We t es t ed t h e ef f ec t o f t r i s s o l u t i o n s a t

pH v a l u es r a n g i n g f r o m 7 . 0 t o 9 . 0 . I n a l l
ex per i m en t s t r i s w a s i n c r ea s i n g l y ef -
f ec t i v e a s t h e pH w a s i n c r ea s ed .
T h e r es u l t s o f t h es e ex per i m en t s s u g -
g es t t h a t t r i s i s m o r e ef f ec t i v e i n t h e u n -
c h a r g ed f o r m , b u t t h ey d o n o t i n d i c a t e
w h et h er i t i s w o r k i n g a t a n i n t r a c el l u l a r
o r a n ex t r a c el l u l a r s i t e, o r , i n f a c t ,
w h et h er t h e t r i s i s c h a r g ed o r u n c h a r g ed
a t t h a t s i t e.
T r i s c o u l d b e en t er i n g t h e c el l a n d i n -
t er f er i n g w i t h t h e pr o c es s es t h a t o c c u r
a f t er t r a n s m i t t er - r ec ept o r i n t er a c t i o n .
On t h e o t h er h a n d , t h e c h em i c a l s i m i l a r -
i t y o f t r i s t o a c et y l c h o l i n e ( s ee F i g . 2 )
s u g g es t s t h a t t r i s c o u l d b e a n a n t a g o n i s t
o f a c et y l c h o l i n e b i n d i n g t o i t s r ec ept o r .
T r i s m a y b e a s pec i f i c a n t a g o n i s t o f
c h o l i n er g i c r es po n s es . We h a v e per -
f o r m ed pr el i m i n a r y ex per i m en t s w i t h
i o n t o ph o r es ed d o pa m i n e w h i c h s h o w
t h a t ex c i t a t o r y r es po n s es a r e m i n i m a l l y
a l t er ed , i f a t a l l , b y 1 0 m M t r i s . I n t h e
c a s e o f 5 - h y d r o x y t r y pt a m i n e ( 5 - HT ) ,
G er s c h en f el d a n d P a u pa r d i n - T r i t s c h ( 5 )
u s ed t r i s t o s u b s t i t u t e f o r s o d i u m i n a
s t u d y o f 5 - HT - m ed i a t ed h y per po l a r i -
z a t i o n s a n d d i d n o t r epo r t a n y d i f f i -
c u l t y . I n c o n t r a s t , B l a n k en s h i p et a l . ( 6 )
u s ed t r i s ( a n d o c c a s i o n a l l y c h o l i n e c h l o -
r i d e a n d s u c r o s e) a s a s u b s t i t u t e f o r s o -
d i u m i n t h e s t u d y o f c h o l i n er g i c ex c i t a -
t i o n i n A pl y s i a . On l y i n a f ew ex per i -
m en t s w er e t h ey a b l e t o d em o n s t r a t e t h e
ex pec t ed s h i f t i n r ev er s a l po t en t i a l . I n
t h e r em a i n d er , t h e r es po n s e w a s n ea r l y
a b o l i s h ed a n d es t i m a t es o f r ev er s a l po -
t en t i a l c o u l d n o t b e m a d e. I t i s n o t c l ea r
f r o m ( 6 ) w h i c h s o d i u m s u b s t i t u t e w a s
u s ed i n t h e v a r i o u s ex per i m en t s . T h e
a b o l i t i o n o f t h e r es po n s e m a y h a v e b een
c a u s ed b y d i r ec t a c t i o n o f t r i s o n t h e a c e-
t y l c h o l i n e- m ed i a t ed ex c i t a t i o n .
T h e r es u l t s r epo r t ed h er e a n d t h e c o n -
f i r m i n g r es u l t s o f P a r m en t i er a n d Z b i c z
( 3 ) w er e o b t a i n ed w i t h m o l l u s c a n s y s -
t em s ; f u r t h er s t u d i es s h o u l d b e c a r r i ed
o u t w i t h c h o l i n er g i c r es po n s es i n o t h er
s y s t em s . S i n c e a n u m b er o f l a b o r a t o r i es
h a v e u t i l i z ed t r i s - b u f f er ed s o l u t i o n s i n
b o t h b i o c h em i c a l ( 7 , 8 ) a n d ph y s i o l o g i c a l
( 9 ) s t u d i es o f c h o l i n er g i c s y s t em s , s pec i f -
i c ex per i m en t s t o ex pl o r e t h e ef f ec t o f
t r i s o n a c et y l c h o l i n e b i n d i n g a n d t h e a s -
s o c i a t ed c o n d u c t a n c e c h a n g es w o u l d b e
m o s t h el pf u l . U n t i l t h e f u l l ex t en t o f t h e
s y n a pt i c a c t i o n s o f t r i s i s k n o w n , i t s h o u l d
b e u s ed o n l y a f t er pr o per c o n t r o l ex per i -
m en t s h a v e b een per f o r m ed .
WI LKI E A . WI LS ON
MA RG A RET T . CLA RK
T ERRY C. P ELLMA R
Epi l eps y Cen t er ,
V et er a n s A d m i n i s t r a t i o n Ho s pi t a l ,
D u r h a m , No r t h Ca r o l i n a 2 7 7 0 5
2 2 A P RI L 1 9 7 7
Rf er en c es a n d No t es
1 . W. R. F r a z i er , E. R. Ka n d el , I . Ku pf er m a n , R.
Wa z i r i , R. E. Co g g es h a l l , J . Neu r o ph y s i o l . 3 0 ,
1 2 8 8 ( 1 9 6 7 ) .
2 . W. A . Wi l s o n a n d M. M. G o l d n er , J . Neu r o b i o l .
6 , 4 1 1 ( 1 9 7 5 ) .
3 . J . P a r m en t i er a n d K. Z b i c z , per s o n a l c o m m u n i -
c a t i o n .
4 . R. E. Co g g es h a l l , J . Neu r o ph y s i o l . 3 0 , 1 2 6 3
( 1 9 6 7 ) .
5 . H. M. G er s c h en f el d a n d D . P a u pa r d i n - T r i t s c h ,
J . P h y s i o l . ( Lo n d o n ) 2 4 3 , 4 2 7 ( 1 9 7 4 ) .
6 . J . E. B l a n k en s h i p, H. Wa c h t el , E. R. Ka n d el , J .
Neu r o ph y s i o l . 3 4 , 7 6 ( 1 9 7 1 ) .
7 . R. P . Kl et t , B . W. F u l pi u s , D . Co o per , M.
m o d el o f r en o v a s c u l a r h y per t en s i o n .
T h e n o n a pept i d e S Q 2 0 , 8 8 1 , < G l u -
T r p- P r o - A r g - P r o - G l n - I l e- P r o - P r o ( 1 ) ,
h a s b een s h o w n t o b e a s pec i f i c a n d po -
t en t i n h i b i t o r o f a n g i o t en s i n - c o n v er t i n g
en z y m e i n v i t r o ( 2 ) a n d i n v i v o ( 3 ) . P r e-
l i m i n a r y c l i n i c a l s t u d i es ( 4 ) h a v e d em o n -
s t r a t ed t h e g r ea t po t en t i a l o f S Q 2 0 , 8 8 1
a s a n o v el a n t i h y per t en s i v e d r u g , l i m i t ed
o n l y b y i t s l a c k o f o r a l a c t i v i t y . T h i s
t h er a peu t i c po t en t i a l l ed u s t o t es t o t h er
s t r u c t u r a l t y pes i n o u r s ea r c h f o r n ew ,
s pec i f i c , a n d o r a l l y a c t i v e i n h i b i t o r s .
S pec i f i c i n h i b i t o r s o f a n g i o t en s i n - c o n -
v er t i n g en z y m e w o u l d b e ex pec t ed t o
s h o w t h e pr o f i l e o f a c t i v i t i es ex em pl i f i ed
b y S Q 2 0 , 8 8 1 ( T a b l e 1 ) w i t h r es pec t t o
i n h i b i t i o n o f t h e i s o l a t ed en z y m e ( 5 ) , i n -
h i b i t i o n o f t h e c o n t r a c t i l e r es po n s e o f
s m o o t h m u s c l e t o a n g i o t en s i n I ( 2 ) , a u g -
m en t a t i o n o f t h e c o n t r a c t i l e r es po n s e t o
" CA RB OX YP EP T I D A S E A U
S m i t h , E. Rei c h , L. P o s s a n i , J . B i o l . Ch em . 2 4 8 ,
6 8 4 1 ( 1 9 7 3 ) .
8 . D . M. Mi c h a el s o n a n d M. A . Ra f t er y , P r o c .
Na t l . A c a d . S c i . U . S . A . 7 1 , 4 7 6 8 ( 1 9 7 4 ) ; J . C.
Meu n i er , R. S ea l o c k , R. Ol s en , J . P . Ch a m s eu x ,
Eu r . J . B i o c h em . 4 5 , 3 7 1 ( 1 9 7 4 ) .
9 . J . S . Keh o e, J . P h y s i o l . ( Lo n d o n ) 2 2 5 , 8 5 ( 1 9 7 2 ) ;
J . L. B a r k er a n d H. G a i n er , S c i en c e 1 8 2 , 7 2 0
( 1 9 7 3 ) .
1 0 . S u ppo r t ed b y t h e V et er a n s A d m i n i s t r a t i o n , D u r -
h a m , No r t h Ca r o l i n a , a n d b y a g r a n t f r o m No r t h
Ca r o l i n a U n i t ed Co m m u n i t y S er v i c es . We t h a n k
R. C. G r een e f o r h el pf u l d i s c u s s i o n a n d T . T u l l y
f o r ex per t t ec h n i c a l a s s i s t a n c e.
2 4 A u g u s t 1 9 7 6 ; r ev i s ed 2 6 Oc t o b er 1 9 7 6
b r a d y k i n i n ( 2 , 6 ) , a n d n o ef f ec t o n r e-
s po n s es t o o t h er a g o n i s t s . On l y a s m a l l
f r a c t i o n o f - t h e n o n pept i d i c c o m po u n d s
t h a t w e h a v e t es t ed w er e po t en t i n h i b -
i t o r s o f a n g i o t en s i n - c o n v er t i n g en z y m e,
a n d v er y f ew o f t h es e s h o w ed t h e d e-
s i r ed s pec i f i c i t y . Ho w ev er , a c c u m u l a t ed
k n o w l ed g e o f t h e c h em i c a l a n d en z y m a t -
i c pr o per t i es o f a n g i o t en s i n - c o n v er t i n g
en z y m e s u g g es t ed t h e po s s i b i l i t y o f a
n ew a ppr o a c h , t h e r a t i o n a l d es i g n o f s pe-
c i f i c i n h i b i t o r s o f a n g i o t en s i n - c o n v er t i n g
en z y m e.
P r ev i o u s s t u d i es w i t h s u b s t r a t es a n d
i n h i b i t o r s o f a n g i o t en s i n - c o n v er t i n g en -
z y m e ( 7 ) s u g g es t ed t h a t t h i s pept i d a s e
w a s a c a r b o x y pept i d a s e s i m i l a r t o pa n -
c r ea t i c c a r b o x y pept i d a s e A , ev en t h o u g h
i t r el ea s es d i pept i d es r a t h er t h a n s i n g l e
a m i n o a c i d s f r o m t h e c a r b o x y l i c a c i d en d
' A NG I OT ENS I N- CONV ERT I NG ENZ YME"
R
|
CH?
7 - 0 2
RI
0
R
0
- NH- CH- C- NH- CH- C=O - NH- CH- C- NH- CH- C - NH- CH - C=O
0
R3 0
O=C- CH2 - CH- C- N- C H- c =O
CH2 0 . CH3 O
V I I F
0 =C- CH2 - CH- C=0 S - CHi - CH
- C - N- CH- C=O
F i g . 1 . S c h em a t i c r epr es en t a t i o n o f t h e b i n d i n g o f s u b s t r a t es a n d i n h i b i t o r s a t t h e a c t i v e s i t e o f
pa n c r ea t i c c a r b o x y pept i d a s e A , a n d a t t h e h y po t h et i c a l a c t i v e s i t e o f a n g i o t en s i n - c o n v er t i n g
en z y m e.
4 4 1
D es i g n o f S pec i f i c I n h i b i t o r s o f A n g i o t en s i n - Co n v er t i n g
En z y m e: New Cl a s s o f Or a l l y A c t i v e A n t i h y per t en s i v e A g en t s
A b s t r a c t . A h y po t h et i c a l m o d el o f t h e a c t i v e s i t e o f a n g i o t en s i n - c o n v er t i n g en -
z y m e, b a s ed o n k n o w n c h em i c a l a n d k i n et i c pr o per t i es o f t h e en z y m e, h a s en a b l ed u s
t o d es i g n a n ew c l a s s o f po t en t . a n d s pec i f i c i n h i b i t o r s . T h es e c o m po u n d s , c a r b o x y a l -
k a n o y l a n d m er c a pt o a l k a n o y l d er i v a t i v es o f pr o l i n e, i n h i b i t t h e c o n t r a c t i l e r es po n s e
o f g u i n ea pi g i l ea l s t r i p t o a n g i o t en s i n I a n d a u g m en t i t s r es po n s e t o b r a d y k i n i n .
Wh en a d m i n i s t er ed o r a l l y t o r a t s , t h es e a g en t s i n h i b i t t h e pr es s o r ef f ec t o f a n g i o t en -
s i n I , a u g m en t t h e v a s o d epr es s o r ef f ec t o f b r a d y k i n i n , a n d l o w er b l o o d pr es s u r e i n a

o
n

A
p
r
i
l

6
,

2
0
1
0

w
w
w
.
s
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i
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c
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g
.
o
r
g
D
o
w
n
l
o
a
d
e
d

f
r
o
m

o f pept i d e s u b s t r a t es . T h es e
t i o n s h a d a l s o i n d i c a t ed t h a t a :
c o n v er t i n g en z y m e, l i k e c a r
d a s e A , w a s a z i n c - c o n t a i n
4 0
C9
0
0 .
0
0 ~
0
0
+
- 0 1 5 2 0 3 0
2 1 0
F i g . 2 . Mea n per c en t i n h i b i t i o n (
s i n g l e o r a l d o s es o f S Q 1 4 , 2 2 5 i n
w er e c h a l l en g ed a t t h e i n d i c a t ed t i
i n v es t i g a - l o pr o t ei n , a c o n c l u s i o n t h a t h a s b een f o r e, t h e a c t i v e s i t e o f a n g i o t en s i n - c o n -
n g i o t en s i n - v er i f i ed r ec en t l y b y o t h er i n v es t i g a t o r s v er t i n g en z y m e w o u l d b e s i m i l a r t o t h a t
- b o x y pept i - ( 8 ) . I t t h u s s eem ed r ea s o n a b l e t o a s s u m e o f c a r b o x y pept i d a s e A .
i n g m et a l - t h a t t h e m ec h a n i s m o f a c t i o n a n d , t h er e- T h e i m po r t a n t s u b s t r a t e- b i n d i n g
g r o u ps a t t h e a c t i v e s i t e o f c a r b o x y pept i -
d a s e A ( 9 ) , a n d a t t h e a c t i v e s i t e o f o u r
h y po t h et i c a l m o d el o f a n g i o t en s i n - c o n -
v er t i n g en z y m e a r e s h o w n i n F i g . 1 . P o s -
i t i v el y c h a r g ed g r o u ps a t b o t h a c t i v e
s i t es ( A r g i 4 s , i n t h e c a s e o f c a r b o x y pept i -
d a s e A ) f o r m i o n i c b o n d s w i t h t h e n eg a -
t i v el y c h a r g ed t er m i n a l c a r b o x y l g r o u ps
o f t h e s u b s t r a t es . A n a d j a c en t " h y d r o -
ph o b i c po c k et " i s r es po n s i b l e f o r t h e
s pec i f i c i t y o f c a r b o x y pept i d a s e A t o w a r d
s u b s t r a t es c o n t a i n i n g COOH- t er m i n a l
a r o m a t i c a m i n o a c i d s . A n g i o t en s i n - c o n -
v er t i n g en z y m e, h a v i n g n o s u c h s pec i f i c -
i t y , w o u l d n o t b e ex pec t ed t o h a v e a s i m -
k g
i l a r h y d r o ph o b i c po c k et . Ho w ev er , t h e
a c t i v e s i t e o f t h i s en z y m e m i g h t h a v e a
g r o u p c a pa b l e o f i n t er a c t i n g w i t h - t h e
COOH- t er m i n a l a m i d e b o n d o f t h e s u b -
s t r a t e, pr o b a b l y t h r o u g h h y d r o g en b o n d -
5 0 7 0 9 0 1 1 0 1 3 0 1 5 0 1 7 0
i n g ( F i g . 1 ) . T h e z i n c i o n s m u s t b e s u i t -
T I ME( MI NU T ES ) a b l y l o c a t ed a t t h e a c t i v e s i t e o f b o t h en -
s t a n d a r d
er r o r ) o f pr es s o r r es po n s es t o a n g i o t en s i n I a f t er
z y m es t o po l a r i z e t h e c a r b o n y l g r o u ps o f
i f a s t ed , u n a n es t h et i z ed r a t s ( f o u r a n i m a l s per d o s e) . T h e r a t s t h e s c i s s i l e a m i d e b o n d s m a k i n g t h em
i m es w i t h i n t r a v en o u s i n j ec t i o n s o f a n g i o t en s i n I a t 3 1 0 n g / k g . m o r e s u s c ept i b l e t o h y d r o l y t i c c l ea v a g e.
T a b l e 1 . A c t i v i t i es i n v i t r o o f i n h i b i t o r s o f a n g i o t en s i n - c o n v er t i n g en z y m e. P r o c ed u r es f o r t es t i n g c o m po u n d s f o r i n h i b i t i o n o f t h e r a b b i t l u n g
en z y m e a n d f o r ef f ec t s o n t h e s m o o t h - m u s c l e c o n t r a c t i n g a c t i v i t y o f v a r i o u s a g o n i s t s h a v e b een d es c r i b ed i n ( 3 , 5 ) . A b b r ev i a t i o n s : I C5 0 , c o n c en -
t r a t i o n o f c o m po u n d pr o d u c i n g 5 0 per c en t i n h i b i t i o n o f en z y m e a c t i v i t y o r a g o n i s t ef f ec t ; A C5 0 , c o n c en t r a t i o n o f c o m po u n d pr o d u c i n g 5 0 per c en t
a u g m en t a t i o n o f a g o n i s t ef f ec t ; A l , a n g i o t en s i n l ; A l l , a n g i o t en s i n I I ; B K, b r a d y k i n i n ; A c h , a c et y l c h o l i n e.
A c t i v i t y ( , u g / m l )
D es i g - A n g i o t en s i n - Ex c i s ed g u i n ea pi g i l eu m
S t r u c t u r e
n a i n c o n v er t i n g
_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _
n a t i o n
en z y m e o f
r a b b i t l u n g
A I A I I
A c h B K
( I C5 0 ) ~( I C5 0 ) ( I C5 0 ) I C5 0 ( A C5 0 )
1 < G I u - T r p- P r o - A r g - P r o - G i n - I l e- P r o - P r o ( S Q2 0 , 8 8 1 ) 1 . 0 0 . 0 6 8 > 3 2 > 3 2 0 . 0 0 1 7
2 H0 2 C- c H2 - CH2 - CO- N C0 2 H 1 3 5 9 4 >1 0 0 >4 0 0 8 . 0
CH3
(
3 H0 2 C- CH2 - CH CO 4 0 0 2 H ( S Q1 3 , 2 9 7 ) 1 2 1 3 >1 0 0 >1 0 0 0 . 2
4 H0 2 C- CH2 - CH- CO- N
4
CO2 H 3 4 0 >1 0 0 >1 0 0 >1 0 0 1 5
CH3
5 H0 2 C- CH2 - CH2 - CH C- N C0 2 H 1 . 0 4 . 6 >1 0 0 >1 0 0 1 . 0
CH3
6
HO2 C- CH2 - CH2 - CH- CO- N
. 4 0 0 2 H 2 3 0 >1 0 0 >1 0 0 >0 4 . 7
7 HS - CH2 - CH2 - CO- N NC2 H ( S 0 1 3 , 8 6 3 ) 0 . 0 4 0 . 0 6 >1 0 0 >1 0 0 0 . 0 0 5
CH3 (
8 HS - CH2 - CH- CO- N CO2 H ( S Q1 4 , 2 2 5 ) 0 . 0 0 5 0 . 0 0 5 >1 0 0 >1 0 0 0 . 0 0 0 7
CH3 C>
9 HS - CH2 - CH- CO- N - 4 C0 2 H 0 . 5 0 1 . 7 >1 0 0 >1 0 0 3 . 1
4 4 2 S CI ENCE, V OL. 1 9 6

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I n 1 9 7 3 , B y er s a n d Wo l f en d en ( J O) r e-
po r t ed t h a t D - b en z y l s u c c i n i c a c i d w a s a
po t en t c o m pet i t i v e i n h i b i t o r o f c a r b o x y -
pept i d a s e A ( t h e i n h i b i t i o n c o n s t a n t Ki
4 . 5 x 1 0 - 7 M) . On e o f t h e m o s t pl a u s i b l e
ex pl a n a t i o n s ( 1 0 , 1 1 ) f o r t h i s i n h i b i t o r y
po t en c y w o u l d b e t h e s i m u l t a n eo u s a n d
s t er eo s pec i f i c i n t er a c t i o n o f t h e i n h i b i t o r
m o l ec u l e w i t h t h r ee s u b s t r a t e- b i n d i n g
g r o u ps a t t h e a c t i v e s i t e o f c a r b o x y pept i -
d a s e A ; n a m el y , t h e po s i t i v e c h a r g e o f
A r g ' 4 5 , t h e h y d r o ph o b i c po c k et , a n d t h e
z i n c a t o m ( F i g . 1 ) . T h i s o b s er v a t i o n ,
a l o n g w i t h t h e a b o v e- m en t i o n ed s pec u l a -
t i o n s a b o u t t h e n a t u r e o f t h e a c t i v e s i t e
o f a n g i o t en s i n - c o n v er t i n g en z y m e, l ed u s
t o pu r s u e t h e d es i g n o f s pec i f i c i n h i b i t o r s
o f t h i s pept i d a s e a l o n g s i m i l a r l i n es .
S i n c e a n g i o t en s i n - c o n v er t i n g en z y m e
i s a " d i pept i d y l " c a r b o x y pept i d a s e ( pep-
t i d y l d i pept i d e h y d r o l a s e, E. C. 3 . 4 . 1 5 . 1 ) ,
t h e d i s t a n c e b et w een t h e c a t i o n i c c a r -
b o x y l - b i n d i n g s i t e a n d t h e z i n c a t o m
s h o u l d b e g r ea t er t h a n i n c a r b o x y pept i -
d a s e A , b y a ppr o x i m a t el y t h e l en g t h o f
o n e- a m i n o a c i d r es i d u e ( F i g . 1 ) . T h er e-
f o r e, w e po s t u l a t ed t h a t a s u c c i n y l d e-
r i v a t i v e o f a n a m i n o a c i d , r a t h er t h a n a
s u c c i n i c a c i d , s h o u l d b e t h e pr o t o t y pe
f o r i n h i b i t o r s o f a n g i o t en s i n - c o n v er t i n g
en z y m e. T o t es t t h i s h y po t h es i s , w e s y n -
t h es i z ed s u c c i n y l - L- pr o l i n e ( F i g . 1 , R3
=
H) . P r o l i n e w a s o r i g i n a l l y c h o s en
a s t h e a m i n o a c i d m o i et y b ec a u s e a l l o f
t h e n a t u r a l l y o c c u r r i n g pept i d i c i n h i b -
i t o r s o f a n g i o t en s i n - c o n v er t i n g en z y m e
h a v e t h i s a m i n o a c i d a s t h e COOH- t er -
m i n a l r es i d u e; i t w a s s o o n d em o n s t r a t ed
t h a t pr o l i n e- c o n t a i n i n g i n h i b i t o r s w er e
m o r e po t en t t h a n t h o s e i n c o r po r a t i n g
o t h er n a t u r a l l y o c c u r r i n g a m i n o a c i d s .
T h e a c t i v i t y pr o f i l e o f s u c c i n y l - L- pr o l i n e
( s t r u c t u r e 2 , T a b l e 1 ) c l ea r l y i n d i c a t ed
t h a t t h i s c o m po u n d , a l t h o u g h o n l y s l i g h t -
l y a c t i v e, w a s a s pec i f i c i n h i b i t o r o f a n -
g i o t en s i n - c o n v er t i n g en z y m e.
A f t er ex pl o r i n g t h e i n f l u en c e o f d i f -
f er en t s t r u c t u r a l m o d i f i c a t i o n s , i n c l u d i n g
l en g t h a n d s u b s t i t u t i o n o f t h e a c y l
m o i et y , w e w er e a b l e t o i n c r ea s e c o n s i d -
er a b l y t h e i n h i b i t o r y a c t i v i t y o f t h e pr o -
t o t y pe c o m po u n d b y s y n t h es i s o f 2 - D -
m et h y l s u c c i n y l - L- pr o l i n e ( S Q 1 3 , 2 9 7 ,
s t r u c t u r e 3 ) , a n d 2 - D - m et h y l g l u t a r y l - L-
pr o l i n e ( s t r u c t u r e 5 ) . T h es e c o m po u n d s
w er e pu r el y c o m pet i t i v e i n h i b i t o r s o f pu -
r i f i ed a n g i o t en s i n - c o n v er t i n g en z y m e o f
r a b b i t l u n g ; a n d , w h en a d m i n i s t er ed
o r a l l y o r pa r en t er a l l y t o r a t s , t h ey i n h i b -
i t ed t h e pr es s o r ef f ec t o f a n g i o t en s i n I .
T h e c o r r es po n d i n g 2 - L- m et h y l a n a l o g s o f
t h es e i n h i b i t o r s w er e a t l ea s t 1 0 0 t i m es
l es s a c t i v e ( T a b l e 1 ) .
I f t h e i n t er a c t i o n o f a c a r b o x y l g r o u p
o f c o m po u n d s s u c h a s 3 w i t h t h e z i n c
2 2 A P RI L 1 9 7 7
F i g . 3 . ( a ) Ef f ec t s o f s i n g l e o r a l a .
d o s es o f S Q 1 4 , 2 2 5 o n m ea n
c O
b l o o d pr es s u r e ( MB P + S . E. ;
t en a n i m a l s per d o s e) o f u n - 0
a n es t h et i z ed G o l d b l a t t t w o -
k i d n ey r en a l h y per t en s i v e
r a t s . ( b ) Ef f ec t s o f s i n g l e o r a l
d o s es o f S Q 1 4 , 2 2 5 o n m ea n b
b l o o d pr es s u r e ( MB P S . E. ;
t en a n i m a l s per d o s e) o f u n - I ' 1 8 0 -
a n es t h et i z ed n o r m o t en s i v e E
r a t s .
E
1 4 0 -
E
1 0 0 -
l o -
0
a t o m o f t h e en z y m e ( F i g . 1 ) pl a y s a n i m -
po r t a n t r o l e i n d et er m i n i n g t h e i n h i b i t o r y
po t en c y , t h en r epl a c em en t o f t h e c a r -
b o x y l f u n c t i o n b y o t h er g r o u ps c a pa b l e
o f s er v i n g a s z i n c - i o n l i g a n d s s h o u l d
y i el d i n h i b i t o r s o f eq u a l o r g r ea t er po -
t en c y . Repl a c em en t o f t h e c a r b o x y l g r o u p
b y n i t r o g en - c o n t a i n i n g f u n c t i o n a l i t i es
( a m i n es , a m i d es , o r g u a n i d i n es ) d i d n o t
en h a n c e i n h i b i t o r y a c t i v i t y , b u t r epl a c e-
m en t b y a m er c a pt o g r o u p ( F i g . 1 ) l ed t o
a d r a m a t i c i m pr o v em en t o f i n h i b i t o r y
po t en c y , w i t h o u t a n y c o n c o m i t a n t l o s s
o f s pec i f i c i t y . T h e po t en c y a n d s pec i f i c i -
t y o f 3 - m er c a pt o pr o pa n o y l - L- pr o l i n e ( S Q
1 3 , 8 6 3 , s t r u c t u r e 7 , T a b l e 1 ) a n d 2 - D -
m et h y l - 3 - m er c a pt o pr o pa n o y l - Lpr o l i n e
( S Q 1 4 , 2 2 5 , s t r u c t u r e 8 ) a r e, o n a m o l a r
b a s i s , eq u a l t o o r b et t er t h a n t h a t o f t h e
n o n a pept i d e S Q 2 0 , 8 8 1 . T h e L- m et h y l
en a n t i o m er o f S Q 1 4 , 2 2 5 i s a t l ea s t 1 0 0
t i m es l es s a c t i v e.
T h e a v a i l a b i l i t y o f c o m po u n d s po s -
s es s i n g s u c h r em a r k a b l y po t en t a n d s pe-
c i f i c i n h i b i t o r y a c t i v i t y pr o m pt ed t h e ex -
pl o r a t i o n o f t h ei r ef f ec t s o n t h e r en i n - a n -
g i o t en s i n s y s t em i n t w o a n i m a l m o d el s .
I n t h e f i r s t m o d el , a o r t i c b l o o d pr es s u r es
o f u n a n es t h et i z ed n o r m o t en s i v e m a l e
S pr a g u e- D a w l ey r a t s ( w ei g h i n g a b o u t
2 0 0 g ) w er e r ec o r d ed d i r ec t l y b ef o r e a n d
a f t er c h a l l en g e w i t h a n g i o t en s i n s I a n d
I I , b r a d y k i n i n , a n d a c et y l c h o l i n e a s d e-
s c r i b ed ( 3 , 1 2 ) . S i n g l e o r a l d o s es o f S Q
1 3 , 2 9 7 ( 3 0 0 t o 1 0 0 0 m g / k g ) , S Q 1 3 , 8 6 3 ( 1
t o 3 0 m g / k g ) , o r S Q 1 4 , 2 2 5 ( 0 . 1 t o I m g /
k g ) , g i v en b y g a v a g e t o r a t s t h a t w er e
f a s t ed o v er n i g h t , pr o d u c ed a d o s e- r e-
l a t ed i n h i b i t i o n o f t h e pr es s o r r es po n s e
t o a n g i o t en s i n I ( 3 1 0 n g l k g , g i v en i n t r a -
v en o u s l y ) , b u t n o t t o t h a t o f a n g i o t en s i n
I I ( 1 0 0 n g / k g , g i v en i n t r a v en o u s l y ) . T h e
d eg r ee a n d t i m e- c o u r s e o f t h e i n h i b i t o r y
ef f ec t s pr o d u c ed b y S Q 1 4 , 2 2 5 o n t h e
a n g i o t en s i n I r es po n s e i s pl o t t ed i n F i g .
1 0 m g / k g
I
4 8 1 2 1 6 0 4 8 1 2 1 6
T I ME( h o u r s )
3 m g / k g 1 0 m g / k g
~~~~~~i
I r -
4 8 1 2 1 6 0
T I ME( h o u r s )
4 8 1 2 1 6
2 . A t 1 / 3 t o 1 / 1 0 0 o f t h e a b o v e- c i t ed o r a l
d o s es , t h e t h r ee c o m po u n d s a l s o a u g -
m en t ed t h e v a s o d epr es s o r r es po n s e t o
b r a d y k i n i n ( 3 t o 1 0 u g / k g , g i v en i n t r a -
v en o u s l y ) , b u t n o t t h a t o f a c et y l c h o l i n e
( 0 . 3 t o I , u g / k g , g i v en i n t r a v en o u s l y ) .
No n e o f t h e c o m po u n d s a t a n y o f t h e
d o s es t es t ed h a d a n y a ppr ec i a b l e ef f ec t
o n t h e m ea n " r es t i n g ' " b l o o d pr es s u r e.
T h e s ec o n d a n i m a l m o d el w a s t h e u n -
a n es t h et i z ed G o l d b l a t t t w o - k i d n ey r en a l
h y per t en s i v e r a t , w h i c h i s r en i n - a n g i o -
t en s i n - d epen d en t f o r a t l ea s t s ev er a l
w eek s ( 1 3 ) . Ma l e CF N Wi s t a r r a t s
( w ei g h i n g a b o u t 1 5 0 g ) w er e m a d e h y per -
t en s i v e b y pl a c i n g a 0 . 2 2 - m m s i l v er c l i p
o n t h e l ef t r en a l a r t er y , w i t h t h e o t h er
k i d n ey b ei n g l ef t i n t a c t ( 3 ) . F i v e t o s i x
w eek s l a t er , b l o o d pr es s u r es w er e r e-
c o r d ed f r o m t h e a b d o m i n a l a o r t a o f ea c h
o f t h es e u n a n es t h et i z ed r a t s . T h e r a t s
w er e m a i n t a i n ed o n c o m m er c i a l ( P u r i n a )
r a t c h o w a n d t a p w a t er . I n t h es e r a t s
m o d er a t e t o m a r k ed a n t i h y per t en s i v e ef -
f ec t s a r e pr o d u c ed b y o r a l d o s i n g w i t h
S Q 1 4 , 2 2 5 ( 3 a n d 1 0 m g / k g ) a d m i n i s t er ed
b y g a v a g e ( F i g . 3 ) ; t h i s d r u g pr o d u c ed
pr a c t i c a l l y n o h y po t en s i v e ef f ec t i n n o r -
m o t en s i v e Wi s t a r r a t s ( F i g . 3 ) .
We h a v e t h u s s h o w n t h a t t h e r a t i o n a l
d es i g n o f i n h i b i t o r s o f a n g i o t en s i n - c o n -
v er t i n g en z y m e h a s l ed t o t h e d ev el -
o pm en t o f po t en t o r a l a n t i h y per t en s i v e
a g en t s t h a t a c t b y b l o c k a d e o f t h e r en i n -
a n g i o t en s i n s y s t em . T h e t h er a peu t i c ef f i -
c a c y a n d t h e d i a g n o s t i c u t i l i t y o f t h es e
c o m po u n d s i n h u m a n h y per t en s i o n r e-
m a i n t o b e d em o n s t r a t ed , b u t t h e r es u l t s
i n a n i m a l s s u g g es t t h a t t h es e c o m po u n d s
h a v e g r ea t po t en t i a l a s a n ew c l a s s o f a n -
t i h y per t en s i v e d r u g s .
MI G U EL A . OND ET T I
B ERNA RD RU B I N, D A V I D W. CU S HMA N
S q u i b b I n s t i t u t e f o r Med i c a l Res ea r c h ,
P r i n c et o n , New J er s ey 0 8 5 4 0
4 4 3
a 3 m g / k g
&
1 4 0
I 4 0 -
1 -

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Ref er en c es a n d No t es
1 . M. A . On d et t i , N. J . Wi l l i a m s , E. F . S a b o , J .
P l u s c ec , E. R. Wea v er , 0 . Ko c y , B i o c h em i s t r y
1 0 , 4 0 3 3 ( 1 9 7 1 ) ; a b b r ev i a t i o n s u s ed a r e a s f o l -
l o w s : < G l u , py r o g l u t a m i c a c i d ; T r p, t r y pt o -
ph a n ; P r o , pr o l i n e; A r g , a r g i n i n e, G l n , g l u t a -
m i n e; I l e, i s o l eu c i n e.
2 . B . Ru b i n , E. H. O' Keef e, D . G . Ko t l er , D . A .
D eMa i o , D . W. Cu s h m a n , F ed . P r o c . F ed . A m .
S o c . Ex p. B i o l . 3 4 , 7 7 0 ( 1 9 7 5 ) ; E. H. O' Keef e,
D . G . Ko t l er , M. H. Wa u g h , B . Ru b i n , i b i d . 3 1 ,
5 1 1 ( 1 9 7 2 ) ; H. S . Ch eu n g a n d D . W. Cu s h m a n ,
B i o c h i m . B i o ph y s . A c t a 2 9 3 , 4 5 1 ( 1 9 7 3 ) .
3 . S . L. En g el , T . R. S c h a ef f er , B . I . G o l d , B . Ru -
b i n , P r o c . S o c . Ex p. B i o l . Med . 1 4 0 , 2 4 0 ( 1 9 7 2 ) ;
S . L. En g el , T . R. S c h a ef f er , M. H. Wa u g h , B .
Ru b i n , i b i d . 1 4 3 , 4 8 3 ( 1 9 7 3 ) .
4 . H. G a v r a s , H. R. B r u n n er , J . H. La r a g h , J . E.
S ea l ey , I . G a v r a s , R. A . V u k o v i c h , N. En g l . J .
Med . 2 9 1 , 8 1 7 N1 9 7 4 ) ; H. G a v r a s , H. R. B r u n -
n er , J . H. La r a g h , I . G a v r a s , R. A . V u k o v i c h ,
Cl i n . S c i . Mo l . Med . 4 8 , 5 7 S ( 1 9 7 5 ) ; J . G . J o h n -
s o n , W. D . B l a c k , R. A . V u k o v i c h , F . E. Ha t c h ,
J r . , B . I . F r i ed m a n , C. F . B l a c k w el l , A . N. S h e-
n o u d a , L. S h a r e, R. E. S h a d e, S . R. A c c h i a r d o ,
E. E. Mu i r h ea d , i b i d . , p. 5 3 S .
5 . D . W. Cu s h m a n a n d H. S . Ch eu n g , B i o c h em .
P h a r m a c o l . 2 0 , 1 6 3 7 ( 1 9 7 1 ) .
6 . S i n c e a n g i o t en s i n - c o n v er t i n g en z y m e i s a l s o a n
a c t i v e b r a d y k i n i n - i n a c t i v a t i n g en z y m e [ s ee E.
G . Er d o s , Ci r c . Res . 3 6 , 2 4 7 ( 1 9 7 5 ) ] , ev en t h e
m o s t s pec i f i c i n h i b i t o r s o f t h i s en z y m e h a v e t w o
pr i m a r y b i o l o g i c a l a c t i v i t i es : i n h i b i t i o n o f t h e ef -
f ec t s o f a n g i o t en s i n 1 , a n d a u g m en t a t i o n o r pr o -
l o n g a t i o n o f t h e ef f ec t s o f b r a d y k i n i n .
No r a d r en er g i c n eu r o n s w i t h c el l b o d -
i es i n t h e po n s g i v e r i s e t o a w i d es pr ea d
i n n er v a t i o n o f t h e c er eb r a l c o r t ex ( 1 ) .
D o pa m i n er g i c n eu r o n s w i t h c el l b o d i es
i n t h e m i d b r a i n c o n t r i b u t e a n a d d i t i o n a l
i n n er v a t i o n t o r es t r i c t ed a r ea s o f t h e n eo -
c o r t ex ( 2 ) . D es pi t e t h e ex t en s i v e pr o -
j ec t i o n o f t h es e c a t ec h o l a m i n er g i c a x -
o n s , i t i s es t i m a t ed t h a t t h ey f o r m l es s
t h a n 1 per c en t o f t h e t o t a l s y n a pt i c c o n -
t a c t s i n t h e a d u l t c er eb r a l c o r t ex ( 3 ) .
I n t h e n eo c o r t ex o f per i n a t a l r a t s , t h e
d en s i t y o f a m i n er g i c t er m i n a l s , a s r e-
v ea l ed b y h i s t o f l u o r es c en c e m et h o d s ,
a ppea r s t o b e ex t r em el y l o w ( 4 ) , a n d t h e
l ev el s o f c a t ec h o l a m i n e s y n t h es i z i n g en -
z y m es a n d en d o g en o u s a m i n es i n n eo -
c o r t ex r em a i n r el a t i v el y l o w t h r o u g h o u t
t h e n ew b o r n per i o d ( 5 , 6 ) . Yet t h e m a j o r
c a t ec h o l a m i n er g i c n eu r o n s a r e f o r m ed
a n d u n d er g o d i f f er en t i a t i o n a t ea r l y
s t a g es o f f et a l d ev el o pm en t ( 7 ) , a n d t h ei r
a x o n s r ea c h t h e n eo c o r t ex b y 1 w eek b e-
f o r e b i r t h ( 8 ) . Ei t h er t h er e i s a l o n g d el a y
b et w een t h e a r r i v a l o f a m i n er g i c a x o n s
i n t h e c o r t ex a n d t h e s u b s eq u en t f o r m a -
t i o n o f s y n a ps es , o r i m m a t u r e c a t e-
c h o l a m i n er g i c a x o n s i n n er v a t e t h e c o r -
4 4 4
7 . D . W. Cu s h m a n , J . P l u s c ec , N. J . Wi l l i a m s , E.
R. Wea v er , E. F . S a b o , O. . Ko c y , H. S . Ch eu n g ,
M. A . On d et t i , Ex per i en t i a 2 9 , 1 0 3 2 ( 1 9 7 3 ) ; D .
W. Cu s h m a n a n d H. S . Ch eu n g , i n Hy per -
t en s i o n ' 7 2 , J . G en es t a n d E. Ko i w , Ed s .
( S pr i n g er , B er l i n , 1 9 7 2 ) , p. 5 3 2 ; Y. E. El i s s eev a ,
V . N. Or ek h o v i c h , L. V . P a v l i k h i n a , L. P .
A l ex een k o , Cl i n . Ch i m . A c t a . 3 1 , 4 1 3 ( 1 9 7 1 ) .
8 . M. D a s a n d R. L. S o f f er , J . B i o l . Ch em . 2 5 0 ,
6 7 6 2 ( 1 9 7 5 ) .
9 . F . Qu i o c h o a n d W. N. Li ps c o m b , A d v . P r o t ei n
Ch em . 2 5 , 1 ( 1 9 7 1 ) .
1 0 . L. D . B y er s a n d R. Wo l f en d en , B i o c h em i s t r y
1 2 , 2 0 7 0 ( 1 9 7 3 ) .
1 1 . J . W. B u n t i n g a n d C. D . My er s , Ca n . J . Ch em .
5 2 , 2 0 5 3 ( 1 9 7 4 ) .
1 2 . R. J . La f f a n , A . P et er s o n , S . W. Hi t c h , J . J eu n e-
l o t , Ca r d i o v a s c . Res . 6 , 3 1 9 ( 1 9 7 2 ) ; A . B i a n c h i ,
D . B . Ev a n s , M. Co b b , M. T . P es c h k a , T . R.
S c h a ef f er , R. J . La f f a n , Eu r . J . P h a r m a c o l . 2 3 ,
9 0 ( 1 9 7 3 ) .
1 3 . H. G a v r a s , H. R. B r u n n er , H. T h u r s t o n , J . H.
La r a g h , S c i en c e 1 8 8 , 1 3 1 6 ( 1 9 7 5 ) ; J . R. D o u g l a s ,
J r . , E. M. J o h n s o n , J r . , J . F . Hei s t , G . R. Ma r -
s h a l l , P . Need l em a n , J . P h a r m a c o l . Ex p. T h er .
1 9 6 , 3 5 ( 1 9 7 6 ) .
1 4 . We t h a n k E. F . S a b o , H. S . Ch eu n g , J . B a u -
m a n n , D . D eMa i o , J . P . Hi g h , D . G . Ko t l er , E.
H. O' Keef e, T . R. S c h a ef f er , a n d M. H. Wa u g h
f o r t ec h n i c a l a s s i s t a n c e; D r s . M. E. G o l d b er g ,
R. J . La f f a n , a n d F . L. Wei s en b o r n f o r s u g g es -
t i o n s a n d a d v i c e; a n d D r . Z . P . Ho r o v i t z f o r
en c o u r a g em en t a n d s u ppo r t t h r o u g h o u t t h e
c o u r s e o f o u r s t u d i es .
6 D ec em b er 1 9 7 6 ; r ev i s ed 1 F eb r u a r y 1 9 7 7
t ex a t b i r t h b u t a r e d ef i c i en t a t t h a t a g e i n
t h ei r a b i l i t y t o s y n t h es i z e o r t r a n s po r t
en d o g en o u s c a t ec h o l a m i n es . T o a d d r es s
t h i s pr o b l em , w e h a v e a t t em pt ed t o c h a r -
a c t er i z e t h e m o n o a m i n er g i c i n n er v a t i o n
o f i m m a t u r e c o r t ex b y a n a ppr o a c h n o t
d epen d en t u po n t h e pr es en c e o f en d o g e-
n o u s n eu r o t r a n s m i t t er s . T h e i n v i v o u p-
t a k e o f ex o g en o u s c a t ec h o l a m i n e pr e-
c u r s o r s a n d c o n g en er s b y t h e c o r t ex w a s
s t u d i ed b y el ec t r o n m i c r o s c o pi c a n d b i o -
c h em i c a l t ec h n i q u es .
Mo n o a m i n er g i c t er m i n a l s c a n b e i d en -
t i f i ed a t t h e u l t r a s t r u c t u r a l l ev el b y t h e
pr es en c e o f s m a l l ( 4 0 - t o 5 0 - n m ) g r a n u l a r
v es i c l es ( S G V ' s ) , w h i c h a r e t h e s t o r a g e
s i t es f o r t h e a m i n es ( 9 ) . T h e d em o n s t r a -
t i o n o f S G V ' s i n t h e c en t r a l n er v o u s s y s -
t em i s en h a n c ed b y ex po s u r e o f t i s s u e t o
t h e c a t ec h o l a m i n e c o n g en er 5 - h y d r o x y -
d o pa m i n e ( 5 - OHD A ) ( 1 0 ) . T h i s " f a l s e"
n eu r o t r a n s m i t t er i s s el ec t i v el y t a k en u p
a n d c o n c en t r a t ed i n t h e s y n a pt i c v es i c l es
o f m o n o a m i n er g i c n er v e t er m i n a l s ,
w h er e, a f t er a l d eh y d e f i x a t i o n , i t f o r m s
a n el ec t r o n - o pa q u e pr ec i pi t a t e. T h i s i n -
d i r ec t m et h o d per m i t s t h e u l t r a s t r u c t u r a l
a n a l y s i s o f t h o s e s y n a pt i c t er m i n a l s t h a t
h a v e a n u pt a k e- s t o r a g e m ec h a n i s m s pe-
c i f i c f o r m o n o a m i n es ( 1 0 , 1 1 ) . S i n c e t h e
i m m a t u r e b l o o d - b r a i n b a r r i er i s per -
m ea b l e ( 1 2 ) , s y s t em i c a d m i n i s t r a t i o n o f
5 - OHD A w a s u s ed t o s t u d y t h e d i s t r i b u -
t i o n o f m o n o a m i n er g i c t er m i n a l s i n t h e
n eo c o r t ex o f i n f a n t r a t s ( 1 3 ) .
T h e m o r ph o l o g y a n d d i s t r i b u t i o n o f
s y n a ps es i n t h e l a t er a l n eo c o r t ex o f i n -
f a n t r a t s ( f r o m b i r t h t o 7 d a y s o l d ) w er e
a n a l y z ed w i t h t h e el ec t r o n m i c r o s c o pe
[ f o r d et a i l s s ee ( 1 3 - 1 5 ) ] . I n t er n eu r o n a l
a ppo s i t i o n s w i t h c h a r a c t er i s t i c v es i c l es
( 3 0 t o 5 0 n m i n d i a m et er ) a d j a c en t t o a n
a r ea o f m em b r a n e s pec i a l i z a t i o n w er e
d es i g n a t ed a s s y n a ps es . T h e d en s i t y o f
s y n a ps es i n n ew b o r n c o r t ex i s ex t r em el y
l o w c o m pa r ed w i t h t h a t i n t h e a d u l t . I n
r a t s f r o m b i r t h t o 7 d a y s o l d , t r ea t ed w i t h
5 - OHD A , 3 0 per c en t o f a l l s y n a pt i c t er -
m i n a l s i n t h e l a t er a l n eo c o r t ex c o n t a i n
S G V ' s ; t h es e v es i c l es a r e r o u n d , 4 0 t o 5 0
n m i n d i a m et er , a n d c o n t a i n a d en s e, ec -
c en t r i c , el ec t r o n - o pa q u e g r a n u l e ( F i g . 1 ) .
I n c o n t r o l a n i m a l s ( u n t r ea t ed ) , a l l s y n a p-
t i c t er m i n a l s c o n t a i n c l ea r ( t h a t i s , em p-
t y ) v es i c l es . I n r a t s t h a t h a v e b een
t r ea t ed w i t h r es er pi n e ( 1 0 m g per k i l o -
g r a m o f b o d y w ei g h t ) 1 2 h o u r s b ef o r e 5 -
OHD A , n o S G V ' s c a n b e d em o n s t r a t ed .
Hen c e t h e v es i c u l a r a c c u m u l a t i o n o f 5 -
OHD A i s r es er pi n e- s en s i t i v e a n d pr o b -
a b l y i s r es t r i c t ed t o m o n o a m i n er g i c t er -
m i n a l s .
B y 1 w eek o f a g e, t h e s i x c y -
t o a r c h i t ec t o n i c l a y er s c h a r a c t er i s t i c o f
m a t u r e c o r t ex c a n b e r ec o g n i z ed . T h e
s y n a ps es - s t i l l r el a t i v el y s pa r s e- a r e
c o n c en t r a t ed i n s t r a t a t h a t a r e pa r a l l el t o
t h e s u r f a c e ( 1 5 ) . I n 5 - OHD A - t r ea t ed
r a t s , t h e r a d i a l d i s t r i b u t i o n o f S G V s y n -
a ps es i s c h a r a c t er i s t i c a n d h i g h l y r epr o -
d u c i b l e: i n l a y er I V ( t h e d eep t h i r d o f t h e
c o r t i c a l pl a t e) m o r e t h a n 7 0 per c en t o f
t h e s y n a pt i c t er m i n a l s c o n t a i n S G V ' s
( 1 3 ) . I n o t h er c o r t i c a l l a y er s , S G V s y n -
a ps es a r e s pa r s e, ex c ept i n t h e m a r g i n a l
z o n e w h er e 1 0 t o 3 0 per c en t o f t h e b o u -
t o n s c o n t a i n S G V ' s . Ma n y o f t h e S G V
b o u t o n s f o r m s y n a ps es d e pa s s a g e a s
i s c h a r a c t er i s t i c o f c en t r a l c a t ec h o l -
a m i n er g i c n eu r o n s , a n d i n l a y er I V m a n y
a r e o n pr o x i m a l d en d r i t es . T h e u s e o f 5 -
OHD A r ev ea l s , i n i m m a t u r e c o r t ex , a
pr ev i o u s l y u n r ec o g n i z ed s et o f a x o n t er -
m i n a l s d ef i c i en t i n en d o g en o u s t r a n s -
m i t t er b u t w i t h t h e c a pa c i t y t o t a k e u p
a n d s t o r e t h i s c a t ec h o l a m i n e c o n g en er .
We a t t em pt ed t o c o n f i r m a n d c h a r a c t er -
i z e t h i s u pt a k e- s t o r a g e c a pa c i t y b y a ppl i -
c a t i o n o f b i o c h em i c a l m et h o d s .
Ra t s o f v a r i o u s a g es w er e t r ea t ed w i t h
t h e c a t ec h o l a m i n e pr ec u r s o r L- d o pa .
S u b s eq u en t l y , d o pa m i n e a n d n o r epi -
n eph r i n e l ev el s i n n eo c o r t ex w er e m ea -
s u r ed b y a s en s i t i v e r a d i o m et r i c en z y m a t -
S CI ENCE, V OL. 1 9 6
Ma j o r I n n er v a t i o n o f New b o r n Ra t Co r t ex
b y Mo n o a m i n er g i c Neu r o n s
A b s t r a c t . A m a j o r m o n o a m i n er g i c i n n er v a t i o n i n i n f a n t r a t n eo c o r t ex , pr e-
d o m i n a n t l y i n l a y er I V , h a s b een d em o n s t r a t ed b y u l t r a s t r u c t u r a l a n d b i o c h em i c a l
s t u d i es a f t er t h e a d m i n i s t r a t i o n o f ex o g en o u s c a t ec h o l a m i n e pr ec u r s o r s a n d c o n -
g en er s . On e- t h i r d o f a l l c o r t i c a l s y n a ps es h a v e a n u pt a k e- s t o r a g e m ec h a n i s m f o r
c a t ec h o l a m i n es . I n n ew b o r n c o r t ex , t h e s t o r a g e c a pa c i t y f o r c a t ec h o l a m i n es i s t en -
f o l d g r ea t er t h a n t h e en d o g en o u s l ev el s , a n d t h e u pt a k e- s t o r a g e m ec h a n i s m m a t u r es
ea r l i er t h a n t h e a b i l i t y t o s y n t h es i z e n eu r o t r a n s m i t t er .

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