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Qumica Biolgica I TP 3 LPIDOS

OBJETIVOS:

-Poner de manifiesto ciertas propiedades de lpidos.
-Comprobar la presencia de los lpidos complejos en cerebro de vaca luego de extraccin con
diferentes solventes y posterior fraccionamiento de los extractos.

FUNDAMENTOS:

Los lpidos, son un grupo heterogneo de compuestos, de naturaleza antiptica, es decir que
contienen regiones hidrofbicas y regiones hidroflicas. La mayor parte de los lpidos
abundantes en la naturaleza (triacilgliceroles), estn formados por cidos grasos de cadenas
hidrocarbonadas pares, saturados o insaturados. Los lpidos llevan a cabo mltiples funciones
en el organismo, como: almacenamiento de energa, de transporte, cumplir funciones
hormonales, actuar como vitaminas, formar parte de las membranas celulares confirindoles
la propiedad de permeabilidad selectiva, al permitir el paso o no de algunas sustancias y en
determinada direccin, as como la conduccin nerviosa y el transporte activo como la bomba
de Na
+
/K
+
. A diferencia de los carbohidratos, protenas y cidos nucleicos, no forman
polmeros, son mas bien molculas pequeas que presentan una fuerte tendencia a asociarse
mediante fuerzas no covalentes. Algunas de las propiedades de los lpidos pueden ser usadas
para su reconocimiento, ya que pueden reaccionar con una variedad de agentes originndose
productos coloreados, desprendimiento de vapores, formacin de jabones, entre otros.
El tejido adiposo est constitudo principalmente por las grasas neutras, pero el cerebro
contiene relativamente pocas, los constituyentes lipdicos de estos tejidos son los lpidos
complejos como: fosfolpidos y colesterol.
Basados en la solubilidad de los lpidos en solventes orgnicos, es posible extraer y purificar
lpidos del cerebro por sucesivas extracciones con diferentes solventes y posterior
fraccionamiento de los extractos para obtener fracciones ricas en: esteroles,
glicerofosfolpidos y esfingolpidos. El esquema se basa en los siguientes hechos:
Los esteroles son solubles en acetona, al contrario de lo que sucede con otros lpidos
complejos.
Algunos glicerofosfolpidos, como las lecitinas, la fosfatidiletanolamina y la
fosfatidilserina, son solubles el ter e insolubles en acetona.
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Los glucsidos de esfingosina se disuelven en alcohol caliente y son insolubles en
acetona y ter.
Los productos finales de este experimento son sustancias de una pureza relativa y sern
identificados una vez efectuadas las extracciones.

PARTE EXPERIMENTAL

I - Extraccin de lpidos
Pesar 20 g de cerebro triturarlo en mortero y secarlo parcialmente en un vaso de precipitado.
Agregar 50 ml de alcohol etlico, llevar a ebullicin y mantenerlo por 3 minutos, luego filtrar
por gasa. El filtrado se concentra en manta calefactora hasta unos 30 ml y se agregan luego 25
ml de ter, agitar y separar en ampolla de decantacin.

Se obtienen dos fracciones:
Fraccin superior A : etrea, que tendr disueltos lecitina, cefalina, grasas, colesterol y restos
de esfingomielina y cerebrsidos.

Fraccin inferior B : alcohlica que tendr disueltos esfingomielina y cerebrsidos.

Fraccin A: concentrar en bao Mara a mitad de volumen inicial y agregar 25 ml de acetona:
se observar un precipitado que corresponde principalmente a fosfolpidos, quedando en
solucin el colesterol y las grasas. Separar por centrifugacin obteniendo un sobrenadante C y
un precipitado D.
Sobrenadante C: separar en dos fracciones, en una reconocer grasas y en la otra extraer el
colesterol con 10 ml de ter, separar en ampolla de decantacin y reconocer el colesterol.
Precipitado D: reconocer lecitina y cefalina como fosfolpidos.
Fraccin B: reconocer cerebrsidos.

II - Reacciones de reconocimiento

1 - Reconocimiento de grasas:
Es una prueba para identificar cidos grasos, por lo tanto, general para los lpidos que los
contengan. Los jabones se define qumicamente como, las sales metlicas de los cidos grasos
superiores.
Prueba de saponificacin

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Se separan las grasas por saponificacin, para esto se coloca 1 ml de la muestra, 1 ml de
etanol y 0,5 ml de hidrxido de sodio al 40%. Calentar suavemente. Agregar unas gotas de
cido sulfrico. La presencia de enturbiamiento indica liberacin de cidos grasos.


2 - Reconocimiento de colesterol: reaccin de Liebermann Burchard.

El colesterol reacciona con anhdrido actico y cido sulfrico concentrado. Se produce una
prdida de agua y una protonizacin del colesterol. Se constituyen en medio anhidro
polmeros de hidrocarburos no saturados de intenso color verde azulado.
Secar la muestra a bao Mara. Resuspender en 2 ml de cloroformo.
En un tubo de ensayo mezclar 1 ml de anhdrido actico y 1 ml de cloroformo. Enfriar a 0C
en bao de hielo. Agregar al tubo los 2 ml de la muestra y colocar en hielo. Agregar por las
paredes 1 gota de cido sulfrico cc. Enfriar y observar . Una coloracin verde azulada indica
la presencia de grupo esteroide, colesterol en nuestro caso.

3 - Reconocimiento de cerebrsidos:

Mediante la reaccin de Molish para hidratos de carbono. ( Ver TP H de Carbono).

4 - Reconocimiento de fosfolpidos: lecitina y cefalina mediante la determinacin de la
presencia de fsforo.



La reaccin se basa en que el fosfato inorgnico, en medio cido, con el molibdato (reactivo
1) da fosfomolibdato, color amarillo, que es reducido luego por el cido ascrbico (reactivo 2)
a azul de molibdeno, color azul verdoso. El reactivo 3 (arsenito/citrato) se combina con el
exceso de molibdato impidiendo su reaccin posterior con fosfatos liberados de steres
lbiles, lo que se aprovecha cuando se quiere determinar fosfato inorgnico libre en presencia
de, por ejemplo, fosfolpidos (que no es nuestro caso).

Muestra soluble de ppdo D 1 ml
Reactivo 1 0,5 ml
Mezclar y esperar 30 segundos.
Reactivo 2 0,5 ml
Mezclar y esperar 30 segundos.
Reactivo 3 0,75 ml

Mezclar. Luego de 10 minutos la presencia de color azul demuestra la presencia de fosfato
unido a lecitina y cefalina en el tejido.