizar guantes estriles durante todo el proceso. Desinfectar la piel del
paciente del mismo modo que la descripta en el punto anterior (sistemas
automatizados). Se extrae sangre sobre una solucin al 5% concentracin





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final de saponina-polianetolsulfonato de sodio en solucin fisiolgica.
Adultos: 9 ml en 1 ml de solucin lisante, Nios: 1 a 5 ml en 0.5 ml de
solucin lisante, Neonatos: 0.5 a 1 ml en 0.5 ml de solucin lisante. Se
mezclan los tubos varias veces para activar la lisis celular se espera
aproximadamente 1 hora y se centrifugan los tubos durante 30 minutos a
3000 r.p.m. En los adultos se siembra el precipitado diludo en algunos
mililitros de sol. fisiolgica estril. En los nios y neonatos no es necesario
centrifugar por lo que se siembra todo el material lisado.

II) LCR

El diagnstico etiolgico de una meningitis precisa LCR. La dificultad de su
obtencin hace del LCR una de las muestras biolgicas estriles ms
valiosas en un laboratorio de Microbiologa. Realizar la puncin en
condiciones de mxima asepsia. Desinfectar la zona con yodo-povidona al
2%. Realizar la puncin en los espacios intervertebrales L3-L4, L4-L5,
L5-S1. Al llegar al especio subaracnoideo, retirar el estilete y dejar salir
libremente el LCR, recolectarlo en tres tubos estriles cnicos con tapa a
rosca. Extraer un volumen mnimo de 3 ml/tubo, enviar rpidamente al
laboratorio de Microbiologa. Extraer tambin sangre para hemocultivo

III) L. pleural, peritoneal, pericrdico, sinovial y otros lquidos de
puncin

Realizar la puncin en condiciones de mxima asepsia. Desinfectar la piel
con yodo-povidona 2%, obtener la muestra por aspiracin con aguja
percutnea o por ciruga. Extraer un volumen mnimo de 5 ml y depositarlo
en un tubo cnico estril con tapa a rosca (o inocular un frasco de
hemocultivo); enviar rpidamente al Laboratorio de Micologa.

IV) Mdula sea

El aspirado de mdula sea, por puncin esternal o de cresta ilaca, es
una de las mejores muestras para el diagnstico de histoplasmosis
diseminada. El estadio levaduriforme de este microorganismo es
eminentemente intracelular, por lo que la utilizacin del sistema de lisis-
centrifugacin facilita la liberacin de las levaduras fagocitadas,
aumentando su recuperacin en el medio de cultivo. Aplicar mximas
condiciones de asepsia. Introducir el aspirado en un tubo cnico con
solucin de saponina (5% concentracin final) como se describi
oportunamente para la toma de muestra de hemocultivo por el mtodo
Lisis-centrifugacin. Realizar en el momento de la toma de muestra un
extendido en un portaobjeto para realizar la tincin de Giemsa. Tener la
precaucin que el material extrado no debe coagularse de ser necesario
agregar 1 gota de heparina estril al tubo.





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V) Tejidos

Las muestras de tejidos se obtienen mediante ciruga, biopsia percutnea
o autopsia. Realizar la biopsia aplicando las mximas medidas de asepsia.
Introducir el tejido biopsiado en un recipiente estril de tapa a rosca con
solucin salina estril y enviar al laboratorio rpidamente.


7.3.3.3 Transporte de lquidos de puncin de cavidades estriles y
tejidos

Si la muestra fue inoculada a un frasco de hemocultivo deber enviarse
rpidamente al laboratorio para su pronta incubacin a 37C. Si la muestra
se recolect en un frasco estril de no procesarse en el da puede ser
almacenada en la heladera 4C durante 24- 48 hs. con unas gotas de
solucin salina estril.

7.3.2.4 Toma de muestras genitourinarias

I) Exudado vaginal

Debe indicarse que no debe realizar tratamiento local o general previo.
Abstinencia sexual (24 horas previas) No debe practicarse higiene vaginal
previa que pueda alterar las caractersticas de la flora. Debe realizarse la
toma de muestra ayudndose con un espculo, sin utilizar lubricantes. Se
toma la secrecin mucosa de la pared posterior del canal vaginal,
mediante un hisopo humedecido con solucin fisiolgica estril haciendo
rotar el mismo por la zona se mayor secrecin. Para el examen directo
puede tomarse material con esptula.

II) Exudado vulvar

Es conveniente lavar la superficie cutnea con solucin salina estril, antes
de arrastrar el exudado con un hisopo. La obtencin del exudado anal se
realiza de la misma forma que el vulvar.

III) Surco balanoprepucial

Hisopado de los bordes de las lesiones y del surco balonoprepucial sin
higiene previa

IV) Primer chorro de orina






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Por la maana despus de una retencin de 1-3 hs. sin vaciar la vejiga.
Debe higienizarse la zona externa para evitar una contaminacin, sobre
todo en hombres no circuncidados, utilizando jabn nuevo y agua. Se
recolecta el primer chorro de orina en frasco estril con tapa a rosca.

V) Exudado uretral

El exudado uretral se recoge por la maana o al menos despus de 1-3 hs.
sin vaciar la vejiga. Higienizar con agua y jabn nuevo la zona externa
para evitar contaminacin, sobre todo en hombres no circuncidados. Si
existe secrecin abundante, se exprime la uretra, se desecha la primer
gota que contiene flora saprofita y se toma el resto con un hisopo fino
(uretral) introducido 2 cm en el meato urinario, en caso de no existir
secrecin, se introduce el hisopo en la uretra despus de realizar un
masaje uretral.

VI) Miccin espontnea / Chorro medio de orina

Realizar una higiene de sus genitales con agua y jabn nuevo. En el
momento de la miccin los hombres debern retraer el prepucio y las
mujeres colocarse un tapn vaginal. Recolectar chorro medio de la orina
recin emitida en un frasco estril, preferiblemente de boca ancha (se
descarta la primera y ltima parte de la miccin)

VII) Sonda vesical

El cateterismo vesical efectuado de manera asptica, despus de un
lavado cuidadoso del meato uretral y de los genitales externos, es el
procedimiento ms adecuado para recoger orina cuando se sospecha una
candiduria, pero implica peligro de sobreinfeccin de vas altas. Se recurre
a este procedimiento ante la imposibilidad de obtener buenos resultados
por los mtodos directos o cuando se pretende corroborar un diagnstico.
En pacientes con sonda permanente la orina se recolecta por puncin
asptica de la sonda, nunca de la bolsa.

VIII) Puncin suprapbica
Cuando la recoleccin de orina es dificultosa por otro procedimiento,
puede realizarse una puncin vesical, sobre todo en lactantes, pero es una
tcnica contraindicada en pacientes con problemas de la hemostasia. La
vejiga se punza directamente despus del aseo, antisepsia y anestesia
local.


7.3.3.4 Transporte de muestras genitourinarias






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En general las muestras genitourinarias deben procesarse rpidamente,
pues el crecimiento de levaduras a temperatura ambiente puede dar lugar
a una falsa interpretacin en cuanto a su concentracin en la muestra. Los
hisopados si van a demorarse se pueden colocar en solucin fisiolgica
estril. En las muestras de orina si se va a demorar el cultivo podrn
guardarse en la heladera a 4C 24 horas.

7.3.2.5 Toma de muestras de cavidad oral y otorrinolaringolgicas

La toma de muestras se har antes de administrar antifngicos.

I) Cavidad oral

Ir precedida de un enjuague con agua o solucin salina. Las lesiones
pseudomembranosas y las secreciones se recolectan con un hisopo estril
y se colocan en tubo estril con solucin fisiolgica.

II) Muestras rinosinusales

Debe tomarse con hisopo o torunda de algodn de la mucosa
nasofarngea, mediante aspiracin o biopsias durante una intervencin
quirrgica. Tambin son muestras tiles los exudados nasales, as como el
contenido y tejido de los senos afectados. Deben colocarse en frasco
estril, con solucin fisiolgica estril.

III) Muestras ticas

Deben efectuarse bajo visin directa con otoscopio y el material se extrae
con una cucharita o cureta. Tambin pueden emplearse hisopos
humedecidos en solucin fisiolgica. Pero los resultados son menos
satisfactorios.

IV) Biopsias o piezas quirrgicas

Son de utilidad en otitis y rinosinusitis invasoras y deben obtenerse por
procedimientos quirrgicos. La muestra debe colocarse en recipiente
estril con unas gotas de solucin fisiolgica estril

7.3.3.5 Transporte de muestras de cavidad oral y otorrinolaringolgicas

Deben procesarse antes de las 2 horas. Los hisopos pueden introducirse en
solucin fisiolgica estril. Las muestras recogidas mediante enjuague o
lavado oral se transportan en frasco estril a temperatura ambiente. Las
muestras de biopsias transportar en medio lquido, de lo contrario utilizar





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envase estril con solucin salina, pudindose guardar en la heladera a 4C
durante 24 -48 horas.

7.3.2.6 Toma de muestras gastrointestinales

I) Cepillado esofgico

Mediante escobilln guiado por endoscopa, se recolecta material
preferentemente de las placas blanco-amarillentas o seudo membranosas
si las hubiere. Despus se frota el cepillo por la superficie de uno o varios
portaobjetos limpios y estriles.

II) Biopsia esofgica

Raramente es necesaria esta muestra ya que el cepillado esofgico es muy
sensible para el diagnstico de esofagitis candidisica, adems no diferencia
colonizacin de infeccin. Se prefiere tomar varias muestras de mucosa
gstrica para aumentar el rendimiento

7.3.3.6 Transporte de cepillado y biopsia esofgicos

Los portaobjetos se envan inmediatamente al Laboratorio protegidos en un
recipiente limpio, seco y cerrado. En el caso de una muestra de biopsia enviar
en recipiente estril, aadiendo unos mililitros de solucin fisiolgica. De no
ser procesado en el momento guardar en heladera a 4C no ms de 24 horas.

7.3.2.7 Toma de muestras oculares

I) Exudado conjuntival

Con un hisopo estril, de algodn o alginato humedecido en solucin salina
estril frotar la zona lesionada suavemente e introducirlo en medio de
transporte. Repetir la toma de muestra en el ojo contralateral con otro hisopo.
Si se dispone de medios de cultivo es preferible inocularlos en el momento de
la toma de muestra.

II) Raspado corneal

Obtener exudado conjuntival de cada ojo por separado. Aplicar un colirio
anestsico. Raspar la superficie de la lesin con un ansa de Kimura (ansa de
platino ultrafina, flexible, de punta roma que puede enfriarse rpido si se
esteriliza a la llama (este procedimiento debe realizarla el oftalmlogo,
controlando la toma de muestra con microscopio o con lmpara de hendidura
Si la lesin es purulenta conviene tomar la muestra con hisopo, si es profunda
se puede hacer una incisin con microbistur. Si la lesin est mal definida se





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puede pasar un hilo quirrgico por el rea infectada y luego usarlo para
inocular los medios.

III) Fluidos y aspirados oculares

En los casos de endoftalmitis y celulitis orbitaria, las muestras deben ser
recolectadas por el oftalmlogo en el quirfano, mediante puncin aspiracin
o vitrectoma y controladas por microscopa. Colocarlas en recipiente estril,
pero conviene inocular la muestra en los medios de cultivo directamente.

IV) Conductos lacrimales

Con hisopo hmedo en solucin salina estril, recoger el material purulento
presionando los prpados y el saco lacrimal.

V) Lentes de contacto

Frotar en hisopo por la superficie de contacto corneal de cada lente

7.3.3.7 Transporte de muestras oculares

Todas las muestras deben (en lo posible) inocularse en el momento, de no
ser posible enviarlas al laboratorio en envase estril con tapa a rosca.

7.3.2.8 Catteres

I) Catteres intravasculares

Desinfectar con alcohol la zona cutnea alrededor de la insercin del catter y
aspticamente cortar 5 cm del extremo distal, que se introduce en contenedor
estril con tapa a rosca.

II) Catteres de dilisis peritoneal

Extraer el catter, seleccionar y cortar el segmento subcutneo y el extremo
distal e introducirlos en contenedores estriles.

7.3.3.8 Transporte de catteres

Se recomienda el procesamiento de inmediato, de lo contrario conservar la
muestra a 4C mximo 24 horas.

7.3.2.9 Material protsico






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En el contexto general, las infecciones fngicas del material protsico son
muy infrecuentes. Entre todas, las prtesis de vlvula cardiaca y las mallas de
refuerzo abdominal son las ms relacionadas con la infeccin fngica. Si el
material lo permite es aconsejable que el troceado lo realice el mdico en el
quirfano en condiciones aspticas y en el momento de su extraccin, para
facilitar la siembra en los diferentes medios de cultivo.


7.3.3.9 Transporte de material protsico

En frasco estril y a temperatura ambiente.