Cromatografa de

lquidos
Cromatografa de lquidos.
Para obtener una buena separacin dentro de la cromatografa
liquida parte en tener un equilibrio entre sus fuerzas
intermoleculares de los participantes.
* Fase mvil
* Estacionaria
* Soluto
Las fuerzas intermoleculares se describen en trminos de
polaridad.
Cromatografa de lquidos.
La polaridad de la fase estacionaria debe ser similar a la del
analito para que lo retenga, se eluye con una fase mvil de
polaridad diferente.
Si la polaridad de la fase mvil y el soluto son muy parecidas en
tiempo de retencin del analito en la columna es muy corto.
Si la polaridad de la fase estacionaria y el soluto son muy
parecidas el tiempo de retencin es muy largo.
Cromatografa de lquidos.
La composicin de la fase mvil es capaz de modificar el
tiempo de retencin, el factor de interaccin del analito
con la fase estacionaria y la fase mvil; modificar la
selectividad de la separacin.
Se pueden adicionar a la fase mvil, en fase reserva o
aditivos que mejoren la separacin.
Cromatografa de lquidos.
Caractersticas muestra Mtodo HPLC/columna
Peso molecular > 2000 D
Exclusin por tamao, intercambio
inico
Ismeros pticos Columnas quirales
Otros ismeros, posicionales, estereo y otros Fase normal, silica no modificada
Sales inorgnicas Cromatografa inica
Carbohidratos Amino columnas con FR
Muestra biolgica
A veces se usan condiciones especiales
Aditivos recomendados.
Compuestos bsicos: 50 mM buffer de fosfato pH 3.0
Compuestos cidos: 50 mM buffer de fosfato 1% HOAc, pH 3.0
Mezcla de cidos y bases: 50 mM buffer de fosfato, 30% mm trietil amina pH
3.0
Sales catinicas: 30% mM trietil amina, 50 mM NaNO
3
Sales aninicas: 1% HOAc, 50 mM NaNO
3
Si se requiere: Aminas fuertes (dimetil octil amina)