ELISA (Chagatest de Wiener lab)

Consideraciones:

Por grupo se utilizan dos pocillos para procesar una Muestra 1 y una Muestra 2.
Rotular los pocillos con Número de GRUPO y Números de Muestras.
Mantener cubiertos con cinta los pocillos sin usar y solo descubrir los que
se vayan a usar en esa determinación. Si el pocillo está rotulado, significa
que ya ha sido usado.
• Cerrar bien los frascos al terminar de usar. No intercambiar los frascos entre
los grupos.

Protocolo:

1. Con el frasco gotero agregar 2 gotas de MUESTRA 1 en uno de los pocillos

previamente rotulado como (1).

2. Con el frasco gotero agregar 2 gotas de MUESTRA 2 en uno de los pocillos

previamente rotulado como (2).

3. Cubrir con cinta los pocillos para evitar la evaporación e incubar durante 30
minutos a 37°C en baño termostático. Fijarse que los pocillos estén en contacto con
el agua, pero que no se hundan por completo.

4. Descartar el líquido de los pocillos en el recipiente de descarte. Lavar con

BUFFER DE LAVADO. Para ello, colocar un poco de este buffer en cada pocillo y
después descartar con firmeza el líquido en el recipiente. Repetir este lavado 4 veces
más (5 lavados en total). Después del último lavado, eliminar por completo el líquido
residual invirtiendo los pocillos y golpeándolos varias veces sobre papel absorbente.

5. Luego, agregar 1 gota de CONJUGADO en cada pocillo.

6. Mezclar con golpes laterales suaves. Cubrir los pocillos e incubar 30 minutos
a 37°C en baño termostático.

7. Descartar el líquido de los pocillos y lavar 5 veces con BUFFER DE LAVADO,

como se realizó anteriormente.

8. Agregar en CADA pocillo 1 gota de REVELADOR A y 1 gota de REVELADOR

B. Mezclar con golpes laterales suaves. Puede llevarse a 37°C y esperar hasta el
desarrollo de color celeste (de 15 a 30 min).

9. Detener la reacción con 1 gota de STOPPER. El color celeste vira a amarillo.

Evaluar a simple vista los resultados. El color es estable durante 30 minutos.