UNIVERSIDAD TCNICA DE MACHALA

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

ESCUELA DE INGENIERA AGRONMICA

12
BIOLOGA MOLECULAR
PORTAFOLIO
JHON HENRY GONZLEZ GUEVARA

CAPITULO I

DOGMA CENTRAL DE LA BIOLOGA MOLECULAR
El dogma central de la biologa
molecular es un concepto que ilustra
los mecanismos de transmisin y
expresin de la herencia gentica tras
el descubrimiento de la codificacin
de sta en la doble hlice del ADN.
Propone que existe una
unidireccionalidad en la expresin de
la informacin contenida en los genes
de una clula, es decir, que el ADN es transcrito a ARN mensajero y que ste es
traducido a protena, elemento que finalmente realiza la accin celular.
El dogma central de la biologa molecular define tres procesos principales en la
utilizacin celular de la informacin gentica:
El primero consiste en la copia de un DNA progenitor para formar una
molcula de DNA hija que tiene una secuencia de nucletidos idntica a la
original.
El segundo proceso consiste en copiar, en forma de ARN, partes del
mensaje codificado en el DNA.
El tercer proceso supone en traducir el mensaje gentico codificado en una
protena con una secuencia especfica de aminocidos.

1.1. Tipologa de los cidos nucleicos
Los cidos nucleicos (AN) fueron descubiertos por Freidrich Miescher en 1869.
En la naturaleza existen solo dos tipos de cidos nucleicos: El ADN (cido
desoxirribonucleico) y el ARN (cido ribonucleico) y estn presentes en todas las
clulas.
Los cidos nucleicos son principios inmediatos orgnicos constituidos por
carbono, oxgeno, hidrgeno, nitrgeno y fsforo.
Los cidos nucleicos tienen al menos dos funciones: trasmitir las caractersticas
hereditarias de una generacin a la siguiente y dirigir la sntesis de protenas
especficas.
Tanto la molcula de ARN como la molcula de ADN tienen una estructura de
forma helicoidal.
Qumicamente, estos cidos estn formados, como dijimos, por unidades
llamadas nucletidos: cada nucletido a su vez, est formado por tres tipos de
compuestos:
1. Una pentosa o azcar de cinco carbonos: se conocen dos tipos de pentosas
que forman parte de los nucletidos, la ribosa y la desoxirribosa, esta ltima se
diferencia de la primera por que le falta un oxgeno y de all su nombre. El ADN
slo tiene desoxirribosa y el ARN tiene slo ribosa, y de la pentosa que llevan se
ha derivado su nombre, cido desoxirribonucleico y cido ribonucleico,
respectivamente.

2. Una base nitrogenada: que son compuestos anillados que contienen nitrgeno.
Se pueden identificar cinco de ellas: adenina, guanina, citosina, uracilo y timina.

3. Un radical fosfato: es derivado del cido fosfrico (H3PO4
-
).





La secuencia de los nucletidos determina el cdigo de cada cido nucleico
particular. A su vez, este cdigo indica a la clula cmo reproducir un
duplicado de s misma o las protenas que necesita para su supervivencia.
1.1.1.ADN
Algunos autores definen estructuras que denominan primarias, secundarias, etc.
en orden de complejidad creciente, similar a las de las protenas.
Las cuatro bases nitrogenadas del ADN se encuentran distribuidas a lo largo de
la "columna vertebral" que conforman los azcares con el cido fosfrico en un
orden particular, (la secuencia del ADN). Laadenina (A) se empareja con
la timina (T) mientras que la citosina (C) lo hace con la guanina.
La estructura primaria del ADN est determinada por esta secuencia de bases
ordenadas sobre la "columna" formada por los nuclesidos: azucar + fosfato. Este
orden es en realidad lo que se transmite de generacin en generacin (herencia).
Estructura secundaria: es el modelo postulado por Watson y Crick: la doble
hlice, las dos hebras de ADN se matienen unidas por los puentes hidrgenos
entre las bases. Los pares de bases estn formados siempre por una purina y
una pirimidina, de forma que ambas cadenas estn siempre equidistantes, a
unos 11 una de la otra. Los pares de bases adoptan una disposicin helicoidal
en el ncleo central de la molcula, ya que presentan una rotacin de 36 con
Los AN son polmeros lineales en los que la unidad repetitiva, llamada
nucletido (figura de la izquierda), est constituida por: (1) una pentosa (la
ribosa o la desoxirribosa), (2) cido fosfrico y (3) una base nitrogenada
(purina o pirimidina).

respecto al par adyacente, de forma que hay 10pares de bases por cada vuelta
de la hlice. La A se empareja siempre con la T mediante dos puentes de
hidrgeno, mientras que la C se empareja siempre con la G por medio de 3
puentes de hidrgeno
En cada extremo de una doble hlice lineal de ADN, el extremo 3'-OH de una de
las hebras es adyacente al extremo 5'-P (fosfato) de la otra. En otras palabras, las
dos hebras son antiparalelas (Figura superior), es decir, tienen una orientacin
diferente. Por convencin, la secuencia de bases de una hebra sencilla se escribe
con el extremo 5'-P a la izquierda.
Estructura terciaria: es la forma en que se organiza esta doble hlice,
En los Eucariotas el ADN se encuentra localizado principalmente en el ncleo,
apareciendo el superenrrollamiento (trenzamiento de la trenza) y la asociacin
con protenas histnicas y no histnicas.
El ADN se enrolla (dos vueltas) alrededor de
un octeto de protenas histnicas formando un
nucleosoma, estos quedan separados por una
secuencia de ADN de hasta 80 pares de bases,
formando un "collar de perlas" o ms
correctamente denominado fibra de cromatina,
siendo la estructura propia del ncleo
interfsico, que no ha entrado en divisin.
Este collar de nucleosomas vuelve a enrollarse
y cada 6 nucleosomas constituyen un "paso de
rosca" por medio de histoma H1 formando
estructuras del tipo solenoide.
En el ciclo mittico de las clulas eucariotas la cromatina se enrolla formando
cromosomas, que son complejas asociaciones de ADN y protenas.
1.1.2. ARN
Una clula tpica contiene 10 veces ms ARN que ADN. El azcar presente en el
ARN es la ribosa. Esto indica que en la posicin 2' del anillo del azcar hay un
grupo hidroxilo (OH) libre. Por este motivo, el ARN es qumicamente inestable, de
forma que en una disolucin acuosa se hidroliza fcilmente. En el ARN la base
que se aparea con la A es U, a diferencia del ADN, en el cual la A se aparea con
T.
Segn las modernas teoras sobre el origen de la vida, parece bastante probable
que el ARN fuese el primer biopolmero que apareci en la corteza terrestre
durante el transcurso de la evolucin.
Se distinguen varios tipos de RNA en funcin, sobre todo, de sus pesos
moleculares:
RNA MENSAJERO (RNAm)
Se sintetiza sobre un molde de ADN por el
proceso de transcripcin por el cual se
copia el ARN a partir del molde del ADN,
pasa al citoplasma y sirve de pauta para la
sntesis de protenas (traduccin).
RNA RIBOSMICO (RNAr)
El RNA ribosmico (RNAr) est presente
en los ribosomas, orgnulos
intracelulares implicados en la sntesis
de protenas. Su funcin es leer los
RNAm y formar la protena
correspondiente.
RNA DE TRANSFERENCIA.( RNAT)
Son cadenas cortas de una estructura bsica,
que pueden unirse especficamente a
determinados aminocidos.
ARN corto de interferencia (si ARN: del ingls:
short interfering RNA): son componentes de una
gran respuesta antiviral denominada
interferencia del ARN.
Ribo-llaves (ribo-switches) son formas de ARN que actan como llaves
"encendido-apagado" de gran precisin.
ARNnc : ARN funcional que no codifica para sntesis proteica

1.2. Evolucin de la Biologa molecular.
Desde el nacimiento de las ciencias hasta el establecimiento de distintas
disciplinas a finales del siglo XIX la vida se concibe desde un punto de vista
totalmente mecanicista, reduciendo la clula a sus partes constitutivas. Gracias
a este planteamiento se esclarecieron muchos procesos elementales de la
fisiologa celular.
Esta visin se ve favorecida por los estudios de la herencia y la bioqumica de
finales del siglo
XIX y principios del XX.
La naturaleza qumica de los cromosomas se estaba estudiando
simultneamente a la transferencia de los genes. Entre 1868 y 1869, el suizo
Friedrich Miescher (1844-1895), siendo estudiante de postdoctorado en el
laboratorio de Friedrich Hoppe-Seyler (el acuador del trmino biochimie), en
Tubinga, aisl ncleos a partir del pus de los vendajes usa-dos en el hospital.
Tras un tratamiento simple, comprob que estaban formados por una nica
sustancia qumica muy homognea y no proteica, que denomin Nuclena
El modelo del DNA propuesto por Watson y Crick respondiese a la realidad.
Quiz por eso se desarrollaron con ms xito la gentica, la embriologa y la
bioqumica durante la primera mitad del siglo XX.
En 1938 sir William Thomas Astbury (1898-1961) y Florence Bell, de la
Universidad de Leeds, proponen que el DNA debe de ser una de fibra peridica, al
encontrar un espaciado regular de 0,33 nm a lo largo del DNA mediante estudios
preliminares de difraccin por rayos X. En aquel momento Astbury vea que las
bases estaban apiladas a 0,33 nm unas de otras, y perpendiculares al eje de la
molcula; de hecho, era la distancia que separaba los tetranucletidos. Astbury
sigui trabajando desde el punto de vista estructural sobre protenas fibrosas,
como las queratinas, en lana. Su preocupacin por la estructura de las
molculas hizo que consiguiera en 1945 la primera ctedra de
Estructura Biomolecular; adems fue el primer cientfico en denominarse
bilogo molecular aprovechando que el trmino biologa molecular haba sido
acuado en 1938 por Warren Weaver (1894-1978),
La biologa molecular es el dominio de la biologa que busca explicaciones a las
clulas y organismos en trminos de estructura y funcin de molculas; las
molculas ms frecuente-mente analizadas son las macromolculas del tipo
protenas, cidos nucleicos y glcidos, as como conjuntos moleculares del tipo
membranas o virus (H. Salter). Este concepto de biologa molecular llev a una
tendencia reduccionista de los problemas biolgicos, favoreciendo que lo que se
desarrolla-se en primer lugar fuera su vertiente estructuralista, cuyo objetivo era
el conocimiento de la estructura atmica.
Sin que haya un registro histrico evidente, entre 1950 y1953 la mayor parte de
la comunidad cientfica empieza a admitir que el material gentico es el DNA, por
lo que comienza una nueva ola de experimentos dedicados a conocer su
estructura real.
Cantor y David Schwartz desarrollan la electroforesis encampo pulsante para
separar molculas de DNA de alto peso molecular.
Hoy en da la metodologa y la filosofa de la mayora de los bilogos es casi
indistinguible de unas reas a otras. Si bien las distintas disciplinas existen y
seguirn existiendo, la forma de trabajar y de abordar los problemas es muy
parecida en cada una de ellas. Esto est favoreciendo extraordinariamente la
comunicacin entre bilogos de distintas reas de conocimiento, con lo que se
mezclan an ms las tcnicas.






BIBLIOGRAFA

http://www.slideshare.net/marianaranjosuarez/dogma-central-de-la-
biologa-molecular
http://www.ciencia-explicada.com/2009/08/video-del-dogma-central-de-
la-biologia.html
http://www.profesorenlinea.cl/Ciencias/AcidosNucleicos.htm

http://recursos.cnice.mec.es/biosfera/alumno/2bachillerato/biomol/cont
enidos19.htm
http://www.korion.com.ar/archivos/duplicacion.pdf
http://es.scribd.com/doc/22025916/Historia-Biologia-Molecular
http://sebbm.es/ES/divulgacion-ciencia-para-todos_10/la-evolucion-
biologica-a-nivel-molecular_356
















CAPITULO II
BASES TERICAS DE LAS TCNICAS DE ANLISIS
MOLECULAR

1.1. Tcnica del PCR (Reaccin en cadena de la polimerasa)
La reaccin en cadena de la polimerasa,
conocida como PCR por sus siglas en ingls
(Polymerase Chain Reaction), es una tcnica
de biologa moleculardesarrollada
en 1986 por Kary Mullis,
1
cuyo objetivo es
obtener un gran nmero de copias de un
fragmento de ADN particular, partiendo de un
mnimo; en teora basta partir de una nica
copia de ese fragmento original, o molde.
Esta tcnica sirve para amplificar un fragmento de ADN; su utilidad es que tras
la amplificacin resulta mucho ms fcil identificar con una muy alta
probabilidad,virus o bacterias causantes de una enfermedad, identificar
personas (cadveres) o hacer investigacin cientfica sobre el ADN amplificado.
Estos usos derivados de la amplificacin han hecho que se convierta en una
tcnica muy extendida, con el consiguiente abaratamiento del equipo necesario
para llevarla a cabo.

1.2. Tcnica de Southern Blot.
La tcnica consiste en cortar el DNA con enzimas de restriccin para producir
fragmentos de diferente tamao. Los fragmentos se separan por su tamao
molecular mediante electroforesis en gel de agarosa y tincin con bromuro de
etidio (Rybicki y Purves, 1996). Losfragmentos son luego transferidos a una
membrana que acta como filtro. Para ello el gel se sumerge en una solucin
salina para denaturarlo a hebras sencillas. Las hebras se adhieren al papel
secante quelas recibe y acepta debido a sus propiedades qumicas. Despus los
fragmentos se fijan (por UV) al filtro membranoso y pueden ser hibridados con
una sonda que se marque radioactivamente y que tenga una secuencia
complementaria a la del fragmento en cuestin. Despus de la hibridacin, se
lava el filtro y los fragmentos se detectan por radio autografa o mediante
fluorescencia (en caso de marcajeno-radioctivo).

El Southern Blot es una tcnica que permite la identificacin de secuencias
especficas de DNA, mediante el uso de electroforesis en gel y de hibridacin
utilizando sondas especificas. Para analizar una muestra de DNA cromosomal
sta debe ser previamente fragmentada, por ejemplo utilizando sonicacin
enzimas de restriccin. Los fragmentos obtenidos se separan, de mayor a menor
tamao mediante una electroforesis en gel de agarosa. Una vez terminada la
electroforesis y sin teir el gel, los fragmentos de DNA se traspasan aun filtro de
nitrocelulosa a una membrana de nylon. A continuacin, el filtro se incuba con
una sonda marcada, especfica para la secuencia que se desea identificar. Esta
sonda es una secuencia de cido nucledo, DNAds RNAm, que reconocer a la
secuencia de DNA inmovilizada en el filtro, a travs del reconocimiento de
secuencias complementarias de cidos nucledos. El traspaso de las muestras
desde el gel al filtro es una etapa esencial, porque el reconocimiento de bases
complementarias entre sonda y secuencias de DNA en el gel es muy ineficiente.
Cabe sealar que el nombre de la tcnica Southern Blot deriva en parte del
apellido Southern del investigador que la desarroll y de la palabra en ingls Blot
que significa traspasar.
1.3. Tcnica de Nouthern Blot.
Una tcnica de laboratorio que se utiliza para identificar y localizar las
secuencias de ARNm que son complementarias a un fragmento de ADN o ARN
llamado sonda. Northern blot o anlisis Northern es bsicamente una prueba
para detectar la presencia del ARNmensajero en un tejido en particular y la cual
permite tambin determinar el tamao de la trascripcin de ese ARN mensajero.
El procedimiento se hace transfiriendo todo el ARN mensajero de un tipo
determinado de tejido desde un gel a una membrana de nylon o nitrocelulosa. La
presencia de un ARN en particular se detecta hibridizando esta membrana con
una sonda de cido nucledo, generalmente de cADN o rARN del gen de inters.
Es similar a la tcnica anterior, pero permite detectar RNA en vez de DNA (Innis
yGelfand, 1990). En sntesis la tcnica consiste en extraer el RNA de las clulas
pertinentes y su posterior separacin por tamao mediante electroforesis en gel.
Las molculas de RNA son transferidas y unidas al filtro, al igual que en el
Southern blot. Despus de la hibridacin con una sonda marcada (y posterior a
la deteccin segn el mtodo de marcaje utilizado), las bandas en el gel indican
la ubicacin de los tipos de RNA que sean complementarios a la sonda. Teniendo
marcadores de RNA de tamao adecuado, se puede conocer el tamao de los
RNA que se han identificado. As, la tcnica permite conocer el tamao preciso de
un mRNA, luego del empalme transcripcional. Adems, sirve para identificar
diferentes tipos de mRNA codificados por un mismo gen y para determinar la
cantidad y el tejido especfico (o tipo de clulas) en que se encuentra un mRNA
especfico. As, ser posible determinar los niveles de actividad gnica, por
ejemplo durante el desarrollo, o bien en distintos tejidos (o tipos celulares)
durante un perodo definido de la vida, o despus de haber sido sometido a los
organismos a diferentes estmulos fisiolgicos (Russel, 1998).

Es una tcnica muy similar al Southern Blot que permite la identificacin de
secuencias especficas de RNA. La muestra de RNA a analizar no requiere
fragmentacin y se somete a electroforesis en geles de agarosa, donde las
molculas de RNA se separan desde mayor a menor tamao. Una vez terminada
la electroforesis, y sin teir el gel, los fragmentos se traspasan a un filtro de
nitrocelulosa a una membrana nylon, luego el filtro se incuba con una sonda
marcada, especfica para la secuencia que se desea identificar.
1.4. Tcnica de Elisa
La tcnica de ELISA (Enzyme Linked InmunoSorbent Assay) es un procedimiento
de ensayo inmunoenzimtico. Se basa en la deteccin antgeno(Ag) o anticuerpo
(Ac), inmovilizado sobre una fase slida y mediante anticuerpos que directa o
indirectamente producen una reaccin, la prueba recurre al empleo de
inmungenos, haptenos anticuerpos marcados con una enzima cuyo producto
colorido, puede ser medido espectrofotomtricamente.Este principio tiene las
propiedades de un inmuno ensayo ideal: es verstil, robusto, simple en su
realizacin, emplea reactivos econmicos y consigue, mediante el uso de la fase
slida, de una separacin fcil entre la fraccin retenida y la fraccin libre.
Tcnica de Westher Blot.
Se usa en muchos laboratorios para determinar si un anticuerpo particular est
presente en la muestra de sangre de un paciente. Aunque el procedimiento es
rutinario y sencillo, involucra a un gran nmero de variables, tales como
seleccin de reactivo, temperatura, medicin de volumen y tiempo, que si no se
ajustan correctamente puede afectar a los pasos sucesivos y al resultado de la
prueba.
La interaccin antgeno-anticuerpo en el laboratorio puede ser utilizada para
determinar si un paciente tiene una infeccin o una enfermedad autoinmune.
Pero como prueba diagnstica, posee diversas limitaciones que conviene conocer:
o En primer lugar, un resultado positivo que confirma la presencia de
anticuerpos no significa necesariamente que el paciente est enfermo. El
cuerpo de una persona que ha estado enferma y que ya se ha recuperado,
puede seguir produciendo anticuerpos. Esto originara un falso positivo.
o En segundo lugar, hay personas que producen una baja cantidad de
anticuerpos, por lo que stos pueden pasar desapercibidos y no ser
medidos, dando lugar a un falso negativo. Sera el caso, por ejemplo, de
personas que padezcan una inmunodeficiencia, o que se encuentren en el
periodo ventana de la infeccin en el momento de realizar la prueba, o que
estn infectadas por una cepa extraa.
o En tercer lugar, pueden aparecer falsos positivos cuando se da
inespecificidad entre antgeno-anticuerpo.
En estos casos de diagnstico de enfermedad es recomendable la eliminacin
(mediante centrifugacin) de clulas de la sangre que puedan interferir con el
ensayo y pueda ocasionar un resultado falso positivo, careciendo aqul de
especificidad. Tambin, debemos tener en cuenta que cuando se trata de
diagnosticar una enfermedad que posee un valor predictivo positivo bajo en una
determinada poblacin, es decir, que esa enfermedad tiene muy baja incidencia
en dicha poblacin, es necesario volver a confirmar el resultado positivo
mediante otro mtodo de diagnostico independiente. Normalmente, se lleva a
cabo un western blot donde se detecta la presencia de varios anticuerpos,
simultneamente, frente a la misma infeccin en una muestra. El resultado del
western se considera positivo cuando aparecen al menos 5 bandas, que indica
que 5 anticuerpos diferentes estn presentes en el sujeto frente a esa infeccin.
Entonces es cuando se diagnostica como positivo a dicho paciente.
Este principio tiene muchas de las propiedades de un inmunoensayo ideal: es
verstil, robusto, simple en su realizacin, mediante el uso de la fase slida, una
separacin fcil entre la fraccin retenida y la fraccin libre.
1.5. Tcnica de Westhern Blot
El Western blot, o inmunoblot, es una tcnica analtica usada para
detectar protenas especficas en una muestra determinada (una mezcla compleja
de protenas, como un extracto tisular). Mediante una electroforesis en gel se
separan las protenas atendiendo al criterio que se desee: peso
molecular, estructura, hidrofobicidad, etc.
Hay casi tantas posibilidades como tipos de electroforesis existen. Luego son
transferidas a una membrana adsorbente (tpicamente de nitrocelulosa o
de PVDF) para poder buscar la protena de inters con anticuerpos especficos
contra ella. Finalmente, se detecta la unin antgeno-anticuerpo por actividad
enzimtica, fluorescencia entre otros mtodos. De esta forma se puede estudiar
la presencia de la protena en el extracto y analizar su cantidad relativa respecto
a otras protenas.
Esta tcnica es hoy en da imprescindible en varios campos de la biologa, como
la biologa molecular, la bioqumica, la biotecnologa o la inmunologa. Existe
toda una industria especializada en la
venta de anticuerpos
(monoclonales y policlonales) contra
decenas de miles de protenas diferentes.
El Western blot fue desarrollado en el
laboratorio de George Stark, en
la Universidad de Stanford. El nombre
(Western, occidental en ingls) le fue dado
por W. Neal Burnette,
5
y consiste en un
juego de palabras con una tcnica anloga pero que usa DNA, el Southern
(sureo) blot, que en este caso debe su nombre a su descubridor, Edwin
Southern. Otras tcnicas que fueron nombradas siguiendo este criterio son
el Northern blot (en el que se separa e identifica RNA), el Eastern blot,
el Southwestern blot.
El Western blot se basa esencialmente en separar las principales estructuras del
virus en un gel de poliacrilamida, mediante la aplicacin de corriente elctrica la
cual hace correr estas protenas y glicoprotenas de acuerdo a su peso molecular.
Una vez separadas, son transferidas a un papel de nitrocelulosa donde se agrega
el suero en estudio y si ste tiene anticuerpos contra las estructuras virales nos
daremos cuenta por la presencia de bandas. Los resultados que nos informa el
laboratorio son tres: un resultado positivo es cuando aparecen mltiples bandas,
un resultado negativo es cuando no aparece ninguna banda y un resultado
indeterminado es cuando slo aparece alguna o algunas bandas pero que no son
suficientes para ser considerado como positivo
1.6. Electroforesis
La electroforesis es un mtodo de laboratorio en el que se utiliza una corriente
elctrica controlada con la finalidad de separar biomoleculas segn su tamao y
carga elctrica a travs de una matriz gelatinosa.
Fue empleado por primera vez por en el ao 1937, pero su importancia vino a
incrementarse cuando en los aos cincuenta E. L.Durrum y Arne W.K. Tiselius ,
impulsaron la electroforesis de zona, nombre que se asigno a la separacin de
materiales en un campo elctrico en presencia de algn tipo de soporte; aunque
este trmino se limito originalmente al anlisis de coloides y partculas
submicroscopicas , se ha convertido en estos ltimos aos en una metodologa
aplicada a sustancias de bajo peso molecular.
Fundamento.
Cuando una mezcla de molculas ionizadas y con carga neta son colocadas en
un campo elctrico, estas experimentan una fuerza de atraccin hacia el polo que
posee carga opuesta, dejando transcurrir cierto tiempo las molculas cargadas
positivamente se desplazaran hacia el ctodo (el polo negativo) y aquellas
cargadas positivamente se desplazaran hacia el nodo (el polo positivo).
El movimiento de las molculas est gobernado tambin por dos fuerzas
adicionales; inicialmente la friccin con el solvente dificultar este movimiento
originando una fuerza que se opone , por otro lado las molculas tienen que
moverse en forma aleatoria o movimiento browniano debido a que poseen
energa cintica propia denominado difusin. La energa cintica de las
molculas aumenta con la temperatura, por ello a mayor temperatura mayor
difusin.
Mtodos electroforeticos zonales.
Son los ms comunes, dada su alta aplicabilidad en diferentes campos. Son
tiles para lograr la separacin de mezclas
complejas. Se aplican pequeas cantidades de
la disolucin de protenas a un soporte slido,
que se impregna con una solucin tampn.
Los soportes son en general polmeros y
forman un gel poroso que restringe el
movimiento de las molculas a travs del medio
durante la electroforesis y disminuyen los
flujos de conveccin del solvente.

Como soporte han sido utilizados papel (celulosa), almidn, poliacrilamida,
agarosa y acetato de celulosa, entre otros. Este mtodo tiene gran poder
resolutivo por que se aplica una cantidad pequea de protena a una zona
estrecha, mientras que la longitud del trayecto es mucho mayor que la zona de
aplicacin. El equipamiento requerido es simple, fuente de poder, cubeta vertical
u horizontal donde se colocan el soporte y dos electrodos Los ms utilizados son:
Electroforesis en gel de poliacrilamida.
Los geles de poliacrilamida se forman por polimerizacin de la acrilamida por
accin de un agente entrecuzador, es qumicamente inerte, de propiedades
uniformes, capaz de ser preparado de forma rpida y reproducible. Forma,
adems, geles transparentes con estabilidad mecnica, insolubles en agua,
relativamente no inicos y que permiten buena visualizacin de las bandas
durante un tiempo prolongado. Adems tiene la ventaja de que variando la
concentracin de polmeros, se puede modificar de manera controlada en el
tamao del poro, lamentablemente cada vez se emplea menos en diagnostico
debido a su neurotoxocidad.
Electroforesis en geles de gradientes.
El uso de geles de poliacrilamida que tienen un gradiente creciente de
concentracin de archilamida + bisacrilamida, y en consecuencia un gradiente
decreciente en el tamao del poro, pueden tener ventajas sobre los geles de
concentraciones uniformes de acrilamida. En un gel en gradiente la protena
migra hasta alcanzar una zona donde el tamao de poro impida cualquier
avance. Una vez se alcanza el lmite del poro no se produce una migracin
apreciable aunque no se detiene completamente. Una de las ventajas de este tipo
de geles es que resuelve mejor las bandas pues las concentra en regiones ms
estrechas, adems de incrementar el rango de pesos moleculares que se pueden
resolver en un mismo gel comparado con los de una concentracin fija.
Electroforesis en geles de agarosa.
La agarosa es un polisacrido (originalmente obtenido de algas, como el agar-
agar, pero de composicin homognea), cuyas disoluciones (tpicamente de 0.5 a
2 %) poseen la propiedad de permanecer liquidas por encima de 50 grados C y
formar un gel, semislido al enfriarse. Este gel est constituido por una matriz o
trama tridimensional de fibras polimricas embebida en gran cantidad de medio
lquido, que retarda el paso de las molculas, se usa usualmente para separar
molculas grandes de alrededor 20.000 nucletidos.

BIBLIOGRAFA

http://www.higiene.edu.uy/parasito/trabajos/elisa.pdf
http://es.scribd.com/doc/7176351/Southern-Northern-Western-Blot
http://es.wikipedia.org/wiki/ELISA
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http://javeriana.edu.co/Facultades/Ciencias/neurobioquimica/libros/cel
ular/electroforesis.html
http://www2.uah.es/bioquimica/b-fbbma/notas4.pdf


















CAPTULO III

GENTICA MOLECULAR DE LOS PROCARIOTAS

3.1. Estudio del sistema Opern
Un Opern se utiliza como una unidad gentica funcional formada por un grupo
o complejo de genes capaces de ejercer una regulacin de su propia expresin
por medio de los sustratos con los que interaccionan las protenas codificadas
por sus genes. Este complejo est
formado por genes estructurales
que codifican para la sntesis de
protenas (generalmente enzimas),
que participan en vas metablicas
cuya expresin generalmente est
regulada por otros 3 factores de
control, llamados:
Factor promotor: zona que
controla el inicio de la transcripcin del opern, ya que la ARN Polimerasa
tiene afinidad por ella. Realmente, como un gen es cada unidad de
transcripcin independiente, y puesto que el opern tiene un nico promotor
que controla toda su expresin, no hay elementos para decir que se trate de
"varios genes" de expresin coordinada; ms correcto sera decir que el
opern es un nico gen que codifica un ARNm policistrnico (es decir, con
muchos codones de inicio y paro, con lo que a la hora de traducirse dar
lugar a varias protenas independientes).
Operador: zona de control que permite la activacin/desactivacin del
promotor a modo de "interruptor gnico" por medio de su interaccin con un
compuesto inductor. Esto lo logra porque tiene secuencias reconocibles por
protenas reguladoras.
Gen regulador: alguno de los genes del opern pueden codificar factores de
transcripcin que se unan al promotor, regulando as la propia expresin del
opern. A toda regulacin de la expresin realizada desde dentro del gen u
opern se le llama "regulacin en cis", pero puede haber tambin genes muy
alejados del opern que codifiquen factores de transcripcin para uno o
varios otros genes u operones, y en este caso se hablara de "regulacin en
trans".
Segn el tipo de regulacin que presenten, los operones se clasifican en
inducibles, represibles y constitutivos.
Opern inducible
Opern inducible es el que en condiciones normales no se expresa, se activa en
respuesta a un agente inductor que funciona como Activador, en el momento que
el inductor se une al operador, se activa el promotor y comienza
la transcripcin de los genes estructurales. El modelo clsico de este tipo de
opern es el operon lactosa. Otros ejemplos de operones inducibles son aquellos
que codifican para enzimas que participan en el metabolismo de sustratos como
operon maltosa, arabinosa, etc.
Suelen ser operones que participan en rutas catablicas, para la obtencin de
metabolitos energticos.
Opern reprimible
Opern reprimible o represible es el que en condiciones normales s expresa las
protenas estructurales an en ausencia de inductor, en respuesta a un agente
represor se activan. El inductor funciona como represor y se une al operador,
inhibiendo el funcionamiento del promotor y la transcripcin de los genes
estructurales. Ejemplos de este tipo de operon son los operones que codifican
para la sntesis de aminocidos, como opern trp, his, etc.
Suelen ser operones que participan en rutas anablicas, para la obtencin de
monmeros de macromolculas.
Opern constitutivo
Opern constitutivo es el opern que siempre se expresa, y por lo tanto no estn
regulados ni por inductores ni por represores. Aparece en operones que tienen
alguna mutacin en alguno de sus elementos reguladores y el sistema de control
falla y hace que estn expresando los genes estructurales de manera
constitutiva.

3.2. Estudio de elementos genticos mviles.
Los elementos genticos mviles son los plsmidos , los virus y
los transposones .
Adems de los genes que lleva el cromosoma bacteriano, las bacterias pueden
contener otros genes llevados en los plsmidos, que son molculas de DNA de
doble cadena mucho ms pequeas y tambin circulares. La mayora de los
plsmidos pueden ser transferidos de clula a clula. Esta transferencia de DNA
por contacto clula a clula se conoce como conjugacin . Parte de los
plsmidos puede integrarse reversiblemente al cromosoma bacteriano, en cuyo
caso se conocen como episomas .
El factor F (de fertilidad) de E. coli es un plsmido presente en las clulas F+
dadoras (machos) y puede ser transferido a las clulas F- (hembras) receptoras;
estas clulas pueden transformarse en F+ y transferir, a su vez, el factor F.
Cuando el factor F se integra al cromosoma de una clula de E.
coli (transformndolas en una clula Hfr), parte del cromosoma o (en raras
ocasiones) todo el cromosoma puede ser transferido a otra clula de E. coli por
conjugacin. En el momento de la transferencia, el cromosoma se replica por el
mecanismo de crculo rodante y una copia de DNA de cadena simple entra a la
clula receptora linealmente, de modo que los genes bacterianos penetran uno
tras otro, en una secuencia fija. Luego se sintetiza la cadena complementaria.
Como la velocidad a la cual los genes bacterianos entran en la clula receptora es
constante a una temperatura dada, la separacin a intervalos regulares de las
clulas que se conjugan permite mapear el cromosoma bacteriano.
Otros elementos genticos mviles son los virus bacterianos o bacterifagos ;
estn formados por DNA o RNA envuelto en una cubierta protenica. Dentro de la
clula hospedadora, el cido nucleico viral puede utilizar los recursos
metablicos de la clula para sintetizar ms molculas de cido nucleico viral y
ms protenas virales. Empaquetados en sus cubiertas protenicas, las partculas
de virus pueden provocar la lisis celular y escapar de la clula (ciclo ltico) para
comenzar un nuevo ciclo de infeccin.
El DNA de algunos virus, conocidos como virus atenuados, puede integrarse en
el cromosoma del hospedador de la misma manera que un episoma y replicarse
junto con el cromosoma iniciando un ciclo lisognico. Cuando se integra en un
cromosoma hospedador, el DNA de un virus bacteriano se conoce como profago
. De tanto en tanto, los profagos se separan del cromosoma y establecen un
nuevo ciclo de infeccin.
Los virus pueden servir como vectores de material gentico, transportando genes
de una clula a otra, proceso conocido como transduccin . La transduccin
general ocurre cuando el DNA hospedador, fragmentado en el curso de la
infeccin viral, se incorpora a nuevas partculas virales que llevan estos
fragmentos a una nueva clula hospedadora. La transduccin especializada
ocurre cuando un profago, al liberarse del cromosoma hospedador, lleva con l,
como parte del cromosoma viral, genes del hospedador que luego son
transportados a una nueva clula hospedadora.
3.3. Estudio de virus bacterianos.
Estos virus infectan a las bacterias. Generalmente tienen una forma complicada,
con una cpsida geomtrica, un cuello en el que se inserta una cola o vaina
ms o menos larga, y unos apndices de fijacin. En su interior se encuentra el
material gentico en forma de ADN o ARN.
El bacterifago se fija a la pared bacteriana e inyecta el ADN en el interior
mientras que la cpsida no entra en la bacteria. El ADN utiliza la maquinaria
celular para expresar su mensaje gentico: se produce la transcripcin de
algunos genes, la replicacin del ADN o ARN viral, la transcripcin de genes
tardos y la sntesis de las protenas de la cpsida. Posteriormente, en un
mecanismo que recuerda a las cadenas de ensamblaje de una fbrica, se
ensamblan las nuevas cpsidas, se introduce el cido nucleico, se aade la cola
y, mediante una enzima codificada por el virus, se produce la destruccin de la
pared bacteriana y la lisis (ruptura) de la clula, con la salida de unos 1.000
bacterifagos por bacteria que infectarn a las clulas vecinas. El proceso es tan
rpido y eficiente que se ha utilizado como modelo para estudiar los mecanismos
bsicos de la gentica molecular. La mayora de los bacterifagos se reproducen
de un modo semejante a ste, el cual se denomina ciclo ltico de multiplicacin.
Algunos bacterifagos han desarrollado otra estrategia de multiplicacin ms
sutil que se conoce como ciclo lisognico: en ciertos casos, como en el
bacterifago lambda, que infecta aEscherichia coli, una vez inyectado el ADN en
el interior de la bacteria tiene lugar un proceso de recombinacin homologa entre
la molcula de ADN circular del bacterifago y la de la bacteria, y el ADN queda
integrado en el ADN del husped.En pocas palabras, el ADN del fago y el de la
bacteria se unen.

Se produce entonces la transcripcin de un nico gen del fago, que codifica a
una protena que acta como represor, ligndose al operador e impidiendo la
expresin del resto de las protenas del fago. El fago, que en este estado se
denomina profago, se comporta entonces como un gen y no causa ningn dao a
la bacteria; su ADN se replica con el del husped, de modo que cada bacteria hija
hereda una copia del mismo. El ciclo lisognico puede transformarse en ltico si
se inactiva el represor por cualquier agente (luz ultravioleta u otros). En estas
condiciones, el ADN del fago se transcribe, se replica, se sintetizan sus protenas
constituyentes y se produce el ciclo ltico, destruyndose la bacteria.

Esta capacidad de destruccin de bacterias que tienen algunos virus llev a
algunos investigadores de la extinta URSS a pensar una terapia radicalmente
diferente a la tradicional para acabar con algunas de nuestras bacterias
patgenas: la fagoterapia. Se trata de encontrar fagos que ataquen a nuestras
bacterias patgenas y que por lo tanto las destruyan. Como los fagos bacterianos
no tienen ningn efecto sobre el ser humano, este tratamiento sera inocuo, pero
eficaz. Podra ser una alternativa al tratamiento tradicional con antibiticos. Con
la cada de la Unin Sovitica la investigacin se paraliz, aunque algunos
laboratorios estn empezando a reconsiderarla.


BIBLIOGRAFA


http://es.wikipedia.org/wiki/Oper%C3%B3n
http://www.ucm.es/info/genetica/grupod/Operon/Operon.htm
http://www.cobach-
elr.com/academias/quimicas/biologia/biologia/curtis/libro/c15b.htm




















CAPITULO IV

GENTICA MOLECULAR DE EUCARIOTAS

4.1. Expresin gentica de los eucariotas.
El cromosoma eucariota
Los cromosomas de los eucariotas consisten en ADN y protenas que parecen
jugar un importante rol en la regulacin de los genes eucariotas. El ADN de cada
cromosoma es una larga cadena de ADN bicatenario. El ADN eucariota se
presenta en dos formas.
La cromatina que es la forma no empaquetada ("uncoiled") y tiene un 50%
de protenas.
Los cromosomas que son ADN y protenas empaquetados ("coiled") y se
forman durante los primeros estadios de la divisin celular.
Las protenas asociadas al ADN se conocen colectivamente con el nombre de
histonas. Son polipptidos relativamente cortos cargados positivamente (bsicos)
y por lo tanto son atrados por las cargas negativas del ADN (cido) Las histonas
son sintetizadas en cantidad durante la fase S ( S por sntesis) del ciclo celular.
Una de las funciones de esas protenas est relacionada con el empaquetamiento
del ADN en la forma del cromosoma: los 2 metros de ADN de la clula humana
son empaquetados en 46 cromosomas de un largo combinado de
aproximadamente 200 nm. La clula tiene unas 90 millones de molculas de
histonas siendo la mayora perteneciente a un tipo conocido como H1. Se
conocen cinco tipos de las siguientes histonas (H1, H2A, H2B, H3, y H4 , 8
molculas en total); con la excepcin de la H1 la mayor parte de las histonas de
los eucariotas son muy similares.
El nucleosoma es la unidad fundamental de "empaquetamiento" del ADN
eucaritico. El "carretel" ("core") del mismo consiste en dos molculas de H2A,
H2B, H3, y H4; alrededor de las cuales el ADN se enrolla dos veces (1). La
histona 1 est fuera del "carretel". Este nivel de empaquetamiento ("packing") se
conoce como "cuentas de un collar" (2). El siguiente nivel se conoce como la fibra
de 30 nm, cuyos detalles de organizacin no se conocen completamente. Las
fibras se condensa a posteriori en dominios en bucle de 300 nm (3). Los dominios
son parte de las secciones condensadas (4) (700 nm) de los cromosomas (el
cromosoma tiene un ancho de unos 1.400 nm en la metafase) (5).
Replicacin del cromosoma de los eucariotas
Los nucletidos trifosfatos (en la formas de ATP, GTP, CTP y TTP) se enganchan
de acuerdo al modelo semi-conservativo. Otros detalles de la replicacin del ADN
son consistentes con los hallazgos en procariotas. El ADN eucariota tiene
muchas horquillas de replicacin y tambin sntesis bidireccional. El ADN
eucariota se sintetiza mucho ms lentamente que el del procariota, en humanos,
a unos 50 nucletidos por segundo y por horquilla de replicacin. Luego de la
replicacin el nuevo ADN se asocia inmediatamente con histonas.
Regulacin de la expresin gnica en eucariotas
La regulacin gentica de los eucariotas, especialmente en los multicelulares se
complica por el proceso de diferenciacin que ocurre en los organismos
multicelulares. Cada organismo multicelular comienza como una sola clula
llamada cigoto que se divide por mitosis. Las clulas se diferencian en variados
tipos funcionales utilizando algunos genes e ignorando otros.
Los genes hometicos (Homeobox genes) dirigen la organizacin general del
cuerpo y la posicin de los rganos en respuesta a un gradiente de molculas
regulatorias.
El momento ("timing") en que se expresa un determinado gen parece seguir una
secuencia, tal como la produccin de hemoglobina fetal en los glbulos rojos de
los mamferos, que cambia a hemoglobina adulta poco antes del nacimiento.
Claramente la inactivacin de ciertos genes ocurre en cada adulto y ello est
relacionado con el cncer, la prolongacin de la vida y tanto otro...
Tipos de cromatina
La heterocromatina es una cromatina que se tie ms fuerte y es ms
condensada. Laeucromatina se tie dbilmente y es ms "abierta" o sea es menos
condensada. La eucromatina permanece dispersa (no condensada) durante la
interfase, momento donde ocurre la transcripcin del ARN.
Algunas regiones de la heterocromatina parecen ser estructurales (como la
heterocromatina que se encuentra cerca de la regin de los centrmeros). Los
cuerpos de Barr (cromosomas X irreversiblemente inactivados), son tambin
heterocromatina condensada. Otras regiones de heterocromatina varan de clula
a clula. A medida que la clula se diferencia, la proporcin
heterocromatina/eucromatina se incrementa, reflejando la especializacin de la
clula a medida que se diferencia.
Los cromosomas "plumosos" de los insectos tienen en sus "plumas" o lazos
("loops or puffs") reas de sntesis activa de ARN sugiriendo, nuevamente que los
genes activos estn situados en la eucromatina.
Los eucariotas tambin tienen protenas especficas que intervienen en los
procesos de sntesis en manera similar a la de los procariotas, sin embargo, tal
como cabra esperarse el proceso es mucho ms complicado.
4.2. Mutacin.
La mutacin es la nica fuerza que genera variabilidad gentica en las
poblaciones, por la creacin de genes mutantes nuevos sin necesariamente
conocer su efecto en un individuo ni en la poblacin, siendo las que determinan
el proceso evolutivo de las especies.
La mutacin gnica se define como cualquier cambio sbito en la estructura de
un gen que determine un efecto gentico, es decir, incluso el cambio de una base
en la secuencia de aminocidos podra determinar un nuevo efecto sobre la
funcin definida para ese gen, ser una mutacin.
Adems una mutacin siempre es
aleatoria (sbita) en su efecto, es
decir, las mutaciones no se pueden
asegurar previamente si sern
positiva, negativa o neutra, slo
una vez que ocurren deben sufrir
un proceso de adaptacin a largo
plazo para definitivamente
permanecer y llegar a producir un cambio significativo de la frecuencia gnica en
la poblacin

TIPOS DE MUTACIONES
Puntuales y pseudopuntuales
* Cambios de base
Transiciones: Purina por purina y pirimidina por pirimidina
Transversiones: Purina por pirimidina y pirimidina por purina
* Desfases (cambio en el nmero)
Delecin
Insercin
Cromosmicas
Deleciones
Duplicaciones
Inversiones
Translocaciones
Las mutaciones pueden ser espontneas mediante varios mecanismos
diferentes, incluyendo errores de replicacin del DNA y lesiones fortuitas
de ste; o mediante mutgenos. Los mutgenos son agentes que
aumentan la frecuencia de mutagnesis, generalmente alterando el DNA y
en este caso son inducidas.
MUTACIONES ESPONTNEAS
Errores en la replicacin del DNA
Durante la sntesis del DNA puede producirse un error en la replicacin
porque se forme un emparejamiento ilegtimo de nucletidos como A-C
que da lugar a la sustitucin de una base por otra.
Cada una de las bases aparece en el DNA en una de varias formas
llamadas tautmerosque son ismeros que se diferencian en las
posiciones de sus tomos y en los puentes que se forman entre ellos. Esas
formas estn en equilibrio. La forma ceto es la que se encuentra
normalmente en el DNA mientras que las formas imino o enol son menos
frecuentes. La capacidad del tautmero menos frecuente de una base de
emparejarse errneamente y producir mutaciones durante la replicacin
del DNA fue puesta de manifiesto por primera vez por Watson y Crick. A
estos emparejamientos errneos se les llama cambios tautomricos.
Tambin pueden ocurrir emparejamientos errneos cuando una de las
bases se ioniza, esto sucede con ms frecuencia que los cambios
tautomricos.
Transiciones
Todos los emparejamientos errneos anteriores producen mutaciones por
transicin, en las que una purina es sustituida por otra purina y una
pirimidina es sustituida por otra pirimidina.
Transversiones
No pueden realizarse por emparejamientos errneos como los debidos a
cambios tautomricos.
Pero s pueden realizarse si una base sufre un cambio tautomrico
mientras que la otra base rota sobre su enlace glucosdico y quedan
enfrentadas sus cargas.
Desaminacin
Es una de las ms frecuentes debido a la inestabilidad qumica, afectando
gravemente a la replicacin del ADN provocando transiciones. En este
caso la base se modifica antes de la replicacin debido a los radicales que
provoca el metabolismo.
La desaminacin de citosina produce uracilo, as los residuos de uracilo
que no sean reparados se emparejarn con adenina durante la replicacin
produciendo la conversin de un par GC en uno AT, se produce una
transicin.
Cambios de fase
Estas mutaciones pueden ser inserciones o deleciones.
Las inserciones se producen por un deslizamiento o "resbaln" de la
cadena sintetizada con lo que se forma un lazo de varios pares de bases.
En la siguiente ronda de replicacin se aadirn tantas bases como
comprenda el lazo ya que cuando se produce el "resbaln" sigue
replicndose por donde se qued antes del "resbaln".
Las deleciones se producen por un deslizamiento o "resbaln" de la cadena
molde, como las que hay que copiar no se pueden no se aaden a la caden
hija.
Despurinizacin
El ADN pierde de alguna manera alguna de sus bases y si hay un hueco la
reparacin introduce una base.
La frecuencia de las mutaciones espontneas es generalmente baja.
EFECTOS DE LOS CAMBIOS
Se expresan cuando el gen pasa a su protena correspondiente. Los efectos
de los cambios pueden ser:
Cambios de sentido: se cambia un aminocido por otro
Sin sentido: la mutacin se produce porque se transforma en un
codn de terminacin.
Desfases: si hay una delecin de la base, la pauta de lectura cambia
y se produce un gran cambio en la protena y es muy grave.
Mutaciones silenciosas: son mutaciones sin efecto: UUU (Phe)--->
UUC (Phe)
El aminocido que cambia es muy parecido y la protena sigue
funcionando.
En eucariotas tienen un efecto muy grave ya que pueden provocar
enfermedades, se dan sobre todo, cuando hay una delecin de 5.000 pb
(pares de bases) que afecta a dos genes y producen la enfermedad como
problemas respiratorios de inteligencia.
MUTACIONES INDUCIDAS
Existen puntos de un gen donde la mutacin es ms frecuente se llaman
PUNTOS CALIENTES. Al genotipo silvestre o salvaje se le utiliza como
patrn y en el que se produce la variacin se le llama mutante.
Una estirpe mutante puede cambiar a otra y luego volver a la inicial, a
esto se le llama regresin. Los mutantes se inducen con mutgenos que
son de varios tipos y cada uno induce una mutacin distinta, aunque
suele ser al azar.
Los mutgenos son de varios tipos:
Mutgenos Qumicos
Algunos compuestos qumicos son suficientemente parecidos a las bases
nitrogenadas normales del DNA para, ocasionalmente, incorporarse a ste
en lugar de las bases normales, tales compuestos se llaman anlogos de
bases. Una vez en su sitio tienen propiedades de emparejamiento distintas
de aquellas a las que han sustituido, de este modo, causan mutaciones al
provocar que, durante la replicacin, se inserten frente a ellas nucletidos
incorrectos. El anlogo de base original slo estn en una cadena sencilla
pero puede provocar el cambio de un par de nucletidos que se replica en
todas las copias de ADN descendientes de la cadena original. Ejemplos
son: 5-bromurouracilo, 2-aminopurina.
Modificadores de bases:
cido nitroso: provoca una desaminacin que modifica las bases C-->U,
G--->X, con lo que se produce un apareamiento errneo.
Hidroxilamina: provoca una transicin de G-->A y se da
principalmente en bacterias.
Agentes alquilantes: introducen grupos alquilo a las cuatro bases en
muchas posiciones, produciendo transiciones, etilmetanosulfonato y
la nitrosoguanidina.
Agentes intercalantes: son molculas planas que imitan pares de
bases y son capaces deddeslizarse entre las bases nitrogenadas
apiladas en el ncleo de la doble hlice, mediante un proceso de
intercalacin. En esta posicin el agente puede producir deleciones
o deleciones de un par de nucletidos. Algunos agentes
intercalantes son: proflavina, naranja de acridina y ICRs.

Prdida del emparejamiento especfico:
Un gran nmero de mutgenos daan una o ms bases, haciendo
imposible el posterior emparejamiento especfico. El resultado es un
bloqueo en la repliacin, puesto que la sntesis del DNA no sigue ms all
de una base que no puede especificar una complementaria mediante
puentes de hidrgeno. Este fallo es replicado por el mecanismo SOS.
Radiaciones
UV que producen dmeros de timina, rayos X y las radiaciones gamma que
rompen el DNA.






BIBLIOGRAFA

http://med.unne.edu.ar/catedras/bioquimica/expresion.htm
http://www.biologia.edu.ar/adn/adntema4.htm
http://www.cienciaybiologia.com/bgeneral/mutacion-reparacion-
adn.htm