Cromatografa de

lquidos
Cromatografa de lquidos.
High Performance Liquid Chromatography (HPLC)
Es una tcnica analtica de separacin muy utilizada en la
actualidad debido a su alta sensibilidad.
Realiza determinaciones cuantitativas exactas en diferentes
tipos de sustancias (aminocidos, protenas, cidos
nucleicos, hidrocarburos, carbohidratos, frmacos,
plaguicidas, antibiticos, especies organomtalicos y
sustancias inorgnicas)
Cromatografa de lquidos.
Se utilizo una alta presin para incrementar la velocidad lineal y
reducir la difusin de los compuestos en el interior de las columnas
empaquetadas, mejorando as la resolucin.
Se necesitaron bombas capaces de generar hasta 500 psi; y recibe el
nombre de high - pressure liquid chromatography (cromatografa
lquida de alta presin)
En la dcada de los 70s la tecnologa empleada experiment grandes
avances, con bombas que generaron 6,000 psi, mejores inyectores y
detectores y partculas ms pequeas , donde se mantiene el
acrnimo HPLC pero cambia high performance liquid
chromatography.
Cromatografa de lquidos.
Cromatografa de lquidos.
Cromatografa de lquidos.
En la actualidad para lograr un incremento en la resolucin,
velocidad y sensibilidad en la cromatografa liquida, se han
incorporado columnas con partculas e instrumentos ms
pequeos para bombear la fase mvil a presiones
alrededor de 15,000 100,000 psi.
Bajo estas condiciones a esta tecnologa se le conoce como
Ultra Performance Liquid Chromatography UPLC;
Cromatografa Liquida de Ultra Eficacia.
Cromatografa UPLC.
Componentes del sistema HPLC
Sistema de bombeo: debe ser capaz de generar elevadas
presiones, producir un flujo de pulsaciones, amplio intervalo de
caudales con elevada reproducibilidad y estar dotado de
componentes resistentes a la corrosin.
Las bombas empleadas pueden ser de distintos tipos y siendo de
ms comn uso: recprocas, desplazamiento y neumticas.
Bombas reciprocas: consisten en una cmara en la que el
disolvente es impedido por el movimiento de vaivn de un pistn
accionado por un motor de arrastre.
Componentes del sistema HPLC
Bombas reciprocas: consisten en una cmara en la que el
disolvente es impedido por el movimiento de vaivn de un
pistn accionado por un motor de arrastre.
La desventaja de las bombas reciprocas sera el flujo pulsado
que proceden, se puede dar solucin utilizando bombas con 2
pistones que al trabajar alternamente consiguen un flujo
constante.
La ventaja de las bombas son: pequeo volumen interno, altas
presiones de salidas, adaptacin a los gradientes, caudales
constantes.
Componentes del sistema HPLC
Bombas de desplazamiento: Se conforman de grandes cmaras
similares a jeringas, dotadas de un mbolo que se activa por un
mecanismo de tornillo accionado mediante un motor paso a
paso.
Las ventajas de las bombas de desplazamiento es sobre el flujo
generado esta libre de pulsaciones y es independiente de la
viscosidad del disolvente y de la columna.
Las desventajas son la limitada capacidad de disolvente y la
dificultad de cambio entre disolventes.
Componentes del sistema HPLC
Bombas neumticas: se conforman de un recipiente plegable
para la fase mvil el cual se presuriza mediante gas
comprimido.
Las ventajas de las bombas de neumticas son de un costo
econmico y libres de impulsos; pero con capacidad limitada y
presin de salida fija.
Las desventajas son el caudal que depende de la viscosidad
del disolvente y de la presin presente en la columna.
Componentes del sistema HPLC
Para cualquier sistema de bombeo funcione es esencial que
las fases mviles no contengan gases disueltos ni partculas
en suspensin; para tal efecto se utilizan desgasificadores
que pueden estar conformados por:
* Bombas de vaco.
* Sistemas de destilacin.
* Dispositivos de agitacin.
* Sistemas de purga