PRCTICAS DE MICROBIOLOGA

OBJETIVOS:
1. Iniciacin en las tcnicas del estudio de
micoo!anismos" culti#o$ tincin % mo&olo!'a(
Mateial necesaio"
Culti#o de )acteias$ le#aduas$ #ino a!iado(
Anti)iticos(
Cistal #ioleta *+ ! de cistal #ioleta en +,, cc de a!ua destilada-(
Lu!ol *+ ! de iodo en . ! de ioduo /ot0sico en +,, cc de a!ua
destilada-( 1ucsina )0sica *+ ! de &ucsina )0sica en +,, cc de a!ua
destilada-(
Aceite de inmesin(
Micosco/io
Potao)2etos$ asas de culti#o$ mec3eo$ c0/sulas de Peti$ tu)os de
ensa%o( Pa/el secante(
+(4 I5TROD6CCI75
El tama8o de la ma%o'a de las clulas
)acteianas es tal 9ue esultan di&'ciles
de #e con el micosco/io /tico( La
/inci/al di&icultad es la &alta de
contaste ente la clula % el medio 9ue
la odea( El modo m0s sim/le de
aumenta el contaste es la utili:acin
de coloantes(
Si se desea sim/lemente aumenta el
contaste de las clulas /aa la
micosco/'a$ son su&icientes los
/ocedimientos 9ue usan un solo coloante llamados de tincin
sim/le( Sin em)a!o$ a menudo se utili:an mtodos 9ue no ti8en
de i!ual modo todas las clulas$ es el /oceso denominado
tincin di&eencial( 6no mu% usado en mico)iolo!'a es la
tincin Gam( Bas0ndose en su eaccin a la tincin Gam$ las
)acte'as /ueden di#idise en dos !u/os" !am/ositi#as %
!amne!ati#as( Esta tincin tiene !an im/otancia en
ta;onom'a )acteiana %a 9ue indica di&eencias &undamentales
de la /aed celula de las distintas )acteias(
Mientas 9ue las )acteias !amne!ati#as son constantes en su
eaccin$ los micoo!anismos !am/ositi#os /ueden /esenta
es/uestas #aia)les en cietas condiciones *son !aml0)iles-(
Po e2em/lo$ los culti#os #ie2os de al!unas )acteias
!am/ositi#as /ieden la /o/iedad de etene el cistal
#ioleta$ % en consecuencia$ se ti8en /o la sa&anina
a/aeciendo como !amne!ati#as( An0lo!o e&ecto se /oduce
en ocasiones /o cam)io en el medio del o!anismo$ o /o
li!eas modi&icaciones en la e2ecucin de la tcnica( Po este
moti#o$ es /eciso atenese$ en la /0ctica$ al /ocedimiento
esta)lecido(
Paa e;/lica el mecanismo de la tincin de !am se 3an
/o/uesto #aias 3i/tesis &undadas en la natuale:a 9u'mica
de las /aedes celulaes de los micoo!anismos(
A9u' /uedes #e las di&eencias estuctuales % 9u'micas de los
dos ti/os de /aed )acteiana"
Paed Gam <
ca/a densa % uni&ome de .,, a =,, A-
0cidos teicoicos
/olisac0idos
/ote'nas */ocas #eces-
!lico//tido *>,? del /eso seco-
Paed Gam 4
ca/a intena del!ada de ., a @, A
cu)ieta /o ca/as e;tenas de
densidad meno-
li/o/olisac0idos
li/o/ote'nas
/ote'nas
!lico//tido *+,? del /eso seco-
El mecanismo de la tincin Gam es la ese8ado en el si!uiente
es9uema"
Poductos
9ue se
utili:an
Reaccin % coloacin de las )acteias
GRAM < GRAM 4
+- Cistal
#ioleta
Clulas colo #ioleta Clulas colo #ioleta
.- Lu!ol
solucin
iodada
Se &oma el com/le2o CA4I(
Las clulas continBan
te8idas de colo #ioleta(
Se &oma el com/le2o CA4I(
Las clulas continBan
te8idas de colo #ioleta(
@- Alco3ol Se des3idatan las /aedes
celulaes( Se contaen los
/oos( Disminu%e la
/emea)ilidad( El com/le2o
CA4I no sale de las clulas
9ue continBan te8idas de
colo #ioleta(
Eliminacin /o e;taccin
de !asas de las /aedes
celulaes( Aumenta la
/oosidad( El com/le2o CA4I
se se/aa de la clula(
C- Sa&anina Clulas no decoloadasD
9uedan te8idas de colo
#ioleta(
Clulas decoloadasD se
ti8en de colo osado(
.( TI5CI75 DE GRAM
.(+ Mtodo
.(+(+ E;tensin" En un /ota )ien lim/io *con alco3ol$ /a/el de
&ilto % &lameado- se coloca una !ota de a!ua destilada a la 9ue(
con el asa de siem)a$ /e#iamente esteili:ada a la llama$ se
lle#a una /e9ue8a cantidad de sus/ensin de )acteias o$ en su
caso$ de una colonia(
Con el asa se e;tiende la !ota % las )acteias so)e el /ota %
se &i2a la e;tensin /o el calo$ calentando sua#emente a la
llama del mec3eo 3asta 9ue se se9ue(
.(+(. Coloacin"
a- + minuto en cistal #ioleta de EucFe (colorante inicial)
)- se la#a con a!ua destilada
c- + minuto en lu!ol (mordiente)
d- se decoloa con alco3ol de G>H (decolorante)
e- se la#a con a!ua destilada
&- + minuto en &ucsina )0sica (colorante de contraste)
!- se la#a con a!ua coiente
3- se seca suavemente % sin frotar con /a/el de &ilto
6na #e: 9ue la /e/aacin est0 totalmente seca$ /one una
!ota mu% /e9ue8a de aceite de cedo % o)se#a al micosco/io
con el o)2eti#o de inmesin(
.(.( Observacin
De)e utili:ase el
o)2eti#o de
inmesin(
Se coloca una
!ota de aceite de
cedo so)e la
/e/aacin( Se
en&oca$
/e&eentemente$
con el
micomtico(
Despus de
utili!ar el
ob"etivo de inmersin debe limpiarse con #ilol
O)se#aciones eali:adas" antalas en tu cuadeno IJu &oma
tienen las )acteias o)se#adasK ILas )acteias a/aecen
aisladas o a!u/adasK En caso de 9ue a/ae:can a!u/adas
indica el ti/o de asociacin( Indica ti/o de Gam(